长期缺氧对肺腺癌SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶表达及耐药性的影响

目的 探讨长期缺氧对SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶（GST-π）表达的影响及耐药性的改变。方法 SPCA1细胞常氧（20％O2）和缺氧（0．5％O2）条件下作用16h后，提取RNA和蛋白，用定量RT-PCR的方法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和GST-π mRNA的表达情况，用Western blotting法检测HIF-1α蛋白；制备细胞悬液，用流式细胞仪测定GST-π表达；通过克隆形成实验分析SPCA1细胞对阿霉素和丝裂霉素的药物敏感性。通过 RNA干扰技术下调HIF-1α表达后，分为对照组和干扰组，观察GST-π的表达。结果 设常氧组GST-π mRNA表达率为1，缺氧组为12．2。常氧组GST-π蛋白阳性表达率为（35．78±1．25）％，缺氧组为（72．13±2．11）％。与常氧组比较缺氧组HIF-1α表达明显增加。计算1％克隆存活的药物浓度，阿霉素处理细胞，常氧组浓度为（0．29±0．05）μg／ml；缺氧组浓度为（0．48±0．07）μg／ml；丝裂霉素处理细胞，常氧组浓度为（0．71±0．10）μg／ml；缺氧组浓度为（0．79±0．12）μg／ml。干扰HIF-1α后，HIF-π mRNA与对照组比较下降了70％，而GST-π mRNA稍有下降。GST-π蛋白表达常氧条件下对照组为（32．14±1．23）％，干扰组为（30．88±1．65）％；缺氧条件下对照组为（64．78±2．45）％，干扰组为（67．42±2．21）％。结论 长期缺氧可诱导SPCA1细胞HIF-1α和GST-π表达增加，对阿霉素耐药性增加，对丝裂霉素没有影响，HIF-1α和GST-π并没有直接的相关性。     

谷胱甘肽S转移酶-π与人肝细胞耐砷性关系的研究

目的探讨谷胱甘肽S转移酶-π（GST-π）在人胚肝细胞（L-02细胞）耐砷性中的作用。方法培养L-02细胞和耐砷L-02细胞,用实时PCR和免疫组织化学法检测细胞GST-π mRNA和蛋白表达情况;两种细胞均采用亚砷酸钠（NaAsO2）2．5、5．0、10mmol／L及NaAs02与GST-π抑制剂依他尼酸（EA）联合培养24h,噻唑蓝（MTT）法和石墨炉原子吸收光谱法检测细胞生存率和细胞内砷浓度。结果耐砷L-02细胞GST-π mRNA及蛋白表达阳性率均显著高于L-02细胞（P〈0．001）;单用NaAsO2培养时,耐砷L-02细胞生存率明显高于L-02细胞、砷浓度明显低于L-02细胞（P〈0．001）;NaAsO2与EA联用时两种细胞内砷浓度增加、细胞存活率降低（P〈0．001）。结论L-02细胞的耐砷性可能与GST-π基因高表达有关,此从基因水平上为砷中毒的防治提供了实验依据。     

表没食子儿茶素没食子酸酯逆转人白血病细胞多药耐药性及机制研究

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)epigallocatechin-3-gallate(EGCG）对人自血病细胞K562／A02多药耐药性的逆转作用及相关机制。方法：采用MTT法确定EGCG的非细胞毒性剂量。以及对K562／A02细胞药物敏感性的影响。以流式细胞仪测定细胞内化疗药物浓度的改变，同时于逆转前后采用免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达水平的变化。结果：EGCG在低于103．2μmol/L时对K562/A02细胞的生长抑制率小于10％。40μmol/L、60μmol/L及80μmol/L EGCG均可增加K562／A02细胞对阿霉素的敏感性，使阿霉素对K562／A02细胞的IC50由原来的113．34mg／L降低至9．66mg／L、7．67mg/L和4．68mg／L，其逆转倍数分别为11．73、14．77和24．23倍。同时，不同浓度EGCG均可增加细胞内阿霉素浓度，并呈剂量依赖性。在40μmol/L、60μmol/L及80μmol/L EGCG作用后，细胞bcl-2和bax的表达水平均增加，并且bax/bcl-2比值升高。结论：EGCG可部分逆转人白血病细胞K562／A02对阿霉素的耐药性，其逆转机制与增加细胞内化疗药物浓度，升高细胞bax／bcl-2比值从而诱导细胞凋亡有关。     

异汉防己碱逆转白血病K562/DOX细胞多耐药性的实验研究

目的探讨中药十大功劳中异汉防己碱对白血病K562/DOX细胞多药耐药性（multidrug resistance,MDR）的逆转作用。方法采用MTT法检测异汉防己碱的内在细胞毒性及其对阿霉素（DOX）的增敏作用,并以逆转倍数（RF）值评价其逆转效果;应用免疫组化方法检测K562/DOX细胞膜上P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达水平及异汉防己碱对P-gp表达的影响;应用流式细胞仪分析细胞内罗丹明123（rhodamine123,Rh123）和DOX浓度;以维拉帕米（verapamil,VER）为阳性对照。结果异汉防己碱在10μg/ml的无毒剂量下可明显增强DOX的细胞毒性,RF=4.86,明显高于维拉帕米（RF=2.65）的逆转活性（P〈0.05）;K562/DOX细胞膜上P-gp呈强阳性表达,但异汉防己碱对该P-gp表达水平无明显影响;异汉防己碱使细胞内Rh123和DOX的浓度明显增加。结论异汉防己碱可通过抑制P-gp功能而有效逆转白血病细胞的多药耐药性,它有望成为肿瘤多药耐药逆转剂的候选药物。     

三苯氧胺在肝癌化疗中作用机制的实验研究

目的 研究三苯氧胺在肝癌化疗中的作用效果，并对其作用机制进行初步探讨。方法 通过阿霉素（ADM）浓度梯度递增诱导法，建立人肝癌多药耐药细胞株Hep-3B／ADM。MTT法检测细胞对化学疗法药物的敏感性；流式细胞仪检测细胞表面多药耐药基因（MDRI）表达产物P-170及分析细胞内Rhdaming123（Rh123）相对荧光强度；流式细胞仪及电镜观察TAM对ADM诱导Hep-3B／ADM细胞凋亡的影响。结果 TAM预处理组ADM对Hep-3B／ADM细胞的IC50下降为非预处理组的1／7；TAM（2．5μmol／L）处理前后，Hep-3B／ADM细胞表面P-170表达及细胞内Rh123相对荧光强度均无明显变化；TAM（2．5μmoL／L）可明显增强ADM诱导Hep-3B／ADM细胞凋亡的效果。结论 TAM（2．5μmol／L）具有增强ADM对Hep-3B／ADM细胞的毒性作用，其作用机制与逆转MDR无关，而是增强了ADM诱导耐药细胞凋亡的作用。     

甲基莲心碱对人卵巢癌顺铂耐药逆转的体外研究

目的研究甲基莲心碱（Nef）在人卵巢癌耐药细胞SKOV3／顺铂（DDP）对DDP敏感性中的作用,初步探讨其化疗增敏的作用机制。方法采用MTT比色法筛选Nef对细胞株的无毒剂量,并测定Nef干预后SKOV3／DDP对DDP耐药性的变化;免疫细胞化学法检测Nef对SKOV3／DDP细胞GST-π竹蛋白表达的影响;RT—PCR法分析Nef作用SKOV3／DDP细胞株不同时间GST-π mRNA水平表达的差异。结果不同浓度DDP与Nef联合应用使DDP对SKOV3／DDP细胞IC50明显下降,且逆转倍数随药物作用时间延长而增大,24h、48h、72h分别为1．15、1．91、2．28倍（P〈0．01）;镜下SKOV3／DDP细胞较SKOV3细胞高表达GST-π,经Nef作用72h后其GST-IT表达明显下降（P〈0．01）;无毒剂量Nef作用1、3、5d后SKOV3／DDP细胞内GST-π mRNA转录水平随作用时间延长而降低（P〈0．01）。结论Nef能有效逆转SKOV3／DDP细胞的耐药性,其逆转机制可能与下调GST-π基因高表达有关。     

Sorcin表达受抑乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／A02对化疗药物敏感性的观察

目的观察可溶性耐药相关钙结合蛋白基因（Sorcin）表达受抑乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／A02对化疗药物敏感性的影响,并探讨其机制。方法将MCF-7／A02细胞分为两组,观察组转染针对Sorcin基因的siRNA,对照组不转染。MTT法检测细胞对阿霉素（ADR）、依托泊苷（VP-16）、高三尖杉酯碱（HHT）、长春新碱（VCR）的敏感性,用流式细胞仪检测细胞对碱性蕊香红-123（Rho-123）的外排功能及VP16处理后的细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中的Bcl-2、Bax蛋白。结果观察组ADR、VP-16、HHT、VCR的IC50分别为（19．92±1．29）、（31．47±2．36）、（4．19±0．27）、（2．96±0．23）μg／ml,对照组分别为（111．57±5．60）、（144．77±20．43）、（24．30±0．43）、（5．89±0．28）μg／ml,两组比较,P均〈0．01。观察组细胞凋亡率为9．15％±0．25％,对照组为4．10％±0．12％,两组比较,P〈0．01。观察组细胞内Rho-123的荧光强度为6．34±0．86,对照组为5．42±0．73,两组比较,P〉0．05。观察组细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达量为0．59±0．032、1．80±0．03,对照组分别为0．69±0．025、1．94±0．04,两组比较,P均〈0．05。结论抑制Sorcin表达可显著增强MCF-7／A02细胞对化疗药物的敏感性;这种作用可能与其调节Bcl-2／Bax通路促进MCF-7／A02细朐凋亡有关。     

STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达的研究

目的研究STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达情况,探讨其耐药机制。方法用药物浓度逐步递增的方法诱导野生型K562细胞（K562-W）对STI571产生耐药,用台盼蓝染色、MTT法对耐药K562细胞（K562-R）进行特性鉴定。应用DNA芯片技术对STI571耐药前后的K562细胞的基因差异表达进行检测。结果诱导出K562-R-的耐药浓度为0．5／μmol／L,活细胞比例为98．5％。芯片结果发现662个基因出现差异表达。其中335个基因表达上调,327个基因表达下调。结论利用DNA芯片技术挑选与耐药可能相关的基因。可为STI571耐药机制的研究提供新的切入点。     

罗格列酮对急性时相血清淀粉样蛋白A诱导的内皮细胞MCP-1、PAI-1基因表达的影响

目的观察急性时相血清淀粉样蛋白A（A—SAA）和PPAR-γ激动剂罗格列酮（RSG）对内皮细胞单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和纤溶酶原激活物抑制因子1（PAI-1）基因表达的影响。方法分别用不同浓度（0．5μg／ml、5μg／ml）的A—SAA、RSG（10μmol／L）处理ECV304内皮细胞8h、24h后抽提总RNA，用半定量RT-PCR技术检测MCP-1、PAI-1mRNA的表达。结果A—SAA能显著促进ECV304细胞MCP-1、PAI-1mRNA的表达，并呈剂量和时效依赖性（P〈0．01）。而RSG能部分减低A—SAA对ECV304细胞MCP-1和PAI-1mRNA表达的促进作用。结论A—SAA可通过促进内皮细胞MCP-1、PAI-1的表达和分泌，参与动脉粥样硬化的形成；RSG可通过部分减低A—SAA对内皮细胞MCP-1和PAI-1表达的促进作用发挥其抗炎、抗AS的作用。     

3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究

目的探究3-Br PA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制。方法 1细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;2采用CCK8及Western blot法观察3-Br PA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-Br PA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况。结果顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-Br PA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714μg/ml、38.99μg/ml及12.86μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81%。3-Br PA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调。3-Br PA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性。结论 3-Br PA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

环孢素A对乙型肝炎病毒作用的体外实验

目的探讨环孢素A（CsA）在体外对乙型肝炎病毒（HBV）蛋白合成、DNA复制的影响。方法将不同浓度的CsA（0．6～20．0μg／ml）作用于HepG2．2．15细胞系，通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）水平；以及细胞内乙型肝炎核心抗原（HBcAg）mRNA水平和HBVDNA水平来评价HBV复制情况；通过检测细胞内PyK2激酶402位点酪氨酸（PyK2Y402）磷酸化水平来探讨CsA对HBV复制的作用机制。结果CsA对HBV复制具有抑制作用，随着CsA浓度的升高，对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升，细胞内HBVDNA复制水平下降。10．0μg／ml CsA作用4d时，对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为49．7％和34．3％，HBVDNA的表达量仅为对照组的34．9％。在2．0“g／ml CsA作用下PyK2 Y402的磷酸化水平下降。结论CsA对HepG2．2．15细胞HBsAg和HBeAg表达、HBVDNA复制均有抑制作用，并呈剂量依赖性。CsA可能通过降低PyK2 Y402的磷酸化水平抑制HBV的复制。     

PHⅡ-7的体内外抗肿瘤活性及机制

目的研究PHⅡ-7的体内外抗肿瘤活性,为肿瘤的治疗提供新思路。方法采用MTT法检测PHⅡ-7对18种细胞系（其中包括5对敏感肿瘤细胞和相应耐药细胞株）的体外抗肿瘤活性;建立人白血病细胞K562和K562／A02裸鼠移植瘤模型,研究PHⅡ-7的体内抗肿瘤活性。结果PHⅡ-7对人肿瘤细胞的生长均有抑制作用,IC50为0．35-18．68μmol／L;其对于多药耐药（MDR）类细胞亦显示出较强的抑制作用。PHⅡ-7对耐药肿瘤细胞（K562／A02）移植瘤模型的抑制率为62％,对敏感肿瘤细胞（K562）移植瘤模型的抑制率为52％。结论PHⅡ-7体内外均可抑制肿瘤细胞的生长,其抗耐药肿瘤的作用可能存在多种机制。本研究为肿瘤的治疗提供了新思路。     

GST-π在CagA阳性Hp感染胃黏膜组织中的表达

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染胃黏膜组织中谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）的表达及与Hp细胞毒力相关基因A（CagA）的关系。方法将198例慢性非萎缩性胃炎胃黏膜根据^13C呼气实验及病理切片改良Giemsa染色法分为Hp阴性组和阳性组，PCR扩增行CagA检测、免疫组化行GST-π表达检测。结果Hp阳性及阴性组中GST-π阳性率分别为52．78％、67．78％，组间比较有显著差异（P〈0．05）；Hp阳性组中，CagA阳性和阴性者GST-π阳性率分别为38．18％、67．93％，亦有统计学差异（P〈0．01），CagA阳性亚组中GST-π阳性率与Hp阴性组比较有显著差异（P〈0．01）。结论Hp感染可降低胃黏膜GsT-π的表达，削弱GST-π对胃黏膜损伤的保护作用，而CagA因子可能是其因素之一。     

内毒素对气管上皮细胞损伤的实验研究

目的观察不同浓度内毒素（LPS）作用不同时程对气管上皮细胞（HBE）的损伤作用。方法取处于对数生长期的HBE,加入LPS的终浓度分别为0．02μg/ml、0．04μg／ml、0．06μg／ml、0．08μg／ml、0．1μg／ml、0．2μg／ml、0．4μg／ml、0．6μg／ml、0．8μg/ml、1．0μg／ml,在培养箱内分别孵育24h、48h后,采用MTT比色法于酶联免疫测定仪490nm波长处测定OD值。结果作用24h后,各浓度LPS对HBE具有不同程度的损伤作用,其中以0．1μg／ml作用最为明显（0．4080±0．0217 vs 0．3800±0．0100,P〈0．01）;作用48h后,各浓度LPS对HBE具有不同程度的损伤作用,其中以0．1μg／ml作用最为明显（0．3900±0．0122 vs 0．3060±0．0230,P〈0．01）。结论根据LPS致气管上皮细胞损伤的量效及时效关系,选择0．1μg／ml作用24h作为细胞刺激条件较为适宜。     

人参皂甙-Rh2对Ara—c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响

目的探讨人参皂甙单体Rid（GS—Rh2）对阿糖胞苷（Ara—c）抗白血病作用的影响。方法体外培养人髓性白血病细胞株（HL60）并随机分为三组,其中Ara．C组加入终质量浓度分别为5．0-40．0μg／ml的Ara-c,GSRh2组加入终质量浓度为4．0～32．0μg／ml的GS-Rh2,联合组加入终质量浓度为4．0μg／ml的GS—Rh2及上述质量浓度Ara—C。48h后采用MTT法测定三组HL60细胞的增殖抑制率（IR）,并计算半数抑制浓度（IC50）、合用指数（CI）、增效倍数及合并效应与期望合并效应的比值（q）;倒置显微镜及常规瑞-吉染色法观察细胞凋亡形态。结果Ara-c组、GSRh2组的IC如分别为32．0、13．0,联合组Ara-c的IC50为14．5μg／L,显著低于Ara-c组（P〈0．001）;联合组CI为0．76,4．0μg／ml GSRh2对Ara—c的增效倍数为2．21,Ara-c质量浓度为5．0、10．0、20．0、40．0μs／ml时的q分别为1．42、1．39、1．36、1．21;联合组细胞凋亡形态较其他两组明显。结论GSRh2可提高HL60细胞对Am-c的敏感性,减少Ara—C的临床用药剂量和毒副作用,加强Ara-c的疗效;此为临床治疗白血病提供了新的思路。     

急性时相血清淀粉样蛋白A和罗格列酮对内皮细胞白介素6、8基因表达的影响

目的观察急性时相血清淀粉样蛋白A（A-SAA）和罗格列酮（RGZ）对内皮细胞白细胞介素（IL）6和IL-8基因表达的影响。方法分别用不同浓度（0．5／μg／ml、5／Lg／μg）的A-SAA、RGZ（10μmol／L）处理ECV304内皮细胞8h、24h后抽提总RNA,用RT-PCR技术检测IL-6、IL-8 mRNA的表达。结果A-SAA能显著促进ECV304细胞IL-6、IL-8mRNA的表达,并呈剂量和时效依赖性（P〈0．01）。而RGz并不影响A—SAA对ECV304细胞IL-6和IL-8 mRNA表达的促进作用。结论A—SAA可通过促进内皮细胞IL-6、IL-8的表达和分泌,参与动脉粥样硬化的形成;RGZ并非通过影响A-SAA对内皮细胞IL-6和IL-8表达的促进作用发挥其抗炎、抗动脉粥样硬化的作用。     

GST-π在胃腺癌与癌周组织中的表达

目的探讨π类谷胱甘肽S-转移酶（GST-π）在胃腺癌与癌周组织中的表达及其在胃癌发生发展中的意义。方法68例中晚期胃癌患者分别在胃腺癌组织及距癌灶边缘5cm以上癌周组织取活检4块，用SP免疫组化检测GST-π，比较不同分化程度胃腺癌组织及癌周组织中GST-π的表达水平。结果GST-π阳性率在胃腺癌组（82．35％）明显高于癌周组（50％），P〈0．01；癌周组织中慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化生及不典型增生GST-π阳性率分别是20％、43．75％、52％和70．37％，不典型增生组显著高于慢性浅表性胃炎组（P〈0．05），其他各亚组间无统计学差异。结论GST-π在癌前病变组织中表达率开始上升并在癌组织中过度表达，提示GST-π可作为检测胃癌发病的指标。     

细胞因子对人冠脉平滑肌细胞PAPP—A、MMP-3、TIMP-1基因表达的影响

目的探讨细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6对人冠脉平滑肌细胞中妊娠相关血浆蛋白-A（PAPP—A）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）基因表达的影响。方法应用相同浓度IL-1β（20μg／L）、1L-6（10μg／L）各自刺激人冠脉平滑肌细胞，共同培养0、2、4、8、24、36h后收集细胞。应用不同浓度IL-1β（0、5、20、40μg／L）、[L-6（0、5、10、50μg／L）刺激人冠脉平滑肌细胞，共同培养6h后收集细胞。应用实时定量PCR的方法检测细胞内PAPP—A、MMP-3、TIMP-1基因表达量。结果同剂量IL-1β刺激下，MMP-3和PAPP—A基因表达量在2h时开始发生上调，8h左右达高峰，而后开始下降；而TIMP-1表达量在2h时开始发生下降，8h左右达最低，而后开始上升。在不同剂量IL-1β刺激下，MMP-3、PAPP—A基因表达量随着剂量加大呈上升趋势（MMP-3：r=0．907，P=0．000；PAPP—A：r=0．972，P=0．000），TIMP-1呈下降趋势（r=-0．768，P=0．004）。不同剂量组MMP-3、TIMP-1、PAPP—A表达量具有显著性差异（MMP-3：F=24．047，P=0．000；TIMP-1；F=33．737，P=0．000；PAPP—A：F=264．699，P=0．000）。MMP-3在20μg／L和40μg／L组间没有显著性差异（P=0．154）；TIMP-1仅40μg／L组和其他组间具有显著性差异，其余组间无显著性差异（P=0．383）；PAPP—A在各组间均有显著性差异。在同剂量IL-6的刺激下，MMP-3、PAPP—A表达量随时间变化趋势和IL-1β相似，而TIMP-1则在4h时就达到最低，随后开始上升。在不同剂量IL-6刺激下，MMP-3、PAPP—A亦有随剂量加大表达量上升趋势（MMP-3：r=0．919，P=0．000；PAPP—A：r=0．941，P=0．000），TIMP-1呈下降趋势（r=-0．799，P=0．002）。不同剂量组MMP-3、TIMP-1、PAPP—A表达量均有显著性差异（MMP-3：F=14．081，P=0．001；TIMP-1：F=5．727，P=0．022；PAPP—A：F=25．128，P=0．000）。MMP-3在5μg/L和10μg／L组间没有显著性差异（P=0．292）；TIMP-1对照组与10μg／L和50μg／L组间具有显著性差异，其余各组间没有显著性差异（P=0．253）；PAPP—A基因表达量在5μg／L和10μg／L组没有显著性差异（P=0．065）。结论炎症因子IL-1β、IL-6对冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物PAPP—A、MMP-3、TIMP-1表达的影响，可能是炎症在急性冠脉综合征发生发展中作用机制之一。     

脐血CIK细胞对耐药白血病细胞体外杀伤效应及其机制的研究

目的:探索干预或克服白血病细胞耐药的新策略.方法:采用抗CD3McAb联合多种细胞因子诱导的脐血杀伤细胞(CB-CIK)体外作用于K562耐药细胞株(K562/A02),用MTT比色法检测其杀伤效应;用免疫组化染色法检测杀伤前后K562/A02细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平;采用DNA凝胶电泳进行CB-CIK细胞诱导白血病细胞凋亡的检测.结果:①CB-CIK细胞杀伤K562/A02细胞活性(73.647±5.72)与杀伤K562细胞活性(75.124±4.36)相比差异无统计学意义,P＞0.05;其杀瘤活性显著高于CB-LAK细胞、CB-CD3AK细胞,P<0.05,与成人CB-CIK细胞相比差异无统计学意义,P＞0.05.②经CIK细胞杀伤后,K562/A02细胞表面mdr1表达产物P170含量明显减少.③K562/A02细胞在CIK细胞作用20 h后,其DNA结构断裂,在DNA凝胶电泳上呈现凋亡特有的梯形图谱(DNA Ladder).结论:CB-CIK细胞对K562细胞及其耐药株K562/A02细胞均有较强的杀伤作用,其杀伤机制可能与CIK细胞能下调白血病细胞表面多药耐药基因mdr1表达产物P170水平,以及诱导白血病细胞凋亡有关.提示脐血CIK细胞在抗白血病多药耐药性方面具有独特的优势,若与化疗联合使用,有可能成为克服白血病细胞多药耐药性的一种可供选择的新策略,因脐血的来源较广,采制相对简便,该研究方法可能具有广泛的应用前景.     

促红细胞生成素对马兜铃酸致肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对马兜铃酸（AA）所刺激的肾小管上皮细胞结构损伤的影响。方法：以不同浓度AA（10、20、40μg／ml）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，透射电镜观察细胞的超微结构，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况，流式细胞仪检测凋亡细胞的比例。结果：电镜显示：与AA10μg／ml组相比，AA10μg／ml＋EPO20U／ml组有少数细胞线粒体肿胀或呈早期凋亡改变（异染色质），大部分细胞结构基本正常；AA10μg／ml＋EPO10U／ml组与前者相似，有少数细胞出现凋亡。AA20μg／ml和AA40μg／ml刺激的细胞经不同浓度EPO干预后，细胞的损伤无明显变化。TUNEL结果：经AA10μg／ml、20μg／ml刺激后，核染色阳性的细胞百分比与对照组比较明显增加（P〈0．05）。与AA10μg／ml组比较，EPO10U／ml和EPO20U／ml可明显降低阳性细胞的百分比（P〈0．05）。流式细胞仪显示：经AA10μg／ml、20μg／ml刺激24h后，细胞凋亡的比例明显增加（P〈0．05），AA20μg／ml组凋亡和坏死的细胞比例高于AA10μg／ml组。与AA10μg／ml组比较，EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后细胞凋亡比例有所下降，以EPO20U／ml作用显著（P〈0．05）。AA20μg／ml组细胞凋亡的比例与EPO干预后的各组比较无显著差异。结论：EPO通过抑制细胞的凋亡从而对AA所刺激的肾小管上皮细胞结构的损伤产生保护作用，但对细胞的坏死改变无明显影响。