蜥蜴及其伪品石龙子鉴别方法比较

目的比较蜥蜴Eremias argus Peters及其伪品石龙子Eumeces chinensis(Gray)的鉴别方法。方法采用薄层色谱法(TLC)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Native-PAGE)对不同来源的10批蜥蜴药材和3批石龙子药材进行对比研究。结果不同来源蜥蜴药材及其伪品石龙子薄层色谱在相同位置出现相同颜色的斑点,不能对两者进行区分;SDS-PAGE结果显示,不同来源的蜥蜴有3条共有谱带,其中1条是区别于石龙子的特征谱带,且3批石龙子样品在14.6 kDa处的蛋白条带染色程度明显高于蜥蜴;Native-PAGE结果显示,10批蜥蜴样品3条共有谱带中1条是区别于石龙子的特征谱带,3批石龙子样品7条共有谱带中有3条特征谱带,二者特征谱带位置差别很大,进行遗传距离聚类分析,SDS-PAGE法不能将蜥蜴和石龙子完全分开,Native-PAGE法可将2种药材聚为2类。结论 Native-PAGE法可作为中药蜥蜴与其伪品石龙子的快速鉴别方法。     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

党参种子真实性鉴定研究

目的：研究党参种子真实性鉴别方法,为党参种子品种鉴定以及党参种子质量标准的制定提供依据。方法：对不同来源党参分别进行了种子蛋白的SDS—PAGE电泳,子叶蛋白的SDS—PAGE电泳,子叶蛋白的非变性凝胶电泳。结果：三种电泳结果显示,种子蛋白的SDS—PAGE电泳,谱带清晰,分离到的差异谱带多;子叶蛋白的SDS—PAGE电泳,谱带模糊;子叶蛋白的PAGE电泳,谱带虽然清晰但是没有分离到有差异的谱带。结论：党参种子真实性鉴定应选择种子蛋白的SDS-PAGE电泳,通过电泳分析得到陕西凤县,甘肃文县,四川野生的亲缘关系比较近,比其他地方的党参种子多出一条R,值大约为0．060的谱带,根据Marker蛋白谱带可以初步推断这个差异蛋白的分子量为170KDa。     

几种不同种源远志等位酶与可溶性蛋白鉴别研究

目的:利用等位酶与可溶性蛋白凝胶电泳技术探讨远志不同种源的鉴别与亲缘关系。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术分析不同种源远志苹果酸酶、过氧化物酶、酯酶与可溶性蛋白谱带,采用NASYS软件对电泳谱带进行聚类分析。结果:远志可溶性蛋白与等位酶聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱能够鉴别不同种源的远志,9份不同种源远志可被聚为三种类型,遗传距离0.1054～1.2040,除卵叶远志外,其余8份远志遗传距离0.1054～0.6931,卵叶远志与远志间的遗传距离明显高于远志间的遗传距离,地理位置相近的远志遗传距离较小,亲缘关系较近。结论:利用等位酶与可溶性蛋白凝胶电泳技术可为不同种源远志的鉴定与划分提供参考。     

石斛总DNA的提取及鉴定

目的 :探讨不同DNA提取方法对石斛属DNA质量及分子标记结果的影响。方法 :对提取的DNA进行紫外光谱分析、总DNA电泳及RAPD分析。结果 :不同方法提取的DNA质量及产率存在显著差异 ,对RAPD结果影响很大。结论 :石斛属植物在DNA提取前加入无CTAB缓冲液抽提多糖等杂质 ,可获得较高质量的DNA。     

不同栽培品种橘皮中主要活性成分的动态积累

目的：利用不同方法对白及基因组DNA进行提取,比较提取质量的差异,找到一种最适于白及基因组的DNA提取方法,以满足白及DNA条形码研究的需要。方法：采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、十二烷基硫酸钠（SDS）法、碱裂解法和经本文改良的CTAB法提取白及叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及PCR扩增效果检测所提DNA的质量。结果：CTAB法、SDS法和改良CTAB法均能从白及中提取到基因组DNA,而碱裂解法几乎提取不到。其中改良CTAB法提取的DNA纯度和完整度均高于其他方法,PCR扩增效率达到100 %,且扩增条带明亮清晰。结论：经本文改良的CTAB法是提取白及基因组DNA的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于DNA条形码研究。     

浙贝母低温解除休眠过程中酯酶同工酶和可溶性蛋白质的电泳分析

用电泳方法分析了浙贝母低温解除休眠过程中芽、鳞片近轴面表皮和鳞片内部组织的酯酶同工酶和可溶性蛋白质的变化。芽的酯酶同工酶谱带较多，变化明显。鳞片内部组织的酯酶同工酶谱带较少，变化较小。芽、鳞片近轴面表皮和鳞片内部组织可溶性蛋白质图谱的变化主要是颜色深浅的变化。结果说明浙贝母低温解除休眠的过程是由芽和鳞片共同完成的，鳞片近轴面表皮在芽和鳞片内部组织的相互关系中起着重要作用。     

山茱萸药材鲜品与干品总DNA提取方法比较

目的:探讨山茱萸药材鲜品与干品总DNA的提取方法,比较鲜、干品总DNA质量,为以后的研究奠定基础。方法:采用改良CTAB法A,B和经典SDS法,提取山茱萸药材鲜品和干品总DNA,对其进行DNA含量测定和电泳检测。结果:改良CTAB法A提取山茱萸药材鲜品与干品总DNA的OD260/OD280比值在1.7~1.9之间,电泳条带清晰,无拖尾,对山茱萸药材鲜品与干品DNA进行综合比较,结果显示鲜品获得的DNA质量高于干品。结论:改良的CTAB法A是分离高质量完整DNA的方法简便、快速,该方法得到的DNA适合下一步分子生物学研究。     

半夏总蛋白提取及其动态变化研究

目的优选出半夏总蛋白提取的最适方法并研究不同生长时期总蛋白量及成分的变化,为半夏药用成分的监控及合理采收提供科学依据。方法采用丙酮沉淀法、95%(NH4)2SO4盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取半夏总蛋白,筛选半夏总蛋白提取的最佳方法。分别于半夏出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰苞期及倒苗期采集样品,分为新鲜组和干燥处理组,提取样品总蛋白,进行SDS-PAGE电泳检测及Bradford浓度测定。结果丙酮沉淀法、95%(NH4)2SO4盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取的半夏总蛋白量分别为0.369、0.678、1.082、0.493 mg/mL;新鲜半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期4.53 mg/g、全苗期2.28 mg/g、珠芽期2.79 mg/g、佛焰苞期7.61 mg/g、倒苗期10.21 mg/g;干燥半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期31.85 mg/g、全苗期18.52 mg/g、珠芽期42.08 mg/g、佛焰苞期28.56 mg/g、倒苗期56.84 mg/g;新鲜半夏块茎中蛋白含有15条蛋白带,干燥处理半夏块茎中蛋白含有5条蛋白带。结论 TCA-丙酮法是半夏总蛋白提取的最佳方法,不同生长时期的半夏块茎中蛋白成分各异,倒苗期总蛋白量最高。     

黑龙江省不同产地满山红遗传多样性的RAPD分析

目的:分析不同产地满山红遗传背景与遗传关系,建立中药满山红的RAPD分析方法。方法:CTAB法提取不同产地满山红的基因组DNA;琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物,SPSS17.0软件进行聚类分析,NTSYS2.10e软件进行遗传距离计算。结论:从100条随机引物中筛选出10个随机引物,其扩增产物谱带多,特征好,共扩增出806条条带,多态性条带数710条,多态性比例为88.1%。结论:不同产地间的满山红存在丰富的遗传多样性,RAPD分析技术可用于鉴定满山红。     

不同薯蓣皂苷元的盾叶薯蓣遗传关系的RAPD分析

目的从DNA水平分析鉴定不同薯蓣皂苷元盾叶薯蓣的遗传关系。方法从40个10 bp随机引物中筛选出12个引物,进行RAPD分析,应用POPGENE 1.31软件对扩增结果进行聚类分析。结果共扩增出73条DNA片段,其中多态性片段64条,占87.67%,盾叶薯蓣类型间具有明显的多态性差异。结论DNA分子多样性差异与薯蓣皂苷元量差异具有相关性,说明盾叶薯蓣的遗传基础可能对薯蓣皂苷元的形成和积累有显著的影响。     

新疆药用桑树9个栽培群体的RAPD分析

目的 从DNA分子水平上分析新疆药用桑树资源9个栽培群体的遗传关系。方法 从100个随机引物中筛选出10个引物，用这10个引物做RAPD扩增，应用NTSYS软件对扩增结果进行聚类分析。结果 共扩增出108个位点。其中多态性位点91个，多态比例为84．26％，各群体间存在较明显的遗传分化。另外，获得药桑的8个特异位点。结论 RAPD分析结果与新疆药用桑树资源植物的遗传关系的传统划分是基本一致的。     

HPLC法测定草豆蔻中小豆蔻明

草豆蔻为姜科植物草豆蔻A lp in ia katsum ad a iH ayata的干燥近成熟种子。气香,味辛、微苦,性温。归脾、胃经。具燥湿健脾、温胃止呕功效。用于治疗寒湿内阻、脘腹胀满冷痛、嗳气呕逆、不思饮食[1]。种子含黄酮类化合物:小豆蔻明(cardam om in)、山姜素(alp inetin)、鼠李柠     

炮制方法对珍珠母总蛋白质含量及凝胶电泳特征谱带的影响

目的分析不同炮制方法对珍珠母蛋白质含量及其凝胶电泳特征谱带的影响。方法分别应用考马斯亮蓝法测定珍珠母蛋白质含量和应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术获得珍珠母总蛋白质凝胶电泳谱带。结果考马斯亮蓝法测定珍珠母超微粉的蛋白质含量最大,而烘烤品、生品的依次降低;SDS—PAGE凝胶电泳分析表明3种样品均主要含有4条条带,生品、烘烤品和超微粉各条带平行比较时颜色依次加深。结论生品、烘烤品和超微粉的蛋白质分子量分布基本相同,而蛋白质含量依次升高,其中超微粉样品含量最高,说明超微粉碎技术可以作为贝壳类药材新的炮制方法。     

应用微卫星PCR技术鉴别中国林蛙

目的采用微卫星PCR电泳图谱鉴别中国林蛙长白山亚种及混淆蛙种,进而从基源上控制中药材哈蟆油的质量。方法以东北4种不同产地林蛙基因组DNA为原料,根据5对引物的PCR扩增结果,对4种不同产地的林蛙开展鉴别,并采用荧光标记法对结果进行验证。结果在同种引物作用下,4种林蛙的PCR产物电泳图谱显示,DNA条带大小差异明显;荧光标记验证微卫星分子遗传标记方法可以对东北地区4种蛙属动物进行准确鉴别。结论微卫星方法准确可靠,分子遗传标记技术是一个有效的生物鉴定手段,突破了传统鉴定方法,为道地药材保护和利用提供了有力的参考依据,能够用于鉴别物种种类及新物种的产生。     

不同产地丹参药材的ISSR分析与鉴别

目的对不同产地丹参药材的亲缘关系进行分析研究,建立具有鉴别意义的DNA指纹图谱。方法采用ISSR分子标记对丹参药材的基因组DNA进行PCR扩增,利用NTSYS-pc2.1和POPGENE 1.32软件分析不同产地药材间的亲缘关系,构建树系图。结果从66条ISSR引物中筛选出两条具有鉴别意义的多态性引物,在11个不同产地的丹参药材中共得到32位点,1条是单态的,31条是多态的,多态性位点达96.88%,遗传距离在0.1699～1.0678,平均为0.4712。结论不同产地的丹参药材间遗传分化明显,具有丰富的遗传多样性,但是遗传分化与地理关系没有表现出相关性。ISSR标记可以作为不同产地丹参药材鉴别的有效分子标记。     

沉香DNA提取方法及种质资源聚类分析研究

目的：分别建立适用于提取不同类型沉香样品（叶片、干燥枝条、药材）DNA的方法,通过ITS2序列对沉香药材进行种质资源聚类分析。方法：根据沉香叶片、干燥枝条、药材的组织差异,分别采用试剂盒法和优化的CTAB法提取DNA;利用紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增及ITS2序列测定来检测DNA的纯度、浓度及可用性,以比较不同DNA提取方法的效率;将样品测序结果与从GenBank下载的沉香属（Aquilaria spp.）、拟沉香属（Gyrinops spp.）,及沉香药材常见混伪品的ITS2序列,进行聚类分析。结果：优化的CTAB法提取得到的DNA纯度比试剂盒法稍低,但浓度更高。两种方法所提沉香总DNA进行ITS2序列的PCR扩增成功率和测序成功率均为100%。ITS2序列能准确鉴别出4个沉香混伪品和2个拟沉香物种,且15个沉香样品ITS2序列与Aquilaria subintegra（泰国）、Aquilaria sinensis（中国）、Aquilaria crassna（柬埔寨、泰国）三个沉香物种均100%相似。结论：本研究中的两种DNA提取方法均可用于沉香DNA条形码研究;优化CTAB法比试剂盒法更适用于药材DNA的提取,该方法为有关中药材DNA的提取提供了参考;ITS2序列可为沉香种质资源的鉴定和系统发育分析提供必要的实验依据。     

改良CTAB法提取新疆一枝蒿干叶基因组DNA

目的:从自然干燥的新疆一枝蒿中提取高质量的基因组DNA,为该药材的分子生物学研究提供参考。方法:采用2种改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法与常规CTAB法提取新疆一枝蒿中基因组DNA,通过加适量聚乙烯吡咯烷酮(PVP)研磨样本,在核裂解前用细胞核裂解液(STE)洗涤多酚类和多糖类物质,利用95%乙醇室温沉淀DNA等措施。改良CTAB法2与1相比不用液氮研磨样本。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和相关序列扩增多态性(SRAP)检测提取DNA的质量。结果:2种改良CTAB法所得DNA质量均优于常规CTAB法,DNA完整性较好,A260 nm/A280 nm在1.8~2.0,多糖类杂质去除较为干净。SRAP检验条带清晰、多态性良好。结论:2种改良CTAB法均适用于高质量新疆一枝蒿干叶基因组DNA的提取,得到的DNA纯度和完整性均较理想,可为后续分子生物学研究提供良好模版。     

贝母类药材随机引物扩增多态性分析研究

目的探讨贝母类药材不同居群间遗传变异大小,为贝母的种质鉴定及遗传多样性分析提供依据。方法运用随机扩增多态性DNA技术,对浙江象山、浙江磐安、吉林通化、新疆伊犁四个不同居群贝母的基因组DNA进行随机扩增,利用NTsys2.10e软件计算遗传相似性,运用UPGMA法进行聚类分析并构建树状图。结果共筛选了70个随机引物,从中挑选出13条多态性强、重复性好的引物,总共检测出152个位点,多态性位点96个,多态位点比率为63.2%,UPGMA聚类可以将不同来源的贝母很好地区分开来。结论不同居群间的贝母遗传差异与地域差异有明显关系,RAPD分子标记方法可以用来鉴定不同产地的贝母。     

Electrophoresis assay on isoperoxidase in the course of seed dormancy relieving for Fritillaria thunbergii Miq. at two different low temperatures]

The relieving of seed dormancy for Fritillaria thunbergii required 50 days at 8-10 degrees C and 80 days at 3-5 degrees C. During the relieving process, isoperoxidase pattern changes were studied by means of electrophoresis. The results showed that some new bands were detected, some original bands enhanced as the seeds were treated with a low temperature, and the changes of lsoperoxidase patterns were similar at two different low temperatures.