3种磨损颗粒对体外原代培养人成骨细胞的作用

目的比较3种不同磨损颗粒对体外原代培养人成骨细胞的作用。方法PE颗粒、TI-6A1—4V颗粒、Co-Cr-Mo颗粒加入体外原代培养的人成骨细胞，噻唑蓝(MTT)比色试验检测细胞存活和生长。用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其吸光度值，可间接反映活细胞数量。结果不同浓度、不同磨损颗粒对原代培养成骨细胞成活无明显影响。结论不同浓度、不同磨损颗粒对原代培养成骨细胞成活无明显影响，表明人工关节松动中磨损颗粒的骨溶解作用是通过其它途径起作用的。     

槲皮素对钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡抑制作用研究

目的 探讨槲皮素对钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡的抑制作用。方法 采用钛颗粒处理小鼠MC3T3-E1细胞系构建细胞凋亡模型,应用槲皮素进行干预并设置对照,噻唑蓝法[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,MTT法]法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA）检测白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）表达,免疫荧光技术检测C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）、B细胞淋巴瘤因子2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）检测CHOP和Bcl-2的mRNA的表达。结果 钛颗粒抑制成骨细胞增殖活性,并呈浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示,钛颗粒诱导成骨细胞凋亡。槲皮素预培养能有效缓解钛颗粒对成骨细胞增殖活性的抑制,减少其凋亡。ELISA检测结果显示,槲皮素能减少IL-1β和TNF-α表达。免疫荧光技术显示槲皮素参与调控CHOP蛋白和Bcl-2蛋白的表达,RT-PCR检测结果显示,槲皮素参与调控CHOP和Bcl-2的mRNA的表达。结论 槲皮素能抑制钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡,其作用机制可能与内质网应激启动的凋亡途径抑制,调控CHOP、Bcl-2蛋白表达的信号通路有关。     

TNF-α与IFN-γ诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡

探讨ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ诱导妊娠早期人绒毛膜滋养层细胞凋亡的作用。方法　建立人妊娠早期滋养层细胞体外培养体系：利用台盼蓝染色记数、光镜、透射电镜、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察和检测ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ处理后的细胞凋亡情况。结果ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ可引起活细胞数减少;透射电镜观察到染色体边集、核固缩、凋亡小体：ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳有“梯形条带”。结论ＴＮＦ－α能够诱导人妊娠早期绒毛滋养层细胞凋亡,ＩＦＮ－γ对ＴＮＦ－α有协同作用。     

磨损颗粒引发人工关节假体松动机制的研究

人工关节置换是治疗晚期骨关节炎的有效方法,能达到解除关节疼痛、重建活动功能的目的。人工关节置换面临的难题之一是人工关节的使用寿命和远期疗效,而关节假体无菌性松动是影响人工关节长期稳定性、减少人工关节使用寿命的主要原因。人工关节无菌性松动的原因除了假体设计、手术技术、假体微动等力学因素以外,还有假体材料及其产生的磨损颗粒等生物学因素。     

血管内皮生长因子在磨损颗粒诱导骨溶解中的作用研究

运用小鼠植骨气囊模型,观察局部注射血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF抑制剂bevacizumab对磨损颗粒诱导骨溶解的影响,进一步探讨VEGF在人工关节无菌性松动中的作用。方法将40只小鼠按随机数字表法分成空白对照组、颗粒组、VEGF刺激组、VEGF抑制组,每组10只。在小鼠背部皮下注射无菌空气形成气囊,继而将近交系小鼠(10只)颅骨片植入气囊。在颗粒组、VEGF刺激组、VEGF抑制组小鼠气囊内注入磨损颗粒,空白对照组则注入PBS。气囊植骨后隔天分别在VEGF刺激组和VEGF抑制组小鼠气囊内注入重组人血管内皮生长因子(rh-VEGF)和bevacizumab进行干扰,颗粒组和空白对照组则注入生理盐水。植骨2周后取囊壁和植入颅骨组织进行HE染色检测炎症反应情况及骨片吸收情况;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分化成熟情况;取组织匀浆液应用ELISA方法检测炎性细胞因子IL-1β、TNF-α浓度;qRT-PCR进一步检测炎性细胞因子IL-1β、TNF-αmRNA表达水平。结果磨损颗粒诱导囊壁产生明显炎症反应及骨溶解。颗粒组囊壁厚度、细胞密度及TNF-α、IL-1β等炎性因子表达均较空白对照组明显增加(均P<0.05),局部注射VEGF进一步促进磨损颗粒诱导囊壁产生炎症反应及骨溶解,而bevacizumab则使囊壁炎症反应及骨溶解受到了明显抑制。结论磨损颗粒在体内可以诱导VEGF的表达,而VEGF抑制剂可抑制其诱导的炎症反应及骨溶解。     

阿司匹林对脂多糖、地塞米松分别诱导巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响

目的本实验旨在观察阿司匹林对脂多糖和地塞米松分别诱导的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响.方法小鼠腹腔巨噬细胞培养成功后,分别以脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)为诱导剂进行凋亡的诱导,在出现凋亡的基础上,给予不同剂量的阿司匹林分别分5组给药,放射免疫分析法检测TNF-α表达情况.结果阿司匹林对脂多糖和地塞米松诱导的凋亡中TNF-α的表达均有抑制作用.结论阿司匹林在炎症和非炎症情况下,都可以降低TNF-α水平.     

人HMGB1诱导单核细胞分泌TNF-α的规律

目的 :探讨人高迁移率族蛋白 1 (HMGB1 )诱导人单核细胞TNF α的分泌规律和HMGB1在脓毒症中的作用 .方法 :HMGB1的剂量效应组分别用含有 0 .1 ,1 .0 ,1 0 ,2 0和5 0mg·L-1 HMGB1的培养基孵育与人单核巨噬细胞系THP1 ,共培养 6h ,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量 ,采用流式细胞技术观察细胞的凋亡 .HMGB1的时间效应组以含有 2 0mg·L-1 HMGB1的培养基、对照组以不含HMGB1的培养基、另外以含有 2 0mg·L-1 HMGB1和10 0mg·L-1 脂肪多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)的混合组的培养基分别培养THP1细胞 0 ,2 ,4 ,6 ,8,1 0 ,1 2和 2 4h ,同上留取离心后的培养液上清 ,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量 .结果 :将HMGB1加入到单核细胞培养液中能明显刺激其TNF α的分泌 .在 0 .1～ 5 0mg·L-1 范围内 ,HMGB1诱导THP1的TNF α分泌增加 ,呈显著剂量依赖性关系 ,5 0mg·L-1 HMGB1能明显诱导THP1细胞的凋亡 ;HMGB1组和HMGB1与LPS的混合组THP1的TNF α分泌在 0～ 2 4h间呈双相性规律 .结论 :人HMGB1能诱导人单核细胞的TNF α分泌与凋亡 ,初步证实HMGB1在脓毒症的发生、发展中发挥重要作用     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响. 方法 分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2 培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况. 结果 与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强. 结论 在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能.     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响。方法分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况。结果与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强。结论在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能。     

TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的研究

血管内皮细胞对维持心血管系统的正常功能有着重要的作用,它的凋亡引起的血管萎缩衰退,不仅在临床上造成很多人类疾病而且会促进感染性休克的发生、发展。肿瘤坏死因子α有着强大的细胞毒性,可以造成血管内皮细胞凋亡。本文对肿瘤坏死因子α造成血管内皮细胞凋亡的机制进行综述。     

淫羊藿总黄酮对骨水泥微粒刺激单个核细胞产生分泌型TNF-α及TNF-α转换酶mRNA表达的影响

目的　探讨淫羊藿总黄酮对人工全髋关节无菌性松动的影响。方法　随机选择准备行人工关节置换术患者 2 1例。采集外周血 ,分离单个核细胞 ,然后将其分为两大组 ,即Ⅰ、Ⅱ组。Ⅰ组标本分成 5个亚组 :单个核细胞组 (对照组 )、单个核细胞 +骨水泥微粒组、单个核细胞 +骨水泥微粒 +淫羊藿总黄酮 (5mg L)组、单个核细胞 +骨水泥微粒 +淫羊藿总黄酮 (10mg L)组、单个核细胞 +骨水泥微粒 +淫羊藿总黄酮 (2 0mg L)组。Ⅱ组分为3个亚组 :单个核细胞 +骨水泥 +佛波脂组、单个核细胞 +培养液组、单个核细胞 +骨水泥 +淫羊藿总黄酮 (10mg/L)组。培养后 ,放免法测定Ⅰ组细胞上清液中肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)含量 ,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术检测Ⅱ组TACEmRNA表达。结果　单个核细胞 +骨水泥微粒组的TNF -α含量明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;单个核细胞 +骨水泥微粒 +淫羊藿总黄酮的TNF -α含量明显低于单核细胞 +骨水泥微粒组 (P <0 .0 1) ;而不同浓度淫羊藿总黄酮组之间的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。单个核细胞 +骨水泥微粒组TACEmRNA的表达呈强阳性 ,而单个核细胞 +骨水泥微粒 +淫羊藿总黄酮组TACEmRNA的表达明显减弱。结论　骨水泥微粒可刺激单个核细胞分泌TNF -α,而淫羊藿总黄酮能通过下调人外周     

番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的探讨番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用.方法体外培养HUVEC,用0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的TNF-α与HUVEC共同孵育30min,乳酸脱氢酶实验检测TNF-α处理对HUVEC的毒性作用.选取TNF-α干预对HUVEC细胞造成损伤的最佳浓度,并在处理前加入不同浓度的番茄红素作用1h,WST-1实验检测HUVEC的增殖情况.结果10 ng/mL TNF-α与细胞共同孵育30min后,对细胞造成的毒性作用最明显.当HUVEC预先与5μmol/L 番茄红素孵育后,能显著降低TNF-α诱导的细胞毒性.结论番茄红素能显著降低TNF-α诱导的细胞毒性,这可能是番茄红素防治一些炎症相关性疾病的机制之一.     

miR-29c对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响及其机制的初步研究

目的研究miR-29c对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法空白对照组、miR-29c过表达阴性对照组、miR-29c过表达组、miR-29c抑制表达阴性对照组、miR-29c抑制表达组预先转染HUVECs,再用TNF-α(10 ng/mL)诱导HUVECs 48 h,然后分别采用MTT法和Hoechst 33342荧光染色法检测miR-29c对TNF-α诱导HUVECs增殖活力及凋亡的影响;再采用Western blot技术检测miR-29c对Akt、eNOS磷酸化水平及eNOS蛋白表达的影响。结果 miR-29c可显著降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力(P0.05);Heochst 33342荧光染色结果显示,miR-29c可促进TNF-α诱导的HUVECs凋亡(P0.05);miR-29c可显著下调Akt、e NOS的磷酸化(P0.05),但其对e NOS蛋白的表达无影响。结论 miR-29c可降低TNF-α诱导的HUVECs增殖,并促进其凋亡,其机制可能与下调Akt、e NOS的磷酸化相关。     

骨碎补总黄酮对人工关节磨损微粒引起单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的 探讨骨碎补总黄酮对聚乙烯微粒引起单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响.方法 采集20例健康人体外周血,分离单核细胞,随机分组培养.A组（对照组）：仅单核细胞;B组：单核细胞＋聚乙烯微粒;C组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋帕米磷酸钠（10 mg/L）;D组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋骨碎补总黄酮（5 mg/L）;E组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋骨碎补总黄酮（10 mg/L）;F组：单核细胞＋聚乙烯微粒＋骨碎补总黄酮（20 mg/L）.培养48 h后,检测细胞上清液中TNF-α的含量.结果 TNF-α含量B组高于A组（P〈0.01）;C、D、E、F组分别低于B组（P〈0.01）;C组与D、E、F组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）;D组和E组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）,E组和F组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）,F组低于D组（P〈0.01）,随着药物浓度的增加,D、E、F组有逐渐减少趋势.结论在体外聚乙烯微粒可以刺激人外周血单核细胞过量分泌TNF-α.在体外骨碎补总黄酮和帕米磷酸钠均可有效抑制人外周血单核细胞过量分泌TNF-α.在一定剂量范围内,在体外骨碎补总黄酮和帕米磷酸钠抑制人外周血单核细胞过量分泌TNF-α的效果相似.骨碎补总黄酮能有效抑制由磨损微粒介导的TNF-α的高表达,有望成为将来防治人工关节无菌性松动的一种很有潜力的药物.     

内毒素血症Wistar大鼠血清TNF-α与心肌细胞凋亡的关系

目的研究内毒素血症Wistar大鼠血清TNF-α与心肌细胞凋亡的关系及EPO对其的影响。方法将180只Wistar大鼠随机分为对照组、脂多糖LPS组及EPO处理组,分别在处理后2h、4h、6h、12h、24h断头取血并取其心脏。采用ELISA法测定血清TNF-α,用TUNEL法检测原位凋亡。结果①LPS组TNF-α浓度在2h时达到最大值,且明显高于对照组(P<0.05),随后TNF-α浓度开始下降,并在6h时降到正常,与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。LPS+EPO组TNF-α浓度在2 h时达到最大值,且明显低于LPS组(P<0.05),随后开始下降,在6h时降到正常值;②LPS组心肌细胞凋亡指数在2h时达到最大值,且明显高于对照组(P<0.05),随后开始下降,并在4h、6h、12h、24h时均明显高于对照组(P<0.05)。LPS+EPO组心肌细胞凋亡指数在2h时达到最大值,且明显低于LPS组(P<0.05),随后开始下降,并在4 h、6 h、12 h、24 h时均明显低于LPS组(P<0.05);③心肌细胞凋亡指数与血清TNF-α存在明显的直线正相关性。结论血清TNF-α参与了内毒素血症Wistar大鼠的心肌损伤的病理过程,与心肌细胞凋亡呈正相关性,EPO通过抑制TNF-α的产生而延缓心肌细胞凋亡,对内毒素血症Wistar大鼠的心肌具有保护作用。     

人源TNF-α抗体基因的克隆与表达

目的:在原核系统中高效表达抗TNF-α单克隆抗体VH/K21,以便进一步研究其生物学功能,预测临床应用前景.方法:以已筛选获得的TNF-α抗体基因VH/K21为模板进行PCR扩增,产物与其表达质粒进行双酶切,连接后克隆进入PET22b(+)/BL21(DE3)感受态中并在该原核系统中实现可溶性表达;对表达产物进行Western blotting、ELISA鉴定.结果:成功克隆与表达出可溶性的高效表达的人源TNF-α单克隆抗体.序列分析表明该克隆具有全新的人源TNF-α抗体基因,它可以特异识别人TNF-α.结论:人源TNF-α单克隆抗体的获得为进一步研制应用于临床的TNF-α人源抗体奠定了基础,也将为其他人源抗体的制备提供理论依据和技术基础.     

突变型与野生型TNF-α诱导肿瘤细胞的凋亡

目的：比较重组人突变型471rhTNF-αt（mt 471rhTNF-α）与野生型rhTNF-α（wt rhTNF-α）诱导肿瘤细胞发生凋亡的能力．并对mt 471rhTNF—α诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用机制进行初步研究．方法：以乳腺癌细胞系ZR75—1细胞为靶细胞,应用基因组DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞技术分析mt 471rhTNF—α与wt rhTNF-α诱导肿瘤细胞凋亡的情况;利用以ELISA为基础的Trans AMTMNF—KBp65试剂盒检测经mt471 rhTNFα或wt rhTNF-α处理的ZR75—1细胞核因子NF—kB的活化情况,以便对其诱导凋亡的机制进行初步的研究．结果：20g/L琼脂糖凝胶电泳显示,mt 471rhTNF—α处理组的ZR75—1细胞基因组DNA呈现明显的ladder状分布,wt rhTNF-α处理组的“ladder”条带明显减弱;流式细胞仪分析显示,mt 471rhTNF-α诱导的细胞凋亡峰面积高于wt rhTNF-α处理组．NF—kB活化检测结果显示,当两型rhTNF-α浓度增高到50μg／L时．wt rhTNF-α处理组的NF-kB的活化量明显高于同浓度的mt 471rhTNF-α处理组（P=0．002）．结论：mt 471rhTNF-α诱导肿瘤细胞凋亡的能力明显优于wt rhTNF-α;肿瘤细胞内NF—kB活化明显受抑是mt 471rhTNF-α诱导凋亡能力增强的主要原因之一．