蝉拟青霉总多糖对老龄大鼠巨噬细胞的激活作用

目的：观察蝉拟青霉总多糖对老龄大鼠巨噬细胞的激活作用，探讨其对老龄大鼠的免疫调节作用。 方法： 以中性红吞噬试验测定巨噬细胞的吞噬功能，MTT比色法测定细胞转化率；分别以双试剂终点法、速率法在全自动生化分析仪上测定酸性磷酸酶(ACP)及乳酸脱氢酶(LDH)活力；以鸟氨酸的生成判断精氨酸酶(arginase)的活力；电镜观察大鼠脾脏细胞形态结构的变化。 结果： 蝉拟青霉总多糖使老龄大鼠肺泡巨噬细胞(AM)、腹腔巨噬细胞(PM)胞内和细胞培养上清液内ACP、LDH、arginase活力显著高于对照组（P<0.05或P<0.01）；使PM的吞噬功能及其刺激指数（SI）显著高于对照组（均P<0.01）；使老龄大鼠脾脏细胞胞质粗面内质网和溶酶体数量多于对照组。 结论： 蝉拟青霉总多糖对老龄大鼠的免疫功能具有增强作用。     

蝉拟青霉总多糖对大鼠非特异性免疫调节作用的研究

目的：研究蝉拟青霉总多糖对机体的免疫调节作用。方法：200 mg/L的蝉拟青霉总多糖（PCTPS）臀部皮下注射处理17 d后,用常规方法测定大鼠外周血白细胞 (WBC)数;用生化方法测定脾脏与胸腺组织中的脂质过氧化物（LPO）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平;10%小牛血清的RPMI-1640细胞培养液贴壁培养肺泡巨噬细胞（AMφ）2 h后,用全自动生化分析仪测定其中乳酸脱氢酶（LDH）与酸性磷酸酶（ACP）活性,并进行中性红吞噬试验。 结果：PCTPS组大鼠WBC数高于对照组（P<0.01）;脾脏、胸腺组织中GSH水平高于对照组（P<0.01、P<0.05）,而胸腺组织中LPO水平低于对照组（P<0.05）;AMφ内LDH和ACP活性均强于对照组（P<0.01、P<0.01）,对中性红摄取能力也高于对照组（P<0.01）。结论：PCTPS能提升WBC数;减少LPO的生成,维持GSH的含量,具有增强清除自由基的能力;并对AMφ具有激活作用。     

蝉拟青霉多糖对大鼠免疫功能的调节作用

目的：探讨不同剂量蝉拟青霉多糖对大鼠免疫功能的调节作用。方法： 每天给大鼠称重，并按所称大鼠体重，以50、100、200 mg/kg的蝉拟青霉多糖(PCPS)剂量在大鼠后背部皮下注射给药半个月。处死大鼠后称脾和胸腺湿重，并计算其湿重指数；计数大鼠外周血白细胞(WBC)数；以双试剂终点法测定酸性磷酸酶(ACP)、速率法测定乳酸脱氢酶(LDH)及测定精氨酸酶(arginase)等活力；进行大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中性红吞噬试验。结果：PCPS组大鼠脾脏、胸腺湿重指数及白细胞计数显著高于对照组；PCPS组大鼠肝、肾、脾、胸腺内ACP、LDH活力显著升高，AM吞噬功能显著增强，AM内ACP、LDH、arginase活力显著提高(P＜0.01，P＜0.05)。结论： 不同浓度蝉拟青霉多糖能提高大鼠外周血WBC数，激活肺泡巨噬细胞，并具有剂量依赖性。     

蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠组织器官免疫功能调节的实验研究

目的：观察蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠组织器官免疫功能调节和自由基代谢的影响，探讨其对免疫抑制大鼠组织器官的免疫调节和抗衰老作用。 方法： 以速率法在全自动生化分析仪上测定乳酸脱氢酶（LDH）活力；以鸟氨酸的生成判断精氨酸酶(arginase)的活力；以硫代巴比妥酸-醋酸法测定脂质过氧化物(LPO)含量；以Ellman试剂测定还原型谷胱甘肽(GSH)水平。 结果： 蝉拟青霉总多糖使环磷酰胺所致免疫抑制大鼠组织细胞内LDH（肾、胸腺）、arginase（肝、脾、胸腺）活力升高，具有显著差异（均P<0.01）；使LPO（肾、脾、胸腺）的含量下降（P<0.05或P<0.01）；使环磷酰胺所致的肝、脾内低下的还原型谷胱甘肽(GSH)升高（均P<0.01）。 结论： 蝉拟青霉总多糖能增强免疫抑制大鼠组织器官的免疫功能和加速自由基的代谢。     

蝉拟青霉对大鼠腹腔及肺泡巨噬细胞的激活作用

目的:探讨蝉拟青霉菌丝体水提取物对大鼠腹腔、肺泡巨噬细胞的激活作用。方法:大鼠随机分为4组:正常对照组(Ⅰ)、环磷酰胺组(Ⅱ)、蝉拟青霉组(Ⅲ)、环磷酰胺加蝉拟青霉组(Ⅳ),各组大鼠在同等条件下饲养,连续皮下注射相应药物26d。用生理盐水灌洗大鼠的腹腔和肺泡,收集腹腔与肺泡巨噬细胞(PMΦ、AMΦ)37℃培养2 h,用生化方法测定巨噬细胞内酸性磷酸酶(ACP)和乳酸脱氢酶(LDH)的活力,并进一步观察巨噬细胞摄取中性红的能力。结果:蝉拟青霉菌丝体水提取物使正常大鼠PMΦ、AMΦ内ACP、LDH活力显著升高,并能拮抗由于使用环磷酰胺所致的降低作用;而且能显著增强大鼠PMΦ、AMΦ的吞噬能力。结论:蝉拟青霉对腹腔、肺泡巨噬细胞具有激活作用。     

秃疮花注射对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

本文从体内外研究了秃疮花（DLF）提取物对小鼠腹腔巨噬细胞（PMΦ）免疫功能的影响。结果显示，DLF可诱发PMΦ产生强烈的呼吸爆发作用，并能提高PMΦ的吞噬功能和溶菌酶水平，且具有剂量效应关系。在体试验明，剂量为50－100mg/mlDLF能有效促进PMΦ的活化，提高其吞噬能力和溶菌酶活力（P＜0．05），其中100mg/mlDLF诱发PMΦ产生超氧阴离子（O2）的效应最为显著（P＜0．01）；体内试验时发现，0．5－2g/kgDLF对PMΦ的活化作用及其吞噬能力有显著作用，其中1g/kgDLF可诱导PMΦ产生O2（P＜0．01）提高PMΦ吞噬能力（P＜0．001）和溶菌酶水平（P＜0．05）均有显著性效果。以上结果表明，DLF可诱导PMΦ活化并提高其免疫功能，从而提示DLF的临床治疗作用可能与此有关。     

小檗碱对2型糖尿病大鼠巨噬细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的： 探讨小檗碱对2型糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞（AM）和腹腔巨噬细胞（PM）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。 方法：SD大鼠随机分成4组，正常对照组、高脂组、糖尿病组、小檗碱治疗组。治疗12周后，测定各组大鼠血清葡萄糖、胰岛素和血脂含量，并检测肺泡和腹腔巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）含量、MMP-9和TIMP-1的基因表达水平。结果：糖尿病组大鼠血糖、血胰岛素、血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）浓度明显高于对照组，AM和PM内ox-LDL浓度、MMP-9 mRNA表达明显高于对照组；而TIMP-1 mRNA的表达低于对照组。小檗碱治疗组大鼠血糖、血胰岛素、LDL、TC、TG浓度低于糖尿病组，AM、PM内MMP-9 mRNA的表达低于糖尿病组，而TIMP-1 mRNA的表达高于糖尿病组。 结论：小檗碱具有降低血糖、调节血脂、防治2型糖尿病动脉粥样硬化的作用，其机制可能与其减少ox-LDL生成，直接下调巨噬细胞中MMP-9的表达有关。     

高糖及高胰岛素对肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的： 探讨高糖、高糖＋高胰岛素环境对大鼠肺泡巨噬细胞（AM）氧化应激损伤的影响。方法: 采用支气管肺泡灌洗的方法分离大鼠AM,高糖及高糖＋高胰岛素环境下培养,用卡介苗（BCG）、干扰素α-2b（IFNα-2b）或两者联合活化,检测其丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果: BCG和IFNα-2b＋BCG活化AM时,其SOD活性均低于对照组(P<0.05),而MDA含量和LDH活性均高于对照组(P<0.05);IFNα-2b活化AM时,其MDA含量、LDH活性和SOD活性与对照组无明显差别（P>0.05）。结论: 在高糖、高糖＋高胰岛素环境可诱导AM氧化应激损伤,从而使糖尿病个体易发生肺部感染。     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺巨噬细胞肾上腺髓质素蛋白表达及其意义

目的探讨缺氧性肺动脉高压 (HPH)肺巨噬细胞 (MΦ)肾上腺髓质素 (adrenomedullin,AM)合成、分泌及其在HPH病理生理过程中的作用。方法本研究模拟海拔5km高原连续缺氧 ,制备大鼠HPH动物模型 ,应用光镜、免疫组化、放免测定、细胞计数等方法 ,观察、测定缺氧后10、20、30d和平原对照组 (对照组 )大鼠肺MΦ(肺血管MΦ、间质MΦ、支气管壁MΦ、肺泡MΦ)AM蛋白表达及血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)AM含量变化。结果对照组及缺氧各组肺MΦ、血管内皮细胞、血管和支气管平滑肌细胞、支气管黏膜上皮、Ⅱ型肺泡上皮AM均呈阳性表达。其中各部位MΦ在缺氧后数量明显增加 ,与对照组比较差异显著 (P<0.05) ,AM表达明显增强。缺氧后10、20、30d血浆AM含量显著高于对照组 (P<0.01)。BALF含量于缺氧后10、20d显著高于对照组 (P<0.01) ,30d含量下降 ,与对照组比较无显著差异 ,但P值近于0.05。结论肺MΦ不仅是具有肺部免疫和清除尘埃的功能 ,还可以产生多种生物活性物质 ,参与机体调节的多能细胞。缺氧后肺MΦ数量增加 ,AM表达增强 ,即AM合成分泌增加 ,使肺组织各部位AM含量增加 ,同时泌入血浆和BALF的浓度升高 ,从而对肺循环、肺通气、气道免疫反应及血管结构改建等多方面发挥广泛的调节作用     

多抗甲素增强大鼠腹腔巨噬细胞抗癌免疫功能的研究

目的 本实验探讨腹腔内注射多抗甲素增强大鼠腹腔免疫功能的机制。方法 大鼠腹腔内分别注射0．5、1．0和1．5mg的多抗甲素。2d后处死大鼠分离巨噬细胞。计数并测定乳酸脱氢酶（LDH）和酸性磷酸酶（AcP）的活性，巨噬细胞吞噬活力，一氧化氮（NO）的分泌以及对人K562细胞的细胞毒性进行分析。同时采集大网膜，对大网膜乳斑的数量和面积进行了观察分析。结果 大鼠腹腔巨噬细胞数量、LDH和ACP的活性、吞噬活力、NO的分泌以及细胞毒性随着多抗甲素剂量的增加而增加。并且多抗甲素也显著增加了大网膜乳斑的数量和面积。结论 腹腔内注射多抗甲素可显著增加大鼠大网膜乳斑的数量和面积，并因此增加PMφ的数量，增强PMφ的活性。因而增强了腹腔巨噬细胞的免疫功能。     

Spleen-derived macrophages are readily polarized into classically activated (M1) or alternatively activated (M2) states

Bone marrow derived macrophages (BM-MΦ) that differentiate from precursor cells can be polarized into classically activated pro-inflammatory (M1) or alternatively activated (M2) states depending upon the cytokine microenvironment. We questioned whether tissue MΦ, such as spleen-derived MΦ (Sp-MΦ), have the ability to differentiate into M1 or M2 cells. We show in response to activation with IFN-gamma (IFN-γ) and lipopolysaccharide (LPS), that the Sp-MΦ readily acquired an M1 status indicated by up-regulation of iNOS mRNA, nitric oxide (NO) production, and the co-stimulatory molecule CD86. Conversely, Sp-MΦ exposed to IL-4 exhibited increased levels of mannose receptor (CD 206), arginase-1 (Arg)-1 mRNA expression, and significant urea production typical of M2 cells. At this stage of differentiation, the M2 Sp-MΦ were more efficient at phagocytosis of cell-associated antigens than their M1 counterparts. This polarization was not indefinite as the cells could revert back to their original state upon the removal of stimuli and exhibited flexibility to convert from M2 to M1. Remarkably, both M1 and M2 Sp-MΦ induced more CD4 expression on their cells surface after stimulation. We also demonstrate that adherent macrophages cultured for a short term in IL-4 enhances ARG-1 and YM-1 mRNA along with increasing urea producing capacity: traits indicative of an M2 phenotype. Moreover, in response to in vivo virus infection, the adherent macrophages obtained from spleens rapidly express iNOS. These results provide new evidence for the polarization capabilities of Sp-MΦ when exposed to pro-inflammatory or anti-inflammatory cytokines.     

ConA增强NФ吞噬功能、杀瘤效应及产生效应分子的研究

目的了解 Con A在体内对小鼠腹腔 MΦ 吞噬功能、细胞毒作用及产生 NO、TNF- α、IL- 1的影响。方法分别测MΦ 吞噬鸡红细胞的能力 ,以 S180为靶细胞测 MΦ 依赖的细胞毒作用。以 griess试剂、L92 9细胞 MTT检测法、胸腺细胞增殖法测 MΦ 产生 NO、TNF- α、IL- 1的水平。结果 Con A活化的腹腔 MΦ 吞噬鸡红细胞的能力以及对 S180细胞的细胞毒作用显著强于 PBS对照组 (P<0 .0 1) ,并产生较高水平的 NO、TNF- α、IL- 1。结论 Con A能活化 MΦ 产生 NO等效应分子 ,发挥对 MΦ的免疫调节作用     

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡巨噬细胞延迟整流钾通道的活性研究

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠肺泡巨噬细胞延迟整流钾通道（KV）活性变化。 方法： 随机将大鼠分为COPD模型组和对照组,采用香烟烟雾吸入法复制大鼠COPD模型。应用全细胞电压或电流膜片钳的方法，观察和比较正常对照大鼠与COPD模型大鼠肺泡巨噬细胞（AM）KV电流活性、膜电位和电容的差异。 结果： （1）COPD组支气管肺泡灌洗液（BALF）中单个核细胞总数及AM细胞数均显著高于对照组(P<0.01)；（2）COPD大鼠BALF中AM细胞Kv电流幅度［（520.5±38.7） pA，+50 mV,n=30］显著低于对照组［（713.6±44.4） pA，+50 mV,n=30，P<0.01］；（3）COPD组AM细胞电容［（101.6±7.6）pF, n=42］与对照组［（97.4±1.6）pF,n=67］无显著差异(P>0.05)。但模型组AM膜电位［（-24.6±4.5） mV，n=18］负值显著低于对照组［（-37.9±6.1） mV,n=34，P<0.01］。 结论： COPD大鼠肺泡AM细胞KV功能下调，细胞膜电位负值降低，兴奋性升高。该机制可能与AM细胞促进COPD发病的形成机制有关。     

CCL25 and CCR9 is a unique pathway that potentiates pannus formation by remodeling RA macrophages into mature osteoclasts

This study elucidates the mechanism of CCL25 and CCR9 in rheumatoid arthritis (RA). RA synovial fluid (SF) expresses elevated levels of CCL25 compared to OA SF and plasma from RA and normal. CCL25 was released into RA SF by fibroblasts (FLS) and macrophages (MΦs) stimulated with IL-1β and IL-6. CCR9 is also presented on IL-1β and IL-6 activated RA FLS and differentiated MΦs. Conversely, in RA PBMCs neither CCL25 nor CCR9 are impacted by 3-month longitudinal TNF inhibitor therapy. CCL25 amplifies RA FLS and monocyte infiltration via p38 and ERK phosphorylation. CCL25-stimulated RA FLS secrete potentiated levels of IL-8 which is disrupted by p38 and ERK inhibitors. CCL25 polarizes RA monocytes into nontraditional M1 MΦs that produce IL-8 and CCL2. Activation of p38 and ERK cascades are also responsible for the CCL25-induced M1 MΦ development. Unexpectedly, CCL25 was unable to polarize RA PBMCs into effector Th1/Th17 cells. Consistently, lymphokine like RANKL was uninvolved in CCL25-induced osteoclastogenesis; however, this manifestation was regulated by osteoclastic factors such as RANK, cathepsin K (CTSK), and TNF-α. In short, we reveal that CCL25/CCR9 manipulates RA FLS and MΦ migration and inflammatory phenotype in addition to osteoclast formation via p38 and ERK activation.     

ORIGINAL ARTICLE: The Role of TSP‐1 on Decidual Macrophages Involved in the Susceptibility to Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion

Problem To investigate the role of TSP‐1 on decidual macrophages (DMΦ) in unexplained recurrent spontaneous abortion (RSA). Method of study A total of 20 women undergoing artificial abortion in the first trimester and 10 patients with RSA were selected. (i) The expression of TSP‐1 mRNA in deciduas was detected by real‐time polymerase chain reaction; (ii) Flow cytometry was used to detect the percentage of positive TSP‐1, CD36, CD47 markers on macrophages. (iii) Cytokine expression was measured by enzyme‐linked immunosorbent spot‐forming (ELISPOT) cell assay. Results (i) The expression of TSP‐1 mRNA on DMΦ in RSA was significantly decreased (P < 0.05). (ii) The increased expression of CD36 (P < 0.01) and the decreased expression of TSP1 (P < 0.01) were found on DMΦ of RSA. No different CD47 expression level on DMΦ was observed between two groups. (iii)The expression of IL‐10 in DMΦ of RSA patients was decreased significantly compared with that of controls (P < 0.05). When adding TSP1 into culture medium, there was no change in IFN‐γ expression, but increased IL‐10 (P < 0.05) expression in DMΦ of RSA patients was observed. The expression of IL‐10 was decreased significantly in DMΦ from controls when adding anti‐TSP‐1 antibody to culture medium (P < 0.05). Conclusion TSP‐1 on DMΦ could influence IL‐10 expression as Th2 cytokines. The abnormal expression of TSP‐1 could make some women undergo pregnancy loss.     

小鼠腹腔巨噬细胞基态游离钙离子浓度的不均一性及其和细胞反应性的关系

目的:在单细胞水平上研究小鼠腹腔巨噬细胞(PM)基态游离钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的不均一性及其和细胞反应性的关系。方法:用荧光指示剂Fura-2/AM结合荧光显微镜成像系统检测单个PM基态的及用激动剂刺激细胞后的[Ca²⁺]_i;同时结合NBT染色法定量检测单个PM产超氧阴离子(O₂^-)水平。结果:对7只正常小鼠共392个PM基态[Ca²⁺]_i的研究表明小鼠PM的基态[Ca²⁺]_i呈正态分布[(54±24)nmol/L,n=392],但波动范围较大(从10nmol/L到高于100nmol/L),以[Ca²⁺]_i在40-60nmol/L的细胞数量最多(约占50%)。用PMA、fMLP刺激后PM[Ca²⁺]_i升高,且受刺激后[Ca²⁺]_i升高的峰值和基态[Ca²⁺]_i之间呈正相关(PMA刺激组:r=052,P<0.01,n=58;fMLP刺激组:r=0.59,P<0.01,n=44。此两组实验均以不同的小鼠重复3次,其它两只小鼠的结果与上同。下面的表述方法同此)。另外小鼠PM的基态[Ca²⁺]_i与其受PMA刺激后产生O₂^-的量也呈显著正相关(r=0.42,P<0.01,n=43,重复4次)。结论:小鼠PM的基态[Ca²⁺]_i是不均一的,且基态[Ca²⁺]_i的高低和该细胞对致炎因子的反应性密切相关。