烟草烟雾提取物对人牙龈成纤维细胞在3Y-TZP表面生长状态的影响

原代培养HGFs并进行细胞来源鉴定;SRB法检测不同浓度CSE作用下HGFs在材料表面粘附、增殖情况;免疫荧光染色,病理图像分析系统计数评价HGFs细胞铺展面积及形状系数改变;激光共聚焦显微镜下观察拍照,观察凋亡形态;扫描电镜观察细胞粘附的形态结构改变。结果:细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性;随CSE浓度升高,HG-Fs在材料表面粘附、增殖、铺展面积、形状系数及形态伸展均呈下降趋势,各实验组与对照组间均存在显著差异(P<0.05),抑制作用随浓度升高更加明显,呈浓度依赖性。结     

烟草浸提液对牙龈成纤维细胞在钛板上粘附增殖的影响

目的:观测烟草浸提液(smokeless tobacco extract,ST)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblats,HGFs)在钛板上粘附的数量、形态、超微结构及增殖的影响.方法:不同浓度的ST作用于钛板上粘附的HGFs,扫描电镜观测细胞形态的变化,MTT法分别于2 h和第1、4、7、10天测定细胞粘附和增殖情况.结果:随着ST浓度的增加,细胞铺展面积逐渐变小.由纺锤形逐渐变成长条形、卵圆形;超微结构显示:细胞表面长线状伪足减少;细胞的增殖能力呈浓度依赖性抑制.结论:ST可改变HGFs粘附的数量、形态和结构,抑制细胞的增殖,提示烟草在破坏牙种植体龈界面机制中起重要作用.     

粘附肽精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸促进小鼠成骨细胞在材料表面的附着和铺展

目的：研究粘附肽RGD（精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸）对对小成骨细胞夺材料表面附着和铺展的影响,为使用粘附肽对肿有面修提供外体实验依据。方法：采用自组装单层结构法将含有RGD的粘附肽片段RGDC以共价键固定在材料表面,小鼠成骨细胞体外培养4h,细胞计数分析其对材料的附着。FITC标记免疫荧光染色观察培养4h后细胞内肌动蛋白的分布。结果：RGD可以使细胞对材料表面的附着密度显著提高,体外培养4h,细胞在RGD材料表面具有良好的铺展形态,结论：表面固定RGD可以促进细胞对材料表面的附着和铺展。     

热休克蛋白27在烟草烟雾提取物介导的牙龈成纤维细胞损伤中的表达变化

目的 观察在不同质量分数烟草烟雾提取物（CSE）干预下,热休克蛋白（HSP）27在人牙龈成纤维细胞（HGFs）损伤过程中的表达。方法 取原代培养并经过鉴定的3~8代HGFs,采用细胞划痕试验检测不同刺激质量分数（0、2.5%、5.0%、12.5%、25.0%、50.0%）的CSE对HGFs体外迁移的影响,并采用Western blot方法检测HSP27在HGFs中的表达。结果 CSE质量分数越高,细胞的迁移能力越弱;HSP27在正常HGFs中呈弱阳性表达,在CSE刺激后的HGFs中呈强阳性表达,且随CSE质量分数的增高,HSP27的相对表达量有逐渐增高的趋势,与细胞迁移能力相反。结论 HSP27在CSE介导的HGFs损伤中表达升高,在CSE介导的上皮损伤中有重要作用。     

烟草对大鼠牙龈成纤维细胞在钛板上附着的影响

目的:探讨烟草浸提液(smokeless tobacco extract,ST)对大鼠牙龈成纤维细胞(ral gingival fibroblasts,RGFs)在钛板上附着数目、形态、增殖的影响.方法:采用组织块法进行RGFs的原代培养,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法进行细胞来源鉴定.不同浓度的ST作用于附着于钛板上的RGFs.MTT法检测钛板表面细胞的贴附、增殖情况,免疫荧光检测并分析钛板表面细胞铺展形态的变化.采用SPSS13.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:SP结果显示,RGFs波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性.证明该细胞来源于中胚层.随着ST浓度的升高.RGFs在钛板表面的贴附、形态伸展、增殖呈下降趋势,ST作用组与阴性对照组间存在显著差异(P＜0.05).结论:ST可抑制RGFs在钛板表面的贴附、形态伸展及增殖,提示吸烟可能影响口腔种植手术的远期效果.     

MC3 T3-E1细胞在四种生物膜上粘附增殖能力的比较研究

目的：研究四种生物膜的表面形态及生物相容性,比较它们对 MC3 T3-E1细胞粘附增殖能力的影响,及成膜材料与制备方法之间的交互作用。方法：以聚己内酯[poly（ε-caprolactone）,PCL]与聚乳酸-羟基乙酸[poly（lactic-co-glycolic acid）, PLGA]作为膜材料,浇铸及电纺两种方法分别制备生物膜,使用场发射扫描电子显微镜观察四种膜表面结构,CCK-8法检测膜上 MC3T3-E1细胞1、3、7 d增殖量,激光共聚焦显微镜评价细胞在材料表面的粘附情况,实时荧光定量 PCR反应检测粘附相关基因。结果：扫描电镜观察到浇铸膜表面具有孔隙结构,电纺膜表面电纺丝交织成网;CCK-8检测中3 d、7 d 时 PLGA 膜上细胞增殖量大于 PCL膜（P＜0．05）,与制备方法无关（P＞0．05）;激光共聚焦显微镜观察到除 PCL 电纺膜表面细胞铺展不佳外,其余膜上细胞生长良好;实时荧光定量 PCR检测发现 PCL浇铸膜上细胞整合素基因表达量高于其他组（P＜0．05）,且不同材料与制备方法间存在交互作用。结论：PLGA膜有利于 MC3T3-E1细胞增殖,而 PCL 浇铸膜适合细胞粘附。因此,相对单一材料或成膜方式,PLGA与 PCL及浇铸、电纺法的混合膜可成为以后发展的方向。     

微纳复合结构对成纤维细胞黏附增殖的影响

目的：探讨经不同方法处理后的纯钛表面对成纤维细胞黏附增殖的影响。方法：将36个试件分平均为3组：机械抛光组（A组）;喷砂酸蚀组（B组）;喷砂酸蚀碱热组（C组）,每组均12个试件。通过扫描电子显微镜（SEM）观察分析3组试件表面微观结构和细胞在试件表面的铺展情况,激光共聚焦显微镜（CLSM）检测各试件表面的粗糙度;运用CCK-8试剂盒在450 nm波长下检测各试件对成纤维细胞（ L929）黏附与增殖的吸光度值（ OD值）。结果：A组表面光滑,试件表面成纤维细胞骨架大多呈梭形铺展,伸展较差;B组和C组表面粗糙,且C组表面可见微纳复合结构,试件表面成纤维细胞骨架呈三维空间向铺展,表面黏附成纤维细胞数量明显多于A组和B组。观察第1,3,5 d试件表面细胞增殖情况,可见粗糙表面较光滑表面更利于成纤维细胞的增殖。结论：喷砂酸蚀碱热方法处理后的纯钛表面形成微米-纳米复合孔洞,表面活性好,促进成纤维细胞早期黏附及表面铺展,且不抑制细胞的增殖。     

人牙髓干细胞在聚乳酸-聚乙醇酸共聚物支架上粘附与增殖的研究

目的：研究成人牙髓干细胞（HDPSCs）在聚乳酸-聚乙醇酸共聚物（PLGA）支架上粘附与增殖的情况。方法：采用酶消化法分离、培养人牙髓干细胞,免疫组化法及体外诱导分化对细胞进行鉴定。将人牙髓干细胞与PLGA支架材料进行复合培养,扫描电镜（SEM）观察支架材料形态,细胞粘附、增殖及基质分泌情况;细胞计数检测其增殖力。结果：细胞接种2、5、10d,扫描电镜及细胞计数均显示HDPSCs与PLGA支架材料粘附紧密,生长状态良好,细胞明显增殖（P〈0.05）,有丰富的细胞外基质形成。结论：PLGA是一种适宜人牙髓干细胞粘附与增殖的支架材料。     

凝胶样支架材料对三维培养的人牙髓干细胞增殖的影响

目的　评价牙髓组织工程中不同浓度的两种可注射性凝胶样支架材料对牙髓干细胞增殖的影响。方法：配制不同浓度的I型胶原、肽段水凝胶（Puramatrix）支架材料,将牙髓干细胞分别接种于各组支架材料上;CCK-8方法检测细胞增殖情况;活死细胞染色观察细胞数量及形态。 结果　接种在各浓度支架材料上的牙髓干细胞均生长良好,其中1%的胶原支架和0.25%的水凝胶支架对牙髓干细胞的增殖有明显的促进作用;活死细胞染色观察牙髓干细胞在各浓度的两种支架材料中均生长良好,细胞数量随培养时间的延长呈递增趋势;细胞充分伸展,呈纺锤型。     

人血清白蛋白对人牙龈上皮细胞在纯钛表面粘附作用的影响

目的：探讨人血清白蛋白（human serum albumin，HAS）对人牙龈上皮细胞（human gingival epith-elial cells，HE）在种植体材料表面粘附作用的影响。方法：HE原代培养，免疫荧光染色法标记细胞，观察人牙龈上皮细胞在人血清白蛋白预孵育及普通纯钛试件表面的粘附。结果：使用角朊细胞无血清培养基和分离酶成功地培养出HE；HE经广谱细胞角蛋白单抗免疫组化染色为阳性；浓度为50mg/ml的HAS预孵充于纯钛表面，4h时处理组粘附的HE的数量显著少于对照组，12、24h处理组与对照组相比，粘附的细胞数量无显著性差异。结论：HAS预孵充纯钛表面，对HE的粘附在早期产生抑制作用。     

Evaluation of the biological behaviour of various dental implant abutment materials on attachment and viability of human gingival fibroblasts

ObjectiveThis study aimed to investigate the biological effects of yttria-stabilized zirconia (Y-TZP) compared to other dental implant abutment materials, i.e. lithium disilicate (LS2) and titanium alloy (Ti), as well as the effects of aging of Y-TZP on viability/proliferation and attachment properties of Human Gingival Fibroblasts (HGFs).MethodsCylindrical specimens of each material were prepared as per manufacturer’s instructions. Y-TZP specimens were divided into three groups: 1. no aging (Zr0), 2. aging for 5 h, 134 °C, 2 bars, 100% humidity (Zr5), 3. aging for 10 h under the same conditions (Zr10). Surface roughness was evaluated by optical profilometry; cell metabolic activity/viability by MTT assay, morphological changes by Scanning Electron Microscopy (SEM) and ratio of live/dead cells by confocal microscopy.ResultsResults showed statistically significant reduction of HGF metabolic activity/viability in contact with Y-TZP after aging. Nevertheless, non-aged zirconia showed no significant differences compared with LS2, Ti and control cultures. In contrast, significant stimulation of cell metabolic activity/viability was observed in HGFs exposed to LS2 eluates. Differential morphological patterns were observed for HGF in contact with different materials/treatments, with obviously increased number of dead cells and sparser distribution of HGFs cultured on Zr10 specimens. These effects were not correlated with surface topography, since Y-TZP aging did not alter surface micro-roughness.SignificanceThese findings indicate that Y-TZP shows comparable biological properties to Ti and LS2 as implant abutment material. Nevertheless, Y-TZP aging might influence gingival cell attachment and proliferation properties, providing an alert to a potentially negative effect on the long-term maintenance of gingival architecture.     

服用硝苯地平后牙龈增生以及未增生患者牙龈成纤维细胞生物特性比较

目的：观察服用硝苯地平后牙龈增生和未增生患者牙龈成纤维细胞（nifedipine responders gingival fibro-blasts NIFr-HGF,nifedipine non-responders gingival fibroblasts NIFn-HGF）超微结构、细胞周期变化以及增殖能力的差异性,以探讨该药导致牙龈增生的可能作用机理。方法：采用透射电镜观察NIFr-HGF、NIFn-HGF的超微结构,利用流式细胞仪、MTT法检测和比较2种细胞经硝苯地平诱导后其细胞周期以及增殖能力的差异性。结果：与NIFn-HGF相比较,NIFr-HGF内粗面内质网扩张;受硝苯地平诱导后其增殖明显加强。结论：NIFr-HGF合成蛋白质的能力可能较NIFn-HGF强,且前者对于硝苯地平的反应也明显强于后者,这提示两类细胞的细胞生物学特性以及对钙离子拮抗剂的反应能力存在差异,药物性牙龈增生的发生可能存在细胞异质性。     

釉基质衍生物对牙周炎症组织中凋亡发生的影响

目的：探讨釉基质衍生物（EMD）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg—LPS）龈沟内注射形成的牙周炎症组织中细胞凋亡的影响。方法：隔日向SpragueDawley大鼠双侧上颌第一及第二磨牙间腭侧龈沟内注射Pg—LPS2wk建立牙周炎模型;牙周炎形成后,龈沟内注射EMD或磷酸盐缓冲液;截取上颌骨标本,行HE染色观察牙周组织破坏情况,TUNEL染色观察牙周组织中细胞凋亡,免疫组织化学染色观察凋亡酶caspase--3和波形蛋白的表达。结果：在大鼠龈沟内注射Pg—LPS后,牙周组织形成明显的炎症和附着丧失;TUNEL染色显示EMD可以抑制Pg—LPS所致牙周组织中的细胞凋亡;免疫组织化学染色显示EMD降低凋亡酶caspase--3的表达,并且促进牙周组织中波形蛋白的表达。结论：EMD可以抑制Pg—LPS所致牙周组织中的细胞凋亡,从而促进牙周组织再生。     

中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL／OPG表达的影响

目的：探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法：将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞,显微镜下观察细胞的变化。实时定量 RT-PCR法和 Western blot法分别检测 RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达,并计算 RANKL/OPG的比值。结果：牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少,50μg/mL 时,显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上,RANKL/OPG的比值在12．5μg/mL处理组均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达 RANKL 和 OPG,破坏 RANKL/OPG比例的平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。     

促结缔组织增生型成釉细胞瘤细胞的体外培养与鉴定

目的：观察体外培养的促结缔组织增生型成釉细胞瘤细胞的生长特点。方法：对促结缔组织增生型成釉细胞瘤细胞用酶消化法进行体外培养，免疫组化证实其细胞来源，以倒置显微镜观察细胞形态及生长情况．并用流式细胞仪分析细胞周期，MTT法绘制细胞生长曲线。结果：促结缔组织增生型成釉细胞瘤为上皮来源，细胞在体外培养过程中包含2种形态的细胞，与实性成釉细胞瘤细胞在体外培养相比，存在较多梭形细胞，细胞生长缓慢，培养的各代细胞未见异倍体。结论：促结缔组织增生型成釉细胞瘤细胞在体外培养过程中包含较多的梭形细胞．可能与其较多的细胞间质有关。     

贫血小板血浆和根面脱矿对人牙周膜成纤维细胞在病变牙根面附着和增殖的影响

目的：观察贫血小板血浆和根面脱矿单独及联合应用对人牙周膜成纤维细胞在病变牙根面的附着及增殖的影响,探讨PPP和根面脱矿处理在促牙周组织再生中的可能作用。方法：实验分4组,经PPP、EDTA和两者联合处理的病变根片的3组作为实验组,未处理的病变根片作对照组。分别通过细胞计数法、四唑盐比色法[MTT]和扫描电镜检测人牙周膜成纤维细胞在不同处理病变牙根表面的附着、增殖和形态。结果：与未处理组相比,PPP组及根面脱矿组均能促进人牙周膜成纤维细胞对病变根面的附着（P〈0.05）,二者联合处理促细胞附着效果明显增强（P〈0.01）;未处理组中人牙周膜成纤维细胞体外培养48h与培养24h相比,细胞在病变根片上的无增殖（P〈0.05）;单独PPP或脱矿处理组中人牙周膜成纤维细胞体外培养48h与培养24h相比,细胞在病变根片上的附着及增殖增加,但无统计学意义,PPP和根面脱矿联合处理组中细胞在病变根片上的附着及增殖明显增加（P〈0.05）。结论：PPP能牢固地附着于病变根面,PPP和根面脱矿单独和联合处理病变根片能明显加强人牙周膜成纤维细胞的附着和增殖,而PPP和根面脱矿联合处理还有显著的促细胞增值效应。     

槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激的人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响研究

目的研究槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g LPS)刺激的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学行为的影响。方法采用DNA片段凝胶电泳、CCK-8法、细胞划痕法观察不同浓度槲皮素(10、20、50、100μmol/L)对体外培养HGFs的毒性作用,以及对HGFs增殖与迁移的影响。采用P.g LPS刺激HGFs来建立体外炎症刺激模型,通过流式细胞术、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测、酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进一步观察槲皮素对HGFs凋亡、ROS的产生及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)表达的影响。结果槲皮素对HGFs无毒性作用,且对HGFs的增殖无影响(P>0.05)。各组细胞迁移率总的比较,差异有统计学意义(F=9.973,P<0.05),在处理48 h后,20μmol/L槲皮素处理组细胞迁移率大于10、50μmol/L槲皮素处理组以及对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。槲皮素对P.g LPS刺激的HGFs凋亡具有抑制作用,且其能够抑制并预防P.g LPS刺激的HGFs中ROS相对产生量增加现象(均P<0.05)。槲皮素处理显著抑制了P.g LPS诱导的TNF-α表达增加现象(P<0.05),而槲皮素处理组PGE2的表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论浓度为20μmol/L的槲皮素能够促进体外培养HGFs的迁移,且具有抗氧化、抗炎保护作用。     

亲水性纯钛表面对成骨细胞黏附行为的影响

目的:体外研究亲水性喷砂酸蚀钛表面对成骨细胞黏附、铺展行为和黏着斑激酶(FAK)表达的影响.方法:钛片表面分别采用大颗粒喷砂酸蚀表面处理(sandblasted,large-grit,acid-etched,SLA)及亲水性化学活化大颗粒喷砂酸蚀表面处理(chemically-modified hydrophilic SLA,modSLA),在其表面接种人成骨细胞,对细胞黏附率、细胞铺展情况以及黏着斑激酶(FAK)的表达进行检测.应用SAS6.0软件包对数据进行统计学分析.结果:成骨细胞在modSLA表面的早期黏附率(1h、3h)显著高于SLA表面(P<0.05);接种3h后,modSLA表面的成骨细胞呈现更多的肌动蛋白结构和明显的成骨细胞骨架结构,细胞铺展更加明显,modSLA组细胞形状因子均值显著低于SLA组(P<0.05);免疫荧光分析显示,6h modSLA表面细胞内FAK的荧光强度高于SLA组(P<0.05).结论:亲水性化学活化大颗粒喷砂酸蚀处理钛表面较大颗粒喷砂酸蚀处理钛表面能显著增强成骨细胞在材料表面的贴附,促进细胞骨架沿一定方向伸展,促进黏着斑激酶(FAK)的表达,从而增强细胞的黏附力.     

口腔鳞癌癌细胞和癌相关成纤维细胞的原代培养、鉴定及其生物学特性研究

目的：对口腔鳞状细胞癌细胞（OSCCs）及癌相关成纤维细胞（CAFs）进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法：取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数培养法分离、纯化细胞,正常口腔成纤维细胞（NFs）和舌鳞癌细胞系Tca8113作为对照组。通过形态学观察、波形蛋白和角蛋白免疫组化染色对纯化的细胞进行鉴定。应用MTT法绘出OSCCs、CAFs、NFs和Tca8113细胞的生长曲线。结果：获得纯化的OSCCs和CAFs,通过对比研究阐明OS-CC和CAFs的生物学特点;OSCCs中免疫组化染色角蛋白呈阳性、波形蛋白呈阴性,CAFs中角蛋白呈阴性、波形蛋白呈阳性。结论：通过本实验研究成功获得纯化的OSCCs和CAFs,对比研究发现CAFs和NFs在形态结构、生长特点等方面不同。