α-平滑肌肌动蛋白表达及血浆转化生长因子β1变化在肝纤维化发生发展中的作用

目的 测定肝纤维化不同分级α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)蛋白表达及血浆转化生长因子β_1(TGF β_1)变化,以探讨其在肝纤维化发生发展中的意义。方法 慢性肝病患者37例,依据肝组织HE、VG染色分为0～4级,其中1级8例,2级9例,3级7例,4级13例。6例正常肝组织为正常对照组。免疫组织化学法测定肝组织α-SMA、uPA、PAI-1蛋白表达变化。ELISA法测定血浆TGF β_1变化。检测血透明质酸。结果 肝纤维化S_(1～4)级肝组织α-SMA表达分别为(4.2±0.5)％、(5.5±0.7)％、(7.9±0.5)％、(9.7±0.7)％,uPA分别为(4.0±0.5)％、(4.8±0.5)％、(5.0±0.5)％、(4.8±0.4)％,PAI-1分别为(4.7±0.4)％、(7.0±0.4)％、(8.9±0.3)％、(11.9±0.3)％,且随肝纤维化分级增加血浆TGF β_1水平也逐渐增加。在肝纤维化S_3、S_4级,α-SMA、PAI-1蛋白表达以及血浆TGF β_1水平增加尤为明显,而uPA仅轻微增加,表现为uPA相对不足。结论 肝组织α-SMA、uPA、PAI-1蛋白表达以及血浆TGF β_1变化在肝纤维化发生发展过程中发挥着重要作用,抑制TGF β_1的早期激活,抑制肝硬化晚期PAI-1过度表达,可能有助于抑制肝星状细胞的激活、增加肝细胞外基质降解,从而有助于延缓肝硬化的发生发     

肝硬化患者纤溶酶原激活物以及基质金属蛋白酶抑制剂蛋白表达

[目的]探讨肝纤维化不同分级α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)蛋白表达以及血浆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)变化在肝纤维化发生发展中的意义.[方法]慢性肝病患者37例,依据病理变化分为0～4级,其中1级8例,2级9例,3级7例,4级13例;正常对照组6例.免疫组化法测定肝组织α-SMA、MMP-1、TIMP-1蛋白表达.ELISA法测定血浆uPA、PAI-1、转化生长因子β1(TGF-β1)变化.并同时检测血透明质酸、血清清蛋白、凝血酶原时间及其活动度、胆红素改变.[结果]随着肝纤维化的发展,肝组织α-SMA、MMP-1、TIMP-1蛋白表达以及血浆uPA、PAI-1、TGF-β1水平逐渐增加.在肝纤维化3、4级α-SMA、TIMP-1蛋白表达、血浆PAI-1水平增加尤为明显,而血浆uPA水平、肝组织MMP-1蛋白表达差异无统计学意义,表现为uPA、MMP-1相对不足.在肝纤维化4级血浆TGF-β1与α-SMA蛋白表达呈正相关(P＜0.05),α-SMA蛋白表达与PAI-1、TIMP-1蛋白表达呈正相关(均P＜0.05).[结论]肝组织TIMP-1蛋白表达以及血浆PAI-1在肝硬化发展过程中发挥着重要作用.抑制TGF-β1的早期激活,抑制肝星状细胞激活与PAI-1过度表达,适当增加MMP-1表达,可能有助于增加肝细胞外基质降解,从而延缓肝硬化的发生发展.     

肝纤维化发生发展过程中纤溶酶原激活物抑制剂-1 mRNA及其蛋白表达

[目的]探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）mRNA及其蛋白表达在大鼠肝纤维化发生发展中的作用。[方法]采用复合致病因子四氯化碳、高胆固醇、乙醇喂养大鼠6周、8周，复制肝纤维化、肝硬化动物模型。动物随机分为正常组、肝纤维化组、肝硬化组。测定血浆转氨酶、总胆红素（TB）、透明质酸（HA）以及肝组织内羟脯氨酸（Hyp）水平；免疫组化测定PAI-1、廿平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）、转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达；RT-PCR测定PAI-1、TGF-β1 mRNA表达。[结果]与正常组相比，肝纤维化、肝硬化组血浆转氨酶、TB、HA、肝组织内Hyp均明显增加。随着肝纤维化的发展，肝组织静SMA、TIMP-1、TGF-β1蛋白表达明显增加，PAI-1、TGF-β1 mRNA表达增加。[结论]肝组织PAI-1 mRNA及其蛋白表达在肝纤维化发生发展过程中发挥着重要作用。减少PAI-1 mRNA及其蛋白表达，可能会减缓肝纤维化的发生发展。     

Staurosporine对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞表达t-PA与PAI-1的影响

目的 通过观察不同浓度Staurosporine (STS)对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表达组织型纤溶酶原激活物(tissue type plasminogen activator,t-PA)与1型纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA及蛋白的影响,探讨尼古丁所致内皮细胞纤溶紊乱的机制.方法 将体外培养的3～6代HUVECs随机分为对照组、尼古丁组及不同浓度STS组,STS组分别以20、50、100μmol/L STS预处理细胞30 min,再与100 μmol/L尼古丁孵育24 h.酶联免疫吸附双抗体夹心法检测细胞上清液t-PA与PAI-1蛋白含量,RT-PCR检测PAI-1 mRNA表达.结果 尼古丁组PAI-1 mRNA与蛋白表达较对照组升高(P值均＜0.05);不同浓度STS组PAI-1 mRNA与蛋白表达较尼古丁组降低(P值均＜0.05),且呈浓度依赖性,以100 μmol/L STS组作用为著,但PAI-1 mRNA与蛋白表达仍高于对照组(P值均＜0.05).各组间t-PA蛋白差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 STS通过阻断蛋白激酶C通路的信号传导可部分减弱尼古丁诱导的血管内皮细胞纤溶功能紊乱.     

尿激酶型纤溶酶原激活物途径在大鼠酒精性肝纤维化形成中的作用

目的 通过观察尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其抑制物(PAI-1)在大鼠酒精性肝纤维化形成中的动态变化,探讨uPA纤溶途径在酒精性肝纤维化形成中的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为空白组、四氯化碳(CCl4)组和造模组.采用56度二锅头酒、玉米油、吡唑混合物灌胃联合腹腔注射CCl4橄榄油溶液(CCl4∶橄榄油=1∶3...     

转化生长因子-β1和纤溶酶原激活物抑制物-1在肝纤维化中的作用及关系

有关肝纤维化过程中纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的作用，以及转化生长因子-β1(TGF-β1)和PAI-1的相关性，目前国内少见报道。我们通过检测慢性乙型肝炎患者肝组织中TGF-β1及PAI-1蛋白的表达情况及血清中活性TGF-β1水平及血浆PAI-1活性，探讨TGF-β1、PAI-1在人肝纤维化中的作用及相互关系。     

PAI-1引起2型糖尿病合并NAFLD小鼠肝脏炎性反应和纤维化的机制研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积,炎性反应,纤维化等的影响。方法以C57BL/KSJ-Lepdb雄性小鼠作为T2DM合并NAFLD组(db/db组),同周龄C57BKS db/m雄性小鼠作为对照组(db/m组)。采用苏木素-伊红染色,油红О染色等方法检测小鼠肝组织切片脂质沉积;采用ELISA检测肝组织甘油三酯含量。以小鼠正常肝细胞NCTC1469作为研究对象,分为5组:对照组给予25 mmol/L葡萄糖(NG组)高渗对照组给予25 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇(HMA组)、高糖高脂组给予50mmol/L葡萄糖+0.75 mmol/L棕榈酸(HG+PA组)、高糖高脂+RNA干扰对照组(HG+PA+Si-NC组)用NC siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预,高糖高脂+PAI-1沉默组(HG+PA+Si-PAI-1组)用PAI-1的siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预。采用实时定量PCR和Western印迹方法检测炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β),肝纤维化相关指标转化生长因子-B(TGF-3),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col I)以及PAI-1的表达情况。结果与db/m组相比,db/db组小鼠肝组织中出现明显脂质聚集和纤维组织增生,甘油三酯含量增加,且MCP-1,IL-1β、TGF-β,a-SMA,ColⅠ和PAI-1的mRNA和蛋白水平均明显上调(均P<0.05)。与NC组细胞相比,HG+PA组MCP-1、IL-1β、TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ、PAI-1表达量均明显上调(均P<0.05);与HG+PA组相比,HG+PA+si-PAI-1组PAI-1、MCP-1、IL-β、TGF-β、α-SMA和ColⅠ等表达量均明显下调(均P<0.05)。结论T2DM合并NAFLD小鼠模型肝组织中PAl-1表达明显增加,抑制PAI-1表达可明显改善肝组织炎性反应和纤维化水平。     

外源性尿激酶抗肝纤维化的作用机制

目的 探讨外源性尿激酶抗大鼠肝纤维化的作用机制.方法 采用复合致病因子复制肝纤维化大鼠模型.大鼠随机分为对照组(正常饮食)、肝纤维化组(复合致病因子饲养6周)和尿激酶预防组(复合致病因子+尿激酶饲养6周).检测并比较各组大鼠血透明质酸含量、肝组织内羟脯氨酸、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、尿激酶型纤溶酶原激活物(μPA).尿激酶型纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、转化生长因子β1(TGF β 1)、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达量以及PAI-1 mRNA和TGF β 1 mRNA的相对表达量.多组间用单因素方差分析q检验,两组间比较采用t检验,多组间等级资料比较采用Kruskal Wallis H检验,多样本间两两比较采用扩展的t检验. 结果血浆ALT、AST、总胆红素、透明质酸和肝组织内羟脯氨酸含量在尿激酶预防组大鼠分别为(46.66±6.30)U/L、(126.26±31.65)U/L、(31.11±4.20)μmol/L、(109.70±18.81)μg/L和(0.98±0.09)mg/g,较肝纤维化组的(101.57±11.97)U/L、(205.89±56.26)U/L、(67.75±2.75)μmol/L、(184.43±32.36)μg/L和(1.65±0.16)mg/g均明显降低(q值分别为3.3801～20.0061,P值均<0.01).尿激酶预防组α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、TIMP-1、PAI-1及TGF β 1蛋白相对表达量分别为299.27±37.36、210.05±27.17、192.94±24.48、213.70±32.21、204.25±17.92和205.97±23.81,较肝纤维化组的418.83±30.21、323.77±21.53、302.37±31.43、376.63±25.19、313.53±26.67和327.42±36.75均明显减少,而uPA蛋白表达增加.尿激酶预防组PAI-1 mRNA,TGF β 1 mRNA表达减少,肝纤维化程度明显减轻. 结论 预防性使用外源性尿激酶可减轻肝损伤,降低血浆转氨酶、胆红素,减少肝星状细胞活化,降低TIMP-1、PAI-1蛋白表达,增加uPA蛋白表达,加速组织损伤修复,延缓肝纤维化的发生.     

OPN和PAI-1在肝纤维化时的表达特征

目的:研究骨桥蛋白(OPN)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达特征及其在肝纤维化时的变化.方法:采用二甲基亚硝胺制作大鼠肝纤维化模型.大鼠肝脏常规HE和天狼猩红染色.采用SABC法作免疫组织化学染色及Western blot检测OPN和PAI-1蛋白表达:RT-PCR法检测OPN基因表达;检测结果采用计算机图像定量分析系统,扫描并计算染色阳性区域面积和阳性比率或条带的吸光度值.结果:正常大鼠肝组织OPN和PAI-1表达极弱,肝纤维化大鼠肝脏中OPN表达增强,阳性信号散在或弥漫性分布,主要见于小叶内中央静脉周围、纤维间隔内以及周围巨噬细胞胞质,库普弗细胞,门管区的部分肝细胞,肝窦壁内皮细胞.PAI-1在肝纤维化大鼠肝组织汇管区、肝细胞变性坏死处,肝窦周Disse间隙及毗邻以上部位的肝细胞,组织纤维间隔处及其外周细胞亦见阳性染色.Western blot检测正常大鼠肝脏OPN的蛋白表达极低,肝纤维化组OPN的蛋白表达较正常组显著增强(1.0907±0.2082vs 0.0673±0.0663,P<0.01).与正常组比,肝纤维化组PAI-1表达也显著增强(1.1407±0.3094vs 0.2464±0.2234,P<0.01).RT-PCR检测结果显示,正常大鼠肝脏OPN mRNA表达极低,肝纤维化大鼠肝脏OPN mRNA的表达明显增强(0.2128±0.0527 vs 0.1298±0.0316,P<0.05).结论:OPN及PAI-1的表达与肝纤维化密切相关,肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高,OPN可能会促进PAI-1的高表达,从而抑制细胞外基质(ECM)降解、加速肝纤维化进程.     

扶正化瘀方对非酒精性肝纤维化小鼠肝组织血管生成基因的调节作用及其对肝纤维化的影响*

目的 探讨血管生成基因在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用,以阐明扶正化瘀方治疗非酒精性脂肪性肝纤维化的作用机制。方法 选用7~8w龄健康雄性C57BL/6J小鼠,给予高脂、蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饮食喂养8w,建立非酒精性脂肪性肝纤维化模型。采用扶正化瘀方进行干预,以蛋氨酸-胆碱充足饮食设立对照组。以HE和Masson染色观察小鼠肝组织脂肪变、炎症和纤维化程度;采用RT-PCR、免疫组化和Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及其下游因子血管内皮生成因子（VEGF)和诱导型一氧化氮合酶（iNOs）mRNA及其蛋白水平。结果 模型组小鼠肝细胞出现大泡性为主的脂肪变性,小叶内可见点灶状肝细胞坏死及炎细胞浸润、窦周纤维化,汇管区纤维组织增生,纤维间隔形成;应用扶正化瘀方干预组动物肝损伤、炎症及纤维化程度显著改善,肝组织α-SMA、HIF-1α、VEGF和iNOs mRNA水平亦较模型组显著减低,依次为（3.83±0.53） 对 （8.33±2.32）、（3.02±0.55）对（4.50±0.78）、（3.23±0.94）对（7.40±1.54）和（3.60±0.96）对 （9.94±1.60）,（P<0.01）;上述蛋白表达水平与基因水平呈一致变化趋势,扶正化瘀方干预组与模型组α-SMA、HIF-1α、VEGF和iNOs表达水平依次为（0.53±0.04） 对 （1.08±0.20）、（0.44±0.02）对（0.55±0.08）、（0.54±0.07） 对 （1.08±0.03）、和（1.61±0.21）对（3.30±0.88）,（P<0.05）。结论 扶正化瘀方可通过抑制肝星状细胞活化,下调HIF-1α及其下游促血管生成因子VEGF和iNOs表达,阻止或减缓非酒精性脂肪性肝纤维化的进展。     

地龙2号对肝纤维化大鼠uPA和PAI-1蛋白表达的影响

目的研究蚯蚓提取物地龙2号对实验性大鼠肝纤维化的uPA和PAI-1蛋白表达的影响。方法52只雄性Wistar大鼠,随机分成6组:正常大鼠组(N);秋水仙碱对照组(CC);造模同时用秋水仙碱0.1mg.Kg-1.d-1灌胃,假模型组(NC):皮下注射花生油(CCl4),灌单蒸水;模型组对照组(MC):皮下注射CCl4花生油混合物,每日单蒸水灌胃;地龙大剂量组(Eh):造模同时用地龙2号50mg.Kg-1.d-1灌胃;地龙小剂量组(El):造模同时用地龙2号25mg.Kg-1.d-1灌胃。8周末处死大鼠,用免疫组化法检测各组大鼠肝脏组织中uPA和PAI-1的表达情况。结果地龙2号大、小剂量组与模型组相比,uPA和PAI-1的表达均显著降低,且uPA与PAI-1的表达下降呈明显的正相关。结论地龙2号可能通过抑制肝纤维化大鼠肝组织中肝星状细胞(HSC)的活化及抑制uPA、PAI-1的表达发挥抗肝纤维化作用。     

uPA、uPAR和uPA／uPAR与肝癌发生的研究进展

尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase type plasminogen activator,uPA）及其特异性受体（urokinase type plasminogen activatorreceptor,uPAR）介导纤维蛋白溶解系统在肿瘤的浸润和转移中发挥重要作用。近年研究表明,uPA、uPAR不仅在肿瘤的浸润和转移中发挥重要作用,而且与肝硬化纤维化进程中恶变趋势及肝的出凝血系统有关,已经成为肝癌研究中的新热点。     

尿激酶对大鼠胸膜成纤维细胞分泌TGF-β1、VEGF、PAI-1的影响

目的探讨尿激酶(urokinase,UK) 对大鼠胸膜的成纤维细胞（fibroblasts，FB）分泌转化生长因子-β₁ （transforming growth factor beta-1，TGF-β₁）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、纤溶酶原激活物抑制剂（plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）的影响。方法取健康雄性SD大鼠胸膜，培养、纯化并鉴定FB。设对照组和实验组。对照组分2组：对照0组由不含胸膜FB的40个样本组成，加入无血清RPMI 1640培养液；对照1组由40个胸膜FB样本组成，加入无血清RPMI 1640培养液，培养24h后，用酶联免疫吸附法测定上清液中TGF-β₁、PAI-1、VEGF的含量；实验组分为4组，共40个样本，分别加入5000、10000、20000和30000IU/ml的UK，培养24h后取上清液，测定其中TGF-β₁、VEGF、PAI-1量。结果对照0组未检测出TGF-β₁、PAI-1、VEGF；对照组1胸膜FB分泌TGF-β₁、VEGF、PAI-1的量为（3135.205±390.975）pg/mL；（22.09±7.48）ng/ml；（1.8775±0.39）ng/ml；加入5000～30000IU/ml尿激酶的试验组， TGF-β1、VEGF、PAI-1的浓度与对照1组相比，有明显下降（P<0.05）。结论胸膜成纤维细胞能分泌TGF-β₁、PAI-1、VEGF；而尿激酶能抑制其分泌。     

纤溶酶原激活物抑制剂-1在大鼠肝纤维化组织中的表达及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原的相关性分析

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)与肝纤维化发生的关系.方法 采用皮下注射四氯化碳(CCl4)的方法制备大鼠肝纤维化模型,根据注射时间的不同,获取组织标本,行苏木精-伊红和VG染色,明确纤维化分期后,利用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应方法,观察PAI-1在肝纤维化进程中的表达变化情况及其与Ⅰ、Ⅲ型胶原的相关性.结果 PAI-1在正常大鼠肝脏中,仅在汇管区细胞浆有少量表达,而随着纤维化的进展,其表达量进行性增加;在纤维化肝脏,PaI-1主要分布于细胞浆;PAI-1与Ⅰ、Ⅲ型胶原呈直线相关.结论 PaI-1在肝纤维化进程中持续上调,可能参与胶原的表达调控,在肝纤维化的发生中起重要作用.     

姜黄素对CCl_4处理的大鼠PAI-1与u-PA蛋白表达的影响

目的:探讨姜黄素对CCl4处理的大鼠肝组织中PAI-1和u-PA蛋白表达的影响.方法:100只♂SD大鼠,随机分为5组:正常对照组(N),肝纤维化模型组(M),姜黄素低剂量组(Cl),姜黄素中剂量组(Cm),姜黄素高剂量组(Ch).M组以CCl4腹腔注射造模,Cl、Cm、Ch组除腹腔注射CCl4外,分别以不同剂量的姜黄素灌胃;每组分别在实验第4、7、21、42天随机取大鼠5只处死,留取同部位肝脏组织行HE染色,用免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏组织中PAI-1和u-PA蛋白的表达情况.结果:在M组,随时间延长,PAI-1和u-PA蛋白表达均不同程度增加,姜黄素低、中、高剂量干预组与M组相比,姜黄素能降低PAI-1蛋白表达(42d:5.60±1.673,3.40±1.673,2.40±1.140vs8.80±2.168,均P<0.05),增加u-PA蛋白表达(42d:6.00±1.414,9.20±1.643,9.80±2.049vs4.20±1.095,P<0.05),其作用强度具有剂量和时间依赖性.结论:姜黄素可通过调节肝纤维化大鼠PAI-1与u-PA蛋白表达,发挥抗肝纤维化作用.     

肝硬化患者血浆中尿激酶型纤溶酶激活物的检测及其意义

目的 探讨肝硬化患者血浆尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)、尿激酶型纤溶酶激活物受体(uPAR)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的变化及其意义。 方法 确诊的72例乙型肝炎后肝硬化患者,Child-pugh分级A级23例(A组),B级29例(B组),C级20例(C组)。6例健康志愿献血者为正常对照组。酶联免疫吸附实验测定血浆uPA、uPAR、PAI-1的变化。并同时检测血透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(C Ⅳ)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、血浆白蛋白、胆红素、凝血酶原时间及其活动度改变。 结果 随着肝硬化的进展,血浆uPA、uPAR、PAI-1逐渐增加,HA、PC Ⅲ也明显增加。Child C组患者血浆uPA、uPAR、PAI-1水平(μg/L)分别为1.88±0.64、4.82±2.02和52.60±16.87,A组分别为1.36±0.43、3.03±1.48和24.09±7.14,B组分别为1.79±0.62、4.80±2.22和41.40±17.52,C组与A、B组比较,t值为2.81～7.38,P值均<0.01。A组血浆uPA与PC Ⅲ呈负相关(r=-0.4785,P<0.05);C组PAI-1与HA呈正相关(r=0.5447,P<0.01)。 结论 肝硬化晚期,虽然血浆uPA、PAI-1增加,但总的效应表现为uPA相对不足,肝基质纤维降解受抑制,血浆uPA、PAI-1与肝硬化发展密切相关。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的探讨同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）对血管内皮细胞纤溶系统影响。方法（1）将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）分为10个实验组（0、10、50、200、500μmol／L Hcy组及叶酸和上述各Hcy点共同培养组）,培养24h后,酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中纤溶酶原激活剂（plasminogen activator,tPA）及纤溶酶原激活物抑制剂1（plasminogen activator inhibitor1,PAI-1）抗原含量,逆转录聚合酶链反应分析（RT-PCR）法分析各组tPA及PAI-1的mRNA表达水平。（2）急性心肌梗死（AMI）患者53例及健康对照组48例,ELISA测定空腹血浆tPA及PAI-1含量,高效液相色谱法测定血浆Hcy水平。结果（1）500μmoL／L Hcy组PAI-1抗原及mRNA表达水平均明显增高（P〈0．05）。（2）以单纯培养基为对照组,生理浓度Hcy组内皮细胞tPA抗原合成及mRNA表达明显增高（P〈0．05）,而以10μmoL／L Hcy组为对照组时,500μmoL／L Hcy组tPA抗原合成及mRNA表达水平则明显减少（P〈0．05）。（3）500μmoL／L Hcy与叶酸共同培养组和单纯Hcy组相比,可以明显提高内皮细胞tPA抗原的合成及mRNA表达,减少PAI-1抗原合成及mRNA表达（P〈0、05）。（4）AMI组Hcy、tPA及PAI-1均明显高于健康对照组（P〈0．05）。结论在体外细胞时,超生理浓度Hcy可以通过下调tPA、上调PAI-1的mRNA表达,减少内皮细胞tPA抗原的分泌及增加PAI-1抗原的合成,可能降低纤溶系统的活性。叶酸则可以减少Hcy引起内皮细胞纤溶系统的损害,起到保护作用。Hcy是AMI的一个独立危险因素。     

PAI-1在大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成中的动态变化

目的: 探讨纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI.1)mRNA在胆汁淤积性肝纤维形成中的动态变化及其作用.方法: 应用胆管结扎法复制胆汁淤积性肝纤维化动物模型,分为假手术组,模型组1 wk、2 wk、3 wk、4 wk,观察模型大鼠肝组织病理、纤维化程度、RT.PCR检测PAI-1 mRNA的水平、ELISA法检测MMP-2和MMP-9含量的动态变化.结果: 随胆管阻塞时间延长,胆管阻塞性肝纤维化大鼠纤维化程度逐渐增加,模型组1 wk、2 wk、3 wk、4 wk组PAI-1 mRNA表达与假手术组相比,逐渐增强,有显著性差异(1.53±0.01,1.84±0.03,2.06±0.04,3.62±0.04vs 0.72±0.02,P<0.01),而MMP-2和MMP-9表达先升高后下降.结论: PAI.1mRNA表达存在动态变化,其表达升高与胆汁淤积性肝纤维化形成和发展有关.     

侵袭转移相关因子在胃肠道间质瘤中的检测及其意义

目的:研究uPA、MMP-2、MMP-9、TGF-β1等侵袭转移相关因子在胃肠道间质瘤(GISTs)中的表达及其临床病理意义.方法:应用RT-PCR及Western blot法检测uPA、MMP-2、MMP-9、TGF-β1在124例GISTs中的表达.结果:在GISTs中,随着NIH分级增高,uPA、MMP-2、MMP-9、TGF-β1的mRNA表达水平上调,低、中、高危组有明显差异(P<0.05或0.01),其阳性表达率与性别、年龄、组织学类型无关,与肿瘤侵袭转移和黏膜受侵关系密切;四者的蛋白表达水平与mRNA表达一致;uPA与TGF-β1蛋白阳性表达之间呈显著正相关(r=0.356)、UPA与MMP-2、MMP-9蛋白阳性表达之间亦呈显著正相关(r=0.323,0.346).结论:TGF-β1、uPA、MMP-2及MMP-9参与了GISTs的浸润和转移;TGF-β1可能通过上调uPA,激活MMP-2及MMP-9,进而降解细胞外基质.     

转录活化子1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和胶原表达的影响

目的 观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和羟脯氨酸表达的影响.方法 将45只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、博来霉素组和寡核苷酸组,每组15只,分别在气管内灌注并雾化吸入生理盐水、博来霉素、STAT1反义寡核苷酸.分别于雾化后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠.肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变,免疫组织化学SP法测定肺组织中TGF-β_1、PAI-1表达,逆转录PCR测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量.样本均数间比较采用单因素方差分析和q检验.结果 寡核苷酸组大鼠各时间点的肺泡炎和肺纤维化程度均较博来霉素组减轻.博来霉素组和寡核苷酸组大鼠肺组织中TGF-β、PAI-1表达水平均明显高于生理盐水组,博来霉素组和寡核苷酸组大鼠雾化后第7天TGF-β、PAI-1的积分吸光度值分别为182±12和169±12、128±11和113±13,明显高于生理盐水组的21±6和27±9,第28天时(68±7和87±7、54±8和57±8)仍高于生理盐水组(22±7和26±7);雾化后第7天、第14天和第28天,寡核苷酸组大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为1.36±0.10、1.19±0.28、1.22±0.24和1.20±0.09、0.62±0.09、0.76±0.12,明显低于博来霉素组(3.29±0.28、2.04±0.25、1.91±0.30和1.63±0.15、1.58±0.13、1.12±0.09),寡核苷酸组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量(mg/g)分别为3.02±0.13、3.24±0.31和3.60±0.16,明显低于博来霉素组的3.76±0.10、3.92±0.30和4.62±0.28.结论 STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β_1、PAI-1的表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减少,羟脯氨酸含量降低有关.