多重PCR结合反向线点杂交方法检测七种性病病原体

目的 建立多重PCR结合反向线点杂交技术同时检测淋球菌、 沙眼衣原体、生殖支原体、人型支原体、微小脲原体、解脲脲原体和毛滴虫的方法。方法 设计7对生物素标记的上述病原体特异性引物同时扩增病原体靶基因。扩增产物与预先标记在尼龙膜上的特异性探针杂交、显影，判读结果。多重PCR结合反向线点杂交方法检测211个尿道、宫颈分泌物临床标本（男107例，女104例），并与传统单一引物PCR检测结果比较，评价反向线点杂交的敏感性和特异性。结果 多重PCR结合反向线点杂交技术能敏感和特异地检测所有这7种病原体标准株，能敏感地检测病原体100拷贝的靶基因。在211个临床标本的检测中，2.8% （6 /211）的标本使用多重PCR结合反向线点杂交技术检测为阳性，而单一引物PCR检测为阴性，再使用巢式PCR检测这6个标本，结果为阳性。结论 多重PCR结合反向线点杂交技术能快速、敏感和特异地检测多种性病病原体。     

在以色列一所美沙酮门诊就诊的妇女中性传播病原体的发生率

本研究的目的是评价在吸毒成瘾的妇女中,性传播病原体的发生率。作者于1987年3～7月在以色列特拉维夫一所美沙酮诊所对64名就诊的妇女进行了性传播病原体的检测,其中30名(47%)妇女是静脉药瘾者(21人是妓女),其他34人(53%)均为口和(或)鼻药瘾者,受检者均无STD的症状,60%承认有卖淫史。研究内容包括:(1)使用标准的问卷调查获得人口统计学以及性行为的资料;(2)采集宫颈分泌物作奈瑟氏淋球菌、沙眼衣原体、人型支原体和尿素分解支原体、阴道加特纳菌、B组链球菌以及单纯疱疹病毒的分离;(3)采集血清作沙眼衣原体(间接免疫过氧化物酶试     

反向斑点杂交技术快速鉴定泌尿生殖道致病性支原体的研究

目的 建立PCR反向斑点杂交方法(PCR-RDB)快速鉴定泌尿生殖道常见致病性支原体.方法 以4种支原体[微小脲原体(Up)、解脲脲原体(Uu)、生殖支原体(Mg)、人型支原体(Mh)]的16SrRNA基因为靶序列设计通用引物和探针,将4种特异的寡核苷酸探针固定于尼龙膜上.利用巢式PCR扩增Up、Uu、Mg和Mh,扩增产物变性后与各特异性探针进行杂交、显色并分析结果,并对检测体系的敏感性、特异性进行测试.同时检测分析60例临床拭子标本.结果 4种特异性探针只与相应的支原体DNA杂交,与其他病原体无交叉反应,其敏感性是1 CFU.60例临床拭子标本PCR-RDB方法共筛选出支原体阳性19例,其中3例为支原体混合感染的标本(Up+Uu 2例,Uu+Mg 1例).结论 该方法可快速、敏感、准确地鉴定引起泌尿生殖道感染的致病性支原体.     

男性非淋球菌引起的尿道炎病原学研究进展

男性非淋球菌引起的尿道炎病因学复杂,除沙眼衣原体等已明确的致病菌外,仍有近50%患者病因未明.近年来研究发现生殖支原体、解脲脲原体(生物2群)、阴道毛滴虫以及单纯疱疹病毒等也与非淋球菌引起的尿道炎相关.阐明非淋球菌引起的尿道炎的病因学对其治疗和控制病原体传播有重要意义.     

不孕女性的宫颈常见性传播病原体感染及性伴情况调查

目的:了解不孕女性宫颈常见性传播病原体感染情况、其性伴感染情况及双方感染一致性。方法:选取在北京大学第一医院妇产科就诊的100名有性经验妇女,分为体检组、不孕组,填写调查问卷,做妇科检查,取宫颈分泌物并留取其性伴的尿液行沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟菌(NG)、生殖支原体(Mg)检测,结果:两组共检测出沙眼衣原体阳性11例,淋病奈瑟菌阳性0例,生殖支原体阳性8例,女方阳性时,男方沙眼衣原体的感染一致率为25%,生殖支原体的感染一致率为33.3%。不孕症组宫颈常见性传播感染及性伴感染比例明显高于体检组。结论:不孕的女性当中,宫颈常见性传播病原体感染的发生率高于普通妇女,并与性伴有一定的一致性。     

DNA芯片检测泌尿生殖道病原体及耐药的研究

目的 研制一种DNA芯片,结合多重PCR方法快速检测泌尿生殖道炎症3种病原体及其耐药类型。方法 根据泌尿生殖道病原体淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体的基因保守序列设计引物和探针,分别检测3种病原体;根据淋球菌gyrA、parC和16srRNA基因序列突变位点设计引物和探针,分别检测淋球菌对喹诺酮类药物和大观霉素的耐药性;根据淋球菌和解脲脲原体的共同tetM基因序列设计引物和探针,检测对四环素的耐药性。制备芯片,对152份泌尿生殖道拭子提取DNA进行7重PCR扩增,并且Cy5荧光标记包含上述基因序列的目的DNA片段,与固定在芯片上的探针杂交,芯片信号分析系统Scanarray 4000在635nm处扫描并分析结果,并与临床检查结果比较。结果 DNA芯片敏感性是0.01fg质粒DNA。152份泌尿生殖道炎症拭子其病原体种类及其耐药类型全部可用DNA芯片检测出来,与目前临床检查结果有较好的一致性(K>0.8)。结论 研制的DNA芯片结合7重PCR方法快速检测泌尿生殖道淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体3种病原体及其对喹诺酮类药物、大观霉素和四环素的耐药类型,具有快速、高特异性和高灵敏度,可以应用于临床检测。     

生殖支原体感染的实验室诊断研究进展

近年的研究已经确认生殖支原体是非淋菌性尿道炎的病原体之一,它独立于沙眼衣原体发挥作用,还可能参与其他泌尿生殖道疾病的发生发展。生殖支原体的分离培养较为困难,血清学检测的非特异性问题阻碍了其临床应用,而聚合酶链反应技术具有较好的敏感性和特异性,已广泛用于生殖支原体的研究。     

生殖支原体感染的实验室诊断研究进展

近年的研究已经确认生殖支原体是非淋菌性尿道炎的病原体之一，它独立于沙眼衣原体发挥作用，还可能参与其他泌尿生殖道疾病的发生发展。生殖支原体的分离培养较为困难，血清学检测的非特异性问题阻碍了其临床应用，而聚合酶链反应技术具有较好的敏感性和特异性，已广泛用于生殖支原体的研究。     

反向斑点杂交技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体及基因分型

目的 建立反向斑点杂交技术,对泌尿生殖道沙眼衣原体感染进行检测和基因分型。方法 用Oligo软件设计寡核苷酸探针,采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增omp1基因的VS1-VS2序列,反向斑点杂交技术对沙眼衣原体进行检测和基因分型。结果 巢式PCR扩增omp1基因的VS1-VS2序列的敏感性与质粒PCR符合率为98.2%(56/57)。优选出11条型特异性(A、B+Ba、C、D、E、F、G、H、I、J和K)和3条群特异性寡核苷酸探针:B群(B、Ba、D和E型),C群(A、C、H、I、J和K型)和中间群(F和G型)。特异性经过基因库中的BLAST程序比较和试验优化,结果显示各探针均与标准株呈特异性杂交。56例VS1-VS2 PER阳性的临床标本杂交法检测均阳性,共检出59株沙眼衣原体,包括8个基因型,其中以E、F、D和H型为主,占77.9%,分别为25.4%,22.0%,16.9%和13.6%。发现3例混合感染占5.4%,分别为D/E、D/F和F/K。结论 反向斑点杂交技术简便且快速,可直接对临床标本沙眼衣原体进行检测和基因分型。     

323例泌尿生殖道衣原体感染合并淋菌及支原体分析

沙眼衣原体(CT)是引起非淋菌性尿道炎(NGU)及女性生殖系统感染的主要病原体。为了解沙眼衣原体合并淋球菌、支原体感染情况，我们于1997年6月～2002年9月，对于确诊为沙眼衣原体感染患者同时进行淋球菌(NG)、解脲支原体(UU)、人型支原体(MH)的检测，有完整资料共323例，结果报告如下：     

性病门诊235例患者生殖支原体感染分析

目的研究分析我院皮肤性病门诊患者生殖支原体(Mg)的感染情况。方法收集2015年2—10月就诊于皮肤性病门诊疑似泌尿生殖系统感染的患者235例(男165例,女70例),采集男性尿道或女性宫颈分泌物分别进行超显微镜检、淋球菌培养、支原体培养、生殖道沙眼衣原体聚合酶链反应(PCR)检测和生殖支原体实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测。结果 235例患者中各种微生物检出情况分别为Mg 17例(7.23%),解脲脲原体(Uu)72例(30.64%),人型支原体(Mh)22例(9.36%),生殖道沙眼衣原体(Ct)10例(4.26%),淋球菌6例(2.55%),上述检测项目全部阴性122例(51.91%)。Mg阳性的17例患者中单一感染7例(41.18%),混合感染10例(58.82%),其中Mg+Uu感染6例,Mg+Uu+Mh感染4例。结论 Mg可单一感染,也可混合感染,临床上应加强对性病门诊患者Mg的筛查。Mg生长条件要求高,培养成功率低,SAT检测是目前可以选择用来检测Mg的方法之一。     

低密度基因芯片检测病毒性STDs病原体方法的建立

目的采用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术建立检测常见病毒性性病病原体的低密度基因芯片。方法将H IV-1,HSV-2,HPV6,HPV11的特异性寡核苷酸探针加尾并以一定阵列固定在尼龙膜上,经过处理后制成低密度芯片。在扩增过程中用B iotin-16-dUTP标记扩增产物,产物变性后分别与点有各种探针的尼龙膜反向杂交,杂交结果采用链霉亲和素-碱性磷酸酶(SP-AP)显色系统检测,并对检测体系的敏感性和特异性进行了测试。结果4种探针只与其对应的DNA杂交,而不和其他病毒杂交。敏感性试验可检出20 fg的病毒DNA。结论低密度基因芯片具有特异、敏感、快速等优点,采用低密度基因芯片一次杂交就可同时筛选鉴定多种性传播疾病(STD s)病毒的感染,值得临床推广应用。     

STD就诊者阴道加特纳菌及其它病原体感染研究

目的:探讨女性STD就诊者阴道加特纳菌(GV)及其它病原菌的感染情况.方法:检测疑为STD患者标本890份(患者组)和健康人标本120份(对照组),用实时荧光PCR检测患者解脲脲原体(Uu)、淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(Ct)和阴道加特纳菌(GV),同时用超高倍显微诊断系统在相差视野下镜检念珠菌(CD)和阴道毛滴虫(TV).结果:STD患者组GV的阳性率为32.14%在CD(40.11%)之后占第2位、对照组GV的阳性率为7.5%.结论:STD患者GV阳性率较高,对STD患者应注意GV的检测和治疗.     

Modelling the cost effectiveness of rapid point of care diagnostic tests for the control of HIV and other sexually transmitted infections among female sex workers

BACKGROUND: In sub-Saharan Africa, gonococcal and chlamydial infections are usually managed using the syndromic approach. However, many infections are asymptomatic in women, and the syndromic algorithm has poor sensitivity and specificity for infections caused by Neisseria gonorrhoeae (Ng) and Chlamydia trachomatis (Ct). Because of this, rapid point of care (POC) tests for Ct/Ng could improve sexually transmitted infection (STI) management in women. This study uses mathematical modelling to estimate the incremental cost effectiveness of using POC tests to diagnose Ng/Ct instead of the current syndromic approach used by the SIDA2 HIV/STI prevention project for female sex workers in Cotonou, Benin. METHODS: A dynamic mathematical model was used with data from Cotonou to estimate the HIV impact of the existing SIDA2 project (1995-8), and to project how impact would change if POC tests had been used. As observed in test evaluations, the POC tests were assumed to have high specificity, but a range of sensitivities. The incremental economic cost effectiveness of using POC tests was modelled using data on intervention costs and an evaluation of an Ng POC test in Cotonou in 2004. All costs were in 2004 US dollars. RESULTS: The model estimated the STI treatment aspect of the intervention averted 18 553 Ng/Ct and 359 HIV infections over 4 years when the syndromic approach was used. In contrast, if Ng/Ct had been diagnosed with a 70-80% sensitive and 95% specific POC test then 24-31% fewer clinic attenders would have been treated, 40-60% more Ng/Ct and HIV infections would have been averted, and the incremental cost effectiveness of using them would have been 107-151 dollars per HIV infection averted if the POC tests cost 2 dollars and 58-81 dollars if they cost 1 dollar. CONCLUSIONS: POC tests can be a cost effective strategy for substantially increasing the impact on HIV transmission, and decreasing the degree of inappropriate treatment of STI treatment interventions that use syndromic management to diagnose Ng/Ct.     

性病门诊男性尿道炎患者沙眼衣原体基因分型

目的 了解性病门诊就诊的尿道炎男性患者中,沙眼衣原体血清型分布情况。 方法 采集2013年1 - 12月中国医学科学院皮肤病医院性病门诊有尿道炎症状的男性患者的尿液,荧光定量PCR检测沙眼衣原体,对沙眼衣原体阳性患者的尿液提取DNA,用巢式 PCR法扩增沙眼衣原体主要外膜蛋白基因ompA的VS1-VS2片段,然后对此片段测序,测序结果用DNAStar5.0软件与每种血清型的参考菌株做比对,分析其血清型。 结果 对2013年432例男性尿道炎患者进行了沙眼衣原体筛查,阳性标本143例,阳性率33.1%。143例沙眼衣原体阳性标本,127例扩增出ompA的VS1-VS2片段,16例未扩增出。127例阳性标本经测序分析获得9种血清型。血清型分布情况如下：E型29（22.83%）、F型28株（22.05%）、D型19（14.96%）、G型16株（12.60%）、J型16株（12.60%）、K型8株（6.30%）、H株5株（3.94%）、I型3株（2.36%）、B型3株（2.36%）,E、F、D、J、G型占85.02%。与标准菌种比对,发现127例菌株中有14株存在碱基突变,为同义突变。 结论 性病门诊男性尿道炎沙眼衣原体血清型主要是E型、F型、D型和G型,与20年前相比,E型菌株比例有所下降,J型菌株比例增高。     

93例女童外阴炎病因分析

目的探讨女童外阴炎临床表现与病因的关系。方法观察患有外阴炎女童的临床表现，取外阴分泌物检查炎性细胞、线索细胞、念珠菌、蛲虫卵、淋球菌(Ng)、沙眼衣原体(Ct)、解脲脲原体(Uu)。取皮损渗出液和静脉血分别检查梅毒螺旋体和RPR。结果女童外阴炎的主要症状有外阴分泌物增多，或脓性，有异味，外阴瘙痒、尿疼、尿频。临床体征有外阴黏膜充血，外阴或肛周皮肤发红或红斑。病原学检查阳性结果分别是G^-或G^ 细菌14例，念珠菌8例，蛲虫卵9例，Ng5例，Ct4例，Uu22例，RPR3例，梅毒螺旋体1例。结论临床表现和病原学结果显示引起女童外阴炎的病因主要有G^-或G^ 细菌、念珠菌、蛲虫。女童生殖道结构特点可能是其易受外界病原菌感染的主要原因。患有性病病原性外阴炎的女童，虽无性疟待史，但其父亲或母亲多有性病史，提示家庭密切接触或不良的环境卫生和个人卫生习惯可致女童性病性外阴炎。值得注意的是：除淋菌和梅毒感染者的临床症状具有特征性，其他几种病原菌所致的女童外阴炎，其临床表现特异性较差，尤其是蛲虫所致的外阴炎常被误诊为性病性外阴炎。     

连接酶链反应检测性病患者沙眼衣原体感染

目的 评价连接酶链反应(LCR)诊断性病患者尿道/宫颈中沙眼衣原体(Ct)的意义。方法 STD门诊尿道(宫颈)炎患者276例,取尿道/宫颈拭子,以LCR分析法检测Ct。采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,其中56例患者同时进行尿道/宫颈拭子Ct细胞培养。差异性结果由PCR法扩增Ct的主要外膜蛋白基因来进行确认,确定LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性。结果 LCR分析法检测尿道/宫颈拭子Ct的敏感性、特异性分别为96.7%和100%。采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,与单独用每份标本逐一进行LCR检测比较,结果完全一致,符合率为100%。结论 以尿道/宫颈拭子为标本,LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性高。适用于诊断泌尿生殖道Ct感染。用标本相混合的方法LCR分析检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,适用于Ct感染的普查。     

Herpes simplex virus seroprevalence and risk factors in 2 Canadian sexually transmitted disease clinics

OBJECTIVES: The objectives of this study were to determine the seroprevalence and risk factors for herpes simplex virus (HSV) types 1 and 2 in patients attending 2 Canadian sexually transmitted disease (STD) clinics. STUDY: Stored sera were tested for the presence of IgG class antibodies to HSV-1 and HSV-2 and results linked to that obtained from a risk behavior questionnaire. RESULTS: Overall prevalences for HSV-1 and -2 were 56% and 19%, respectively. HSV-1 and -2 seropositivity was associated with increasing age, female gender, nonwhite ethnicity, and a history of STD. HSV-2 seropositivity was also associated with a history of genital herpes, presence of genital sores, and coinfection with either human immunodeficiency virus (HIV) or hepatitis C (HCV). CONCLUSIONS: Herpes simplex infection is common in this high-risk Canadian population. Our finding that HCV seropositivity was a significant predictor for HSV-2 seropositivity emphasizes the overlap between pathogens that are primarily thought to be bloodborne pathogens and sexually transmitted infections and the need to target prevention in these areas concurrently.     

STI declines among sex workers and clients following outreach, one time presumptive treatment, and regular screening of sex workers in the Philippines

OBJECTIVES: This intervention linked research aimed to reduce prevalence of Neisseria gonorrhoeae (Ng) and Chlamydia trachomatis (Ct) among female sex workers by means of one round of presumptive treatment (PT), and improved prevention and screening services. METHODS: A single round of PT (azithromycin 1 g) was given to all female sex workers reached during a 1 month period of enhanced outreach activity. Routine sexually transmitted infection (STI) screening services were successfully introduced for two groups of unregistered sex workers who work in brothels (BSWs) and on the street (SSWs). No changes were made to existing screening methods for registered sex workers (RSWs) or lower risk guest relations officers (GROs). Cross sectional prevalence of Ng and Ct was measured by PCR on three occasions, and stratified by type of sex work. Ng/Ct prevalence was assessed twice in clients of BSWs. RESULTS: Prevalence of Ng and/or Ct at baseline, 1 month post-PT, and 7 months post-PT was BSWs: 52%, 27%, 23%; SSWs: 41%, 25%, 28%; RSWs: 36%, 26%, 34%; GROs: 20%, 6%, 24%, respectively. Ng/Ct declines 1 month post-PT were significant for all groups. 6 months later prevalence remained low for BSWs (p<0.001), and SSWs (p = 0.05), but had returned to pre-intervention levels for the other groups. Prevalence of Ng/Ct among clients of BSWs declined from 28% early in the intervention to 15% (p = 0.03) 6 months later. CONCLUSIONS: In this commercial sex setting, one round of PT had a short term impact on Ng/Ct prevalence. Longer term maintenance of STI control requires ongoing access to effective preventive and curative services.