磁珠法和Chelex法在微量或腐败检材DNA检验中的效果对比及探讨

在日常的法医物证工作中,常规检材,如血样、口腔拭子等我们用Chelex法提取DNA能够得到比较理想且完整的实验结果,而像牙刷、饮水瓶等微量检材和腐败的尸体检材,如腐败尸体指甲等亦十分常见,为使法医物证工作能顺利展开,一般可以使用ML-超微量磁珠法DNA提取试剂盒提高DNA检验水平,本次实验主要探讨磁珠法和Chelex在微量或腐败检材DNA检验中的效果差异。     

口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究

目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性捡材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性。方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测。结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型。结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值。     

犯罪现场中生物检材的发现和提取与案件侦破

随着DNA检验技术的发展，对微量生物检材的检验越来越成为可能。同样，随着犯罪手段的日益智能化，微量生物检材在重大案件中的作用愈来愈重要，甚至对整个重大案件起着决定性作用。因此，如何有效地发现和提取生物检材特别是微量的生物检材显得愈为重要。     

河北汉族人群线粒体DNA HV1、HV2区重叠片段遗传多态性分析

人类线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)是位于细胞核外的唯一遗传物质 ,具有呈母系遗传、没有重组、每个细胞内的拷贝数多、不易降解和突变率高等特点 ,所以mtDNA被广泛应用于人类进化、法医学的研究中 ;尤其对于法医案例中的一些特殊检材 :微量、降解和无核的检材 (如骨骼、牙齿、指甲、毛干、腐败检材等 )具有实际应用价值。线粒体DNA非编码区因其高度多态性成为法医学研究的热点 ,近年来世界上很多国家和地区对HV1、HV2区多态性进行了研究 ,积累了丰富的数据资料。我国地域辽阔 ,民族众多 ,目前各民族的线粒体DNA多态性数据…     

DNA提取方法的比较及改良

用于处理DNA检材以分离和提取DNA的方法很多。不同的方法有不同的优缺点,其适用的分析技术也不同。在法医检案的实际应用过程中经常会遇到不少的问题,如微量检材的DNA提取,既要纯度高,又要回收率高;常用的几种方法单独进行时则很难达到这样的要求。本文就几种常用的方法进行了改良及它们效果比较。     

不同检材微量血间日疟原虫PCR检测模板制备方法的研究

目的 探寻不同检材微量血间日疟原虫PRC检测模板制备的方法.方法 全血标本采用酚/氯仿抽提法、洗涤沉淀法、Chelex煮沸法和洗涤水煮法;滤纸干血滴及厚血膜标本以Chelex煮沸法和洗涤沉淀法制备模板.以间日疟原虫特异性引物作PCR扩增检测模板制备的效果.结果 采用上述4种不同的方法制备的全血间日疟原虫DNA模板与采用Chelex法和洗涤沉淀法制备的滤纸干血滴以及厚血膜疟原虫DNA模板均可被扩增出1条341bp的间日疟原虫特异性DNA条带,与预期的扩增片断大小一致;不同方法制备的10份间日疟患者血样DNA模板用于PCR扩增检测,结果无明显差异.其中,Chelex煮沸法和洗涤沉淀法对不同检材的疟原虫感染血样DNA模板均能有效制备,且可在同一离心管中进行,减少了交叉污染的机会.结论 Chelex法和洗涤沉淀法简便、实用,适用于不同检材微量血疟原虫PRC模板的制备.     

直接扩增技术在接触性检材 DNA检验中的应用

目的：将DNA直接扩增技术引入案件现场不同的接触性检材的检验中,构建有效的接触性DNA的生物检材的检验方法。方法采用剪取、擦拭等方法对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶、吸管及残缺指纹等检材进行取样,采用DNA直接扩增技术获得短串联康复序列（short tandem repeat ,STR）分型。结果 DNA直接扩增技术在5种不同检材中检出的基因型均为单一个体来源,其对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶和吸管、残缺指纹检材的成功率分别为90％、100％、70％、90％和60％,平均成功率在70％以上。分别对5种检材多处取点样品进行平行扩增,手套、烟蒂检材3个点位成功率均在90％以上;饮料瓶、吸管3个点位的成功率达80％～90％;衣服3个点位的成功率在60％～70％;残缺指纹3个点位的成功率在50％～60％。结论 DNA直接扩增技术对接触性DNA检材检验具有较高的有效应,其结果可靠,重复性强。     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

非人类DNA在法庭科学中的应用

随着法庭科学的发展,来自于动植物的非人类DNA逐渐应用于民事或刑事案件的调查中。动物DNA检验主要包括犯罪现场生物检材的种属鉴定和个体识别,动物之间的亲子鉴定,走失宠物的认领,肉类的检验检疫等。植物DNA检验用于联系嫌疑人与犯罪现场,寻找毒源等。由于动植物DNA检材常见且不易被发现、清除,因此不仅可为案件的侦破提供线索,有时甚至成为关键证据。但非人类DNA的检验在国内尚未普遍开展,应引起法医学者的重视。     

3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA方法的实验研究

目的对3种提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法进行实验研究和比较,以获得最佳的方法.方法分别采用Chelex-100小体系法、磁珠法、改良磁珠法法对脱落表皮细胞的DNA进行提取,并对检测结果进行分析比较,探讨提取接触性检材脱落表皮细胞DNA的方法.结果磁珠法和改良磁珠法均能获得较高质量的细胞核DNA STR基因座分型,且后者的分型效果更好.Chelex-100小体系法的STR基因座分型效果不佳.结论磁珠法和改良磁珠法均能有效检测接触性检材脱落细胞DNA,故在法医检案中遇到接触性检材时考虑选择改良磁珠法.     

Goldeneye~(TM) DNA ID System 20A试剂盒确证实验

目的:测试GoldeneyeTMDNA ID System20A试剂盒的技术性能指标,评估其法医学应用价值。方法:参照美国DNA分析方法专家组(TWGDAM)制定的确证指南,利用9947A、007标准品,100个拐卖儿童建库血样,日常案件各类检材制定测试方案,从方法学验证、灵敏度测试、混合样本测试、批量样本测试、DNA提取方法适应性测试、各类常见检材的测试、稳定性测试等7个方面进行测试。结果:Gold-eneyeTMDNA ID System 20A试剂盒灵敏度较高,对各类案件检材和DNA提取方法具有较好的适应性,具有直接扩增能力和检测混合DNA样本检测能力。结论:GoldeneyeTMDNAID System 20A试剂盒可用于法庭科学的检案与建库。     

微型磁笔提取DNA的应用

目的探索用微型磁笔进行DNA快速提取以及电泳鉴定的研究。方法取人血0.1ml或菜叶0.1g,磁珠悬液0．25ml,选择性结合DNA、洗涤、洗脱、电泳即得。不需离心,不用大量检材,用微型磁笔在离心管中微量操作,分离纯化DNA只需30min,电泳只需50min。结果可以观察到清楚明亮的DNA条带,使大、中学师生同时掌握了正规DNA提取和琼脂糖电泳两项技能。结论本方法是对细胞生物学、医学遗传学实验的一大改进,对于DNA的提取是一大进步,它操作筒捷直观、速度及准确率大为提高。     

现场DNA物证证据的提取、保存及检验应用进展

目的为了给刑事案件诉讼提供准确可靠的证据,在办理凶杀、强奸等多种刑事案件时,经常需要对各种来源于人体的生物检材进行个人同一认定检验。方法利用法医DNA技术对现场提取的血液(斑)、精液(斑)、唾液(斑)、人体组织、骨骼等检材进行检验,为案件侦破提供科学依据或线索;利用DNA数据库技术更大的发挥法医DNA技术在许多案件侦破中的应用,还可以利用法医DNA技术对灾难性事件(案件)中确定死亡人数、对受害者的身源进行鉴别。结果结论利用DNA物证可以为案件侦查和诉讼提供更多证据     

改良扩增前引物延伸技术检测痕量DNA

痕量DNA又称低拷贝模板（low copy number，LCN）。Gill等最初对其定义为少于100Pg的DNA模板。现有的PCR-STR方法，虽从一定程度上解决了微量模板DNA分析的难题，但对于痕量DNA仍很难检测成功。由于痕量生物检材是法医学上巨大的潜在的生物物证来源，如何提高痕量DNA的检测水平，是目前法医DNA检验迫切需要解决的难题。全基因组扩增技术被认为是目前解决这一难题的一种基本方法。经十余年的探索，全基因组扩增技术不断发展与完善，已被广泛用于遗传病的产前诊断、疾病基因的研究等，并取得良好的效果。本研究参照Hanson建立的改良的扩增前引物延伸反应（improved primer extension preamplification，I-PEP），对痕量DNA样本的检测方法进行探讨。     

法医DNA序列多态性分析技术的研究进展

自上世纪80年代DNA分析技术应用于法医学实践以来,法医物证学技术从以往只能检测基因编码产物水平（如蛋白质）飞跃到直接检测基因多态性的分子水平,这是法医物证检验分析史上的一场重大革新.法医DNA分析技术对犯罪现场遗留的指纹、毛发、唾液、血迹,甚至一些微量、腐败、污染的生物检材,均能做到快速的法医DNA分析,以进行个人识别和亲子鉴定,使现场生物物证的利用率大大提高,成为认定犯罪的有力证据.目前,法医DNA分析技术已成为法医生物物证检验的常规技术,广泛应用于伤害、性侵犯、交通肇事、亲子鉴定等刑事和民事案件中,为刑事侦查提供线索,为司法审判提供有力地科学证据.     

多个STR位点放大技术及法医学应用

由于 STR- PCR(short tandem repeate- polymerase chainreaction)技术的飞速发展 ,较好地解决了法医学微量、陈旧生物检材的分析问题。PCR技术最重要的特点是它的放大效应 ,即微量模板通过扩增达到检测所需的量。但在法医实践中 ,经常由于检材量极少 ,往往不能满足多个位点的检测 ,而无法达到个人识别的目的。单纯复合扩增技术由于多种条件的制约而难以准确分型。本研究采用引物间不存在互补结构、回文结构及其他二级结构的 3个 STR位点 FGA[1 ] 、DXS8377[2 ] 和 VWF [3 ] 进行两步 PCR扩增。试图解决微量检材的多位点同时检测…     

河北汉族人群miniSTR D17S974 、D11S4463基因座复合扩增及遗传多态性研究

在法医DNA检验中,短串联重复序列(shorttandem repeat,STR)技术已经广泛用于个人识别和亲子鉴定。但对于法医检验中一些微量以及降解的检材,因STR技术扩增片段较长(约300~400 bp)不能成功得出结论,会出现“优势扩增”或者“无效扩增”;而miniSTR分析技术是将引物设计得尽可能靠     

DNA微条形码技术在降解检材种属鉴定中的应用及法医学意义

【立题依据】 标准DNA条形码技术是基于COI基因序列分析而建立的一种物种鉴定方法,但由于目的基因扩增片段长达645bp,在法医物证降解检材中的应用受到限制。因此,本研究拟建立DNA微条形码技术,以解决法医物证特殊检材种属鉴定的难题。 【设计思路】 设计分别扩增不同近缘动物COI基因的通用引物,构建相应的复合扩增体系,并从种属特异性、林敏性、稳定性、案件适应性等方面进行验证。 【实验内容】 DNA提取及处理:有机溶剂法提取实验样本的基因组DNA;制备DNA<200bp的降解检材和两种动物DNA不同比例混合的混合检材。引物设计与合成:设计4对种属特异性引物和1对无种属特异性的ND3引物,并合成COI基因的标准引物。PCR扩增:①以10种动物基因组DNA为模板,分别用自行设计的4对引物进行扩增,以检验引物种属特异性;②以10种动物不同浓度基因组DNA为模板,分别用对应种属特异性的引物进行扩增,以检验引物扩增效能;③以降解检材基因组DNA为模板,分别用自行设计引物和标准引物进行扩增,以评估引物应用价值。PCR复合扩增:在确定自行设计引物特异性、扩增灵敏度的基础上,通过调整引物量和退火温度构建含有5对引物的复合扩增体系,并用于单一样本和混合样本基因组DNA的扩增。扩增产物检测:用聚丙烯凝胶电泳结合银染的方法检测各种动物模板DNA的扩增效果,以判定引物的扩增特异性和灵敏度,及降解检材和混合检材的扩增效果;用循环测序的方法获得各扩增产物的碱基序列,并通过BLAST软件与DNA数据库比对及遗传距离分析,判定检材的种属来源。 【实验材料】 常见家禽(鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子)和常见家畜(水牛、黄牛、山羊、绵羊、马、驴、犬)共7科18种动物及人类血液样本各5例。 【可行性】 (1)不同种属动物COI基因序列可从相应DNA数据库获得;(2)熟练掌握引物设计的操作方法和PCR技术;(3)具备本研究所需的各种仪器、设备和试剂。 【创新性】 为法医物证降解检材的种属鉴定提供一种有效的方法。     

DNA微单倍型的研究现状、挑战与展望

法医DNA在刑事侦查中发挥不可替代的作用,面对日益复杂的作案方式,法医DNA面临多重挑战,寻找有效的新型法医DNA遗传标记具有重要的应用价值和科学意义。微单倍型（microhaplotype）是一种新型法医遗传标记,它是长度较短、包含2个以上单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点的多态性基因座,兼有短串联重复序列（short tandem repeat,STR）和SNP的优点,具备较高多态性和极低突变率。最新研究发现其在祖源推断、个人识别、亲权鉴定等方面具有独特优势,尤其是在混合DNA分析、降解或微量检材检测中具备巨大潜力。文章对微单倍型的概念、特点、研究进展、挑战及展望等进行介绍,希望其将来在法医学应用中发挥更大的作用。     

Y染色体短串联重复序列基因座荧光复合扩增体系的法医学应用

目的探讨Y染色体DYS456、DYS464、DYS527、DYS531、DYS709、DYS448和DYS522共7个短串联重复序列(STR)基因座(相当于11个位点)荧光复合扩增体系在法医学中的应用价值。方法提取法医学应用中生物检材的基因组DNA,复合扩增7个Y-STR基因座,然后采用毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测扩增产物。结果盲测试验结果正确;可作为"人"与"非人"的种属特异性检测工具;用同一个体不同组织所获得的分型结果一致;调查同一父系家庭的男性成员样品,未观察到变异;对强奸案混合斑的分析,可直接检出7个Y-STR基因型,协助确定嫌疑人。结论荧光复合扩增Y染色体7个STR基因座方法可靠,对混合斑和微量检材中男性DNA的分析具有较高的应用价值。