肌腱蛋白X和肌腱蛋白C及转化生长因子β表达与心肌纤维化形成的相关性分析

目的 观察肌腱蛋白(TN)-X、TN-C及转化生长因子β(TGF-β)在心肌纤维化过程中的表达变化及其与纤维化严重程度的相关性。方法 选择雄性SD大鼠48只,随机分为模型组43只和对照组5只。模型组建立心肌纤维化模型,采用Masson染色观察心肌组织基本结构,计算胶原容积分数(CVF),采用免疫组织化学法检测心肌中TN-X、TN-C及TGF-β表达。结果 与对照组比较,模型组建模后2、5、8、11、14 d CVF明显升高[(19.13±2.83)%、(21.43±1.45)%、(26.68±2.36)%、(30.69±1.01)%、(30.87±0.73)%vs(2.36±0.29)%,P<0.01]。模型组建模后5、8、11 d CVF呈上升趋势(P<0.05)。免疫组织化学显示,模型组建模后5、8、11、14 d TGF-β和TN-X及2、5、8 d TN-C表达明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。TGF-β、TN-X与CVF呈正相关(r_s=0.701,r_s=0.752,P<0.01);TN-X与...     

促红细胞生成素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞中转化生长因子β1和胶原的表达

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(CF)中转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达和胶原生成的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PD-K)/Akt信号途径和一氧化氮合酶(NOS)在其中的作用.方法 应用胰酶和胶原酶双酶法分离培养新生大鼠CF细胞,应用EPO、Ang Ⅱ、PI3-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L-NAME等不同因素干预.ELISA法检测CF中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的浓度.化学酶法检测CF培养液中的NO浓度以及NOS总的活性及其亚型的活性.Western blot检测Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、iNOS和TGF-β1蛋白的表达.结果 EPO剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的CF培养液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达以及提高NO的浓度.10 U/ml的EPO对Ⅰ型和Ⅲ型胶原浓度的抑制分别达到了28%和46%,同时NO浓度则提高了154%.EPO也显著抑制了Ang Ⅱ促CF中TGF-β1蛋白的表达,同时Akt的磷酸化水平显著提高,并促进eNOS蛋白的表达.应用LY294002使eNOS蛋白表达水平明显下降,培养液中的NO浓度也随之下降.L-NAME不能降低eNOS蛋白表达,但抑制了NO的生成.EPO抑制Ang Ⅱ诱导的CF中TGF-β1蛋白的表达以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成作用均能被二者阻断.结论 EPO可抑制Ang Ⅱ诱导的新生大鼠CF中TGF-β1的表达以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达,可能是通过激活PI3-K/Akt信号途径促使CF中eNOS表达,从而促进NO的表达来实现.     

细胞外信号调节激酶1/2在抗纤维化短肽AcSDKP调节大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原表达中的作用

目的 探讨AcSDKP是否通过阻断细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径调节血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达. 方法 CCK-8法检测心脏成纤维细胞代谢活性.流式细胞仪法检测细胞周期.免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达.Western blot法检测ERK1/2及磷酸化-ERK1/2蛋白表达. 结果 10-9mol/L AcSDKP能够抑制PDGF诱导的大鼠心脏成纤维细胞代谢活性,减少了细胞由G1期向S期的转化,细胞增殖指数下降.抑制了Ⅰ、Ⅲ型胶原及磷酸化-ERK1/2蛋白的表达,而ERK1/2蛋白表达无明显改变. 结论 AcSDKP能够通过阻断PDGF介导的ERK1/2通路的激活进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达.     

脊髓小脑共济失调症相关蛋白-3、转移抑制基因23和磷酸酯酶与张力蛋白同源物在胶质瘤术后组织中的表达及意义

目的检测脊髓小脑共济失调兆(Ataxin)-3、转移抑制基因(nm23)和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)在胶质瘤中的表达及其临床价值。方法 89例胶质瘤并进行手术治疗的患者作为观察组,70例正常脑组织作为对照组,应用免疫组化检测两组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达。结果观察组Ataxin-3、nm23和PTEN表达的阳性率明显低于对照组。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达与肿瘤的体积、有无坏死及分级密切相关。观察组Ataxin-3、nm23和PTEN的表达无相关性。结论胶质瘤中Ataxin-3、nm23和PTEN均低表达,三者起到的抑制肿瘤生长的作用。联合检测Ataxin-3、nm23和PTEN的表达可能是判断肿瘤生物学行为的重要指标。     

肝纤维化大鼠血清有机磷酸酯酶的变化

目的评价血清有机磷酸酯酶（ＰＥ）与肝纤维化的联系。方法用４０％ＣＣｌ４１ｍｌ／ｋｇ体重皮下注射，２次／周，共１４周诱发ＳＤ大鼠肝纤维化，分别于１，２，３，５，７，１０和１４周处死动物，测定血清和肝组织中ＰＥ、磷酸二酯酶Ⅰ（ＰＤＥⅠ）、单胺氧化酶（ＭＡＯ）、结合甘胆酸（ＣＧ）、β２＿微球蛋白（β２＿ＭＧ）、透明质酸（ＨＡ）和Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）等。结果血清ＰＥ、ＰＤＥⅠ和ＣＧ于染毒后逐渐升高并与肝组织纤维化程度相关，ＡＫＰ和ＧＰＴ也升高，但呈不规则变化。ＭＡＯ，β２－ＭＧ，ＨＡ和ＰＣⅢ无变化。肝组织中羟脯氨酸含量增加，其它指标无变化。结论血清ＰＥ活性与肝纤维化程度密切相关，可用作诊断肝硬变     

急性肝损伤大鼠血清有机磷酸酯酶活性变化

目的观察实验性急性肝损伤对血清有机磷酸酯酶的影响。方法用１０％Ｄ＿氨基半乳糖盐酸盐１次腹腔注射，诱发Ｗｉｓｔａｒ大鼠急性肝坏死；另施手术结扎胆道诱发ＳＤ大鼠胆汁淤积。采尾血测定血清有机磷酸酯酶（ＰＥ）、磷酸二酯酶Ｉ（ＰＤＥＩ）等。结果大鼠急性肝坏死或胆道结扎早期均可见血清ＡＬＴ、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和ＰＤＥＩ活性增高。血清ＰＥ活性无变化。结论血清ＰＥ活性不受急性肝损伤的影响     

螺内酯抗钙调神经磷酸酶依赖的肾性高血压大鼠心肌肥厚作用机制

目的　观察螺内酯抗钙调神经磷酸酶 (calcineurin ,CaN)依赖的肾性高血压大鼠心肌肥厚的作用。方法　 2 0只Wistar大鼠随机分为 3组 :2组采用一肾一夹模型制造肾性高血压 ,其中螺内酯组 (n =7)予螺内酯灌胃 ,高血压组 (n =7)予水灌胃 ;假手术组 (n =6 )只予水灌胃。称重法测定心重比 ,发色底物法测CaN活性 ;半定量PCR测定各组心肌组织中心房利钠因子mRNA的水平 ,同时用免疫组织化学染色方法 ,观察心肌中CaN及活化T细胞核因子的表达。结果　肾性高血压大鼠经螺内酯灌胃 4周 ,其心重比较未干预组明显降低 (P <0 0 5 ) ,心房利钠因子mRNA水平较手术组明显降低 (P <0 0 5 ) ,与假手术组水平接近 ,心肌肥厚受到抑制 ,同时发现心肌中CaN活性较未干预组显著下降 ,免疫组化显示螺内酯干预组心肌中CaN及活化T细胞核因子表达降低。结论　螺内酯抑制肾性高血压心肌肥厚的机制与其下调心肌胞浆中CaN表达及其活性有关     

Metabolism of thyroid hormones in cultured cardiac fibroblasts of neonatal rats

We have investigated the potential role of fibroblasts in local thyroid hormone metabolism in neonatal rat heart. Incubation of cardiac fibroblasts with thyroxine (T4) or 3,5,3'-tri-iodothyronine (T3) resulted in the appearance of water-soluble metabolites, whereas incubation of cardiomyocytes under the same conditions did not or did so to a much lesser extent. Time-course studies showed that production is already evident after 1-5 h of exposure and that the process equilibrates after 24-48 h. Analysis of the products revealed both the T4 and the T3 metabolites to be glucuronides. These results were corroborated by the detection of uridine diphosphate (UDP)-glucuronyltransferase activity in cardiac fibroblasts. We found no indication for outer ring deiodination in fibroblasts, cardiomyocytes or heart homogenates. From these results we have concluded that cardiac fibroblasts, but not cardiomyocytes, are able to glucuronidate T4 and T3 and secrete the conjugates. This could play a role in local metabolism, e.g. to protect the heart tissue from high levels of thyroid hormones.     

口服小剂量螺内酯抗高血压大鼠心肌纤维化

目的观察口服小剂量螺内酯对自发性高血压大鼠(SHR)血压、心肌间质和血管周围胶原沉积的干预,探讨螺内酯在高血压心肌纤维化进展期对心脏的保护作用。方法20只雄性SHR随机分为螺内酯组(10只)和安慰剂组(10只),另设Wistar-kyoto鼠7只(WKY组)。Western blot方法分析Ⅰ型胶原的表达;天狼猩红-苦味酸染色观察心肌胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积(PVCA)。结果与安慰剂组比较,螺内酯组Ⅰ型胶原含量、CVF、PVCA显著降低(P<0.01),收缩压、舒张压、平均动脉血压、血K+、心脏重量指数、左心室重量指数、心率未见明显差异。结论口服小剂量螺内酯通过减少Ⅰ型胶原的沉积,起到抗高血压大鼠心肌纤维化的作用。     

基底刚度对新生大鼠心脏成纤维细胞增殖和粘附的影响

目的探讨细胞培养基底刚度对心肌成纤维细胞增殖和粘附的影响。方法制备不同配比聚丙烯酰胺凝胶模拟不同基底刚度,采用细胞计数和MTT法检测细胞增殖,免疫荧光成像和免疫印迹方法检测细胞粘着斑分布及其相关蛋白表达。结果采用自重弯曲法测得0.03%、0.13%和0.26%聚丙烯酰胺凝胶的弹性模量为7～33Kpa。在此刚度范围内,随着基底刚度增加心脏成纤维细胞数量显著增加,粘着斑面积占细胞总面积的百分比增加,粘着斑纽蛋白的荧光强度增加,但纽蛋白和桩蛋白的表达量不变。结论基底刚度增加能促进新生大鼠心脏成纤维细胞的增殖和改变粘着斑蛋白的分布。     

伊那普利拉对新生鼠心肌成纤维细胞增殖及作用机制的研究

目的 观察血管紧张素I转换酶抑制剂（angiotensin I converting enzyme inhibitor,ACEI）伊那普利拉（enal-aprilat,Ena）抗血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFb）增殖及其对细胞周期蛋白的影响,探讨Ena抗CFb增殖及机制。方法以培养的新生wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组,AngII组,用药组3个剂量,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb,四氮唑盐（MTT）比色法检测CFb增殖;羟脯氨酸法测定胶原量;流式细胞仪测定细胞周期和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p^27kip1（Cyclin dependent kinase inhibitor,CKI）表达。结果Ena能够抑制AngⅡ诱导的CFb增殖（P〈0.01,P〈0.05）,降低羟脯氨酸含量（P〈0.01,P〈0.05）,增加细胞周期中G0/G1期百分率,降低S期百分率,提高p27kip1表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论Ena抑制AngII诱导的CFb增殖与提高p^27kip1表达有关。     

The influence of dexamethasone on the proliferation and apoptosis of pulmonary inflammatory cells in bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats

OBJECTIVE: The aim of this study was to investigate the inhibitory effect of dexamethasone on the state of proliferation/apoptosis of the pulmonary inflammatory cells in a rat pulmonary fibrosis model induced by bleomycin. METHODOLOGY: Seventy-five pathogen-free Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into three groups: control, bleomycin (BLM) and dexamethasone (DXM) groups with 25 rats in each group. Each group was then divided into five subgroups based on time of study (1-, 3-, 7-, 14- and 28-days). BAL fluid was obtained, the cells were counted and a differential was performed. A lower DNA content in apoptotic cells was detected and quantitated by flow cytometry. Haematoxylin and eosin staining was performed to observe the extent of alveolitis and fibrosis of lung tissue; the morphological changes in apoptotic cells were discerned by transmission electron-microscopy and a semi-quantitative assessment of apoptotic cells in lung tissue was performed using in situ TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick endlabelling). RESULTS: The total number of inflammatory cells and the percentage of neutrophils in BAL fluid in almost every subgroup of the DXM group were significantly lower than those in corresponding subgroups of the BLM group (P < 0.01). The percentages of apoptotic cells in BAL fluid in the 14-day and 28-day subgroups of the DXM group were higher than those in corresponding subgroups of the BLM group (P < 0.05). The peak of alveolitis in the DXM group shifted backward and the extent of fibrosis was less than that in the BLM group. The apoptosis index (AI) of inflammatory cells in each of the DXM subgroups was higher than that in corresponding BLM subgroups except for day 14. CONCLUSION: Dexamethasone can induce apoptosis of pulmonary inflammatory cells and reduce the extent of alveolitis and fibrosis in bleomycin-induced pulmonary fibrosis of rats.     

1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶对去甲肾上腺素诱导心脏成纤维细胞表达基质金属蛋白酶的影响

目的:探讨1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶(PARP-1)对去甲肾上腺素(NE)诱导培养的大鼠心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1,MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1表达的调节作用及其机制。方法:①培养乳鼠心脏成纤维细胞,10μmol/LNE刺激细胞24h,使用实时定量PCR法检测MMP-1、MMP-9及TIMP-1的基因表达水平;使用PARP抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3AB)后,观察PARP-1对上述基因表达的影响。②检测心脏成纤维细胞内活性氧(ROS)水平、PARP酶活性的变化。③采用凝胶阻滞实验检测心脏成纤维细胞内转录因子AP-1的DNA结合能力,研究PARP-1对AP-1DNA结合能力的影响。结果:NE诱导心脏成纤维细胞内MMP-1,MMP-9及TIMP-1的基因表达水平明显增加。细胞内ROS产生增加,PARP酶被激活。核内转录因子AP-1的DNA结合能力明显增强。PARP抑制剂3AB可明显减少NE诱导的MMP-1、MMP-9及TIMP-1的基因表达水平,同时显著抑制AP-1的DNA结合能力。使用抗氧化剂vitC减少ROS产生,抑制了NE诱导的PARP-1活性增加及AP-1的DNA结合,进而显著降低了NE诱导的MMP-1、MMP-9及TIMP-1的基因表达水平。结论:NE刺激心脏成纤维细胞内ROS产生明显增多,大量的ROS激活了PARP使其酶活性显著增高,PARP通过调节转录因子AP-1的DNA结合调控了MMP-1,MMP-9及TIMP-1的基因表达。PARP可能是心脏纤维化过程中的重要调节机制之一。     

体外转染PTEN对胰腺癌细胞增殖能力的影响

目的选择PTEN低表达胰腺癌细胞系,探讨体外转染PTEN对该细胞系的影响。方法将PTEN转染到PTEN低表达胰腺癌细胞系,应用RTPCR、免疫组化、克隆形成率及观察裸鼠移植瘤生长等方法检测PTEN对胰腺癌细胞系的影响。结果PTEN在ASPC1细胞呈低表达,ASPC1、ApE、ApEP细胞PTENmRNA表达量和克隆形成率分别为203%、150%、568%和333%、317%、240%;ASPC1细胞转染后PTEN蛋白表达水平升高,血管内皮生长因子蛋白下降,表皮生长因子受体蛋白无明显变化;5周时转染前后荷瘤裸鼠瘤结节体积分别为2027mm3和1424mm3,差异有统计学意义(P<001)。结论PTEN低表达ASPC1细胞系经转染PTEN后细胞增殖活性及裸鼠致瘤能力明显降低。