IgH、TCRδ基因重排与急性非淋巴细胞白血病的相关性

目的 探讨初诊急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患中免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体δ链（ＴＣＲδ）基因重排情况。方法 用聚合酶链反应方法检测ＩｇＨ及ＴＣＲδ基因重排。结果 ３０例患中９例（３０％）发生ＩｇＨ基因重排,５例出现ＴＣＲδ基因重排。结论 ＡＮＬＬ中确定存在系列不保真现象,不仅具有较高的ＩｇＨ重排发生率,还具有ＴＣＲδ重排发生。     

多聚酶链反应检测颈淋巴结细针穿刺细胞 IgH 及 TCR β 基因重排的应用研究

多聚酶链反应检测颈淋巴结细针穿刺细胞ＩｇＨ及ＴＣＲβ基因重排的应用研究赵彤张素娟朱梅刚董敬朋赵菲陆药丹用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测淋巴瘤细胞ＩｇＨ和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）克隆性基因重排的应用研究已有一些报道。已往检测样本主要来自手术切除新鲜组织或石...     

急性淋巴细胞白血病T细胞受体δ基因不完全重排的研究

应用ＤＮＡ多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）进行了Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）δ基因重排的研究，并获得了３个ＡＬＬ患者ＴＣＲδ基因的Ｖ－（Ｄ）－Ｄ结合部顺序（Ｎ顺序）。证明ＡＬＬ，特别是Ｂ细胞ＡＬＬ中，ＴＣＲδ基因不完全重排的发生率比较高，最常见的两种重排类型为Ｖδ２－（Ｄ）－Ｄδ３和Ｄδ１／２－Ｄδ３。δ基因的不完全重排是早期淋巴分化调控中一个重要的内容。δ基因Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部     

反向聚合酶链反应扩增吉兰巴蕾 综合征患者T细胞受体体β …

目的 通过研究急性吉兰巴蕾（格林巴利）综合征患者外周血Ｔ淋巴细胞受体（ＴＣＲ）－β链基因的重排情况,以进一步对其基因扩增产物进行序列分析。方法 分离６例患者外周血Ｔ淋巴细胞,用异硫氰酸胍－酚－氯仿法提取细胞总ＲＮＡ。合成双链ｃＤＮＡ,用Ｔ４ＤＮＡ聚合酶补平末端,在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下进行环化。环化的ＤＮＡ直接用作反向聚合酶链反应（ＩＰＣＲ）的模板。扩增产物在１．８％的琼脂糖凝胶上进行电泳分离,     

多重PCR检测急性淋巴细胞白血病IgH及TCRγ链重排基因

多重ＰＣＲ检测急性淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲγ链重排基因徐兵周淑芸孙竞免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排，可作为淋巴细胞白血病特异性基因标志。应用多聚酶链（ＰＣＲ）技术检测重排基因以其灵敏、快速等特点而优于其它传统方法。但目前Ｐ...     

急性淋巴细胞白血病初发和难治复发时基因重排类型改变 …

目的：为进一步了解难治复发急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）基因类型的变化。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测５６例初治及其中２２例难治复发ＡＬＬ患者ＩｇＨ，ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ和ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３基因重排。结果：７１．４％（４０／５６），８０．４％（４５／５６）及５８．９％（３３／５６），初始ＡＬＬ存在ＩｇＨ，ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ和ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３基因重排，４０例ＩｇＨ基因重排阳性病人中，１７     

以T细胞受体γ基因重排为标志分析淋巴瘤和白血病的克隆性

为确定如何通过基因特征来判断恶性肿瘤的克隆性，采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）、限制性酶谱分析、单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测、异源双链形成实验和序列测定等方法分析了有Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γＩ组基因重排的７３例淋巴瘤和白血病等疾病的等位基因特征。用ＰＣＲ获得ＴＣＲγ重排的Ｖ－Ｊ区基因片段后，首先用限制性酶谱分析，发现至少有３４％的患者存在ＴＣＲγ双等位基因重排，急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）双等位基因重排达５４％。提出只有发现两个以上重排的等位基因片段，才能肯定体内存在两个不同的恶性克隆。建立异源双链分析多个等位基因的方法用以弥补限制性酶谱分析存在的缺陷。应用这个方法除了证实限制性酶谱发现的双等位基因重排外，还发现２例ＡＬＬ和１例骨髓增生异常综合征患者存在寡克隆性；１例淋巴瘤化疗１年后瘤细胞出现了克隆演化。此方法可迅速确定ＴＣＲγ重排基因的单克隆、寡克隆和多克隆性。     

53例非霍奇金淋巴瘤患者临床及实验资料分析

目的 分析多种因素对恶性淋巴瘤（ＭＬ）预后的影响,并探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排在协助Ｔ、Ｂ分型的临床意义。方法 通过ＳＡＢＣ法进行免疫分型、ＰＣＲ方法检测ＩｇＨ（ＦＲ２Ａ,３Ａ）和ＴＣＲ（β,γ）基因重排。结果 非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）发病年龄分布呈递增趋势,危险比率每年剃守１．０３９＾ｎ;Ｂ－ＮＨＬ发病率为６６．７％,Ｔ－ＮＨＬ为３１．１     

反向聚合酶链反应扩增吉兰巴蕾综合征患者T细胞受体β链基因

目的　通过研究急性吉兰巴蕾（ 格林巴利） 综合征患者外周血Ｔ 淋巴细胞受体（ＴＣＲ）β链基因的重排情况,以进一步对其基因扩增产物进行序列分析。方法　分离６ 例患者外周血Ｔ 淋巴细胞,用异硫氰酸胍酚氯仿法提取细胞总ＲＮＡ。合成双链ｃＤＮＡ,用Ｔ４ＤＮＡ 聚合酶补平末端,在Ｔ４ＤＮＡ 连接酶的作用下进行环化。环化的ＤＮＡ 直接用作反向聚合酶链反应（ＩＰＣＲ） 的模板。扩增产物在１－８ ％ 的琼脂糖凝胶上进行电泳分离,溴化乙锭染色。结果　对每份患者标本均可以较好地扩增出重排的ＴＣＲβ链基因,而正常人组则未能扩增出任何产物。在反应中连接体系的ｃＤＮＡ 浓度对ＩＰＣＲ 的影响较大,过高的ｃＤＮＡ 浓度使有效的自身环化降低,而导致扩增效率的下降。结论　用ＩＰＣＲ 技术可以特异地扩增重排的未知的ＴＣＲβ链基因,该方法具有特异性高,易于操作的优点。     

儿童急性白血病T细胞受体δ、γ基因重排连接区序列的动态分析

目的 探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患在初诊、完全缓解（ＣＲ）及复发不同时期的Ｔ细胞３受体（ＴＣＲ）δＶ－Ｄ,γＶ－Ｊ基因重排连接区序列的差异及其意义。方法 采用Ｔ－载体分子克隆测离１限制性酶团及聚合酶链反应等技术,对３４丛ＡＬＬ患标本进行ＴＣＴδ、γ连接区序列动态分析。结果 ３４丛ＡＬＬ患标本进行ＴＣＲ－５γ连接区序列动态分析。结果 ３４份ＡＬＬ患标本的ＴＣＲ５、γ基因重排序列在初     

人白血病细胞株重组激活基因表达及T细胞受体基因重排的检测

背景：淋巴细胞特异性重组激活基因编码的重组激活基因1与重组激活基因2蛋白是参与V（D）J重排机制的重要的重组酶。除参与V（D）J重排以外，近年的研究结果表明重组激活基因介导的转位作用可能与染色体易位及淋巴性恶性肿瘤的发生有关，但迄今尚未有明确定论。目的：检测重组激活基因、DNA修复因子Ku70／Ku80和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达以及T细胞受体基因重排在人白血病和淋巴癌细胞株的发生情况。设计：重复测量实验。单位：南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所。材料：T淋巴白血病细胞株Jurkat和6T-CEM购自上海细胞生物研究所；T淋巴白血病细胞株Molt-4，皮肤T细胞淋巴癌细胞株HuT102，Burkitt’s淋巴癌细胞株Raji和Daudi以及原髓细胞白血病细胞株HL-60和慢性髓原白血病细胞株K562均由本实验室保存。细胞用含有体积分数0．1胎牛血清的RPMI1640培养基于37℃，体积分数0．05C02条件下培养。方法：实验于2005-10／2006-01在南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所完成。采用反转录聚合酶链反应检测重组激活基因1，重组激活基因2，非同源末端连接装置途径中的DNA修复因子Ku70／Ku80。以及末端脱氧核苷转移酶mRNA表达；采用巢式、半巢式聚合酶链反应、连接介导的聚合酶链反应等方法检测T细胞受体重排删除DNA环和T细胞受体B链重组信号序列两端的断裂点。了解参与V（D）J重排过程的基因表达和T细胞受体基因重排中间体的产生情况。主耍观察指标：重组激活基因、DNA修复因子Ku70／Ku80和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达以及T细胞受体基因重排在人白血病和淋巴癌细胞株的发生情况。结果：反转录聚合酶链反应检测结果显示：重组激活基因1mRNA在4种T细胞株中均被检测到，在两种B细胞株和两种髓性白血病细胞株中未检测到；重组激活基因2和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达仅在Jurkat，Molt-4和6T-CEM3种T细胞株中检测到，但在6T-CEM表达较弱；除HL-60细胞未检测到Ku80表达外，所有细胞株均检测到Ku70和Ku80表达。对4种T细胞株T细胞受体重排中间体检测结果表明：仅在Jurkat细胞中检测到DB2-J132 sjTRECs与DB25’端和3’Rss断点，表明Jurkat细胞发生T细胞受体基因重排。同时发现Jurkat TCR Dβ2-Jβ2重排删除环结合区具有明显的多样性特征。结论：重组激活基因可能与T细胞白血病具有更为密切的关系。Jurkat细胞有可能成为研究重组激活基因与T细胞淋巴性肿瘤的一个潜在的细胞模型。     

小儿急性淋巴细胞白血病微量残留病T细胞受体δ基因重排的PCR检测

白血病是造血系统的恶性肿瘤,其中急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)是儿童最常见的白血病。患儿经初治后,体内仍有少量的残留白血病细胞(108-1010)称微量残留病(ｍｉｎｉｍａｌｒｅｓｉｄｕａｌｄｉｓｅａｓｅ,ＭＲＤ)。这是白血病复发的主要根源,大多数出现于复发期的肿瘤细胞,且与初诊时的肿瘤细胞来源同一克隆。目前普遍认为提高白血病治愈率的关键之一是要彻底地根除ＭＲＤ,但ＭＲＤ用一般形态学检测很难发现。应用聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术检测急性淋巴细胞性白血病Ｔ细胞受体(ＴＣＲ)克隆性基因重排的研究已有不少报道[1,2]。ＴＣＲ由四条…     

急性髓系白血病免疫球蛋白重链基因和T细胞受体γ基因重排的临床意义

免疫球蛋白重链基因 (ＩｇＨ)和Ｔ细胞受体 (ＴＣＲ)基因重排通常被认为是Ｂ和Ｔ淋巴细胞的克隆性标记。但近年来的研究表明 ,急性髓系白血病 (ＡＭＬ)细胞亦可出现ＩｇＨ和(或 )ＴＣＲ基因的克隆性重排 ,即序列失真现象。为此我们用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)的方法研究了 6 7例ＡＭＬ初治患者ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排 ,并初步探讨其临床意义。对象和方法1　研究对象　 1990～ 1996年我科初治ＡＭＬ 6 7例 ,男 42例 ,女 2 5例 ,年龄 16～ 70岁。所有病例均按ＦＡＢ标准诊断 ,其中Ｍ2 4例 ,Ｍ311例 ,Ｍ42 4例 ,Ｍ5 2 6例 ,Ｍ6 2例。初治时均以…     

外周T细胞淋巴瘤的新亚型——组织细胞样T细胞淋巴瘤

报告６例外周Ｔ细胞淋巴瘤的新亚型－组织细胞样Ｔ细胞淋巴瘤，６例均发生于颈部淋巴结（其中颈右４例，颈左２例），组织学上完全是组织细胞特点－细胞大，胞浆丰富，有吞噬，但免疫组化为Ｔ细胞表型，１例基因重排为ＴＣＲ（＋），证实为Ｔ细胞来源。     

真性红细胞增多症患者T细胞的克隆特点

目的　了解真性红细胞增多症（ＰＶ）患者外周血Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ２４ 个亚家族基因的表达及其克隆特点。方法　采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 检测３ 例ＰＶ 患者外周血单个核细胞ＴＣＲＶβ２４ 个亚家族基因表达情况;采用基因扫描分析Ｔ细胞的克隆特点。结果　３ 例ＰＶ患者外周血仅表达４ ～１４ 个Ｖβ亚家族,主要为Ｖβ２ 、Ｖβ３ 、Ｖβ１６ 、Ｖβ２１ 和Ｖβ２３ ;２ 例患者表达的Ｖβ３ 和Ｖβ２３Ｔ细胞为克隆性增殖。结论　ＰＶ 患者外周血ＴＣＲＶβ亚家族的优势表达和克隆性增殖可能是患者体内对抗恶性细胞的免疫反应特征。     

聚合酶链反应检测克隆性免疫球蛋白重链基因重排

目的 建立较简便、敏感的Ｂ细胞恶性肿瘤微小残留病（ＭＲＤ）检测方法。 方法 根据免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因的保守序列设计引物，应用半巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）基因扩增技术检测克隆性ＩｇＨ基因重排。结果 该方法敏感性达１０＾－３。６２例Ｂ细胞恶性肿瘤患者，５１例检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，阳性率为８２％，假阴性率为１８％（１１／６２）。同时检测３５例非Ｂ细胞恶性肿瘤患者和２０例正常人均阴性，无假阳     

一例慢性移植物抗宿主病患者TCR Vβ细胞分布和克隆性的研究

目的 了解非血缘关系骨髓移植后生移植特抗宿主病（ｃＧＶＨＤ）患者的Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）ＶβＴ细胞的分布和克隆性。方法 应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增１例非血缘关系骨髓移植后ｃＧＶＨＤ患者的外周血单个核细胞的ＴＣＲ Ｖβ２４个亚家族的ＣＤＲ３。了解患者ＴＣＲ ＶβＴ细胞的分布情况,ＰＣＲ产物进一步经基因扫描分析确定Ｔ细胞克隆性。结果 患者存在８个ＴＣＲ Ｖβ亚家族Ｔ细胞;其中Ｖβ２、Ｖ     

人白血病细胞株重组激活基因表达及T细胞受体基因重排的检测

背景:淋巴细胞特异性重组激活基因编码的重组激活基因1与重组激活基因2蛋白是参与V(D)J重排机制的重要的重组酶。除参与V(D)J重排以外,近年的研究结果表明重组激活基因介导的转位作用可能与染色体易位及淋巴性恶性肿瘤的发生有关,但迄今尚未有明确定论。目的:检测重组激活基因、DNA修复因子Ku70/Ku80和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达以及T细胞受体基因重排在人白血病和淋巴瘤细胞株的发生情况。设计:重复测量实验。单位:南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所。材料:T淋巴白血病细胞株Jurkat和6T-CEM购自上海细胞生物研究所;T淋巴白血病细胞株Molt-4,皮肤T细胞淋巴瘤细胞株HuT102,Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji和Daudi以及原髓细胞白血病细胞株HL-60和慢性髓原白血病细胞株K562均由本实验室保存。细胞用含有体积分数0.1胎牛血清的RPMI1640培养基于37℃,体积分数0.05CO2条件下培养。方法:实验于2005-10/2006-01在南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所完成。采用反转录聚合酶链反应检测重组激活基因1,重组激活基因2,非同源末端连接装置途径中的DNA修复因子Ku70/Ku80,以及末端脱氧核苷转移酶mRNA表达;采用巢式、半巢式聚合酶链反应、连接介导的聚合酶链反应等方法检测T细胞受体重排删除DNA环和T细胞受体β链重组信号序列两端的断裂点。了解参与V(D)J重排过程的基因表达和T细胞受体基因重排中间体的产生情况。主要观察指标:重组激活基因、DNA修复因子Ku70/Ku80和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达以及T细胞受体基因重排在人白血病和淋巴瘤细胞株的发生情况。结果:反转录聚合酶链反应检测结果显示:重组激活基因1mRNA在4种T细胞株中均被检测到,在两种B细胞株和两种髓性白血病细胞株中未检测到;重组激活基因2和末端脱氧核苷转移酶mRNA表达仅在Jurkat,Molt-4和6T-CEM3种T细胞株中检测到,但在6T-CEM表达较弱;除HL-60细胞未检测到Ku80表达外,所有细胞株均检测到Ku70和Ku80表达。对4种T细胞株T细胞受体重排中间体检测结果表明:仅在Jurkat细胞中检测到Dβ2-Jβ2sjTRECs与Dβ25’端和3’RSS断点,表明Jurkat细胞发生T细胞受体基因重排。同时发现JurkatTCRDβ2-Jβ2重排删除环结合区具有明显的多样性特征。结论:重组激活基因可能与T细胞白血病具有更为密切的关系。Jurkat细胞有可能成为研究重组激活基因与T细胞淋巴性肿瘤的一个潜在的细胞模型。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体基因重排与急性髓细胞白血病的关系

目的:探讨急性髄细胞白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者的免疫球蛋白重链(IgH)、T细胞受体(TCR)基因重排对疾病预后的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR)方法检测IgH、TCR基因重排。结果:38例患者中12例发生IgH基因重排(31.6%),8例TCR基因重排(21.1%)。阳性病例完全缓解率低;缓解期长的病例阳性率低;初发或复发时阳性率高。结论:IgH、TCR基因重排提示AML患者预后不良,需密切随访。     

聚合酶链反应检测克隆性免疫球蛋白重链基因重排

目的建立较简便、敏感的Ｂ细胞恶性肿瘤微小残留病（ＭＲＤ）检测方法。方法根据免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因的保守序列设计引物，应用半巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）基因扩增技术检测克隆性ＩｇＨ基因重排。结果该方法敏感性达１０－３。６２例Ｂ细胞恶性肿瘤患者，５１例检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，阳性率为８２％，假阴性率为１８％（１１／６２）。同时检测３５例非Ｂ细胞恶性肿瘤患者和２０例正常人均阴性，无假阳性。检测１４例Ｂ细胞非何杰金淋巴瘤患者形态学检查正常的骨髓标本，ＭＲＤ检出率为７１％（１０／１４）。随访５例处于完全缓解期的Ｂ细胞型急性淋巴细胞白血病患者，６个月内ＭＲＤ均阳性，１２个月后３例转阴性，２例持续阳性，１８个月后持续阳性的２例患者均复发，而转阴性的３例仍处于完全缓解状态。结论半巢式ＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ基因重排，方法简便，敏感性和特异性高，可用于Ｂ细胞恶性肿瘤ＭＲＤ检测