IQGAP1 在食管鳞状细胞癌中的表达及其对TE-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨具有IQ 结构域的GTP 激酶活化蛋白1（Ras GTPase-activating-like protein, IQGAP1）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织与细胞中的表达及其对TE-2 细胞增殖及侵袭能力的影响。方法: 收集2015 年1 月至2016 年12 月郑州大学附属肿瘤医院125 例ESCC手术切除的癌及癌旁组织标本,以及ESCC细胞系TE-2、TE-3、ECA109 和正常食管上皮细胞株Het-1A。用免疫组化染色法检测癌组织中IQGAP1 的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系;用qPCR和Western blotting 检测ESCC细胞中IQGAP1 mRNA和蛋白的表达。用si-IQGAP1（阳性转染组）、si-CTRL（阴性对照组）质粒转染TE-2 细胞,用MTT法、Transwell 小室法和Western blotting 分别检测沉默IQGAP1 对TE-2 细胞增殖、侵袭能力以及上皮钙黏蛋白和神经钙黏蛋白表达的影响。结果: IQGAP1 在ESCC组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）,其高表达与肿瘤分期和分级密切相关（均P<0.05）;IQGAP1 mRNA和蛋白在TE-2、TE-3、ECA109 细胞中表达水平显著高于Het-1A细胞（均P<0.05）。沉默IQGAP1 后,与阴性对照组和空白组比较,阳性转染组TE-2 细胞中IQGAP1 mRNA及蛋白的表达水平明显下降（均P<0.05）;细胞的增殖和侵袭能力显著降低（均P<0.05）,上皮钙黏蛋白表达水平升高（P<0.05）,神经钙黏蛋白表达水平下降（P<0.05）。结论: IQGAP1 在ESCC组织中高表达,敲减IQGAP1 可抑制ESCC细胞的增殖和侵袭能力,其在ESCC的发生发展过程中起重要的作用。     

RNA干扰沉默MSI1表达对人脑胶质瘤细胞化疗敏感度的影响

目的 探讨RNA干扰沉默MSI1表达对人脑胶质瘤细胞化疗药物敏感度的影响。方法 构建针对MSI1 mRNA的小分子RNA干扰（siRNA）重组质粒pSIREN-MSI1,转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;Western blot检测U-87MG细胞内MSI1蛋白的表达;CCK-8法观察U-87MG细胞对化疗药物替莫唑胺（TMZ）敏感度的改变;流式细胞仪（FCM）检测pSIREN-MSI1转染后对U-87MG细胞凋亡的影响。结果 成功构建了重组质粒pSIREN-MSI1,并成功转染U-87MG细胞;Western blot结果显示pSIREN-MSI1抑制U-87MG细胞中MSI1蛋白的表达（P<0.01）;CCK-8结果显示在替莫唑胺作用下,pSIREN-MSI1组U-87MG细胞的存活率明显下降（P<0.01）;FCM结果表明pSIREN-MSI1转染后明显提高U-87MG细胞的凋亡率（P<0.01）。结论 MSI1 siRNA能特异性抑制人脑胶质瘤细胞U-87MG细胞中MSI1的表达,增强人脑胶质瘤U-87MG细胞对化疗药物的敏感度,并促进细胞的凋亡。     

siRNA 沉默HIF-1α在缺氧状态下对食管鳞癌细胞VEGF表达的影响

 目的 观察体外乏氧培养条件下食管鳞癌细胞系EC9706中HIF-1α和VEGF的表达，探讨HIF-1α在低氧条件下对食管鳞癌血管生成的调控作用。方法 CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境，RT-PCR、免疫组化法和免疫印迹法分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰技术（RNAi）用siRNA转染EC9706细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果 低氧条件下，EC9706细胞HIF-1amRNA水平稳定，蛋白表达显著升高，而VEGFmRNA和蛋白的表达均显著升高。SiRNA转染EC9706后能够显著下调HIF-1α的基因表达，同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论 缺氧促使EC9706细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并通过转录激活VEGF的机制调控食管鳞癌血管生成。     

RNA干扰PLCE1基因表达对食管鳞癌细胞周期和凋亡的影响

目的：通过siRNA干扰PLCE1基因表达,检测PLCE1对食管鳞癌细胞增殖周期和凋亡的影响,以探讨PLCE1的致癌机制。方法：采用免疫组织化学方法检测食管鳞癌组织和癌旁正常组织中PLCE1蛋白的表达水平;PLCE1特异性siRNA转染食管鳞癌细胞,荧光显微镜观察转染效率;半定量RT-PCR法检测转染后PLCE1沉默效果;流式细胞术检测干扰后细胞周期变化及凋亡情况。结果：PLCE1在食管鳞癌组织的表达高于正常组织（P=0.000）;siRNA转染后PLCE1表达明显减少（P=0.000）;与对照组相比,PLCE1干扰后可致G0/G1期细胞阻滞（P=0.001）,细胞凋亡增多（P=0.000）。结论：PLCE1在食管鳞癌组织中有较高表达;沉默PLCE1后可抑制癌细胞的增殖,促进其凋亡。