用欧蔓陀罗凝集素分离纯化人肝癌组织中强结合的γ-谷氨酰转移酶

目的用欧蔓陀罗凝集素分离纯化人肝癌组织中强结合的γ-谷氨酰转移酶(γGT),为进一步制备其抗血清提供抗原,以期对肝癌早期诊断进行研究。方法人肝癌组织经匀浆、溶解、盐析、透析、层析等步骤进行分离纯化;纯化过程中用IFCC推荐方法测定洗脱物的γGT催化活性,用紫外法监测蛋白出峰图谱,用Lowry法测定蛋白含量。结果经过粗提、DEAE阴离子交换层析、凝胶过滤层析及凝集素亲和层析等纯化步骤得到电泳纯的γGT,其比活为10.56U/mg蛋白,纯化倍数为84.9,得率为1.60%。结论该分离纯化方法能够较好地分离纯化人肝癌组织中欧蔓陀罗凝集素强结合的γGT。     

糖尿病患者血清γ-谷氨酰基转肽酶水平变化及其检测价值

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)水平变化及其临床检测价值。方法选择临床确诊的住院和门诊T2DM患者126例,同期健康对照组50例,两组分别进行血清GGT和血糖(Glu)水平检测,进行对比分析。结果 (1)T2DM患者血清GGT和Glu水平均显著高于健康对照组(P0.01)。(2)126例T2DM患者中有41例阳性,阳性率为32.5%。结论T2DM患者体内存在血清GGT的异常表达,T2DM患者伴血清GGT升高者较多见,血清GGT水平检测可作为T2DM病情判定以及治疗效果观察的指标,对预测T2DM发生、发展具有辅助诊断价值。     

γ-谷氨酰基转移酶与过量饮酒关系探讨

目的　通过观察GGT在过量饮酒患者中的活性分布,探讨GGT检测在对过量饮酒者酒精性疾病防治工作中的意义和价值。方法　过量饮酒者4 7例,采用罗氏公司生产的MODULAR全自动生化分析仪进行GGT测定。结果　4 7例过量饮酒者血清GGT含量明显高于对照组(P <0 .0 0 1) ,其中脂肪肝的患者GGT含量与非脂肪肝者有明显差异(P <0 .0 5 ) ,禁酒后血清GGT含量与禁酒前有明显差异(P <0 .0 0 1)。结论　对于过量饮酒者,血清GGT是敏感性很高的检测指标,GGT的监测有利于酒精性疾病的早期发现     

糖尿病患者尿γ-谷氨酰基转移酶与血清脂质的变化

目的探讨糖尿病患者尿γ-谷氨酰基转移酶（GGT）与血清脂质变化的关系。方法检测正常对照组90例，糖尿病患者205例，并将205例糖尿病患者根据尿GGT排泄量分为三组，分别和血清脂质的水平，对其相互关系进行分析。结果糖尿病患者组中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、载脂蛋白B、E（ApoB、ApoE）、脂蛋白（a）[Lp（a）]和尿GGT明显高于正常对照组差异有显著性意义（P〈0．05）。而高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）、载脂蛋白A。、ApoA，／ApoB明显低于尿GGT正常组差异有显著性意义（P〈0．05）。其中以ApoB及ApoA／ApoB比值变化最敏感。在糖尿病患者三组中，Ⅱ组（尿GGT／Cr（33．1—58．9U／mmol））和Ⅲ组（尿GGT／Cr〉58．9U／mmol）中TC、TG、LDL—c、ApoB、ApoE、Lp（a）明显高于尿GGT正常组差异有显著性意义（P〈0．05），而HDL—c、ApoA1、ApoA1／ApoB、明显低于尿GGT正常组差异有显著性意义（P〈0．05）。Ⅲ组（尿GGT／Cr〉58．9U／mmol）中TC、TG、LDL—c、ApoB、ApoE、Lp（a）明显高于Ⅱ组差异有显著性意义（P〈0．05）。而HDL—c、ApoA，、ApoA1／ApoB、明显低于Ⅱ组差异有显著性意义（P〈0．05）。尿GGT排泄量与血脂水平明显呈正相关。结论糖尿病患者伴有脂质代谢紊乱并与尿GGT的排泄量、肾功能的损害相平行。     

脑梗死患者血清γ-谷氨酰基转移酶水平的观察

脑梗死包括脑血栓形成、腔隙性梗死和脑栓塞等,约占全部脑卒中的70%,是神经系统的常见病和多发病。近来在文献中提出γ-谷氨酰基转移酶（GGT）升高可预示心肌梗死和卒中的发生,在提示心血管病及其引起的死亡的价值优于血清胆固醇。为此,我们观察了确诊脑卒中患者血清GGT水平,初步探讨GGT在脑卒中发病中的作用。     

脂肪肝患者血清γ-谷氨酰基转移酶检测69例分析

采用酶偶联连续监测法 ,检测 69例脂肪肝患者空腹血清γ 谷氨酰基转移酶 ,并以 60名正常体检人员作对照组。结果两组的空腹血清GGT值有显著性差异 (P <0 .0 1)。血清GGT是脂肪肝较敏感的生化指标 ,有助于脂肪肝的诊断。     

脑梗死患者血清γ-谷氨酰基转移酶水平的观察

脑梗死包括脑血栓形成、腔隙性梗死和脑栓塞等,约占全部脑卒中的70%,是神经系统的常见病和多发病。近来在文献中提出γ-谷氨酰基转移酶(GGT)升高可预示心肌梗死和卒中的发生,在提示心血管病及其引起的死亡的价值优于血清胆固醇。为此,我们观察了确诊脑卒中患者血清GGT水平,初步探讨GGT在脑卒中发病中的作用。     

高血压患者尿液γ-谷氨酰基转移酶和尿微量白蛋白检测的临床意义

目的　通过检测高血压患者尿液γ 谷氨酰基转移酶 (GGT)、尿微量白蛋白 (U mAlb)水平 ,探讨尿GGT、U mAlb在高血压并发肾损伤患者中的临床意义。方法　用速率法及免疫比浊法对 6 0例Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期高血压患者及 4 0名健康体检者进行尿GGT、U mAlb测定并作比较。结果　有蛋白尿组与无蛋白尿组尿GGT、U mAlb与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期高血压患者尿GGT、U mAlb测定结果明显高于对照组 ,且两组间比较差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论　检测尿GGT、U mAlb可对高血压早期肾损伤、损伤部位及程度分析提供依据     

基于生物信息学分析γ-谷氨酰转移酶5在肝癌中的表达和意义

目的 探讨γ-谷氨酰转移酶5(GGT5)在肝细胞癌(HCC)中的表达,分析其与预后及免疫浸润的相关性。方法 通过TCGA、HPA、TIMER在线网站分析GGT5在HCC组织中的蛋白和基因表达水平。使用UALCAN数据库分析GGT5与临床特征的相关性。使用Kaplan-Meier分析探讨GGT5表达水平对HCC患者预后的影响。使用Linked Omics数据库分析与GGT5相关及共表达的基因。使用基因本体论(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据评估GGT5参与相关生物学的过程和信号通路。通过TIMER在线网站分析GGT5与肿瘤免疫浸润的相关性。结果 与邻近的癌旁组织相比,GGT5在肝癌组织中的表达降低,GGT5的低表达与肿瘤分期显著相关。GGT5低表达的HCC患者的总生存期(OS)较短。功能分析表明,GGT5参与肝癌细胞的蛋白酶体重组。GGT5低表达与免疫细胞浸润水平呈正相关。结论 GGT5与HCC的预后和免疫浸润有关,可能是HCC的潜在治疗靶点。     

尿γ-谷氨酰基转移酶测定在鉴别泌尿系统感染中的价值

目的　通过检测泌尿系统感染患者尿γ 谷氨酰基转移酶(GGT)水平,探讨检测尿GGT在泌尿系统感 染中的鉴别价值。方法　检测泌尿系统感染者的尿GGT及尿肌酐(Cr)水平,并用U/(g·Cr)表示酶活性单位。 通过受试者工作特征曲线(ROC)特性分析尿GGT在泌尿系统感染鉴别肾脏炎症时的临界值。结果　(1)肾脏 炎症组尿GGT水平显著高于对照组(P<0.01),下尿路感染患者尿GGT水平与对照组相比差异无显著性(P> 0.05);(2)ROC曲线特性分析显示,以75.0U/(g·Cr)为鉴别限时,特异性、阳性预测值和阴性预测值均最高, 能较好的区分肾脏炎症和下尿路感染,但敏感性和准确度均较低。以69.0U/(g·Cr)为鉴别限时,特异性、阳 性预测值和阴性预测值均较高,准确度最高,可以较好的筛选肾脏炎症患者。结论　检测泌尿系统感染患者尿 GGT水平,对肾脏炎症和下尿路感染的定位鉴别诊断有一定的价值。     

抗人甘露聚糖结合凝集素单抗的制备、鉴定及应用

目的　制备抗人甘露聚糖结合凝集素单克隆抗体及建立应用方法。方法　用亲和层析法自人血清中提取甘露聚糖结合凝集素 (MBL) ,免疫Balb/c小鼠 ,通过细胞融合的方法 ,得到 3株稳定分泌抗人MBL单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株。建立检测MBL的ELISA。结果　本组mAb识别相对分子质量 (Mr)为 310 0 0的MBL分子 ,与MBL作用后可明显抑制MBL 甘露聚糖复合物的抗补体效应。用ELISA检测 186例健康人血清中MBL水平为 2 6 9± 1 5 8mg/L。结论　成功地获得了抗MBL的mAb并用于建立ELISA。     

抗曲霉硫氧还蛋白还原酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)GliT单克隆抗体(单抗)并进行鉴定。方法取重组烟曲霉TR蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗TR抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA法测定抗体效价,IsoStrip鉴定抗体类、型,用western blot、免疫荧光分析技术和免疫组化染色鉴定单抗的特异性。结果筛选到1株稳定分泌抗TR单抗(Anti-TR1)的杂交瘤细胞,抗体亚类为IgG1,轻链为κ型。ELISA法测定效价为5×105,能够与烟曲霉分泌蛋白及菌丝中天然TR特异性结合,还可与基因重组TR特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单抗与烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌丝均发生反应,是曲霉属特异性的抗体。病理组织免疫组化染色结果显示,该抗体可与曲霉菌丝产生特异性反应。结论获得了1株持续分泌高效价抗曲霉属特异性抗TR单抗的交杂瘤细胞株,为进一步的研究奠定了基础。     

抗HCCR单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人宫颈癌癌基因（HCCR）单克隆抗体（mAb）,并进行鉴定。方法以HCCR重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,常规筛选杂交瘤细胞。腹水诱导法制备抗人HCCR单克隆抗体,并经蛋白A亲合层析进行纯化。用Western blot和免疫荧光等方法检测HCCR mAb的特异性。用纯化HCCR蛋白进行包被,建立间接ELISA方法,检测系列稀释的HCCR mAb,确定其灵敏度。结果筛选出2株分泌抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明抗人HCCR抗体能与HCCR蛋白特异性结合,免疫荧光结果显示肝癌HepG2细胞中胞浆和胞膜均呈阳性染色。间接ELISA方法检测HCCR mAb的灵敏度可达到1μg/L。结论成功制备并鉴定了特异性抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株,为进一步深入研究HCCR的生物学特征和临床应用打下基础。     

白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)单克隆抗体,用以研究胞壁蛋白Fba1在侵袭性念珠菌感染(IC)中的致病作用。方法取重组白念珠菌Fba1蛋白免疫BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA测定单克隆抗体的效价,western blot和免疫荧光技术鉴定其特异性,用IsoStrip鉴定其抗体类型。结果筛选到1株稳定分泌抗Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体类型为IgG2a,轻链为κ型。鉴定结果表明,ELISA效价为1×106,能与念珠菌裂解物中天然Fba1和基因重组Fba1特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单克隆抗体与白念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌均发生反应。结论建立了1株持续分泌高效价抗念珠菌属特异性Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为研究Fba1在IC中的致病作用提供了实验材料。     

抗人非小细胞肺癌单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：目的：制备抗人非小细胞肺癌（NSCLC）的单克隆抗体(McAb),并对其生物学特性及特异性进行鉴定。 方法：以人肺腺癌细胞株SPC-A1为抗原,免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合,间接细胞ELISA法筛选阳性细胞克隆;多种细胞间接ELISA及间接免疫荧光法鉴定其特异性;western blot分析其特异性结合抗原的相对分子量;免疫组化染色分析单抗的组织特异性。 结果：得到1株高效价的、稳定分泌IgG1抗人NSCLC单抗的细胞株（NJ488-1）,纯化后效价为2×10⁶;间接细胞ELISA 及间接免疫荧光法证实NJ488-1能特异地识别肺癌细胞系,其识别抗原定位于SPC-A1细胞胞浆区;western blot显示NJ488-1特异性结合的抗原相对分子量(Mr)为70 000左右;免疫组化结果表明NJ488-1与NSCLC组织有强阳性反应。 结论:成功地制备并鉴定了抗人NSCLC单抗NJ488-1,为肺癌的进一步研究及NJ488-1的临床应用奠定了基础。     

153Sm标记抗CEA单克隆抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的放射性分布

目的 以153Sm标记的抗CEA单克隆抗体对荷人结肠癌移植瘤裸鼠进行肿瘤定位显像的研究.为结肠癌早期诊断提供一种新方法,并为其临床应用提供实验依据.方法 每只荷瘤裸鼠从尾静脉注射7.4 MBq/0.1 ml于注射后2、4、8、24h行全身SPECT显像.于4、8、24h分批处死裸鼠并测定分别在肿瘤、血液、心脏、肺等重要脏器单位重量的放射性比值(%ID/g).结果 153Sm-CEA能够选择性地积聚于肿瘤组织,其摄取率高于153 Sm-IgG,(P＜0.05).结论 153Sm-AFP在荷人结肠癌裸鼠体内,对过度表达CEA的结肠癌具有集合力.为临床上结肠癌的诊断提供实验依据.     

Dkk-3在原发性肝细胞癌的表达及其临床意义

目的 研究Dkk-3在原发性肝细胞癌的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学(SP)法检测该院普外科手术切除的80例原发性肝细胞癌肿瘤及癌旁正常组织Dkk-3表达,比较原发性肝细胞癌不同临床病理因素中Dkk-3表达的差异,分析Dkk-3表达与临床病理因素的相关性.结果 癌旁正常肝组织Dkk-3表达评分[(10.1±2.6)分]显著高于肝癌组织[4.8±1.1)分],差异有统计学意义(P<0.01).原发性肝细胞癌Dkk-3蛋白质表达在性别和年龄中的差异无统计学意义(P>0.05),肿瘤最大径越大、临床分期越晚及有转移时原发性肝细胞癌Dkk-3蛋白质低表达越低(P<0.05).原发性肝细胞癌Dkk-3蛋白质表达与肿瘤最大径、临床分期及有转移呈负相关关系(P<0.05).结论 Dkk-3在原发性肝细胞癌中呈低表达状态,可作为原发性肝细胞癌病情及预后评估的标志物.     

乙肝相关肝癌患者肝组织硬脂酰辅酶A脱氢酶的表达与预后的相关性

目的:探讨乙肝相关肝癌组织中硬脂酰-辅酶A脱氢酶(stearoyl-CoA desaturase,SCD)的表达水平及临床意义。方法:构建176例距离肝癌边界3cm以上肝组织的组织芯片,应用免疫组化技术检测SCD的表达水平,并分析其与临床病理学特征之间的关系。结果:SCD在乙肝相关肝癌患者肝组织中的阳性率为85.80%(151/176)。且肝组织中SCD表达量与肿瘤数目、微血管侵犯、肝硬化等相关(P0.05),SCD高水平表达组患者无瘤生存时间和总体生存时间均短于SCD低水平表达组。结论:SCD在乙肝相关肝癌患者肝组织中的表达量与临床病理及不良预后之间存在一定联系,提示肝癌患者肝组织中SCD的表达量可以作为不良预后的标志物。     

微创性治疗原发性肝癌84例临床研究

目的探讨经皮肝动脉栓塞化疗（TACE）、瘤内无水酒精注射（PEI）和经皮射频消融（RFA）等介入性微创治疗方法对原发性肝癌（HCC）的疗效。方法将1997年9月～2003年9月84例HCC分为5个治疗组：（1）TACE组13例；（2）PEI组16例；（3）TACE联合PEI组10例；（4）RFA组23例；（5）RFA联合PEI组22例。结果TACE组13例中有5例接受二期手术切除，其中3例见残留的癌细胞；余8例治疗后1、2、3年的复发率为25．0％、50．0％、87．5％，1、2、3年生存率分别为100％、50．0％和12．5％。PEI组16例治疗后1、2、3年的复发率分别为28．6％、50．0％和78．6％，1、2、3年生存率分别为81．3％、68．8％和25．0％。TACE联合PEI组10例治疗后1、2、3年复发率分别为20．0％、50．0％和80．0％；1、2、3年生存率分别为90．0％、40．0％和10．0％。RFA组23例，1、2、3年的复发率分别为8．7％、21．7％和34．8％。1、2、3年生存率分别为92．3％、87．0％和60．9％。RFA联合PEI组22例，3例改行手术切除，其余19例患者术后1年复发率为10．5％，2年复发率为26．3％。1年生存率为89．5％，2年生存率为78．9％。结论HCC的微创治疗创伤小，治疗后能保持较高的生存质量。以RFA为代表的局部治疗，对HCC治疗坏死程度较高，理论上其疗效将会接近或者达到手术切除的效果。     

GGT、AFU和AFP联检在原发性肝癌中的诊断价值

目的 探讨肿瘤标志物谷氨酰转肽酶（GGT）、a-L岩藻糖苷酶（AFU）和甲胎蛋白（AFP）在原发性肝癌（PHC）诊断中的价值.方法 对PHC组84例、转移性肝癌（MC）组48例、肝炎组57例和正常对照组79例,检测血清GGT、AFU和AFP水平（前三组患者在接受治疗前检测）.结果 PHC组血清GGT、AFU和AFP水平均明显高于肝炎组及正常对照组,差异有非常显著性（P＜0.01）.PHC组血清GGT、AFU和AFP阳性率分别为91.7%、80.9%、69.0%,AFU、AFP联检阳性率92.4%,GGT与AFU、AFP联检阳性率97.1%;AFP阴性的PHC26例中,血清GGT、AFU阳性率分别为92.3%（24/26）、76.9%（20/26）,表明二者对AFP阴性的PHC患者具有较高的诊断互补作用.结论 血清GGT、AFU和AFP联合检测可提高PHC的诊断率,特别是对AFP阴性、低浓度的PHC更具有诊断价值.