β淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)凋亡过程中内质网应激的影响,探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、20、30、40μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒48 h,采用CCK8法检测细胞活性。将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、15μmol/L Aβ_(25~35)的培养基染毒24、48和72 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)、蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高,SHSY-5Y细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,各浓度Aβ_(25~35)染毒组SHSY-5Y细胞的凋亡率均较高,除5μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SHSY-5Y细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,各剂量、时间点Aβ_(25~35)染毒组SHSY5Y细胞内质网ATF-6蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24、48 h和各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网GRP78蛋白的表达水平较高;10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和15μmol/L Aβ_(25~35)染毒48 h及各剂量Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网IRE-1α蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ_(25~35)染毒24 h和10、15μmol/L Aβ_(25~35)染毒72 h后SHSY5Y细胞质网PERK蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ_(25~35)染毒浓度的升高和染毒时间的延长,细胞内GRP78、ATF-6、IRE1α和PERK蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可以诱导SHSY5Y神经细胞内质网应激,导致SHSY5Y细胞发生凋亡。     

Aβ对大鼠海马细胞钙浓度和线粒体膜电位影响

目的 探讨β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)对原代培养大鼠脑海马细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位影响.方法 原代培养8d的SD大鼠脑海马神经细胞,利用老化的Aβ25 ～35 1、10和20 μmol/L对其染毒,分别观察染毒后24、48和72 h时海马细胞形态改变、细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位.结果 随着染毒剂量增加,海马神经细胞开始变形、萎缩、神经元胞体模糊,突起变细、变短、分支减少,边缘模糊,神经网络破裂中断;电镜结果显示,随着染毒剂量增加和染毒时间延长,海马细胞凋亡比例增加;20 μmol/L Aβ25～35染毒24、48和72 h后,细胞内Ca2+浓度分别为(30.79±1.28)、(38.19±2.13)和(41.65±3.60),细胞内线粒体膜电位分别为(46.94±9.55)、(39.98±6.51)和(34.52±5.67),与对照组比较,Ca2+浓度均升高,膜电位均降低(P＜0.01).结论 Aβ25～ 35可以通过破坏细胞内钙稳态和线粒体膜电位而发挥神经毒性作用.     

全氟辛酸对大鼠星形胶质细胞内游离钙离子的影响

目的 探讨全氟辛酸(perfluorooctanoic acid,PFOA)对新生大鼠星形胶质细胞(astrocytes,As)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 星形胶质细胞取材于新生24 h内清洁级Wistar大鼠.传代细胞达到80％融合时进行染毒(PFOA终浓度分别为0、50、100、200、500μmol/L).以Fura-2/AM荧光探针法测定PFOA染毒1、2、3h后星形胶质细胞内的([Ca2+]i).结果 星形胶质细胞内的[Ca2+]i随着PFOA剂量的增加和染毒时间的延长而增加,染毒1h时500μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i为353.57 nmol/L,染毒2h时达到528.37 nmol/L,均高于对照组(161.86、155.03 nmol/L),差异均有统计学意义(P＜0.01).当染毒3h时,50、100、200、500 μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i分别为320.93、396.43、601.26、476.20 nmol/L,均显著高于对照组(164.62 nmol/L)(P＜0.01),同时也显著高于相同剂量染毒1h的[Ca2+]i (P＜0.01).结论 PFOA可通过增加新生大鼠星形胶质细胞内[Ca2+]i而影响中枢神经系统钙平衡.     

麦芽酚铝对PC12细胞钙稳态和凋亡的影响

目的探讨麦芽酚铝[aluminum maltolate,Al(mal)_3]染毒对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(rat pheochromocytoma cells,PC12)钙稳态及凋亡的影响。方法将PC12细胞随机分为0(对照组)、50、100、200、400μmol/L Al(mal)_3染毒组,分别培养12、24、48 h,采用CCK-8试剂盒检测PC12细胞活性,以流式细胞术检测PC12细胞内游离钙离子荧光强度[Ca(~2+)]i及细胞凋亡率。结果随着Al(mal)_3染毒时间和染毒剂量的增加,PC12细胞活性逐渐下降,细胞[Ca(~2+)]i与细胞总凋亡率逐渐升高。除50μmol/L Al(mal)_3染毒12、24 h及100μmol/L Al(mal)_3染毒12 h外,其他各剂量组染毒PC12细胞12、24、48 h后细胞活性均低于对照组,细胞[Ca(~2+)]i均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。400μmol/L Al(mal)_3染毒PC12细胞12 h,200、400μmol/L Al(mal)_3染毒24 h,100、200、400μmol/L Al(mal)_3染毒48 h后,PC12细胞总凋亡率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论钙超载可能是Al(mal)_3引起凋亡发生的主要机制。     

纳米二氧化钛染毒对大鼠脑皮层细胞内钙离子浓度和钙蛋白酶1表达的影响

目的研究纳米二氧化钛染毒对大鼠脑皮层细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和钙蛋白酶1(calpain 1)表达的影响。方法将50只健康SPF级雄性Wistar大鼠随机分为5组,分别为对照(蒸馏水)组和低(62.5 mg/kg)、中(125 mg/kg)和高(250mg/kg)剂量纳米二氧化钛染毒组及微米二氧化钛(250 mg/kg)染毒组,每组10只。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒60d,测定大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i和calpain 1的表达水平。结果与对照组比较,仅高剂量纳米二氧化钛染毒组大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i升高,差异有统计学意义(P0.05);而低、中剂量纳米二氧化钛及微米二氧化钛染毒组大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i略有升高趋势,但差异均无统计学意义(P0.05)。且随着纳米二氧化钛染毒剂量的升高,大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i呈上升趋势。与对照组比较,纳米二氧化钛及微米二氧化钛染毒组大鼠脑皮层组织calpain 1表达水平略有升高趋势,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论在本实验剂量下,纳米二氧化钛染毒可导致大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i升高,但并未影响calpain 1的表达。     

海马内注射淀粉样蛋白对大鼠海马细胞内钙稳态的影响

目的 研究海马内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)对大鼠海马细胞内钙稳态的影响.方法 将30只成年清洁级SD雄性大鼠按体重随机分为6组,每组5只.采用海马内注射方式染毒Aβ25～35,剂量分别为10、5、lμg/只,设立生理盐水组、假手术组和正常对照组.于术后14d,检测大鼠海马Ca2+-ATPase的活力及海马细胞内游离钙离子的浓度和海马内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平.结果 与生理盐水组相比,各Aβ25～35染毒组大鼠海马Ca2+-ATPase活力均降低,5、10μg Aβ25～35染毒组大鼠海马细胞内游离钙离子浓度和各Aβ25～35染毒组大鼠海马细胞内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着Aβ25～35染毒量的升高,大鼠海马Ca2+-ATPase活力呈下降趋势,海马细胞内游离钙离子的浓度和海马内Sorcin、Ryr2 mRNA的表达水平均呈上升趋势.而假手术组、生理盐水组与正常对照组大鼠海马以上4个指标间比较,差异均无统计学意义.结论 Aβ25～35可以通过破坏大鼠海马细胞内钙稳态而发挥神经毒性作用.     

β-淀粉样蛋白对大鼠海马细胞内质网钙库的影响

目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对大鼠海马细胞内质网钙库的影响。方法将40只成年清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为Aβ25-35染毒组(每测一次性注射2.5μg/μl凝聚态Aβ25-35溶液2μl)、假手术组、生理盐水组,正常对照组(不进行任何处理),每组10只。于手术后14 d,检测海马细胞内游离钙离子浓度和内质网IP3、RYR、PS mRNA的表达水平。结果与正常对照组、假手术组和生理盐水组相比,Aβ25-35染毒组海马细胞内质网肿胀肥大,扩张明显,且大多内质网膜破裂,游离钙浓度明显增高,内质网IP3、PS mRNA的表达水平升高,RYR mRNA的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 Aβ25-35可以通过破坏大鼠海马细胞内质网钙稳态而发挥神经毒性作用。     

交通相关细颗粒物对人外周血淋巴细胞免疫毒性和钙信号机制研究

目的探讨交通相关的细颗粒物(PM2.5)对人外周血淋巴细胞的免疫毒性,从钙信号途径揭示免疫抑制机制。方法采用0、5、20、80、320、800μg/ml PM2.5染毒T淋巴细胞24、48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定T淋巴细胞的增殖功能。采用0、50、100、200μg/ml PM2.5染毒T淋巴细胞244、8 h,采用流式细胞仪测定T淋巴细胞的免疫功能(CD3+/CD4+/CD8+亚群和CD4+/CD8+)。采用荧光分光光度计测定T淋巴细胞的钙离子浓度([Ca2+]i)。用试剂盒测定T淋巴细胞的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力。结果 320、800μg/ml PM2.5可抑制细胞增殖功能,且与对照组比较有统计学意义(P0.05);50、200μg/ml PM2.5染毒细胞24 h,染毒组T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+百分含量、CD4+/CD8+比值)与对照组比较变化不明显;50、100、200μg/ml PM2.5染毒细胞48 h后,染毒组T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+百分含量、CD4+/CD8+比值)均低于对照组,且各剂量组CD3+和200μg/ml CD4+百分含量与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。200μg/mlPM2.5染毒细胞1、3、61、2、24 h后[,Ca2+]i均高于对照组,除24 h外,与对照比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。在3 h时胞内[Ca2+]i最高,随时间延长[,Ca2+]i逐渐降低。100、200μg/ml PM2.5染毒细胞3 h时,[Ca2+]i高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);随染毒浓度的升高,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力有降低趋势,且Na+-K+-ATP酶活力在200μg/mlPM2.5组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论交通相关的PM2.5可引起人外周血淋巴细胞免疫抑制,其可能与钙稳态失衡有关。     

苯并[a]芘的细胞毒性及诱导IL-1β和IL-8表达作用研究

目的 探讨不同浓度苯并[a]芘（BaP）对人肺癌（淋巴结转移）NCI-H292的细胞毒性及其对NCI-H292细胞炎性因子分泌的影响。方法 取对数期生长的NCI-H292细胞，分别以不同剂量BaP（0、4、8、16和32 μmol/L） 染毒24、48和72 h后，采用实时无标记细胞分析系统（RTCA）法检测细胞存活率，ELISA法检测细胞内白介素-1β（IL-1β）和白介素-8（IL-8）水平。本实验按照5×3析因设计。结果 与对照组相比，各剂量BaP染毒组在24、48和72 h时间点细胞存活率均显著降低（P<0.001），细胞存活率与染毒剂量之间呈高度负相关关系（r1=-0.986、-0.974和-0.993，P<0.01）；与同剂量组24 h时比较，各实验组在染毒48 h和72 h细胞存活率均显著升高（P<0.001）， 细胞存活率与染毒时间之间呈高度正相关关系（r2=0.958、0.996、0.994、0.999和1.000，P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-1β水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.001），在48 h和72 h时BaP高剂量（8~32 μmol/L）染毒组IL-1β水平均呈随着染毒剂量升高而降低（P<0.01），72 h时低剂量BaP染毒组IL-1β水平则呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；同时，各实验组细胞IL-1β水平在24、48和72 h均呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。NCI-H292细胞内IL-8水平在染毒剂量和染毒时间上有交互效应（P<0.01）： 在染毒72 h，BaP染毒剂量为0~16 μmol/L时IL-8水平呈随着染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P<0.01）；4、8 μmol/L染毒组细胞IL-8水平在24、48和72 h呈随着染毒时间增加而上升的时间-效应关系（P<0.01）。结论 BaP染毒可引起NCI-H292细胞的存活率下降，且随着染毒剂量增加毒性作用增强；BaP可刺激NCI-H292细胞分泌IL-1β和IL-8，其可能在BaP致肺肿瘤炎症过程中发挥重要作用。     

阿特拉津对小鼠淋巴细胞钙离子浓度和钙调蛋白表达的影响

目的研究阿特拉津对小鼠脾脏淋巴细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及钙调蛋白(CaM)表达水平的影响。方法选用BALB/c小鼠分别以100、200和400mg/kg剂量的阿特拉津灌胃染毒,3周后处死,采用原子吸收光谱法测定血清中[Ca2+]i;脾淋巴细胞与荧光探针Fura-2/AM孵育后,用荧光分光光度法检测细胞内[Ca2+]i,蛋白印迹法观察细胞内CaM表达水平。结果各剂量组血清中[Ca2+]i无显著变化;中、高剂量组淋巴细胞内游离钙离子浓度显著高于阴性对照组(P<0.01);中、高剂量组细胞内CaM的表达均显著低于阴性对照组(P<0.01)。结论阿特拉津可致小鼠淋巴细胞内钙离子浓度升高,抑制其CaM的表达。     

砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响

目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关。     

结缔组织生长因子对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞释放IL-17A的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞(16HBE)表达白介素17A(IL-17A)水平的影响。方法采用0、12.5、25、50、100μg/ml石英粉尘染毒人支气管上皮细胞(16HBE)24、48 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,以荧光定量PCR方法检测细胞内CTGF mRNA相对表达水平;用CTGF siRNA干扰16HBE细胞12 h后,加入0、25、50μg/ml石英粉尘染毒48 h,并设同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞为对照组,收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-17A的含量。结果与24 h染尘组比较,石英粉尘染毒16HBE细胞48 h后细胞毒性作用更明显,其细胞存活率随石英粉尘浓度的增加逐渐降低(P0.05);同时细胞内CTGF mRNA相对表达水平和细胞分泌IL-17A的水平均显著升高(P0.05),且呈剂量-效应关系,50μg/ml染毒组细胞内表达CTGF mRNA和分泌IL-17A的水平达到最高;与同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞相比,25、50μg/ml石英粉尘诱导CTGF siRNA干扰组细胞分泌IL-17A的水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论抑制CTGF可显著降低石英粉尘诱导16HBE细胞表达IL-17A的水平,提示CTGF可能参与调节石英粉尘致肺部炎性及纤维化的反应过程。     

铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响。方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐(Fura2)作Ca2+荧光探针测定铅对海马细胞[Ca2+]i的影响。结果在水迷宫实验中,结果表明慢性铅暴露可明显损伤仔鼠的空间定位航行能力,损伤程度与饮用铅的浓度成正相关。与对照组比较,25μmol·L-1铅可致分离的小鼠海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i显著性增高(P<0.05);而30μg·ml-1的三磷酸肌醇(IP3)敏感钙库特异性拮抗剂Heparin和0.1mg·ml-1的非IP3敏感钙库的特异性拮抗剂procaine可拮抗铅引起的海马细胞[Ca2+]i增高。结论慢性铅暴露可致小鼠空间学习记忆能力下降;高水平的铅可促进小鼠海马细胞内IP3敏感和非IP3敏感的两种内质网钙库释放,致海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i升高。     

己烯雌酚染毒对小鼠睾丸引带细胞纤维肌动蛋白和游离钙离子浓度的影响

目的通过检测己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)对小鼠睾丸引带细胞纤维肌动蛋白(F-actin)和游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,从细胞水平探讨外源性雌激素对小鼠睾丸引带细胞收缩功能的影响及其可能机制。方法将小鼠睾丸引带细胞分别培养于终浓度为0(溶剂对照)、0.01、0.10、1.00、10.00μg/ml的含DES无血清培养基中24 h。采用细胞免疫荧光法检测细胞F-actin的表达情况,采用共聚焦激光扫描显微镜检测细胞[Ca2+]i的变化。结果经DES处理后的小鼠睾丸引带细胞质周边的肌动蛋白丝模糊,细胞内出现明显粗壮的束状纤维,结构紊乱。与溶剂对照组比较,各浓度DES染毒小鼠睾丸引带细胞内[Ca2+]i均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着DES染毒浓度的升高,小鼠睾丸引带细胞内[Ca2+]i呈上升趋势。结论除传统的雌激素核受体介导的信号传导途径外,DES还可能通过非基因调控信号途径快速增加细胞内钙离子浓度,使由F-actin组成的纤维排列紊乱,并可能导致睾丸引带细胞结构紊乱,收缩功能减弱。     

1α,25-二羟维生素D_3对大鼠成骨细胞骨架、间隙连接通讯及[Ca~(2+)]_i的影响

目的研究不同浓度1α,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2·D3]0、10-9、10-8、10-7mol/L对体外培养3～4d龄SD大鼠成骨细胞(OB)骨架F-actin、间隙连接通讯(GJIC)及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。方法1,25-(OH)2·D3作用20min、24h后测定[Ca2+]i;作用24、48h后观察F-actin及GJIC。结果20min时,不同浓度1,25-(OH)2·D3组[Ca2+]i均显著高于对照组;24h时10-9mol/L组[Ca2+]i则显著低于对照组,其余各组间差异不显著。此时10-8、10-7mol/L组大部分细胞变得扁平,F-actin排列较对照组有序,形成应力纤维;48h时,对照组及10-9mol/L组F-actin表达减少,10-9mol/L组GJIC非常显著地弱于对照组,而10-8、10-7mol/L组大部分细胞F-actin表达完好,GJIC均非常显著地强于其余两组。结论高浓度1,25-(OH)2·D3能够维持OB形态,增强OB间通讯,而低浓度1,25-(OH)2·D3抑制细胞间通讯。     

β-淀粉样蛋白对大鼠海马细胞线粒体-内质网结构耦联的影响

目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ_(25～35))对大鼠海马线粒体-内质网结构耦联(MAM)的影响。方法将48只健康成年清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为6组,分别为对照(不进行任何处理)组、假手术(开颅进针但不注射溶液)组、生理盐水组和2.5、5、7.5μg/μl Aβ_(25～35)染毒组,每组8只。于海马CA1区一次性注射2μl染毒。于手术后14 d,应用ELISA法检测大鼠血清中Aβ_(25～35)水平,分别用RT-PCR和Western blotting检测海马内线粒体融合蛋白1(MFN1)、MFN2 m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组相比,5、7.5μg/μl Aβ_(25～35)染毒组大鼠血清中的Aβ_(25～35)水平均增高,差异有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25～35)染毒浓度的升高,大鼠血清中的Aβ_(25～35)水平呈上升趋势。与对照组相比,各浓度Aβ_(25～35)染毒组大鼠海马组织中MFN1、MFN2蛋白和mRNA的表达水平均增高,除7.5μg/μl组MFN1 m RNA外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着Aβ_(25～35)染毒浓度的升高,大鼠海马组织中MFN1蛋白及MFN2蛋白和mRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势,而大鼠海马组织中MFN1 mRNA的表达水平呈下降趋势。结论 Aβ_(25～35)可以增加大鼠血清中β-淀粉样蛋白的水平,同时Aβ_(25～35)可破环大鼠海马组织线粒体-内质网结构耦联结构,造成其功能异常,从而发挥神经毒性作用。     

麦芽酚铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞β-淀粉样蛋白42蛋白表达的影响及其作用机制

目的探讨铝对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)42表达的影响及其作用机制。方法将处于对数生长期的PC12细胞分别暴露于含麦芽酚铝终浓度为0(对照)、50、100、200和400μmol/L的完全培养基染毒12、24、48 h。采用CCK-8法测定细胞活性,采用酶联免疫吸附(ELISA)测定法测定PS1、Aβ42蛋白的含量。结果与对照组比较,200、400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及各浓度麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着麦芽酚铝染毒浓度的升高,不同染毒时间PC12细胞的存活率均呈逐渐降低的趋势。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h、48 h时PC12细胞PS1蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,400μmol/L麦芽酚铝染毒12 h时及200、400μmol/L麦芽酚铝染毒24 h时以及100、200、400μmol/L麦芽酚铝染毒48 h时PC12细胞Aβ42蛋白的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论γ-分泌酶表达增加可能是铝致PC12细胞Aβ42蛋白含量增多的重要原因之一。     

莱菔硫烷与右美沙芬联合应用对甲基汞致大鼠神经毒性的影响

目的探讨甲基汞对大鼠神经毒性的影响及莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)与右美沙芬(dextromethorphan,DM)联合应用的保护作用,为甲基汞中毒的防治提供理论依据。方法选取SPF级Wistar大鼠56只,按体重随机分成4组,每组14只,雌雄各半。其中对照组皮下及腹腔注射生理盐水;低、高剂量甲基汞染毒组皮下注射生理盐水,2 h后分别腹腔注射4、12μmol/kg氯化甲基汞;SFN+DM联合干预组皮下注射5.6μmol/kg SFN和13.5μmol/kg DM,2 h后腹腔注射12μmol/kg氯化甲基汞。每周一、三、五进行预处理,周一至周五染毒,连续4周。染毒结束后24 h分离大鼠脑皮质。采用冷原子吸收法测定大鼠脑皮质内汞含量,流式细胞仪测定细胞内Ca2+浓度、细胞凋亡率和活性氧(ROS)的含量,以试剂盒测定谷氨酸(Glu)、谷胱甘肽(GSH)含量及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力,以Real-time PCR和Western blotting法测定Nrf2、HO-1、γ-GCS、NR1、NR2A和NR2B的m RNA和蛋白表达。结果与对照组比较,低、高剂量染汞组大鼠的脑皮质汞、ROS、Ca2+含量及细胞凋亡率升高,GSH含量降低,Glu含量升高,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力降低,Nrf2、HO-1、γ-GCS m RNA和蛋白表达量升高,NR1、NR2A和NR2B的m RNA和蛋白表达量下降,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。与高剂量染汞组比较,SFN+DM联合干预组大鼠脑皮质汞含量差异无统计学意义(P0.05),ROS、Ca2+含量及细胞凋亡率降低,GSH含量升高,Glu含量降低,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力升高,HO-1、γ-GCS、NR1、NR2A的m RNA和蛋白表达量升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论甲基汞可引发大鼠神经毒性,SFN与DM联合应用可有效拮抗甲基汞所致神经毒性。     

藤梨根提取物对食管癌EC109细胞抑制作用

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对食管癌EC109细胞生长、凋亡影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养食管癌EC109细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测用药后EC109细胞凋亡率变化,免疫组化法检测用药后EC109细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl -2)、Bcl -2相关X蛋白(Bax)蛋白表达变化,激光共聚焦显微技术测定用药后EC109细胞胞内[Ca2+]i变化.结果 细胞培养24、48、72 h后,对照组细胞凋亡率分别为(1.67±0.76)％、(2.32±0.45)％、(2.98±0.89)％,Bcl -2蛋白表达率分别为(50.12±3.41)％、(49.78±5.65)％、(51.25±6.34)％,Bax蛋白表达率分别为(17.98±2.85)％、(18.27±3.12)％、(17.76±3.64)％,而各干预组细胞凋亡率为7.05％ ～51.11％,均明显增加(t=5.419～17.826,P＜0.05),存在时-效和量-效趋势,同时其细胞Bcl -2蛋白表达降低,为43.32％ ～ 10.46％,Bax蛋白表达上调,为24.54％～ 63.47％,均存在时-效和量-效趋势,当作用时间≥48 h或浓度≥100 μg/mL时,干预组上述变化与对照组比较,差异有统计学意义(Bcl-2∶t=3.58～10.14;Bax∶t =5.047 ～ 11.065,P＜0.05);用药后细胞内[Ca2+]i明显升高,12h达高峰,此后缓慢减低,至48 h仍明显高于对照组.结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制食管癌EC109细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡,可能与降低其Bcl -2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,升高细胞内[Ca2+]i有关.     

原花青素对淀粉样前体蛋白代谢及JNK信号通道磷酸化水平的影响

目的探讨原花青素对淀粉样蛋白片段Aβ 25-35诱导的SH-SY5Y细胞JNK蛋白磷酸化水平及淀粉样蛋白Aβ1-42和可溶性淀粉样蛋白sAPPα分泌水平的影响。方法以1.0μmol/LAβ25-35染毒SH-SY5Y细胞建立细胞损伤模型。原花青素干预24h,用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞分泌Aβ1-42水平及sAPPα水平,Western blot法检测原花青素对SH-SY5Y细胞JNK蛋白磷酸化水平的影响。结果与1.0μmol/L Aβ25-35染毒组相比,不同浓度原花青素可提高细胞活力,降低Aβ1-42分泌水平及增高sAPPα分泌水平。Aβ25-35染毒细胞可诱导p-JNK表达水平升高,给予原花青素和SP600125干预均对Aβ25-35诱导的p-JNK表达水平升高具有抑制作用,同时降低Aβ1-42及及增高sAPPα表达水平。结论原花青素可以通过抑制Aβ1-42分泌,促进sAPPα分泌,减轻神经元的Aβ负荷,其可能通过抑制JNK通道的激活发挥调节Aβ1-42与sAPPα分泌水平的作用。[营养学报,2019,41(1):85-88,94]