非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白 2靶蛋白对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制

目的 研究非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)基因对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年8月,将非小细胞肺癌A549、H1299细胞株分为三组:空白对照组(未经转染的细胞);阴性对照组[转染非特异性的小干扰RNA(siRNA)的细胞];siRNA-TPX2组(转染TPX2特异性的siRNA的细胞).采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)方法对转染小干扰RNA(siRNA)前后的非小细胞肺癌A549、H1299细胞株进行鉴定.人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力.Tanswell小室迁移实验检测细胞迁移和侵袭的影响.蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路关键分子及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的变化.结果 siRNA-TPX2组中TPX2 mRNA和蛋白的相对表达水平显著低于阴性对照组及空白对照组(P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制A549细胞的增殖[24 h(0.71±0.02)比(0.62±0.03);48 h(1.62±0.03)比(0.69±0.02);72 h(2.08±0.03)比(0.95±0.02)]、迁移[(91.18±13.97)个比(49.95±12.15)个]、侵袭[(165.46±19.19)个比(93.37±13.54)个](P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制H1299细胞的增殖[24 h(0.81±0.03)比(0.65±0.02);48 h(1.73±0.02)比(0.78±0.01);72 h(2.18±0.03)比(1.16±0.02)]、迁移[(74.31±13.86)个比(38.76±9.05)个]、侵袭[(158.46±19.58)个比(88.47±11.23)个](P<0.05).TPX2表达下调能显著降低非小细胞肺癌A549、H1299细胞中PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶12(MMP12)蛋白的表达(P<0.05).激动剂胰岛素生长样因子1(IGF-1)能完全削弱TPX2-siRNA抑制A549、H1299细胞中PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达(P<0.05).结论 TPX2通过调控PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达促进非小细胞肺癌细胞侵袭转移.     

鸦胆子油乳对肺癌细胞A549的抑制作用及其机制

目的研究鸦胆子油乳对肺癌细胞A549的抑制作用,并初步探讨其相关作用机制。方法以不同终质量浓度的鸦胆子油乳(0.50,1.25,2.50 g·L^-1)作用于肺癌细胞A549,并将其作为低、中、高3个质量浓度实验组,同时设置对照组(给予等量0.9%NaCl)。用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测各组肺癌细胞A549凋亡的形态学变化,用噻唑蓝(MTT)法和免疫印迹法检测各组肺癌细胞A549增殖抑制情况及凋亡抑制蛋白Survivin表达情况。结果干预24 h后,对照组及低、中、高3个质量实验组肺癌细胞A549增殖抑制率分别为(0.31±0.19)%,(37.24±6.21)%,(49.33±5.96)%,(61.25±6.23)%,干预48 h后,增殖抑制率分别为(0.32±0.21)%,(58.14±6.33)%,(65.28±5.79)%,(73.46±5.37)%,干预72 h后,增殖抑制率分别为(0.38±0.23)%,(68.58±5.87)%,(76.35±6.02)%,(83.97±5.64)%。与对照组比较,实验组肺癌细胞A549增殖抑制率显著升高(P<0.01),且随着鸦胆子油乳质量浓度增大和作用时间延长,肺癌细胞A549增殖抑制率呈逐渐升高趋势(P<0.05或P<0.01)。对照组和低、中、高3个质量浓度实验组Survivin蛋白灰度值分别为0.95±0.07,0.83±0.10,0.66±0.12,0.51±0.09;对照组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),且随鸦胆子油乳质量浓度增加,Survivin蛋白表达量呈逐渐降低趋势(P<0.01)。结论鸦胆子油乳可显著抑制肺癌细胞A549增殖,并诱导其凋亡,相关作用机制可能是其可有效抑制肺癌细胞A549中凋亡抑制蛋白Survivin的表达。     

长链非编码 RNA组蛋白去乙酰化酶 3通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡

目的 研究长链非编码RNA组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调控机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肝细胞MIHA、肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-HDAC3组(转染si-HDAC3)、si-HDAC3+DMSO组[转染si-HDAC3并用二甲基亚砜(DMSO)处理]、si-HDAC3+MHY1485组[转染si-HDAC3并用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂MHY1485处理]用脂质体法转染至SK-Hep1细胞;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot?ting)检测细胞中Akt激酶、翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体p70S6激酶蛋白(S6K1)、磷酸化核糖体p70S6激酶蛋白(p-S6K1)的蛋白表达.结果 与正常肝细胞MIHA(1.00±0.06)相比,肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3表达(4.38±0.34)显著上调(P<0.05).敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞的增殖、迁移、侵袭能力均得到明显下调,凋亡能力得到明显上调.有趣的是,敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞中mTOR信号通路关键基因Akt、4E-BP1、p-S6K1的表达均明显下调,并且激活mTOR信号通路可部分逆转敲减HDAC3对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡调控作用.结论 长链非编码RNA HDAC3可调控肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,其机制可能与mTOR信号通路相关,可为肝癌的治疗提供新的作用靶点.     

高良姜素对非小细胞肺癌A549细胞SIRT1/mTOR通路及放射敏感性的影响

摘要：目的:探讨高良姜素对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞沉默信息调节因子1（SIRT1）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路及放射敏感性的影响。方法:体外培养NSCLC A549细胞,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测不同浓度(10,20,40,60,80,100μmol·L-1)高良姜素处理的A549细胞的增殖抑制率;将A549细胞经不同剂量（0,1,2,4,6,8 Gy）放射处理,并设置各剂量与35μmol·L-1高良姜素联用组,克隆形成实验观察高良姜素的放射增敏作用;将A549细胞分为高良姜素+放射线组(35μmol·L-1+6 Gy)、高良姜素组(35μmol·L-1)、放射线组（6 Gy）及对照组,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测增殖蛋白细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、细胞增殖核抗原（Ki67）、凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9及STRT1/mTOR通路蛋白SIRT1、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、mTOR的表达。结果:与对照组比较,随着高良姜素浓度的增加,A549细胞增殖抑制率逐渐增加（P<0.05）;与各剂量射线单独处理的A549细胞相比,35μmol·L-1高良姜素+各剂量射线处理的A549细胞存活分数降低（P<0.05）,辐射增敏比（SER）=1.522;与对照组比较,高良姜素组、放射线组、高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）;与高良姜素组、放射线组比较,高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,高良姜素+放射线组CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论:高良姜素可能通过调控SIRT1/mTOR通路影响A549细胞的增殖凋亡及放射敏感性,可能是治疗NSCLC的潜在药物。     

大豆苷元对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖、迁移能力的影响及机制

目的探究大豆苷元(daidzein,Daid)对非小细胞性肺癌细胞株A549和H1299增殖、迁移能力的影响及可能机制。方法以A549和H1299为研究对象,CCK-8法检测Daid(0,5,10,25,50,100,200μmol·L^-1)抑制A549和H1299两种细胞的增殖情况。划痕和Transwell小室实验检测Daid对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测Cleaved Caspase-3和LC3Ⅱ/Ⅰ等的蛋白表达。结果与对照组相比,Daid在体外可明显抑制肺癌细胞的增殖,且抑制作用呈浓度依赖关系。Daid(100μmol·L^-1)可明显降低人肺癌细胞A549和H1299的迁移侵袭能力。Western blot结果显示,Daid(100μmol·L^-1)预处理后,两种肺癌细胞的Cleaved Caspase-3及LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高。结论Daid可抑制人非小细胞肺癌A549和H1299细胞的增殖,使上述细胞的迁移侵袭能力明显下降,其机制可能与Daid诱导细胞凋亡及自噬有关。     

热疗对人肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨热疗对人肺癌A549、H1299细胞生长与凋亡的影响。方法 MTT法检测热疗对人肺癌A549、H1299细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察热疗对人肺癌A549、H1299细胞周期和凋亡的影响;RT-PCR检测凋亡相关基因p53及Casepase-3的表达。结果热疗对人肺癌A549、H1299两种细胞的生长均有抑制作用。热疗可以明显改变人肺癌A549细胞生长周期的分布,G0/G1期细胞明显减少;但对人肺癌H1299细胞生长周期的分布影响不大。热疗能使A549细胞p53蛋白的表达明显增强,但不能诱导H1299细胞p53蛋白的表达。热疗能同时诱导A549、H1299两种细胞Caspase-3蛋白表达的增强,并且以A549细胞的表达尤为明显。结论热疗对两种肺癌细胞的生长均有抑制作用,可以增加细胞凋亡。p53基因可能在热疗诱导肺癌细胞凋亡和周期分布改变的过程中起主导作用。     

紫草素对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的影响北大核心CSCD

目的研究紫草素对非小细胞肺癌NCI-H358细胞增殖和迁移的抑制作用。方法将NCI-H358细胞随机分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组细胞给予常规培养,低、中、高剂量实验组分别以5,10,20μmol·L^(-1)紫草素处理24 h。以细胞计数(CCK-8)法检测NCI-H358细胞活力;以划痕愈合实验评估细胞的迁移能力;以蛋白质印迹法检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果对照组和低、中、高剂量实验组细胞的存活率分别为(98.72±1.33)%,(90.68±3.52)%,(76.41±5.64)%,(52.85±3.76)%;迁移率分别为(98.54±2.85)%,(67.94±5.31)%,(42.46±2.23)%,(23.26±4.79)%;p-Akt的表达水平分别为0.42±0.05,0.28±0.03,0.16±0.04,0.17±0.02;p-PI3K的表达水平分别为0.26±0.03,0.15±0.03,0.14±0.02,0.11±0.02;p-mTOR的表达水平分别为0.69±0.08,0.51±0.05,0.33±0.05,0.25±0.04。低、中、高剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论紫草素通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制非小细胞肺癌NCI-H358细胞的增殖和迁移。     

和厚朴酚及厚朴酚抗肺癌药理作用及机制的研究进展

和厚朴酚及厚朴酚是疏水性烯丙基联苯酚类结构的同分异构体,均有抗肺癌药理作用。和厚朴酚能抑制肺癌A549细胞、H1299细胞和Lewis细胞移植瘤在小鼠体内的生长和转移,而厚朴酚能预防乌拉坦诱导小鼠发生肺癌和抑制A549细胞移植瘤在小鼠体内生长。和厚朴酚及厚朴酚在体外能浓度相关地抑制人小细胞肺癌N446细胞、H446细胞,非小细胞肺癌中的肺腺癌A549、H1299、H441、H1975、Calu3、A2、PC、SPC-A-1、95D细胞,大细胞肺癌H460细胞,人肺鳞癌H226、H520、CH27细胞以及小鼠肺癌Lewis细胞增殖,并诱导其凋亡和坏死。和厚朴酚及厚朴酚抑制肺癌的主要机制是：（1）抑制I型去乙酰化酶的表达和酶活性,上调死亡受体-5（DR5）的表达,激活肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）信号通路;（2）激活与半胱天冬酶无关的凋亡通路;（3）阻滞癌细胞中的微管聚合,破坏微管结构;（4）阻滞蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,诱导癌细胞自噬;（5）阻滞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/AKT信号通路而抑制癌细胞转移。     

田蓟苷对A549细胞的抑制作用及其机制研究

目的研究田蓟苷对人非小细胞肺癌细胞系(A549)的抑制作用及其作用机制。方法对照组和10,20,40,80,160μmol·L^-1实验组分别用0,10,20,40,80,160μmol·L^-1田蓟苷处理A549细胞24 h,用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK8)观察各组A549细胞增殖情况;用流式细胞仪检测各组A549的凋亡情况。低氧模型组将A549在低氧培养箱中培养4 h,10,20,40μmol·L^-1低氧实验组将A549在普通培养箱中用10,20,40μmol·L^-1的田蓟苷预处理4 h,再放入低氧培养箱中继续培养4 h,用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的表达情况;用Western blot法检测细胞内VEGF、HIF-1α及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达情况。结果与对照组比较,田蓟苷对A549增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性。10,20,40,80,160μmol·L^-1实验组的增殖抑制率分别为(5.83±1.67)%,(6.77±0.87)%,(12.26±0.23)%,(22.97±0.50)%,(46.24±1.44)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。10,20,40,80,160μmol·L^-1田蓟苷的凋亡率分别为(6.80±0.62)%,(14.70±1.36)%,(24.76±4.37)%,(39.26±6.42)%,(62.31±1.79)%,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。低氧模型组HIF-1α表达量为4.30±0.26,VEGF表达量为6.02±0.53,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10,20,40μmol·L^-1低氧实验组的VEGF表达量为4.73±0.20,2.31±0.09,1.47±0.16;HIF-1α的表达量分别为3.01±0.11,1.81±0.13,1.03±0.16,与低氧模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。低氧模型组p-AKT蛋白表达量为(106.47±2.08)%,HIF-1α表达量为(204.31±8.35)%,VEGF-A表达量为(212.30±4.80)%;10,20,40μmol·L^-1低氧实验组p-AKT蛋白表达量为(87.51±2.72)%,(75.18±1.67)%,(32.40±0.86)%;HIF-1α的表达量为(182.54±6.42)%,(90.95±2.76)%,(15.03±4.21)%;VEGF-A的表达量分别为(156.38±5.12)%,(79.62±2.84)%,(13.72±4.64)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论田蓟苷具有通过AKT/HIF-1α信号通路抑制体外A549增殖、诱导其凋亡的作用。     

西罗莫司治疗婴幼儿卡梅现象的研究进展

西罗莫司靶蛋白(mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、增殖、分化、细胞周期调控等多个方面起作用。mTOR信号通路是调控蛋白质合成、细胞增殖和血管生成的重要信号通路。西罗莫司就是通过抑制mTOR 起到治疗作用。现就西罗莫司治疗婴幼儿卡梅现象的研究进展作一综述。     

丹皮酚抑制人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭及对MAPKs信号通路的影响

目的探讨中药单体丹皮酚对人肺癌A549细胞系增殖、侵袭和迁移能力以及MAPKs信号通路的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度丹皮酚对肺癌A549细胞系的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50)。通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测丹皮酚对A549细胞迁移及侵袭能力的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测丹皮酚处理24 h后培养上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平。Western blot法检测A549细胞内MAPKs信号通路中p-ERK、p-JNK及p-p38等关键蛋白表达水平的变化情况。结果丹皮酚对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,对A549细胞的IC50为(54.68±3.59)μg·m L-1。丹皮酚以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移。ELISA检测发现丹皮酚可以抑制A549细胞分泌MMP-2、MMP-9蛋白。Western blot结果提示丹皮酚可抑制MAPKs信号通路中ERK通路磷酸化蛋白p-ERK的表达,而对p38、JNK通路的磷酸化水平无明显影响。结论在一定浓度范围内,丹皮酚可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,下调分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表达,其机制可能与抑制MAPKs信号通路中的ERK通路有关。     

紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及对PI3K/AKT/p53信号通路的影响北大核心CSCD

目的研究紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及对PI3K/AKT/p53信号通路的干预。方法将CNE2细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组细胞以等量生理盐水处理,低、中、高剂量实验组CNE2细胞以5,10,20 mol·L^(-1)紫杉醇处理。以溴化四唑蓝比色(MTT)法检测CNE2细胞增殖,以免疫荧光法检测CNE2细胞中FoxO3a蛋白表达,以蛋白免疫印迹法检测CNE2细胞中PI3K/AKT/p53信号通路相关蛋白表达情况。结果干预24 h,低、中、高剂量实验组CNE2细胞增殖抑制率(PIR)分别为(22.93±0.08)%,(43.76±0.09)%,(47.51±0.09)%;48 h增殖抑制率分别为(45.33±0.09)%,(52.02±0.10)%,(65.66±0.12)%;72 h增殖抑制率分别为(46.59±0.10)%,(64.16±0.12)%,(69.85±0.14)%。实验组CNE2细胞增殖抑制率随紫杉醇浓度的增加及作用时间的延长呈逐渐升高趋势。免疫荧光检测可见,高剂量实验组细胞核中FoxO3a蛋白表达量为29.61±1.23,明显高于对照组的20.13±0.59(P<0.01)。蛋白免疫印迹法检测可见,与对照组比较,低、中、高剂量实验组FoxO3a蛋白表达量升高(P<0.05或P<0.01),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、p53、p21蛋白表达量降低(P<0.01)。结论紫杉醇可有效抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,与显著调节PI3K/AKT/p53信号通路中蛋白表达相关。     

基于微流控芯片技术橙皮苷抗肺肿瘤作用机制研究

目的探究橙皮苷诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法基于微流控芯片技术采用Hoechst 33342/PI染色法检测橙皮苷对肺癌细胞A549凋亡坏死的影响;流式细胞术检测橙皮苷对肺癌细胞周期及凋亡的影响;实时荧光定量PCR技术检测相关基因VEGF、PI3K及PTEN的表达;Western blot技术检测橙皮苷诱导肺癌细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、PTEN及凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白Cyclin B1的表达。结果橙皮苷作用于细胞G_0/G_1期及S期,阻滞细胞分裂,并呈现浓度依赖性诱导肺癌细胞凋亡,其细胞凋亡坏死率由正常对照组的(6.7±0.6)%增至(27.9±1.1)%;经橙皮苷诱导后的肺癌细胞中VEGF和PI3K基因表达相对降低,抑癌基因PTEN表达相对增加。Western blot结果显示,经橙皮苷诱导的肺癌细胞中凋亡蛋白Bcl-2及周期蛋白Cyclin B1相对表达降低,PI3K-Akt信号通路蛋白Akt表达量与对照组比较明显减少,PI3K蛋白表达量相对增加,PTEN表达量无明显变化。结论橙皮苷可能是通过干扰PI3K-Akt信号通路,阻碍肿瘤细胞的分裂并促进凋亡蛋白的产生,从而诱导肺癌细胞A549凋亡。     

8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶抑制剂TH588诱导人肺腺癌细胞凋亡研究

目的探讨8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶(8-oxoguanine nucleoside triphosphatase,MTH1)抑制剂TH588对肺腺癌细胞A549和H1975凋亡的影响。方法将细胞分为空白组(正常培养的肺腺癌细胞)和低、中、高剂量实验组(8,16,32μmol·L-1 TH588处理肺腺癌细胞)。使用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测TH588对肺腺癌细胞A549和H1975增殖的影响。Transwell检测TH588对肺腺癌细胞A549和H1975的迁移能力的影响。AnixinⅤ-FITC/PI双染法检测TH588对肺腺癌细胞凋亡的影响。Western Blot检测TH588对肺腺癌细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的影响。结果 TH588处理24 h后,A549和H1975细胞低、中、高剂量实验组存活率分别为(76.15±1.02)%,(70.63±4.16)%,(57.42±2.15)%;(78.05±2.06)%,(62.86±3.45)%,(58.47±2.70)%。TH588处理48 h后,A549和H1975低、中、高剂量实验组存活率分别为(62.26±3.84)%,(45.19±1.08)%,(36.03±2.95)%;(73.21±1.84)%,(57.96±3.18)%,(32.47±10.19)%。TH588处理72 h后,A549和H1975细胞低、中、高剂量实验组存活率分别为(59.16±1.15)%,(35.63±2.26)%,(28.56±3.60)%;(63.08±0.98)%,(50.27±2.15)%,(25.76±11.06)%。A549和H1975细胞对照组及低、中、高剂量实验组的相对迁移率分别为(100.00±2.15)%,(80.50±2.07)%,(65.25±3.83)%,(36.76±2.25)%;(100.00±4.05)%,(85.65±2.79)%,(72.48±2.96)%,(43.05±1.98)%。A549和H1975细胞对照组及低、中、高剂量实验组的凋亡率分别为(8.25±0.57)%,(23.17±3.40)%,(42.50±4.83)%,(49.02±8.15)%;(4.05±1.20)%,(6.46±1.85)%,(7.55±1.05)%,(14.87±4.46)%。A549和H1975细胞对照组及低、中、高剂量实验组Bcl-2/Bax值分别为1.18±0.01, 0.75±0.03, 0.68±0.03, 0.52±0.04;1.28±0.04, 1.05±0.04, 0.54±0.04,0.45±0.03。A549和H1975细胞低剂量组、中剂量组、高剂量组的细胞存活率、相对迁移率、凋亡率及Bcl-2/Bax值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TH588显著促进了肺腺癌细胞A549和H1975的凋亡,其机制与调控Bcl-2和Bax的表达有关。     

Six1通过PI3K通路抑制肺癌细胞A549的增殖和迁移

目的研究Six1基因对人肺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其作用机制。方法将Six1的特异小干扰RNA序列转染入A549细胞中,应用Western印迹法检测Six1在A549细胞中的蛋白水平的表达情况,应用MTT法和细胞计数观察低表达Six1对A549细胞增殖的作用,应用划痕实验和transwell侵袭小室实验检测A549细胞迁移能力的变化情况,应用Western印迹法检测PI3K信号通路蛋白的表达变化。结果在A549细胞中,特异的小干扰RNA使Six1在蛋白水平表达降低,低表达Six1的A549细胞系增殖和迁移能力下降,p-AKT的蛋白表达降低。结论在A549细胞系中Six1通过PI3K通路抑制A549细胞的侵袭和转移能力。     

1,25(OH)2D3对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞功能的影响

目的观察1,25-双羟维生素D3(1,25(OH)2D3)通过miR-124-3p调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路对肺炎链球菌(SP)感染的肺泡上皮细胞功能的影响,探讨其作用机制。方法体外培养肺泡上皮细胞A549,肺炎链球菌刺激后,随机分为10,20,40,80,160 ng·mL^-11,25(OH)2D3组、Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-NC组、1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p+LY294002组。以细胞计数(CCK-8)法试剂盒法、流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡,以蛋白质印迹(WB)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、PI3K/AKT通路的相关蛋白表达,以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测miR-124-3p的表达。结果10,20,40,80,160 ng·mL^-11,25(OH)2D3处理A549细胞72 h,细胞活力分别为(83.20±1.92)%,(75.73±3.70)%,(64.40±5.10)%,(47.13±3.56)%,(33.93±5.27)%;细胞凋亡率分别为(8.14±0.96)%,(12.26±1.00)%,(14.37±0.88)%,(16.44±0.96)%,(18.12±1.15)%,最终选择160 ng·mL^-11,25(OH)2D3进行后续实验。Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-NC和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组的miR-124-3p相对表达量为1.00±0.11,1.69±0.05,1.71±0.13,1.12±0.09,细胞活力分别为(100.00±9.67)%,(34.83±2.44)%,(37.70±1.50)%,(68.80±2.45)%,细胞凋亡率分别为(7.20±0.85)%,(18.59±0.82)%,(19.06±0.60)%,(13.44±2.15)%。与Control组对比,其他组miR-124-3p、细胞活力和细胞凋亡率均有统计学意义,CyclinD1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p+LY294002的细胞活力分别为(100.00±9.64)%,(40.13±7.13)%,(74.40±6.54)%,(42.93±1.82)%,细胞凋亡率分别为(5.51±1.11)%,(15.90±0.24)%,(9.35±0.86)%,(14.24±0.84)%,与Control组相比,1,25(OH)2D3对肺泡上皮细胞A549的增殖、凋亡及CyclinD1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达的作用,以及抑制下游PI3K/AKT通路的作用,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论1,25(OH)2D3通过抑制miR-124-3p负向调控PI3K/AKT通路,促进肺泡上皮细胞的增殖,并诱导凋亡。     

阻断Notch信号途径能有效抑制A549细胞增殖

目的 Delta-like 4(DLL4)是Notch信号通路的配体之一,是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明DLL4的高表达与肺腺癌转移预后密切相关。该文旨在研究DLL4在A549细胞中的表达,以及DLL4基因表达对人A549细胞增殖与凋亡的影响。方法 (1)体外培养A549细胞,免疫细胞化学法检测DLL4在A549细胞中的表达及定位;(2)设计并化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lipofectamineTM2000介导DLL4 siRNA转染A549细胞,RT-PCR进行DLL4-mRNA定量,Western blot分别检测A549细胞DLL4蛋白的改变;(3)四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的存活和生长变化;(4)激光共聚焦显微镜检测Annexin V-FITC标记的A549细胞的细胞凋亡比率。结果 (1)A549细胞表达DLL4蛋白,且定位于胞浆中;(2)DLL4-mRNA和DLL4蛋白的表达在对照组与干扰组之间有显著差异(P0.05);(3)MTT检测显示抑制DLL4表达对A549细胞的增殖有抑制作用,DLL4干扰组细胞增殖抑制率为43.85%,未处理组细胞增殖抑制率为23.81%;(4)抑制DLL4基因表达,A549细胞的凋亡比率明显升高,DLL4干扰组细胞凋亡率为(25.01±4.32)%,未处理组细胞凋亡率为(14.24±0.98)%。结论 DLL4在A549细胞表达。特异性阻断DLL4/Notch信号途径能有效抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。     

长链非编码RNA ANCR在肺癌中的表达和作用

目的探讨长链非编码RNA ANCR(LncRNA ANCR)在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞增殖和凋亡的作用。方法收集50例肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织中LncRNA ANCR和叉头框蛋白O1(FOXO1)mRNA的表达水平。将A549细胞分为第1转染组(转染慢病毒阴性对照质粒)、第2转染组(转染pHRi-ANCR)、第3转染组(转染pHRi-sh-ANCR)、第4转染组(转染pHRi-FOXO1)和第5转染组(同时转染pHRi-sh-ANCR和pHRi-sh-FOXO1),未处理细胞为空白组。用RNA pull-down和RIP实验检测ANCR与FOXO1的相互作用。用RT-qPCR检测ANCR和FOXO1的表达水平,用EdU标记技术和流式细胞术分别检测A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果肺癌组织和癌旁组织中LncRNA ANCR的表达分别为2.78±1.36,1.33±0.51,FOXO1 mRNA的表达为1.28±0.57,3.03±0.72。第1,3,4,5转染组细胞增殖比例分别为(47.90±2.36)%,(27.93±2.37)%,(29.93±0.64)%,(74.27±4.06)%,阻滞于G0/G1期细胞比例分别为(37.43±1.96)%,(64.20±4.05)%,(65.47±1.86)%,(24.93±1.38)%,细胞凋亡比例分别为(8.93±0.53)%,(17.81±1.42)%,(16.18±1.07)%,(7.78±0.55)%。肺癌组织与癌旁组织相比、第3,4转染组与第1转染组相比、第5转染组与第3转染组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论LncRNA ANCR在肺癌中表达升高并通过抑制FOXO1的表达调控肺癌细胞的细胞增殖和凋亡。     

抑制自噬促进培美曲塞对A549细胞的增殖抑制作用

目的研究培美曲塞对肺癌细胞A549自噬的作用及自噬的功能。方法采用MTS法观察培美曲塞对A549细胞的增殖抑制作用;采用透射电镜和免疫印迹观察培美曲塞对A549细胞自噬体和自噬相关蛋白的影响;采用自噬抑制剂CQ抑制自噬后观察培美曲塞对A549细胞的抑制作用。结果培美曲塞抑制A549细胞的增殖;培美曲塞诱导A549细胞自噬体表达增加,并诱导自噬相关蛋白Beclin-1表达和LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转换增加,p62表达降低;自噬抑制剂CQ提高培美曲塞对A549细胞抑制作用,使培美曲塞单药组的抑制率由(28.42±2.45)%增加到CQ联合培美曲塞组的(45.36±3.52)%。结论培美曲塞可以诱导肺癌细胞A549自噬增加,抑制自噬提高培美曲塞对A549细胞的增殖抑制作用,为肺癌的临床治疗提供新的联合治疗方案。     

罗哌卡因对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用探究

目的 基于腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)通路探究罗哌卡因对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的保护作用。方法 对软骨细胞进行培养,将软骨细胞随机分为对照组、模型组和低、中、高剂量实验组。对照组常规培养,模型组用含10 ng·mL^-1IL-1β的培养基刺激细胞24 h,低、中、高剂量实验组在模型组的基础上,用25,50,100 mg·L^-1的罗哌卡因进行处理。用细胞计数法-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞凋亡相关蛋白、细胞外基质降解相关蛋白及细胞中磷酸化AMPK(p-AMPK)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达的影响。结果 与对照组比较,模型组24,48,72 h OD值降低;与模型组相比,中、高剂量实验组24,48,72 h OD值均明显升高(均P<0.05)。对照组、模型组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率分别为(4.24±0.64)%,(18.13±1.53)%,(14.93±0.52)%...