大鼠急性软组织损伤模型骨骼肌中AQP-3的表达变化

目的 观察大鼠急性软组织损伤模型骨骼肌中AQP-3的表达变化及与骨骼肌肿胀的关系.方法 SD大鼠36只,随机分成两组,造模前1d使用10％的硫化钠对每只大鼠左后肢大腿外侧区域进行脱毛处理.正常对照组:仅在左后肢大腿外侧进行脱毛处理,并标记打击范围,不予打击造模;模型组:使用软组织打击器在脱毛区标记范围内予以打击建立急性软组织损伤肿胀的模型,不给任何药物处理.造模后1h、6h、1d、3d、5d、7d六个时相点处死动物,每组每个时相点3只,在标记的区域内肌肉组织取材,应用实时荧光定量PCR、Western blot检测AQP-3的表达水平,行相关分析.结果 在3d、5d、7d三个时相点,模型组的AQP-3表达水平均高于正常对照组(P＜0.05).结论 骨骼肌肿胀状态下AQP-3表达上调,提示AQP-3可能参与了急性软组织损伤后肿胀消退的过程,加速了损伤组织修复的进程.     

治伤巴布剂对大鼠急性软组织损伤模型骨骼肌中AQP-3表达的影响

目的:观察治伤巴布剂对大鼠急性软组织损伤模型骨骼肌中水通道蛋白3(AQP-3) 表达的影响。方法:SD 大鼠54 只, 随机分成3 组, 造模前1 d 使用10% 的硫化钠对每只大鼠左后肢大腿外侧区域进行脱毛处理。正常对照组:仅在左后肢大腿外侧进行脱毛处理, 并标记打击范围, 不予打击造模;模型组:使用软组织打击器在脱毛区标记范围内予以打击建立急性软组织损伤肿胀的模型, 不给任何药物处理;药物处理组:急性软组织损伤肿胀模型建立后立即在局部予治伤巴布剂外敷, 另予胶布加强固定。造模后1 h, 6 h, 1 d, 3 d, 5 d, 7 d 六个时间点处死动物, 每组每个时相点3 只, 在标记的区域切取肌肉组织, 采用干湿比重法测定骨骼肌组织的含水量, 应用实时荧光定量PCR、Western 印迹法检测AQP-3 mRNA 及蛋白的表达水平, 并行相关分析。结果:检测的六个时间点中, 模型组和药物处理组的肌肉组织含水量均高于正常对照组(P<0.05), 在3, 5, 7 d 三个时间点, 药物处理组的含水量低于模型组(P<0.01);药物处理组、模型组的AQP-3 mRNA 及蛋白表达水平均高于正常对照组, 且药物处理组高于模型组(P<0.01)。结论:治伤巴布剂具有减轻急性软组织肿胀的作用, 从而加速急性软组织损伤后修复的进程。     

运动对大鼠骨骼肌PI3K磷酸化与表达的影响

目的探讨运动干预对大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)mRNA表达、蛋白总量(t-PI3K)及磷酸化PI3K(p-PI3K)的影响。方法SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分别进行1h/d和1.5h/d的游泳运动7周,最后一次运动结束恢复24h和48h取材,分为1h/d运动24h取材组、1h/d运动48h取材组、1.5h/d运动24h取材组、1.5h/d运动48h取材组。测定血液葡萄糖和胰岛素浓度;Westernblot法检测骨骼肌t-PI3K蛋白表达、p-PI3K磷酸化水平;RT-PCR法分析PI3KmRNA表达。结果与对照组比较,运动组胰岛素浓度降低;各运动组p-PI3K升高;1h/d运动24h取材组和1.5h/d运动24h与48h取材组t-PI3K增高;PI3KmRNA表达变化发生在1h和1.5h运动24h取材组。结论运动干预提高大鼠骨骼肌对胰岛素的敏感性,改善PI3K磷酸化、蛋白和基因表达。     

大鼠骨骼肌挫伤后骨骼肌肌钙蛋白I mRNA的表达变化

目的应用实时荧光定量PCR技术检测大鼠骨骼肌挫伤后肌钙蛋白I mRNA（sTnI mRNA）表达情况,分析其与挫伤的关系。方法建立大鼠骨骼肌挫伤模型,分别在挫伤后0.5h,1h,6h,12h,18h取材。提取挫伤肌肉中的总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,以cDNA作为模板,通过特异性上下游引物荧光定量PCR检测cDNA的拷贝数,选取管家基因核糖体蛋白L32为参比基因,对扩增结果进行相对定量分析。结果大鼠骨骼肌挫伤后0.5h、1h、6h、12h、18h的sTnI mRNA表达量分别为正常组的66.7％、46.6％、31.9％、18.5％和15.3％,呈时序性表达下调趋势。结论大鼠骨骼肌挫伤后0.5h内sTnI mRNA的表达即开始下调,18h内sTnI mRNA的表达有一定的时间规律性,可望作为临床诊断骨骼肌损伤的指标之一。     

大鼠创伤性脑水肿早期水通道蛋白 AQP-4的表达及意义

目的探讨水通道蛋白4（AQP-4）在大鼠创伤性脑水肿早期的表达及意义。方法按Feeney自由落体撞击法建立大鼠创伤性脑损伤（TBI）模型,用干／湿法测定大鼠TBI后不同时相脑组织含水量,并采用免疫组织化学方法检测脑组织AQP-4蛋白的表达．采用Western Blot方法对AQP-4蛋白进行半定量分析。结果TBI后48小时伤侧脑水肿达高峰,同时水通道蛋白AQP-4在大脑半球表达降低（P〈0．05）,损伤侧大脑半球伤后48小时降低最为明显（P〈0．01）。AQP-4的表达与脑组织水含量呈负相关。结论脑损伤后,AQP-4表达降低与脑水肿的形成密切相关。     

低强度聚焦超声促进SD大鼠慢性骨骼肌损伤修复

目的：探讨低强度聚焦超声（low intensity focused ultrasound,LIFU）对大鼠慢性骨骼肌损伤的修复作用。方法：用重力打击器构建大鼠慢性骨骼肌损伤模型,构建成功后模型分为超声组和对照组,超声组采用LIFU每天1次,连续辐照患处14 d,对照组假治疗。2组分别于治疗第3、10、21天取损伤区域组织,采用苏木精-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色法观察组织变化,免疫组化定量生肌决定因子（Myf-5）和辅肌动蛋白（α-actinin）表达强度并使用图像分析软件进行平均光密度（average opti－cal density,AOD）分析,实时荧光定量多聚酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）分析肌分化因子（MyoD）mRNA表达水平,对组织修复情况进行评价。结果：HE染色图片提示超声组坏死肌纤维逐渐被新生排列整齐肌纤维取代;对照组纤维组织形成,炎症细胞浸润,肌纤维萎缩明显。治疗开始的第3、10、21天,超声组α-actinin（3 d=0.270±0.026,t=2.963,P=0.018;10 d=0.244±0.011,t=2.865,P=0.027;21 d=0.222±0.031,t=1.073,P=0.317）、Myf-5（3 d=0.291±0.050,t=2.691,P=0.027;10 d=0.246±0.015,t=2.726,P=0.032;21 d=0.166±0.021,t=0.369,P=0.722）、MyoD mRNA（3 d=5.613±0.379,t=4.679,P=0.002;10 d=3.276±0.261,t=2.377,P=0.048;21 d=1.810±0.200,t=0.634,P=0.546）的表达均高于对照组α-actinin（3 d=0.234±0.008;10 d=0.214±0.020;21 d=0.203±0.023）、Myf-5（3 d=0.225±0.023;10 d=0.211±0.025;21 d=0.161±0.016）、MyoD mRNA（3 d=4.465±0.397;10 d=2.807±0.356;21 d=1.712±0.280）,且在第3、10天差异有统计学意义（P<0.05）。结论：LIFU能促进大鼠慢性骨骼肌损伤再生修复,改善组织结构。     

运动对大鼠骨骼肌P13K磷酸化与表达的影响

目的探讨运动干预对大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）mRNA表达、蛋白总量（t-PI3K）及磷酸化PI3K（p-PI3K）的影响。方法SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分别进行1h／d和1．5h／d的游泳运动7周,最后一次运动结束恢复24h和48h取材,分为1h／d运动24h取材组、1h／d运动48h取材组、1．5h／d运动24h取材组、1．5h／d运动48h取材组。测定血液葡萄糖和胰岛素浓度;Western blot法检测骨骼肌t-PI3K蛋白表达、P-PI3K磷酸化水平;RT-PCR法分析PI3K mRNA表达。结果与对照组比较,运动组胰岛素浓度降低;各运动组P．PI3K升高;1h／d运动24h取材组和1．5h／d运动24h与48h取材组t-PI3K增高;PI3K mRNA表达变化发生在1h和1．5h运动24h取材组。结论运动干预提高大鼠骨骼肌对胰岛素的敏感性,改善PI3K磷酸化、蛋白和基因表达。     

肌钙蛋白T同分异构体在鸡骨骼肌中的表达

目的：研究鸡骨骼肌肌钙蛋白Ｔ同分异构体的表达。方法：对２ｄ龄鸡进行自体肌肉移植，将胸肌植入腿肌、腿肌植入胸肌、前背阔肌植入胸肌和腿肌后，用光镜和电镜观察组织形态，用双向电泳和免疫标记检测肌钙蛋白Ｔ同分异构体的变化。结果：发现供体肌纤维在移植后短期内退化，然后逐渐增生形成新的肌纤维，新生肌纤维细胞与受体组织肌细胞有不完全融合现象；新生肌具有表达原组织肌钙蛋白Ｔ同分异构体的特性，这种特性一直维持至观察期的第６个月。结论：一种骨骼肌的肌钙蛋白Ｔ同分异构体的表达是该细胞系谱所固有的性质     

LacZ基因在体内外骨骼肌中的表达

采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导基因转移技术，将含有大肠杆菌β－半乳糖苷酶的结构基因（ＬａｃＺ基因）及Ｒｏｕｓ肉瘤病毒启动子的质粒（ｐＲＳＶ－ＬａｃＺ）导入体外培养的大鼠原代骨骼肌内；另外，分别将具有ＲＳＶ启动子和巨细胞病毒ＣＭＶ启动子的ＬａｃＺ基因直接注射到活体小鼠肌肉组织内。经转染的体外培养骨胳肌细胞和取自活体的肌肉组织切片行Ｘ－ｇａｌ组织化学检测以判断ＬａｃＺ基因的表达情况。实验结果证明，用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的骨胳肌基因转染率约为１０％～２０％。直接肌肉注射含有不同启动子的ＬａｃＺ基因后，肌细胞内均有该基因表达。结果表明，无论在体内或体外，骨骼肌细胞均能被外源性基因所转染并能表达该报告基因。因此，有望使用经遗传工程改造的骨胳肌细胞作为体细胞基因治疗的有效运载细胞。     

食管癌中AQ P-3的表达与肿瘤转移的关系

目的：探讨AQP-3在食管癌组织中的表达特点及其在食管癌发生、转移中的意义。方法采用免疫组织化学方法检测21例食管癌组织及15例正常组织中 AQP-3的表达。结果 AQP-3在食管癌组织中的表达显著高于其在正常食管组织中的表达,差异具有统计学意义（P＜0．05）;有淋巴结转移的食管癌组织中 AQP-3的表达水平比无淋巴结转移的高;AQP-3的表达与分化程度及分期有关（P＜0．05）,与患者性别、年龄无明显相关（P＞0.05）。结论 AQP-3在食管癌组织中的异常表达与食管癌发生、转移存在密切的关系。     

CLC-3和AQP-1在大鼠半乳糖性白内障晶状体中表达水平的变化

目的:通过研究大鼠半乳糖性白内障晶状体中氯通道蛋白-3(chloridechannelprotein-3,CLC-3)和水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)表达水平的变化,探讨CLC-3和AQP-1与白内障发病的关系。方法:将半乳糖注射Wistar大鼠单侧眼球后,裂隙灯下观察晶状体混浊情况,分别在造模后不同时间点摘取模型组和对照组大鼠的眼球,取出晶状体,运用实时荧光定量PCR方法检测各组晶状体中CLC-3mRNA和AQP-1mR-NA含量的变化。结果:透明晶状体和半乳糖性白内障晶状体中均有CLC-3mRNA和AQP-1mRNA的表达;生理盐水对照组各时间点CLC-3mRNA和AQP-1mRNA表达无统计学差异;模型组于3、7、14d时CLC-3mRNA表达逐渐增高,均高于同期对照组(P<0.01),到14d时约达正常水平7倍,21、30d时又有所下降,均低于同期对照组(P<0.01);各时间点晶状体CLC-3mRNA含量两两比较,差异均有极显著意义(P<0.01);模型组于3d时AQP-1mRNA表达已下降,与同期对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),且随着白内障进一步发展,AQP-1mRNA含量逐渐降低,均低于同期对照组(P<0.01);各时间点晶状体AQP-1mRNA含量两两比较,差异均有极显著意义(P<0.01)。结论:晶状体中CLC-3和AQP-1表达的变化可能与白内障的发生发展有着密切的联系。     

水通道蛋白-2在小鼠集合管发生发育中的表达

目的 研究水通道蛋白-2（AQP-2）在小鼠集合管发生发育中的表达规律并探讨其作用.方法 采用免疫组织化学和细胞图像分析系统测定灰度值法检测不同时期AQP-2的表达.结果 AQP-2在孕16d的胎鼠检测不到,而在孕17d的胎鼠可以明显的检测到,并随着年龄的增长逐渐增加,在生后3周左右达到稳定水平.结论 AQP-2在孕17d的小鼠集合管主细胞的顶浆膜和胞浆内出现,其着色强度随年龄的增加而加强,到成鼠时达到稳定水平,推测可能与尿液的浓缩能力有关.     

水通道蛋白-1在急性肺损伤中的表达及意义

[目的]探讨水通道蛋白1(AQP-1)在脂多糖(LPS)所致的急性肺损伤(ALI)中的作用。[方法]根据是否腹腔注射脂多糖(LPS)将实验动物分为脂多糖组(LPS组)及生理盐水对照组(Con组),对比两组动物组织病理学改变、动脉血气、肺湿/干重比及AQP-1表达的差异。[结果]光镜下见LPS组肺组织水肿,大量炎性细胞浸润;LPS组PO2(55.07±17.02)mmHg明显低于Con组(97.35±9.37)mmHg,差异有显著性意义,P<0.05;LPS组肺湿/干重比(4.93±0.16)明显高于Con组(4.11±0.69),差异有显著性意义,P<0.05;免疫组化染色显示:LPS组的AQP-1蛋白表达减弱,荧光实时定量PCR证实LPS组的AQP-1 mRNA表达较对照组明显下降(P<0.01)。[结论]AQP-1参与了急性肺损伤的形成。     

高湿环境下脑组织水通道蛋白4表达的变化

目的：通过观察大鼠脑组织中水通道蛋白AQP-4的表达变化,探讨水通道蛋白4表达的变化与高湿环境的关系。方法32只健康雄性的SD大鼠,随机分为30℃20d组、30℃30d组和30℃40d组（采用人工气候箱制作高湿模型）和常温常湿对照组,每组8只。采用实时定量PCR测定大鼠脑组织AQP-4 mRNA表达, Western印迹法观察大鼠脑组织AQP-4蛋白表达。结果高湿环境下30℃20d组、30℃30d组和30℃40d组脑组织AQP-4 mRNA、蛋白水平与对照组相比下降,而只有30℃40d组脑组织AQP-4 mRNA、蛋白水平与对照组相比下降差异有统计学意义（ P〈0.05）。结论脑组织AQP-4表达的变化与高湿环境有关。     

甘遂半夏膏对肝硬化腹水大鼠腹膜水通道蛋白-1基因表达影响的实验研究

目的:通过甘遂半夏膏对肝硬化腹水大鼠腹膜上水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响研究,探讨其利水机制.方法:80只健康SD大鼠分为空白对照组(A组),模型组(B组)、生理盐水组(C组)、甘遂半夏膏组(D组),各20只,采用苯巴比妥钠诱导加皮下注射CCl4制造细胞毒性肝硬化腹水大鼠模型;免疫组织化学检测AQP-1在各组大鼠腹膜上的表达.RT-PCR方法检测各组大鼠AQP-1在肝硬化腹水大鼠腹膜上mRNA的表达,并以3-磷酸甘油醛脱氢酶相对定量.结果:AQP-1蛋白质相对积分光密度:A组(28±8)、B组(14±8)、C组(12±6)、D组(23±9)和mRNA:A组(0.68±0.12)μg/μl、B组(0.34±0.14)μg/μl、C组(0.32±0.11)μg/μl、D组(0.58±0.15)μg/μl.结论:甘遂半夏膏可提高肝硬化腹水模型大鼠腹膜的AQP-1的表达,可能是其利水机制之一.     

AQP4在癫(癎)大鼠海马区的表达及意义

目的探讨AQP4与癫发作的关系,并将水的跨膜转运问题引入癫的研究领域。方法健康成年SD大鼠,随机分为对照组(n=6)和戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)组(n=20)。PTZ组以PTZ亚抽搐剂量(35 mg/kg)每天对SD大鼠进行腹腔注射,连续注射28 d;观察癫点燃率。应用逆转录PCR(RT-PCR)方法对比分析对照组、未点燃组和点燃组大鼠脑组织中的AQP4表达的变化。结果SD大鼠总点燃率为50%。RT-PCR结果显示,点燃组大鼠脑组织中AQP-4mRNA的表达水平为(0.85±0.11)明显高于未点燃组(0.38±0.08)和生理盐水组(0.33±0.08),差异有统计学意义(P<0.05),而未点燃组和生理盐水组间AQP4的表达未见明显的差异(P>0.05)。结论AQP-4可能通过水的转运调节了细胞的神经兴奋性,介导癫活动。     

大鼠脊髓内水通道蛋白-4(AQP-4)分布规律的研究

目的:通过研究大鼠脊髓水通道蛋白-4(AQP-4)的分布规律,探讨脊髓内水转运的分子生物学机制。方法:通过免疫组织化学方法标记AQP-4在大鼠脊髓内的表达,图象分析系统测定阳性区域的平均吸光度,对不同区域的AQP-4表达作统计学分析。结果:软脊膜、中央管周围、灰质血管周围AQP-4表达较中央灰质、白质有显著增多;中央灰质AQP-4表达较白质显著增多,软脊膜、中央管、灰质血管周围之间比较无统计学差异。结论:大鼠脊髓内AQP-4呈极性分布,主要集中在与水转运关系密切的部位,是脊髓内水转运重要的的分子生物学解剖基础。     

大鼠去骨瓣减压术后水孔蛋白-4表达变化的实验研究

目的：研究去骨瓣减压术对大鼠创伤性脑损伤后脑水肿、水孔蛋白-4（AQP-4）表达的影响。方法：应用改良Feeney’s自由落体脑损伤打击装置制成大鼠创伤性脑损伤模型,分为假手术组（SO组）、对照组（C组）及去骨瓣减压组（DC组）,各组在损伤后再分为6、12、24、72、120 h及168 h等6个时间点断头取脑损伤区组织。分别利用干湿重量法测量脑组织含水量和Western-Blot检测AQP-4蛋白的表达。结果：大鼠去骨瓣减压组脑组织含水量及AQP-4蛋白表达呈现先升高后降低的趋势,于伤后24 h达高峰后逐渐下降。与C组相比,上述指标含量均有所下降：脑组织含水量在24、120、168 h差异有统计学意义（P〈0.05）,72 h差异有高度统计学意义（P〈0.01）;AQP-4蛋白表达在12、120 h时间点有统计学意义（P〈0.05）,24、168 h时有高度统计学意义（P〈0.01）。结论：创伤后大鼠脑组织脑水肿与AQP-4表达上调密切相关;去骨瓣减压术可减轻脑水肿,减缓AQP-4表达。该手术对创伤性脑损伤的保护机制可能与减缓AQP-4蛋白表达,从而减轻脑水肿和继发性脑损伤,保护脑组织有关。     

两种单肺通气方式对大鼠肺AQP-5表达影响的对比研究

目的研究两种单肺通气（OLV）方式下大鼠肺组织水通道蛋白-5（AQP-5）表达的变化。方法建立两种OLV大鼠模型：夹闭左侧肺门OLV组（A组）,过深插管OLV组（B组）。按不同通气时间分亚组A1、A2、A3和B1、B2、B3。设双对照组：双肺通气组（C组）,同样分亚组C1、C2、C3;空白对照（D组）。免疫印记法检测肺AQP-5的表达。结果 A、B、C组AQP-5的表达均较D组减少（P〈0.05）;各亚组左右两侧肺AQP-5的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;A、B、C组组内各亚组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;A1、B1、C1组间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;A2、B2、C2组间比较,A2比B2和C2均有减少（P〈0.05）,B2与C2差异无统计学意义（P〉0.05）;A3、B3、C3组间比较,A3和B3均较C3组减少（P〈0.05）,A3比B3减少（P〈0.05）。结论机械通气可致大鼠AQP-5表达下调,与时间相关,夹闭法OLV和插管过深法OLV对AQP-5表达的影响超过双肺通气,前者更明显。