复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤动物模型。方法将人复发性涎腺腺样囊性癌组织块,进行裸鼠皮下接种、传代,建立裸鼠移植瘤模型,并对其进行光镜、电镜、免疫组织化学及染色体分析。结果人复发性腺样囊性癌组织块移植于裸鼠后,获原代移植成功。2年期间移植瘤在裸鼠之间共连续传代4代,移植BALB/C裸鼠5只,平均潜伏期44.33天。经光镜、电镜、免疫组织化学观察发现移植瘤与其原发肿瘤结构特征一致。染色体检查为亚中着丝点染色体,符合人类体细胞核型。结论成功建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型并传代,移植瘤保留了原发肿瘤的组织学特征和染色体核型。     

涎腺腺样囊性癌耐药细胞系的建立

目的:建立博莱霉素(BLM)诱导的人涎腺腺样囊性癌耐药细胞株.方法:采用大剂量博莱霉素(20μ/ml)24 h暴露法反复处理腺样囊性癌细胞系ACC-2细胞,获得耐药细胞系ACC-2/BLM;通过MTT法、细胞计数法、流式细胞术等方法,观察ACC-2/BLM的生物学特性.结果:成功建立了博莱霉素诱导的人涎腺腺样囊性癌耐药细胞系ACC-2/BLM,耐药指数为7.299,与环磷酰胺、顺铂等抗癌药有明显的交叉耐药;与ACC-2细胞相比,ACC-2/BLM倍增时间延长,细胞周期中S期细胞减少,G1、G2期细胞增多.在含60μg/ml博莱霉素的培养液中,分别培养9 d后,ACC-2/BLM凋亡细胞明显少于ACC-2细胞.结论:BLM可致ACC-2细胞产生耐药性,ACC-2/BLM细胞系具有多药耐药特性.     

Establishment of a human cancer cell line from adenoid cystic carcinoma of the minor salivary gland

This paper reports the establishment of a human cancer cell line from adenoid cystic carcinoma of the minor salivary gland and the study of its biological behaviours. The cells of the cell line (SACC-83) are polygonal in shape, with a mosaic arrangement. Ultrastructural study reveals that many secretory granules are present in the cytoplasm. The mitosis index, growth curve, chromosome analysis and transplantation into nude mice were performed and discussed. The results prove that this cell line possesses the morphological and biological features of adenoid cystic carcinoma.     

涎腺腺样囊性癌细胞系中DNA甲基化研究

目的探讨涎腺腺样囊性癌（adenoidcysticcarcinoma，ACC）细胞系中抑癌基因甲基化状况及其与mRNA、蛋白表达之间的关系。方法甲基化特异性PCR法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中E-钙黏着蛋白（E-cadherin，E-cad）、p16、RASSFlA、DAPK、MGMT基因启动子区的甲基化状况。应用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测E-cad、p16在mRNA和蛋白水平的表达。结果3个ACC细胞系中均检测到E-cad、p16基因的甲基化，而没有RASSFlA、DAPK、MGMT基因的甲基化；mRNA和蛋白水平均未检测到E-cad的表达，均检测到p16的表达。结论ACC细胞系中，E-cad、p16基因启动子区的甲基化是常见事件，甲基化可能是E-cad基因失活的主要机制之一。     

层粘连蛋白对腺样囊性癌细胞侵袭和转移的影响

目的 研究层粘连蛋白（ＬＮ）与人涎腺腺样囊性癌转移的关系。方法 应用免疫组织化学染色,Ｂｏｙｄｅｎ小室体外移动试验和体外粘附试验,对人涎腺腺样囊性癌细胞系Ａｃｃ－２和其克隆出的肺高转移细胞株Ａｃｃ－Ｍ进行比较研究。结果 发现ＬＮ和层粘连蛋白受体（ＬＮＲ）在Ａｃｃ－Ｍ表达明显高于Ａｃｃ－２。在加入外源性ＬＮ后,Ａｃｃ－２体外移动性、粘附率均明显提高,而Ａｃｃ－Ｍ无明显变化。结论 层粘连蛋白在Ａｃｃ转     

神经生长因子对体外培养腺样囊性癌细胞的作用

目的研究神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对体外培养的腺样囊性癌(adenoidcysticcarcinoma,ACC)细胞的作用及其机制。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度NGF(0.0,0.1,1.0,10.0,100.0,200.0ng/ml)对体外培养的腺样囊性癌细胞系Acc-2和Acc-M的作用;使用反转录(RT)-PCR检测两株细胞系中NGF的受体TrkA和p75的表达。结果Acc-2和Acc-M细胞中各浓度组的吸光度值和对照组差异均无显著性(P>0.05)。指数增长期的两株细胞内在mRNA水平均未发现TrkA和p75基因的表达。结论体外培养的腺样囊性癌细胞不表达NGF的受体TrkA和p75。NGF对体外培养的腺样囊性癌细胞的增殖无明显的促进或者抑制作用。     

顺铂诱导人涎腺腺样囊性癌细胞多药耐药性的评价

目的:用恒定顺铂浓度、周期性作用的方法,诱导产生耐顺铂的腺样囊性癌细胞株SACC,并检测其多药耐药性。方法:用浓度为1μg/ml的顺铂作用于腺样囊性癌细胞株,每次作用时间48h,经6个月后形成在该药物浓度下生长良好的耐顺铂细胞株。用MTT法、流式细胞仪检测4种化疗药物甲氨喋呤、平阳霉素、长春新碱、丝裂霉素对2种细胞的杀伤效应和细胞周期的变化。结果:经过6个月诱导形成的耐顺铂细胞株SACC/DDP,较之SACC,对4种化疗药物均产生了不同程度的抗性,流式细胞仪检测发现其细胞周期发生变化,主要是G0/G1比例下降,且与药物浓度密切相关。结论:经顺铂周期性诱导,可以产生人涎腺腺样囊性癌多药耐药细胞株。     

Sensitivity of human squamous and adenoid cystic carcinoma cell lines with cisplatin and it's combined chemotherapy in vitro]

This was a report on the sensitivity of human squamous (Tca-8113) and adenoid cystic carcinoma (Acc-2) cell lines with Cisplatin (DDP) and it's combined chemotherapy (DDP+VCR+PYM, or PVP). DDP could kill both these two cell lines in vitro depending on the concentration of agent in given time. The rate of 3H-TdR incorporation, plating efficiency and DNA synthesis of carcinoma cells were prevented in drug-exposing groups. Tca-8113 cell line was more sensitive to DDP than Acc-2 cell line (P less than 0.01). PVP combined chemotherapy could enhance DDP's anticancer efficiency.     

力学刺激对人腺样囊性癌高低转移细胞系增殖的影响

目的:比较不同大小的力对腺样囊性癌高低转移细胞系增殖的影响。方法:通过体外培养腺样囊性癌高低转移细胞系ACC-2,ACC-M,建立双轴力学刺激细胞模型,用不同大小力刺激,用流式细胞仪检测ACC-2,ACC-M增殖变化。结果:不同大小的力及作用时间对ACC细胞增殖活性的影响具有统计学意义,并且这种影响还具有随时间延续而变化的特性。结论:力对细胞增殖有影响并与力大小和作用时间相关。     

绿色荧光蛋白转染标记腺样囊性癌生长的裸鼠模型

目的 建立能够实时监测、连续动态观察腺样囊性癌生长、转移的裸鼠模型.方法 用逆转录病毒载体pLEGFP-N1感染腺样囊性癌细胞系ACCM并筛选出ACCM-GFP稳定细胞株,并比较ACCM和ACCM-GFP细胞的增殖特性和形态特点;用ACCM-GFP细胞种植法建立裸鼠舌癌模型,对移植瘤的生长进行实时荧光成像观察,并与AC...     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

涎腺腺样囊性癌细胞对抗癌药物敏感性的研究

目的 检测涎腺腺样囊性癌对抗癌药物的敏感程度。方法 采用ＭＴＴ法测试了１４种抗癌药物对ＳＡＣＣ－８３、ＡＣＣ－２和ＡＣＣ－Ｍ等３个体外培养的涎腺腺样囊性癌细胞株的杀伤作用强度。结果 ３种细胞株对１４种药物的敏感性大体相似而又有差别,在抗代谢类抗肿瘤药物中,对ＭＴＸ、ＤＮＡ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＭＭＣ的敏感性较强,在植物来源的抗癌药物中,对Ｔａｘｏｌ有明显的敏感性。结论 药物敏感性测定对临床选用有效的     

唾液腺腺样囊性癌细胞系中5个抑癌基因甲基化及其表达

目的：探讨唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）细胞系中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化及其与mRNA表达之间的关系。方法：甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC—M中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH—1、MyoD1基因的甲基化：RT—PCR及荧光实时定量PCR对存在甲基化的基因进行mRNA水平的检测。结果：3个细胞系中均存在CDH13、RASSF2A、TFPI-2基因的甲基化和未甲基化,只存在MyoD1基因的甲基化和hMLH-1基因的未甲基化：ACC-2中CDH13基因mRNA水平的表达显著高于ACC—M,ACC-3中RASSF2A的表达显著高于ACC-2、ACC—M,3个细胞系中均未检测到MyoD1基因的表达。结论：ACC细胞系中,CDH13、RASSF2A、TFPI-2、MyoD1基因的甲基化为常见事件,甲基化可能为MvoD1基因失活的主要机制．CDH13基因的表达可能与ACC的转移相关．     

地西他滨上调唾液腺腺样囊性癌细胞系细胞hMLHl的表达

目的：通过检测地西他滨（decitabine）对体外培养人唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cvstic carcinoma,SACC）细胞系细胞hMLHl的影响．探讨DNA甲基化转移酶抑制剂应用于SACC治疗的可行性及可能机制。方法：采用不同浓度的decitabine处理SACC细胞系SACC-83和SACC—LM细胞．观察细胞形态变化。选取5Ixmol／L的decitabine处理细胞后,分别使用甲基化特异性PCR、蛋白免疫印迹法、流式细胞技术检测用药前、后hMLHl基因启动子甲基化状况、hMLHl蛋白表达和细胞周期、凋亡的变化。应用SPSSl3．0软件包对数据进行独立样本t检验。结果：经decitabine处理后,SACC-83和SACC—LM细胞中hMLHl基因启动子甲基化水平降低,hMLHl蛋白表达水平分别升高1．582倍和1．977倍（P〈0．05）。用药后G0／G1期细胞比例显著减少．S期细胞比例显著增加（P〈0．05）．2种细胞系细胞晚期凋亡比例显著增加,差别有统计学意义（P〈O．05）。结论：DeCitabine可通过改变hMLHl基因启动子甲基化水平,上调蛋白表达;使SACC细胞阻滞于S期,Decitabine有可能作为SACC化疗药物或与顺铂联合使用,增强顺铂的效果．     

Establishment and characterization of immortalized human gingival keratinocyte cell lines

Background and Objective: Primary human keratinocytes are used to analyze the properties of the oral epithelium and the early stages of oral bacterial infections. In vitro, these cells are characterized by their short life span and restricted availability. Approaches for culturing these cells will end after approximately 6–10 passages as a result of entry into apoptosis. For this reason, it is important to generate cell lines suitable for obtaining an unlimited source of cells. Therefore, the aim of the present study was to generate gingival keratinocyte cell lines and to compare their in vitro behaviour with those of primary human gingival keratinocytes. Material and Methods: Primary human gingival keratinocytes were immortalized with a combination of the human papilloma virus onkoproteins E6 and E7. The pattern of the cytokeratins, involucrin and filaggrin was investigated by intracellular staining using flow cytometry. This method allows quantitative analysis of the expression of a variety of intracellular or extracellular markers. Results: The immortalized cell lines showed many morphological similarities, expressing a cytokeratin pattern that is comparable with that of primary gingival keratinocytes. Furthermore, they developed transepithelial electrical resistance, which is a marker for the generation of tight junctions. These results indicate that the cells might be able to act as an epithelial barrier, reflecting the reaction of primary human cells. Conclusion: The establishment of a continuous line of human gingival epithelial cells with functional characteristics of the epithelial barrier provides a valuable in vitro model for using to study the early steps of gingival/periodontal infections.     

细胞粘附蛋白在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的　探讨具有不同转移能力的涎腺腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍ ａ; Ａ Ｃ Ｃ）细胞系中粘附分子表达的差异。方法　采用免疫组化方法对两株人腺样囊性癌细胞系（ Ａ Ｃ Ｃ２ 和 Ａ Ｃ Ｃ Ｍ）培养细胞及其 Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ 小鼠移植瘤模型进行粘附分子 Ｃ Ｄ４４ｓ（标准型）、 Ｃ Ｄ４４ｖ６（变异型）、 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ（ Ｅｃａｄ）、αｃａｔｅｎｉｎ（αｃａｔ）、βｃａｔｅｎｉｎ（βｃａｔ）的检测。结果　（１） Ａ Ｃ Ｃ肺转移灶的肿瘤细胞中粘附分子的表达普遍高于其皮下移植瘤细胞;（２） Ａ Ｃ Ｃ Ｍ 肺转移灶肿瘤生长缓慢,细胞分化相对较好,而其皮下移植瘤和腹腔种植瘤肿块生长迅速,细胞分化差;（３） Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在 Ａ Ｃ Ｃ Ｍ 和 Ａ Ｃ Ｃ２ 体外培养细胞中均有弱阳性表达,而在异体移植瘤中包括皮下移植瘤和肺部转移灶均无表达。结论　 Ａ Ｃ Ｃ细胞中 Ｃ Ｄ４４ｓ 的表达受细胞分化程度影响,并影响了肿瘤细胞本身的生长状况; Ｅｃａｄ／ｃａｔ复合体的表达与否或表达强度与肿瘤细胞的分化成正比; Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在涎腺 Ａ Ｃ Ｃ中的表达和转移能力可能无关。     

Characteristic findings of adenoid cystic carcinoma on MR imaging and differentiation from squamous cell carcinoma

Ten patients with adenoid cystic carcinoma and 49 with squamous cell carcinoma confirmed by aiopsy were evaluated. In these patients, malignant tumors were suspected with clinical progressions and clinical symptoms. The purpose of this study was to analyze and discuss the characteristic findings on MR imaging of adenoid cystic carcinoma in the head and neck, and to examine the usefulness of MR imaging in the differentiation between adenoid cystic carcinoma and squamous cell carcinoma. The characteristics on MR imaging of adenoid cystic carcinoma are a high signal intensity on T2-weighted images, marked enhancement by Gd-DTPA, and a capsular structure. All cases of recurrent adenoid cystic carcinomas also showed upward extension. We consider that the high signal intensity on T2-weighted images, the marked contrast enhancement and the capsular structure in MR imaging can be useful in differentiating adenoid cystic carcinoma and squamous cell carcinoma.     

苦参碱对腺样囊性癌细胞周期阻滞和端粒酶催化亚基表达的影响

目的观察中药苦参有效成分苦参碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的细胞周期及端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响。方法体外培养ACC-M细胞,用不同浓度的苦参碱对体外培养的ACC-M细胞进行干预,以流式细胞仪检测对照组和不同浓度（0.25、0.50、0.75、1.00 mg·mL-1）苦参碱作用不同时间后细胞周期的变化;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测苦参碱作用48 h后细胞hTERT mRNA的表达改变;流式细胞术定量检测hTERT蛋白的表达变化。结果苦参碱作用后明显抑制ACC-M细胞的增殖,使ACC-M细胞周期阻滞于G0/G1期,并与药物浓度和作用时间呈正相关;苦参碱作用后hTERT基因和蛋白表达明显下降。结论苦参碱对ACC-M细胞有明显细胞周期阻滞作用,同时显著下调hTERT基因表达。细胞周期阻滞作用可能与苦参碱下调hTERT基因表达有关。     

涎腺腺样囊性癌细胞来源微泡的初步研究

目的:通过检测涎腺腺样囊性癌来源微泡量与神经生长因子表达量的关系,为进一步探求涎腺腺样囊性癌复发、转移、扩散及嗜神经侵袭的机制提供分子生物学的实验依据.方法:用扫描电镜观察微泡分泌量的情况.采用超高速密度梯度离心法分离纯化微泡,以Western Blotting技术检测其标志性蛋白的表达.结果:神经生长因子的表达和ACC-2微泡的分泌呈正相关性.从ACC-2培养上清中分离出的小泡,透射电镜下观察为直径50-100 nm、大小均一、具有明显异质性的圆形或椭圆形膜性小囊泡,有完整的包膜,内为低电子密度物质;Western Blot检测出小泡中含有HSP70和MHC-Ⅰ的表达.结论:涎腺腺样囊性癌来源微泡可能在其嗜神经侵袭中起着重要作用,且与神经生长因子的表达密切相关.