头孢曲松和阿奇霉素体外抗淋球菌联合作用研究北大核心CSCD

目的 评估头孢曲松和阿奇霉素体外对淋球菌临床分离株的联合作用。方法 2012年在大连市皮肤病医院性病门诊收集淋球菌临床分离株25株,Etest法检测头孢曲松和阿奇霉素体外对淋球菌的最小抑菌浓度（MIC）。计算部分抑菌浓度指数（FICI）,判断头孢曲松和阿奇霉素体外对淋球菌的联合作用。结果 头孢曲松MIC均值为0.032 mg/L,MIC值范围为0.008 ~ 0.064 mg/L;阿奇霉素MIC均值为0.834 mg/L,范围为0.064 ~ 4.000 mg/L。 FICI在0.724 ~ 2.696之间,头孢曲松和阿奇霉素对所检测的淋球菌临床分离菌株均表现为相加作用。结论 头孢曲松和阿奇霉素在体外对淋球菌表现为相加作用,尚需大样本进一步证实。     

淋球菌染色体mtrR基因突变对淋球菌多重耐药性的影响

目的 对淋球菌的染色体耐药机理进行了一定的探索。方法 聚合酶链反应及Sanger双脱氧链终止法,测定淋球菌mtrR基因的碱基序列,并做相应淋球菌的药敏试验。结果 具有青霉素耐药性的淋球菌毫无例外都有mtrR基因的单碱基突变,而耐壮观霉素的淋球菌在mtrR基因上有两个位点突变。结论 淋球菌染色体上mtrR基因的突变会引起淋球菌多重耐药性的产生,增加淋球菌对脂溶性细胞毒因子如脂溶性抗生素、去污剂类脂肪酸的抗性。     

淋球菌对头孢曲松的敏感性及淋球菌多抗原测序分型研究

【摘要】 目的 探讨南京市淋球菌对头孢曲松的敏感性以及相应菌株的淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）基因型别。 方法 2007年和2012年在中国疾病预防控制中心性病控制中心临床防治基地分别收集了204株和81株淋球菌,经过分离纯化及鉴定后,用琼脂稀释法测定其对头孢曲松的最小抑菌浓度（MIC）;菌株培养后利用试剂盒提取DNA,并进行淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）。 结果 测试的285株淋球菌MIC ≥ 0.060 μg/ml的菌株比例为63.2%,MIC ≥ 0.125 μg/ml的比例为31.6%。2012年MIC ≥ 0.060 μg/ml和MIC ≥ 0.125 μg/ml的菌株比例分别为44.4%和11.1%,2007年MIC ≥ 0.060 μg/ml和MIC ≥ 0.125 μg/ml的菌株比例分别为70.6%和39.7%。NG-MAST分型研究显示,285株淋球菌共有166个型别,菌株多样性较高,其中73种为已知型别,93种为新型别。2007年测定的所有菌株中以ST568（n = 13）,ST270（n = 9）,ST421（n = 7）,ST2288（n = 5）,ST1731（n = 4）,ST1766（n = 4）,ST1866（n = 4）,ST1870（n = 4）等为主。2012年测定的所有菌株中以ST2318（n = 5）,ST1053（n = 4）,ST5990（n = 4）,ST8726（n = 4）为主。相同NG-MAST型别的菌株具有相同或相近的MIC值。 结论 2012年与2007年菌株的优势型别有较大变化,某些型别与头孢药敏值有较强对应关系。NG-MAST分型可能作为分子生物学标记用于淋球菌耐药监测。     

淋球菌对头孢曲松和头孢克肟耐药现状及耐药机制研究进展

世界各地不断分离出对头孢曲松和头孢克肟敏感性下降的淋球菌菌珠.penA、mtrR、DorB1b和ponA基因是与淋球菌对头孢菌素敏感性下降的主要相关基因.研究表明,镶嵌状penA基因导致淋球菌对头孢克肟敏感性降低,并可能导致淋球菌对头孢曲松敏感性下降.mtrR、porB1b和ponA基因突变与淋球菌对头孢克肟和头孢曲松敏感性下降有明确关系,镶嵌状penA、mtrR、porB1b和ponA基因多态性可能共同导致淋球菌对头孢曲松和头孢克肟的敏感性明显降低.     

系统评价中国大陆地区有关淋球菌头孢曲松耐药监测的研究

目的 收集近期国内外发表的有关中国大陆淋球菌头孢曲松耐药监测文献,分析文献的质量及淋球菌的耐药趋势.方法 检索中国期刊全文数据库、PubMed、Cochrane数据库,筛选合格文献进行系统评价.结果 入选46篇文献,共报道10 163株淋球菌头孢曲松药敏情况.23篇文献主要来自华南(50%);26篇提供的标准菌株为WHO淋球菌分离株(56.52%);32篇文献药敏试验方法为WHO推荐的琼脂糖稀释法(69.57%);淋球菌的头孢曲松耐药率仍较低,但有增加趋势.结论 应该进一步提高淋球菌耐药监测研究的质量,使之能更好地反映淋球菌耐药状况.     

淋病奈瑟菌对头孢曲松耐药性及敏感性降低机制的研究进展

头孢曲松为目前治疗淋病的首选药物之一,国内外淋球菌耐药监测均发现淋球菌对头孢曲松敏感性降低,并已发现少数散发的头孢曲松耐药株。淋球菌对头孢曲松敏感性降低主要由染色体介导,目前大多数研究主要关注三个方面：一是抗生素作用靶位点的改变,影响抗生素与淋球菌的结合产生耐药;二是细菌细胞膜孔蛋白的改变,导致膜通透性降低产生耐药;三是外排系统的改变,导致细菌外排作用增强产生耐药。涉及的基因有penA、ponA、porB和mtrR等。     

抗MtrC单克隆抗体对淋球菌环丙沙星耐药水平的影响

目的　探讨用抗MtrC单克隆抗体（MtrC Ab）干预淋球菌多传递耐药（multiple transferable resistance, mtr）系统后，mtr主动外排泵与环丙沙星耐药的关系。方法　利用MtrC Ab、NaN3阻断mtr主动外排泵，分别测定加入和未加入阻断剂时，淋球菌对环丙沙星的吸收剩余和积累量。结果 敏感组和耐药组的吸收剩余极限分别介于70 ～ 120 ng和0 ～ 80 ng之间。未加入阻断剂时，敏感组环丙沙星积累量高于耐药组。加入MtrC Ab后，耐药组环丙沙星积累量与未加入阻断剂时敏感组无差别。加入MtrC Ab后，敏感组环丙沙星 积累量与未加入阻断剂时无差别。加入NaN3后，耐药组环丙沙星积累量与未加入阻断剂时敏感组无差别。加入NaN3后，敏感组环丙沙星积累量与未加入阻断剂时无差别。6株敏感菌均没有外排泵起作用，4 株高水平耐药菌有外排泵起作用，2 株低水平耐药菌没有外排泵起作用。结论　淋球菌外排泵主动泵出环丙沙星，导致菌体内环丙沙星积累量不足，这是引起淋球菌对环丙沙星高水平耐药的重要因素。MtrC Ab、NaN3可以阻断外排泵蛋白泵出环丙沙星，恢复淋球菌对环丙沙星的敏感性。     

淋球菌rpsE基因突变与大观霉素耐药性的研究

目的 探讨淋球菌rpsE基因突变与淋球菌大观霉素耐药的相关性。 方法 对临床分离的4株大观霉素耐药的淋球菌株（MIC128 μg/ml、256 μg/ml）的rpsE基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,通过DNA转化技术将含有突变基因的细菌基因组DNA转化入敏感的淋球菌株,检测转化成功的淋球菌的MIC并进行PCR扩增测序,分析发现的突变位点与淋球菌大观霉素耐药的相关性。 结果 4株大观霉素耐药的菌株均发现rpsE基因A70C（Thr24Pro）突变,而16S rRNA大观霉素耐药决定区（SRDR）未发现任何突变;大观霉素敏感菌株的16S rRNA和rpsE基因均未发现突变。转化后获得的大观霉素耐药淋球菌中亦发现了同样的rpsE基因突变。 结论 rpsE基因单点突变与淋球菌对大观霉素耐药相关。     

淋球菌mtrR调控区突变片段的体外重组和鉴定

目的:体外重组一段突变DNA片段,用其转染临床淋球菌株,产生特异位点-mtrR调控区突变的转染株。方法:采用基因剪接的技术,通过两步PCR反应完成DNA片段的体外定点突变,突变的EF片段用于后续淋球菌转染实验。结果:经重组的EF分子与淋球菌基因组DNA的相应片段并不完全匹配,测序结果显示,对应mtrR起始密码子上游第45位到第54位碱基之间有9 bp大小的片段缺失。结论:证实EF分子即为预期设计的突变DNA片段。     

南京地区1999-2006年淋球菌青霉素耐药性及耐药质粒基因型研究

目的了解南京地区淋球菌青霉素耐药状况及产青霉素酶淋球菌的质粒基因型的流行情况。方法采用琼脂稀释法检测淋球菌对青霉素的最小抑菌浓度采用纸片酸度定量法检测菌株是否产青霉素酶。采用单管PCR方法对产青霉素酶淋球菌耐药质粒进行基因分型。结果8年间共检测1208株淋球菌，青霉素总耐药率为84．02％（1015／1208）。非产青霉素酶淋球菌中，染色体介导的耐青霉素淋球菌占74．02％（550/743）。产青霉素酶淋球菌占38．49％（465／1208），其中177（38．06％）株同时为质粒介导的耐四环素淋球菌即质粒介导的高度耐四环素淋球菌。产青霉素酶淋球菌阳性率自1999（8．04％）年起逐年增加，至2004年达最高（57．36％），2005、2006年略有下降。质粒PCR分型显示，所测菌株均携带亚洲型质粒。结论南京地区耐青霉素淋球菌始终维持在较高水平，产青霉素酶淋球菌近年增加较快，携带亚洲型质粒的产青霉素酶淋球菌在南京地区流行，未发现其他类型的质粒。     

淋球菌对头孢菌素耐药的治疗应对措施

淋病是淋球菌感染引起的性传播疾病之一,对人类健康及社会经济发展均有较大的危害.近年来,由于治疗不当、患者有耐药基因等多种原因,淋球菌逐渐对青霉素、四环素、环丙沙星等抗菌药出现耐药.目前头孢菌素为治疗淋球菌感染的一线药物,随着头孢菌素的广泛应用,淋球菌对其敏感性逐渐降低,出现临床治疗淋病失败的病例.为了进一步控制淋病,应对淋球菌耐药现象,临床已出现联合治疗、替代疗法、新药研发等方案,以期为控制对头孢菌素耐药的淋病治疗提供应对策略.     

1999-2006年南京地区淋球菌对环丙沙星耐药现状的分析

目的 了解南京地区1999-2006年淋球菌对环丙沙星的耐药现状.方法 对1999-2006年在南京地区性病门诊患者中分离到的1208株淋球菌,采用琼脂稀释法测定环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC).结果 对环丙沙星耐药(MIC 1mg/L)的淋球菌率由1999年的83.93%(94/112)上升至2006年的98.99%(196/198),平均总耐药率为96.61%(1167/1208).其中环丙沙星高度耐药(MIC≥4mg/L)的淋球菌比率达71.61%(865/1208).结论 南京地区流行的淋球菌对环丙沙星的耐药情况极其严重.     

头孢曲松耐药淋病奈瑟菌株FC428的流行、耐药机制及应对策略

淋球菌耐药问题是性传播疾病防控中面临的巨大挑战,近年来在世界范围包括我国流行的头孢曲松耐药淋病奈瑟菌株FC428使耐药问题更加严峻。该菌株因含新型镶嵌结构的penA基因而对头孢曲松高度耐药,且已在全球广泛传播。为更好地了解FC428的特征,控制其进一步传播,本文综述其起源、传播、主要分子特征、耐药机制、检测方法以及临床治疗和耐药监测的策略。     

广州淋球菌基因特征及其多抗原序列分型与环丙沙星耐药相关性研究

目的 探讨2014年广州市97株淋球菌环丙沙星耐药株的基因特征及其多抗原序列分型（NG-MAST）与淋球菌耐环丙沙星的相关性。 方法 用琼脂稀释法测定淋球菌对环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC）,PCR分别扩增淋球菌的gyrA、parC基因和NG-MAST分型基因porB、tbpB基因并测序,获取耐药菌株的ST型别。 结果 97株淋球菌中95株（97.9%）对环丙沙星耐药。95株环丙沙星耐药菌株均在gyrA基因对应丝氨酸的第91和95位点上发生了突变,其中93株菌出现了parC基因突变。41株高水平耐药株（MIC ≥ 16 mg/L）中35株（85.4%）出现了parC基因87位点突变,54株低水平耐药株中32株（59.3%）出现此突变,差异有统计学意义（χ2 = 7.64,P < 0.05）。96株淋球菌分离株配对后,50株为网站已编号型别,共35个不同的ST型,其中10个ST型含有2 ~ 4个不同的分离株,ST型别中最常见ST5309。对淋球菌菌株系统进化树分析,淋球菌流行株可分为两群,第1群84株中MIC ≥ 16 mg/L的菌株39株占46.4%,第2群12株中只有1株MIC值为16 mg/L,差异有统计学意义（χ2 = 6.27,P = 0.012）。 结论 淋球菌对环丙沙星的高水平耐药主要与parC基因87位点突变相关。NG-MAST分型与环丙沙星耐药程度高低可能存在相关性。     

淋球菌耐药性与耐药质粒的相关性研究

目的 探讨质粒在介导淋球菌耐药中的作用。方法 通过耐药质粒的接合、转化及消除试验,比较试验前后各菌株药物敏感性的改变。结果 耐药性淋球菌菌株通过耐药质粒的接合和转化,可将其耐药性传递给敏感的淋球菌菌株,而耐药质粒的消除可使耐药性淋球菌恢复对某些药物的敏感性。结论 质粒的介导在淋球菌耐药性的形成中起着重要作用。     

2008年中国淋球菌临床分离株耐药性的流行病学研究

目的 通过对2008年淋球菌耐药监测结果进行分析,了解我国不同地区淋球菌耐药株的流行现状.方法 淋球菌株来自2008年全国淋球菌耐药监测点符合要求的951例淋病患者,其中江苏156例、浙江71例、福建102例、广东207例,广西77例、海南43例、新疆45例、陕西72例、四川80例、重庆44例、天津54例.通过纸片酸度定量法测定β-内酰胺酶,琼脂稀释法测定大观霉素、环丙沙星、头孢曲松钠、四环素对淋球菌的最小抑菌浓度(MIC).结果 大观霉素有2株耐药(0.21%),头孢曲松451株中度敏感(47.42%),质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNG)487株(51.21%),产青霉素酶淋球菌(PPNG)332株(34.91%),环丙沙星928株耐药(97.58%).淋球菌对多种抗菌药物敏感性间的等级相关分析显示,TRNG阳性率与PPNG阳性率呈正相关(r=0.20,P<0.01),淋球菌对头孢曲松的敏感性与PPNG阳性率负相关r=-0.09,P<0.01),而淋球菌对头孢曲松的敏感性与对环丙沙星的敏感性及TRNG阳性率、淋球菌对环丙沙星的敏感性与PPNG阳性率及TRNG阳性率间没有相关性.卡方分析显示,各省收集的淋球菌对头孢曲松的中敏率之间相差比较大,广西、海南、新疆、陕西四省的中敏率(分别为87.01%、69.77%、82.22%、86.11%)高于总体水平(47.42%);陕西省有2株淋球菌对大观霉素耐药;各省收集的淋球菌对环丙沙星的耐药率较一致(86.11%～100%);广东省收集的淋球菌中TRNG的阳性率(68.60%)明显高于总体水平(51.21%);四川省、浙江省收集的淋球菌中PPNG的阳性率(分别为63.75%和54.93%)明显高于总体水平(34.91%)(P<0.05).结论 不同地区的淋球菌对抗生素的耐药性有明显的差别,其中陕西省收集的淋球菌对首选药物中头孢曲松的中度敏感率及对大观霉素的耐药率较高,应引起重视.

Abstract：

Objective To study the current status of antimicrobial resistance of clinical Neisseria gonorrhoeae isolates in China by analyzing the surveillance results in 2008.Methods N. gonorrhoeae strains were collected from 951 eligible patients at national monitoring sites for resistance of N. gonorrheae,including 156 patients from Jiangsu province,71 from Zhejiang province,102 from Fujian province,207 from Guangdong province,77 from Guangxi province,43 from Hainan province,80 from Sichuan province,44 from Chongqing,45 from Xinjiang Uygur Autonomous Region,72 from Shaanxi province,and 54 from Tianjin.The production of β-lactamase was detected by paper acidometric testing,and minimum inhibitory concentrations(MICs)were determined by agar dilution method for spectinomycin,ciprofloxacin,cefiriaxone,tetracycline,respectively.Results Among the 951 N. gonorrhoeae isolates,2(0.21%)were resistant to spectinomycin,451(47.42%)showed reduced sensitivity to ceflriaxone,928(97.58%)were resistant to ciprofloxacin.Penicillinase-producing N.gonorrhoeae (PPNG) and plasmid mediated tetracycline-resistant N. gonorrhoeae (TRNG) accounted for 34.91%(332/951)and 51.21%(487/951) of these isolates respectively.Kendall rank correlation analysis showed that there was a positive correlation between the positivity rate of TRNG and PPNG(r=0.20,P<0.01),but a negative correlation between the susceptibility to cefiriaxone in N.gonorrhoeae and positivity rate of PPNG(r=-0.09,P<0.01).No correlation was observed between the susceptibility to cefiriaxone and susceptibility to ciprofloxacin or the positivity rate of TRNG,or between the susceptibility to ciprofloxacin and positivity rate of PPNG or TRNG.Chi-square analysis showed a marked increase in the percentage of N.gonorrhoeae isolates with reduced susceptibility to ceftriaxone in Guangxi province,Hainan province,Xinjiang Uygur Autonomous Region and Shaanxi province,the percentage of N.gonorrhoeae isolates with resisitance to spectinomycin in Shaanxi province,prevelance of TRNG in Guangdong province,and prevelance of PPNG in Sichuan and Zhejiang provinces compared with the average level (all P<0.05).Conclusions Thero is a significant diffefence in antimicrobial susceptibility of N.gonorrhoeae from difierent areas of China.A significant elevation is observed in the percentage of N.gonorrhoeae with reduced susceptibihty to cefifiaxone and resistance to spectinomycin in Shaanxi province.to which close attention should be paid.     

耐头孢曲松淋球菌菌株的体外人工诱导及多重耐药现象

目的探讨体外人工诱导耐头孢曲松淋球菌的可行性,为研究淋球菌耐头孢曲松的机制提供实验菌株。方法将对头孢曲松敏感的标准株ATCC49226(MIC 0.004ug/mL)和临床株ZSSY00205(MIC 0.25ug/mL)以头孢曲松次抑菌浓度法连续传代培养,定期监测生物学和分子生物学特性,诱导耐药成功后检测耐药菌株的稳定性,并分析诱导耐药前、后菌株RAPD图谱的改变及对其它抗菌药物耐药性的改变。结果诱导后菌株ATCC49226和ZSSY00205对头孢曲松的MIC值是诱导前的125倍,诱导前、后菌株RAPD图谱未见明显改变,但头孢曲松诱导耐药后的淋球菌对青霉素、四环素、红霉素和环丙沙星的敏感性下降。结论体外头孢曲松次抑菌浓度法可诱导产生头孢曲松耐药株,淋球菌对头孢曲松产生耐药的同时,可对包括青霉素、四环素、红霉素、喹诺酮在内的多种抗菌药物产生耐药或耐药性增加,即多重耐药现象。     

淋球菌对大观霉素耐药基因的初步检测

【摘要】 目的 检测导致大观霉素耐药的淋球菌16S rRNA基因中的突变位点。 方法 对6株大观霉素耐药淋球菌［最小抑菌浓度（MIC） ≥ 128 mg/L］、20株大观霉素敏感菌株（MIC 32 mg/L和16 mg/L各10株）的16S rRNA基因进行DNA扩增和序列测定,分析16S rRNA基因突变情况。 结果 6株大观霉素耐药淋球菌的16S rRNA基因均发生了突变,其中2株（MIC > 256 mg/L）为C1192T突变,1株（MIC 256 mg/L）为C1344T和T1345A突变,1株（MIC 256 mg/L）为T990G和T991C突变,1株（MIC 128 mg/L）为T990G、G1343C和C1344T突变,1株（MIC 128 mg/L）为T991C突变。20株大观霉素敏感菌株均未发生突变。 结论 淋球菌16S rRNA基因不同位点突变可能与大观霉素不同程度的耐药相关,C1192T突变可能导致高度耐药,其他单一位点或多位点突变与不同程度的耐药相关。 【关键词】 奈瑟球菌,淋病; 壮观霉素; 点突变; RNA,核糖体,16S; 抗药性,细菌     

淋球菌gyrA和parC基因突变与氟喹诺酮类药物关系的研究

目的：探讨淋球菌gyrA和parC基因突变与淋球菌耐氟喹诺酮类药物之间的关系。方法：①纸片扩散法检测58株淋球菌对5种氟喹诺酮类药物的敏感性。②E测定法定量检测环丙沙星的最小抑菌浓度（MIC）。③PCR技术扩增gyrA和parC基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR）相关序列并作测序分析。结果：①对环丙沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、洛美沙星、依诺沙星同为敏感、中介、耐药者分别为2株、4株和39株。②环丙沙星MIC为敏感、中介、耐药分别为2株、17株和39株。③环丙沙星MIC为0．004－0．016μg/mL的2株淋球菌gyrA和parC基因均未发生突变；MIC为0．064－0．094μg/mL的菌株仅发生gyrA单位点突变；而MIC≥0.25μg/mL的菌株均发生gyrA双位点突变。MIC≤0．25μg/mL的菌株无parC基因突变，而MIC≥1.0μg/mL的菌株除出现gyrA双位点突变外均同时发生parC单位点突变。④在发生突变的16株菌中，Ser91(TCC)→Phe(TTC）突变为15株。结论：①gyrA基因突变介导淋球菌对氟喹诺酮类药物低和中水平耐药，而对氟喹诺酮类药物高水平耐药需要parC基因突变的共同参与。②gyrA基因Ser91→Phe的突变是导致淋球菌对氟喹诺酮类药物耐药的关键突变。