体外受精周期颗粒细胞卵泡刺激素受体表达与卵巢反应

目的探讨促排卵周期颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)表达与卵巢反应性的关系及其对妊娠结局的影响。方法2006年3月至同年12月,实施体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕者43名,按获卵数量分为低反应组(<5枚)、正常反应组(5~15枚)和高反应组(>15枚)。采用免疫荧光技术检测各组卵巢颗粒细胞FSHR的表达,比较各组FSHR表达强度、胚胎实验室数据和临床结局。结果颗粒细胞FSHR表达量以高反应组最高,正常反应组次之,低反应组最低,三组组间比较均有显著差异(P<0.05);三组间注射人体绒毛膜促性腺激素(HCG)日血雌二醇(E2)水平、获卵数和冻胚数比较,均有显著性差异(P<0.05);而受精率、卵裂率、种植率及妊娠率比较无显著性差异(P>0.05);相关性分析显示,颗粒细胞FSHR的表达与获卵数(r=0.719)及外周血E2水平(r=0.516)呈显著正相关(均P<0.05),与受精率和卵裂率无明显相关性(P>0.05)。结论促排卵时颗粒细胞FSHR表达和卵巢反应性均较高;FSHR表达量与获卵数和血清E2水平呈正相关。研究提示颗粒细胞FSHR水平可能直接影响卵泡发育。     

体外受精周期颗粒细胞卵泡刺激素受体表达与卵巢反应

目的 探讨促排卵周期颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)表达与卵巢反应性的关系及其对妊娠结局的影响.方法 2006年3月至同年12月,实施体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕者43名,按获卵数量分为低反应组(＜5枚)、正常反应组(5～15枚)和高反应组(＞15枚).采用免疫荧光技术检测各组卵巢颗粒细胞FSHR的表达,比较各组FSHR表达强度、胚胎实验室数据和临床结局.结果 颗粒细胞FSHR表达量以高反应组最高,正常反应组次之,低反应组最低,三组组间比较均有显著差异(P＜0.05);三组间注射人体绒毛膜促性腺激素(HCG)日血雌二醇(E2)水平、获卵数和冻胚数比较,均有显著性差异(P＜0.05);而受精率、卵裂率、种植率及妊娠率比较无显著性差异(P＞0.05);相关性分析显示,颗粒细胞FSHR的表达与获卵数(r=0.719)及外周血E2水平(r=0.516)呈显著正相关(均P＜0.05),与受精率和卵裂率无明显相关性(P＞0.05).结论 促排卵时颗粒细胞FSHR表达和卵巢反应性均较高;FSHR表达量与获卵数和血清E2水平呈正相关.研究提示颗粒细胞FSHR水平可能直接影响卵泡发育.     

卵巢表达促卵泡刺激素

目的 :论证卵巢是否有合成分泌促卵泡刺激素 (FSH)的功能。方法 :通过RT-PCR技术从人卵巢中提取RNA。结果 :测序与垂体FSH - β 亚基基因编码序列完全同源。正常人卵巢自身表达促卵泡刺激素 (FSH - β)亚单位 ,结论 :提示经典的下丘脑 -垂体 -性腺轴理论可能存在缺陷     

中国女性卵泡刺激素受体基因多态性与卵巢过度刺激综合征的研究

目的 探讨中国汉族人群中FSHR基因307位点和680位点多态性分布与使用卵泡刺激素治疗后产生OHSS反应的关系.方法 采用PCR-RFLP,对471例中国汉族人群307位点和680位点的多态性进行分析.结果 发生OHSS不良反应人群中307位点TT、TA和AA基因型频率分别为52.73％、40.00％和7.27％,680位点NN、NS和SS基因型频率分别为58.18％、36.36％和5.46％.汉族人群中307位点和680位点基因多态性分布与OHSS发生无统计学意义.结论 FSHR基因307和680位点基因多态性的分布与使用卵泡刺激素后产生OHSS不良反应的关系呈现一定趋势,AA、SS基因型患者OHSS发生率分别相对于其他两组均较低,但无统计学意义.     

卵泡刺激素及其受体与卵巢上皮性癌关系的研究进展

卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）通过其受体（FSHR）而发挥促卵巢上皮癌细胞增殖、生长和转移的作用,也可通过蛋白激酶A和磷脂酰肌醇（-3）激酶信号通路促进癌细胞的生长和转移。FSH还可能和卵巢癌对化疗的耐受有一定关系。FSHR的基因多态性与卵巢上皮癌有关,FSHR存在变异,致其信号转导途径也存在差异。本文就FSH及FSHR与卵巢上皮性癌关系的研究进展进行综述。     

卵泡刺激素受体基因多态性与体外受精周期卵巢反应性的关系

目的:探讨超促排卵周期卵泡刺激素受体(FSHR)基因第10外显子Ser680Asn多态性与卵巢反应性的关系。方法:将体外受精(IVF)周期患者136例,按卵巢反应性分组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测FSHR基因第10外显子Ser680Asn多态性,观察并测定患者临床数据、胚胎实验室数据和妊娠率。结果:①高反应组NS基因型频率显著升高(63.2%,P<0.05)。②SS型患者bFSH水平为(6.81±1.23)IU/L,显著高于NN和NS型。③NS型患者基础窦卵泡数为(13.31±4.33)个,显著多于NN和SS型。NS型患者获卵数明显多于SS型(NS型12.44±5.49,SS型8.41±5.13,P<0.01)。结论:IVF周期卵巢反应性与FSHR基因第10外显子Ser680Asn多态性有关。     

基因重组/尿卵泡刺激素对卵巢的反应及辅助生殖技术结局的对比性研究

目的评估基因重组和尿卵泡刺激素对不孕妇女卵巢的刺激反应和体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）的妊娠结局.方法对1049例实施IVF或ICSI的不孕患者作回顾性分析,在2种促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）方案下,分别给予尿卵泡刺激素（uFSH）、高纯度尿卵泡刺激素（hpFSH）和基因重组卵泡刺激素（rFSH）促排卵,比较3组雌二醇（E2）峰值水平、FSH剂量、成熟卵母细胞数、受精率和妊娠率.结果在中度和高度卵巢反应者（GnRHa长方案）、hpFSH组和rFSH组出现较高的E2峰值和绒毛膜促性腺素的注射延迟,其中rFSH组的胚胎种植率和持续妊娠率最高;在低弱卵巢反应者（GnRHa短方案）、hpFSH组和rFSH组的E2峰值显著增高,其周期取消率也明显减低,但各组之间种植率或妊娠率无明显差异.结论本研究说明,在卵巢的反应性和IVF/ICSI妊娠结局的层面上,基因重组卵泡刺激素较尿卵泡刺激素更显优越性.     

大鼠支持细胞生后发育过程中卵泡刺激素受体mRNA水平的动态观察

本研究发现大鼠出生后２～６０ｄ，睾丸支持细胞卵泡刺激素受体（ＦＳＨＲ）ｍＲＮＡ水平处于波动状态。生后早期（２～５ｄ），睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平轻度增加而后下降，在青春期前（１０～１５ｄ）维持较低水平。进入青春期后，睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平再次升高，尤以生后２０～２５ｄ上升迅速，于生后２５ｄ达高峰。４０ｄ之后睾丸ＦＳＨＲｍＲＮＡ水平重又出现增加趋势。     

反义寡脱氧核苷酸及卵泡刺激素对卵巢黏液性囊腺癌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的 观察卵泡刺激素受体（FSHR）反义寡脱氧核苷酸（antisense ODN）及卵泡刺激素（FSH）对体外培养人卵巢黏液性囊腺癌（OMC）细胞增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法 OMC细胞与不同浓度的FSH、antisense ODN和无义ODN（onnsensc ODN）共培育48、72h后．采用免疫细胞化学SP法检测细胞核内PCNA的表达。结果FSH明显增强PCNA的表达，而antiscnse ODN则显著降低PCNA的表达．与对照组比较．差异均有显著性意义（均P＜0．05或P＜0．01）；应用nonsensc,ODN未观察到其对PCNA表达的影响。同时．antisense ODN可明显拮抗FSH促PCNA表达增加的作用，差异有极显著性意义（P＜0．01）。结论 在OMC发展过程中，FSH具有一定的促进作用．antisense ODN可有效抑制癌细胞的增殖以及FSH的促增殖作用。     

CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达

目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、WesternBlot、RT—PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80％以上的癌巢细胞CUGBPl基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性（t=100．01,P＜0．001）。95％以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性（t=407．53,P＜0．001）。结论CUGBPl基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBPl基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。     

卵巢颗粒细胞凋亡与多囊卵巢综合征

关于多囊卵巢综合征的确切病因机制未明，近年来，对卵巢颗粒细胞凋亡研究取得了很大的进展。颗粒细胞凋亡在多囊卵巢综合征中的发病机制逐渐受到人们的重视。本文对此做一综述，为多囊卵巢综合征的病因研究提供相关的理论依据。     

MEK AND p38 MAPK-DEPENDANT PATHWAYS ARE INVOLOVED IN THE POSITIVE EFFECT OF INTERLEUKIN-6 ON HUMAN GROWTH HORMONE GENE EXPRESSION IN RAT MtT/S SOMATOTROPH CELLS

Objective To investigate the effect of interleukin-6（IL-6） on the human growth hormone （hGH） gene expression in a rat somatotropic pituitary cell line MtT/S. Methods The plasmids containing various lengths of hGH gene 5＇-promoter fragments were constructed. Stably transfected MtT/S cells were created by cotransfecting the above plasmids and pcDNA3.1 （＋） with DMRIE-C transfection reagent. After the administration of these cells with IL-6 and/or various inhibitors of signaling transduction path-ways, the luciferase activities in MtT/S cells lysis were assayed to demonstrate the effects of IL-6 on hGH gene promoter activity and possibly involved mechanism. Results The 10^3U/mL IL-6 stimulated GH secretion and synthesis, and promoted the 5＇-promoter activity of GH gene in stably transfected MtT/SGL cells with the action of 1.69 times above the control. Among inhibitors of signaling transduction pathways, mitogen-activated protein kinase kinase （MAPKK/MEK） inhibitor PD98059 （40μmol/L） and p38 mitogen-activated protein kinase （MAPK） inhibitor SB203580 （5μmol/L） completely blocked the stimulatory effect of IL-6. Western blot analysis further confirmed the activation of phosphorylated MEK and p38 MAPK in MtT/SGL cells. Neither over-expression of Pit-1 nor inhibition of Pit-1 expression affected IL-6 induction of hGH promoter activity. A series of deletion constructs of hGH promoter were created to identify the DNA sequence that mediated the effect of IL-6. The results showed that the stimulatory effect of IL-6 was abolished following deletion of the - 196 to - 132 bp fragment. Conclusions IL-6 promotes GH secretion and synthesis by rat MtT/S somatotroph cells. The stimulatory effect of IL-6 on hGH gene promoter appears to require the activation of MEK and p38 MAPK, and a fragment of promoter se- quence that spans the - 196 to - 132 bp of the gene, but may be unlinked with Pit-1 protein.     

肝血虚证患者血清甲状腺激素和促甲状腺激素的测定

用放射免疫法对辩证属肝血虚证的２１例缺铁性贫血和１１例慢性再生障碍性贫血患者的血清甲状腺激素和促甲状腺激素进行测定。结果显示，两组患者血清Ｔ３结果非常显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１），ｒＴ３，与ｒＴ３／Ｔ３值均非常显著高于正常对照组，且两组患者以上各项指标组间两两比较均无统计学意义。就异常结果进行了讨论。     

两种基础激素对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的 探讨基础卵泡刺激素（FSH）、抑制素B（inhibinB）水平对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）结局的预测价值。方法 随机选择180例接受IVF—ET治疗的不孕症病人,于月经第2天抽取空腹血检测FSH、inhibinB水平,并按不同FSH、inhibinB水平分组,比较各组卵巢反应性及IVF-ET结局。结果 随FSH升高,卵巢反应性呈递减趋势,而妊娠率在FSH〉10U／L才有显著性变化;随inhibinB升高,卵巢反应性呈递增趋势,当inhibin B≤50ng／L,妊娠率显著降低,差异均有显著意义（F=12．36、18．82,P〈0．01;χ^2=8．10～14．22,P〈0．05）。结论 FSH是评价卵巢储备功能的较好指标,但在临床上对妊娠结局的预测实用价值不大。inhibinB能够更好反映卵巢储备功能,且对IVF-ET结局预测优于FSH。     

THE RELATIONSHIP BETWEEN mdrl GENE EXPRESSION AND DRUG-RESISTANCE IN OVARIAN CARCINOMA

INTRODUCTIONChemotherapyplaysamajorroleinthetreatmentofmalignantdiseases.Resultsoftreatmentwithanticanceragentshavesteadilyimprovedovertheyearsfollowingtheintroductionofmoreeffectivedrugsandtheestablishmentofbetterdesignedchemotherapystrategies.However,chemotherapyfailureduetocellulardrugresistanceremainsamajorprobleminmostcancerpatients.Manyfactorsaffecttheresponsetoanticancerdrugs.Thepresenceand/ordevelopmentofdrug--resistanttumorcellsareamongthemostimportantfactorsthatlimittheefficienc…     

高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞c-myc和p21基因表达的影响

目的 :探讨高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞 c- myc和 p2 1基因表达的影响。方法 :体外培养的人腹膜间皮细胞经含 1.5 %、2 .5 %、4 .2 5 %葡萄糖的 M199培养基培养 2 4 h,以正常 M199培养基和含 4 .2 5 %甘露醇的 M199培养基为对照。应用半定量 RT- PCR检测 c- m yc、p2 1基因 m RNA表达。结果 :2 .5 %葡萄糖组、4 .2 5 %葡萄糖组间皮细胞 c- myc和 p2 1m RNA的表达量显著高于 1.5 %葡萄糖组、M199对照组及 4 .2 5 %甘露醇渗透压对照组 (P<0 .0 5 ) ;而 1.5 %葡萄糖组、M199对照组及 4 .2 5 %甘露醇渗透压对照组间间皮细胞 c- myc和 p2 1m RNA的表达量无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,且葡萄糖浓度越高 ,c- myc和 p2 1m RNA表达量越高 (r=0 .96 8,0 .96 7,P<0 .0 1)。结论 :高浓度葡萄糖能上调 C- myc和 P2 1m RNA基因表达 ,这种作用与葡萄糖浓度呈正相关。     

EFFECT OF INTERLEUKIN-1β ON GROWTH HORMONE GENE EXPRESSION AND ITS POSSIBLE MOLECULAR MECHANISM IN RAT MtT/S SOMATOTROPH CELLS

Objective To elucidate the effect of interleukin-1β （IL- 1β） on human growth hormone （hGH） gene expression in a rat somatotropic pituitary cell line MtT/S.
Methods Stably transfected MtT/S cells were firstly established by transfecting 484-Lucl plasmid which contained hGH gene promoter --484 to ＋30 bp and luciferase reporter gene. The effect of IL-1β on hGH gene expression was determined by assaying the luciferase activities. RT-PCR method was also used to determine whether IL-1 recepor mRNA was expressed in MtT/S cells.
Results The 10^3 U/mL IL-1β stimulated secretion and synthesis of GH, and promoted the 5＇-promoter activity of GH gene in stably transfected MtT/SGL cells with the action of 1.38 times above the control. Among inhibitors of signaling transduction pathways, mitogen-activated protein kinase kinase （MAPKK/MEK） inhibitor PD98059 （40 μmol/L） and p38 mitogen-activated protein kinase （MAPK） inhibitor SB203580 （5 μmol/L） completely blocked the stimulatory effect of IL-1μ, and phosphatidylinositol-3-kinase （PI3-K） inhibitor LY294002 partly abolished the effect of IL-1μ. Western blot analysis further confirmed the activation of phosphorylated MEK and p38 MAPK in MtT/SGL cells. Neither over-expression of Pit- 1 nor inhibition of Pit- 1 expression affected induction of hGH promoter activity by IL-1μ. A series of deletion constructs of hGH promoter were created to identify the DNA sequence that mediated the effect of IL-1β, and results showed that the stimulatory effect of IL-1β was abolished following deletion of the --196 to -- 132 bp fragment.
Conclusions IL-1β promotes GH secretion and synthesis in rat MtT/S somatotroph cells. The stimulatory effect of IL-1β on hGH gene promoter appears to require the activation of MEK, p38 MAPK, PI3-K, and a fragment of promoter sequence that spans the -196 to -132 bp of the gene, but it may be unlinked with Pit-1 protein.     

人突变CD59基因在卵巢癌细胞表达及其生物活性检测

目的 研究野生型CD59与突变型CD59在卵巢癌细胞A2780表面的抗补体活性.方法 取突变型CD59质粒、野生型CD59质粒分别转染A2780细胞,G418 筛选稳定表达细胞克隆;酶免疫法及RT-PCR方法检测细胞表面CD59蛋白及mRNA的表达;制备抗CD59多克隆抗体,MTT法观察CD59蛋白的抗补体活性.结果 野生型及突变型CD59质粒扩增成功,并成功建立了稳定转染野生型和突变型CD59的A2780细胞株;与野生型CD59 相比,突变型CD59失去对补体的抑制功能,与未转染A2780表面CD59表达无显著差异.结论 CD59的W40位点对其功能具有重要作用,封闭该位点能够提高补体溶细胞作用,有望应用于肿瘤治疗.     

WWOX基因慢病毒载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达

目的：构建及鉴定WWOX基因慢病毒载体,观察WWOX基因在人卵巢癌PEO1细胞株中的表达,为进一步研究WWOX基因的作用机制及其功能奠定基础。方法：采用PCR技术从克隆质粒模板中获得全长WWOX基因,将WWOX基因亚克隆到慢病毒载体PCDH—CMV—MCS-EF1-copGFP中,构建慢病毒载体表达质粒PCDH—WWOX,通过双酶切验证后,慢病毒表达质粒与慢病毒包装质粒pPACKH1-GAG,pPACKH1-REV,Pvsv-G共转染293T细胞,获得携带WWOX基因及EGFP基因的重组慢病毒Lenti WWOX,并转染靶细胞人卵巢癌PEO1细胞株。通过RT—PCR和Western Blot验证Lenti WWOX在PEO1细胞株中的表达。结果：测序结果显示成功构建重组慢病毒载体表达质粒PCDH—WWOX;表达质粒与辅助包装质粒共转染包装细胞293T后能产生慢病毒颗粒并能有效感染靶细胞PEO1,转导效率约为60％,有WWOX基因mRNA和蛋白水平的高表达。结论：本实验成功构建了携带WWOX基因慢病毒表达载体,包装成病毒后能有效感染卵巢癌PEO1细胞。