家蝇幼虫营养价值及抗病毒活性的初步研究

目的：为在贵阳地区建立畜禽粪便养殖家蝇生产蝇蛆动物蛋白提供实验室数据，并观察用蝇蛆代替鱼粉饲养蛋鸡的效果及经济效益，确定家蝇组织匀浆液的抗病毒活性。方法：（1）在相同的实验室饲养环境下，观察人工饲料、猪粪饲养的家蝇幼虫体内脂肪酸及微量元素含量的区别；（2）用蝇蛆粉或鲜蝇代替鱼粉饲养蛋鸡，观察对蛋质的影响；（3）用鸡胚法检测蝇蛆组织匀浆液的抗病毒活性。结果：用猪粪饲养的蝇蛆体内所含的微量元素（Ca、Fe、Cu、Zn、Se)高于用人工饲料饲养的蝇蛆（P＜0．05）；用蝇蛆粉或鲜蝇代替鱼粉饲养蛋鸡，蛋内的脂肪酸及微量元素含量无明显改变（P＞0．05）；蝇蛆组织匀浆液中有抗病毒活性物质存在，性质尚待进一步确定。结论：用猪粪饲养家蝇不仅可以生产出优质的蝇蛆蛋白，还可以节约开支，净化环境及生产大量的优质生物肥；用蝇蛆代替鱼粉饲养蛋鸡不会影响鸡蛋的质量，蝇蛆生产周期短、经济、简单易行；蝇蛆组织匀浆液中存在抗病毒的活性物质，为抗病毒药物的寻找开辟了新的路径。     

家蝇幼虫淋巴液的抑菌作用及其SDS-PAGE分析

目的 观察针刺诱导家蝇幼虫血淋巴抗菌物质抑菌作用与抗菌分子.方法 室内饲养的家蝇三龄幼虫,经针刺体壁处理后48 h,提取其血淋巴,观察单独使用血淋巴和血淋巴与氨苄青霉素混合对9种应试细菌的抑菌效果,血淋巴与抗真菌药氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果,应用SDS-PAGE分析血淋巴抗菌分子表达.结果 针刺家蝇幼虫后48 h的血淋巴,作用于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、黄色小球菌,结果显示:针刺家蝇幼虫后48 h的血淋巴对试验9个标准株细菌,均产生明显抑菌环,经单因素方差分析,显示各抑菌试验组的抑菌效果,皆有显著差异(P＜0.001).其中对黄色小球菌抑菌活力最强.1 μ1氨苄青酶素与7 μ1针刺诱导家蝇幼虫淋巴液混合对白色葡萄球菌抑菌效果呈现最好的加强抑菌作用.针刺诱导家蝇幼虫血淋巴与抗真菌药物氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果呈现明显协同增强作用.SDS-PAGE分析结果显示:针刺幼虫后发育的成蝇和针刺幼虫血淋巴的电泳条带与未针刺者相比,针刺幼虫后发育的成蝇,在24000～97000范围内表达尤为增强,在12000附近有一条特异性条带.针刺家蝇3龄幼虫血淋巴SDS-PAGE分析显示,在24 000、35000、40 000～96000范围内表达明显增强,其中35 000、12 000条带较为特异.结论 本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性,发现针刺诱导家蝇幼虫血淋巴对黄色小球菌抑菌活力最强,氨苄青霉素与家蝇幼虫淋巴液混合对白色葡萄球菌抑菌效果呈现最好的加强抑菌作用,针刺诱导家蝇幼虫血淋巴与抗真菌药物氟康唑混合对酵母真菌抑菌效果呈现明显增强作用,上述发现在国内外报道较少,本研究结果,为进一步开发这类抗菌物质,提供了实验资料.     

针刺诱导家蝇幼虫抗菌物质的动态观察

目的观察家蝇幼虫经针刺损伤并感染金黄色葡萄球菌后,家蝇幼虫抗菌物质的动态表达效果。方法室内饲养的家蝇3龄幼虫,经针刺损伤感染金黄色葡萄球菌后,分别于第0、12、24、36、48、60小时记录幼虫存活率,并提取其血淋巴,以溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌作指示菌,采用平板法做抑菌试验,37℃恒温24 h观察抑菌圈,并以抑菌圈直径表示抗菌活力的大小,取诱导后高峰时间产生的抗菌物质进行抑菌实验,探讨家蝇抗菌物质诱导产生的规律。结果针刺损伤感染金黄色葡萄球菌后,家蝇幼虫存活率逐渐降低,提取的血淋巴对溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活力峰均出现在诱导后48 h。结论针刺损伤感染金黄色葡萄球菌处理法可诱导家蝇产生抗菌物质,在诱导后48 h收集血淋巴最为适宜。     

大肠杆菌诱导家蝇抗菌物质的研究

目的　对家蝇体内的抗菌物质进行研究。方法　用大肠杆菌诱导家蝇三龄幼虫 ,采用抑菌圈法 ,对家蝇体内抗菌物质的诱导效果及其活性进行研究。以SDS PAGE法分离家蝇的抗菌蛋白。结果　诱导产生的家蝇抗菌物质其活力高峰出现于第 48h。诱导后第 48h血淋巴稀释 10 0倍 ,对大肠杆菌的致死率仍达 12 % ;其抗菌物质对动、植物病原菌有广谱的抗菌活性 ,同时 ,未经诱导的家蝇幼虫也具有抗菌活性。SDS PAGE电泳分析表明 ,外源诱导能增强原有抗菌物质的表达量 ,并能激活新的蛋白产生。结论　为进一步纯化和生化分析家蝇体内的抗菌蛋白提供了新的依据。     

诱导家蝇幼虫产生抗菌物质的实验研究

目的对家蝇体内的抗菌物质进行研究。方法通过喂菌及超声诱导家蝇幼虫产生抗菌物质,采用比浊法对家蝇体内抗菌物质的活性进行测定。结果家蝇经诱导后产生的抗菌物质具有较好的杀菌效果,但对不同细菌所产生的杀菌效果有一定差别。结论研究结果可为进一步纯化和分析家蝇体内的抗菌蛋白奠定了基础。     

先天性巨结肠肠壁微环境变化对神经干细胞分化和迁移的影响

目的:观察先天性巨结肠(HD)和正常结肠肠壁组织匀浆液对肠神经干细胞分化和迁移的影响。方法:体外培养胎鼠肠神经干细胞,采用Transwell小室的方法比较HD肠壁和正常结肠肠壁组织匀浆液对肠神经干细胞的体外分化和迁移的影响。结果:HD肠壁组织匀浆液与正常结肠肠壁组织匀浆液相比,显著增加肠神经干细胞的体外分化和迁移能力。结论:正常肠神经组织及其微环境中存在可促进肠神经干细胞体外分化和迁移的物质。     

家蝇幼虫分泌物对猪蛔虫卵发育的影响

目的：观察家蝇幼虫分泌物对猪蛔虫卵发育的影响。方法：从培养家蝇幼虫的猪粪中提取幼虫分泌物，制成虫卵培养液，观察培养液中猪蛔虫卵发育情况。同时，设立未培养家蝇幼虫的猪粪为阴性对照组。结果：实验组蛔虫卵的发育率较对照组低，两者比较差异有显著性（P＜0．05）。结论：家蝇幼虫的分泌物中可能含有阻碍蛔虫卵发育的物质。     

家蝇幼虫、蛹、成虫抗菌肽的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的分析家蝇幼虫、蛹、成虫的抗菌肽成分。方法通过针刺感染大肠杆菌诱导家蝇各虫态产生抗菌肽,再经研磨、离心等步骤提取这些抗菌肽,用改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳使其分离。结果家蝇幼虫有7条带,成虫有5条,蛹只有4条。结论家蝇幼虫和成虫的抗菌肽种类较蛹的多,且有一些小分子肽段,可能与其较强的抗菌效果有关;家蝇蛹处于相对静止期,其电泳图中抗菌肽条带较少,无较小的条带,抗菌效果可能较幼虫和成虫的差。     

抗菌肽Cecropin-His-6基因的真核表达及其生物活性研究

目的 研究家蝇幼虫Cecropin-His-6抗菌肽基因生物学功能。方法从家蝇幼虫体内扩增Cecropin-His-6抗菌肽基因，构建pcDNA3．1／Cecropin-His-6重组表达质粒并用脂质体转染CHO细胞中，G418筛选，HisTrap HP亲和层析柱纯化目的蛋白，琼脂糖平板抑菌试验检测目的蛋白的抗菌活性。结果pcDNA3．1／Cecropin-His-6重组质粒成功转染入CHO细胞中，并获得具有抗菌活性的Cecropin-His-6目的蛋白。结论家蝇幼虫抗菌肽哺乳动物型工程细胞表达系统的建立，为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。     

家蝇免疫血淋巴的抑菌作用及其免疫活性的研究

目的研究家蝇幼虫免疫血淋巴抑菌作用及其机制并探讨其免疫调节功能。方法分未经诱导、针刺诱导、蘸菌液诱导三组提取家蝇幼虫免疫血淋巴,分别针对多个标准菌株做抑菌实验,并设立空白对照和药物对照,观察抑菌效果。淋巴细胞转化实验研究家蝇血淋巴的免疫调节作用。结果三种处理方法所提取的家蝇幼虫血淋巴对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、肺炎克氏菌、铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等革兰氏阳性菌、阴性菌及单细胞真菌白色念珠菌均有强的抑菌作用,其中带菌诱导的血淋巴抑菌效果较好,并且抑菌活力具有一定的热稳定性。血淋巴对人淋巴细胞的激活作用明显,淋巴细胞的转化率与对照组比较差异有显著性。结论本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性和免疫功能,为家蝇血淋巴的抗菌机制及免疫调节作用的深入研究和应用提供资料。     

经卵白给药研究利巴韦林在鸡胚内抗甲型流感病毒的作用

目的建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型。方法设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度。结果在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。结论在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制。     

人季节性H1N1流感病毒小鼠感染模型的建立

目的制备人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,为研究流感病毒致病性、研发抗病毒药物提供模型动物。方法将人季节性H1N1流感病毒在鸡胚尿囊腔扩增后,滴鼻接种小鼠,4 d后将小鼠处死,挑选感染体征严重者进行实时荧光PCR(FQ-PCR)检测肺中的流感病毒,将检测阳性的肺上清在鸡胚尿囊腔扩增,接种于下一代小鼠。比较各代小鼠对流感病毒的适应情况,直至小鼠出现明显的感染体征,取肺研磨制成匀浆,获得流感病毒鼠肺适应株并检测其半数致死量(LD50)。将10 LD50的病毒液接种于小鼠,建立人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型,观察模型小鼠的一般活动状态、体质量变化、肺部病变,HE染色观察肺部病理切片,计算肺指数,FQ-PCR检测病毒RNA。结果人季节性流感病毒在小鼠体内传代4次后,鼠肺适应株制备完成,其经鼻的LD50为10-2.41/0.05 mL。人季节性流感病毒的小鼠感染模型,一般状态差,体质量明显减轻,肺指数增大,70%出现死亡。病理切片观察病变明显,FQ-PCR显示流感病毒阳性。结论成功建立了人季节性H1N1流感病毒的小鼠感染模型。     

不同地区HIV患者抗病毒治疗服药依从性影响因素的研究

目的：研究不同地区影响艾滋病患者抗病毒的服药依从性的因素。方法：回顾性分析350例艾滋病患者的临床资料,挑出其中的服药依从性好的人群与服药依从性差的人群,并从治疗因素、药物治疗因素、社会人1：7学因素中筛选出对患者服药依从性的影响OR值大于1的因素。结果：这350例艾滋病患者中服药依从性好的为250例,服药依从性差的为100例,对患者服药依从性的影响OR值大于1的因素为医疗费用、心理健康程度、对抗病毒药物知识的了解程度、当地的医疗服务质量。结论：影响艾滋病患者抗病毒的服药依从性的因素很多,主要集中在服务质量和对相应治疗的知识了解上。     

鸡胚材料在肿瘤学研究中的应用

本文综述鸡胚材料在建立肿瘤种植模型、肿瘤侵袭转移、肿瘤血管生成、肿瘤治疗、肿瘤病毒学等研究中的应用,认为鸡胚是较好的研究材料.     

不同种质板蓝根和大青叶的抗甲型流感病毒作用

目的：研究板蓝根和大青叶抗甲型流感病毒作用。方法：选用鸡胚法分别考察各１５个种质的板蓝根和大青叶对甲型流感病毒（Ａ１京防８６－１）的抑制作用。结果：血凝滴度实验表明，在对甲型流奇形怪状现毒的直接作用，治疗作用和预防作用３方面大多数板蓝板和大青叶有效，但各种质药样品抗病毒活性的有无及强度有明显差异。结论：在保证药材来源可靠的前提下，证明了板蓝根和大青叶确具抗病毒作用，并为药材种质的优选提供一定的依据     

不同传染性腔上囊病病毒株结构蛋白表达差异性研究

目的:了解不同传染性腔上囊病病毒株(ICBDV)结构蛋白表达的差异.方法:将在不同时间、地域,从鸭、麻雀及传染性腔上囊病发病鸡群中获得的18株ICBDV,分别用SPF鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞增生,经氯仿处理后,采用聚乙二醇沉淀、超速离心和不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒,并对纯化病毒进行SDS-PAGE分析.结果:病毒主要分布于40%蔗糖层;鸡源、鸭源、麻雀源ICBDV在SDS-PAGE中均出现5条特异的蛋白带,各蛋白带的电泳迁移率毒株间差异不明显;15株鸡源ICBDV结构蛋白VP2在不同毒株表达量有较大差异.结论:不同传染性腔上囊病病毒株结构蛋白VP2表达量存在差异.     

禽冠状病毒的分离鉴定及膜蛋白基因的克隆

目的分离鉴定禽冠状病毒,对该病毒的M基因序列进行分析。方法采用鸡胚传代分离培养病毒,用血凝特性、鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚矮小化、动物回归试验等方法鉴定病毒,用RT-PCR克隆病毒的膜蛋白基因并对其测序。结果分离病毒的生物学特性符合禽冠状病毒,膜蛋白基因与标准毒株膜蛋白基因为核苷酸序列同源性为91.9%,氨基酸的同源性为92.5%。结论本研究分离到1株禽冠状病毒,命名为IBV-HN05,该毒株可能是疫苗株的变异株。     

针对汉坦病毒S基因反义寡核苷酸抗病毒效应的研究

目的：研究反义寡核苷酸（asON）体外抗汉坦病毒（HV）的效应。方法：设计合成了分别针对HV S基因片段5′端手柄状结构区的asON1和针对mRNA翻译起始区的asON2，采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测asON作用后HV感染细胞培养上清中HV核蛋白（NP）的表达水平，免疫荧光试验（IFA）检测asON作用后感染细胞膜上NP的表达水平，空斑减少中和试验（PRNT）测定asON作用和HIV感染细胞培养上清液中病毒滴度。结果：asON可抑制NP的合成以及病毒活恬。结论：asON具有一定的抗HV作用，有可能作为一种治疗人HV感染的新途径。