大鼠脑组织中单胺类神经递质及其代谢产物的液相色谱测定法

用高效液相色谱-电化学检测法测定大鼠6个脑区单胺类神经递质及其主要代谢产物的含量。此法可同时分离和测定10种化合物,且快速、灵敏和简便,适用于临床分析和实验研究。     

用高效液相色谱电化学检测器测定大小鼠脑内单胺类物质的研究

应用反相高效液相色谱法和电化学检测器对单胺类物质如去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺及酸性代谢产物3,4二羟基苯乙酸、5-羟吲哚醋酸和高香草酸的色谱条件及样品的制备进行了研究.结果表明:降低流动相的pH及甲醇含量或增加离子对B_8的含量可使样品的保留时间延长,而增加二正丁胺的含量可缩短保留时间。当pH=3.7,甲醇10％,二正丁胺1.3mmol,离子对B_81.2 mmol时,分离效果最好,能在25 min内将七种物质完全基线分离.在样品的制备方面,用高氯酸沉淀蛋白提取单胺类物质,45,000g×20 min一次离心取上清液20μl直接进样,所含杂质少且不干扰单胺类物质的测定.本实验方法简单,快速、灵敏,比较实用.     

小鼠脑组织中单胺类神经递质含量测定方法的建立与比较

目的 比较高效液相色谱(HPLC)-紫外光(UV)、HPIC-荧光(FLD)和HPLC-质谱(MS)3种检测方法测定小鼠不同脑组织中单胺类神经递质含量的优劣性,并应用最优方法测定血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质的含量.方法 分别采用HPLC仪器搭配UV、FLD和MS检测器建立小鼠不同脑组织中多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)的含量测定方法,并进行系统的方法学验证,采用HPLC-FLD法对血管性抑郁小鼠不同脑组织中单胺类神经递质DA、NE和5-HT含量进行测定.结果 HPLC-UV法的定量限分别为DA 103.5 ng/mL、NE 107.5 ng/mL、5-HT 93.6 ng/mL;HPLC-FLD法的定量限分别为DA 10.35 ng/mL、NE 10.75 ng/mL、5-HT9.36 ng/mL;HPLC-MS法的定量限分别为DA 10.35 ng/mL、NE 32.25 ng/mL、5-HT 9.36 ng/mL.HPLC-FLD和HPLC-MS法对DA和5-HT的测定优于HPLC-UV法,HPLC-FLD法对于NE的测定优于HPLC-MS法,而HPLC-MS法存在较强的基质效应.HPLC-FLD法检测结果示血管性抑郁小鼠海马组织中DA含量最低,大脑皮质中5-HT含量最低,而不同脑组织中NE含量没有明显差别.结论 与HPLC-UV法和HPLC-MS法相比,HPLC-FLD法更适用于小鼠脑组织中单胺类神经递质(DA、NE、5-HT)的含量测定.DA和5-HT可以用作血管性抑郁症疾病的诊断标志物.     

酸枣仁汤对抑郁模型大鼠行为学和脑组织单胺类神经递质的影响

目的:建立抑郁动物模型,观察酸枣仁汤对抑郁模型大鼠行为学和脑组织单胺类神经递质的影响,探讨其抗抑郁作用机理.方法:采用孤养结和慢性不可预见性温和刺激制备抑郁大鼠模型.通过体重增长变化、糖水消耗量和敞箱实验.评定酸枣仁汤对慢性应激抑郁模型大鼠的行为学改变,并用高效液相色谱法测定大鼠脑内单胺类神经递质的含量,运用统计学方法比较组间差异,说明酸枣仁汤对抑郁实验动物模型的影响.结果:模型大鼠出现了明显的行为学异常,脑内单胺类神经递质含量与正常组有显著差异,酸枣仁汤高剂量组可显著提高抑郁大鼠的糖水消耗量、敞箱实验评定、脑内单胺递质含量,其疗效与西药氯丙咪嗪相当.结论:孤养结合慢性不可预见性的温和刺激可制备比较理想的抑郁症模型,酸枣仁汤可显著改善抑郁模型大鼠的行为学异常,增加脑内单胺递质含量,且呈一定的量效关系.酸枣仁汤的抗抑郁作用可能与增加脑内单胺类神经递质含量有关.     

库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究

目的建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）,采用Phenomenex C18反相色谱柱（150mm×4.60mm,5μm）,流动相为缓冲液-乙腈（体积比87∶13）,流速为1mL.min^-1,柱温为35℃。结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.01515～0.01815ng,回收率为85.3%～100.5%。结论该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点,可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。     

胎儿脑组织中单胺类递质及其代谢产物的高效液相色谱分析

单胺类递质是调节生理功能的重要物质基础,单胺类递质及其代谢产物在体内浓度和代谢的异常,往往会出现精神性的功能紊乱和其它疾病,因此这类化合物的测定对疾病的诊断、治疗和药物研究都有重要意义。目前在     

砷对小鼠脑单胺类神经递质浓度影响及牛磺酸、维生素C的保护作用

[目的]观察亚慢性砷暴露对小鼠脑组织单胺类神经递质浓度的影响.[方法]昆明种小鼠70只,随机分为6组,即饮用水对照组、1ppm As2O3染砷组、2 ppm As2O3染砷组、4 ppm As2O3染砷组、2个保护组(4 ppm As2O3+150 mg/kg牛磺酸和4 ppm As2O3+45 mg/kg维生素C)....     

高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质

建立高效液相色谱-荧光分析方法,研究小鼠脑皮层、海马、纹状体、丘脑等不同部位的单胺类神经递质及其相关物质。脑组织样本经高氯酸沉淀蛋白后进行色谱分析,采用Lichrospher C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为pH 3.06缓冲液(含1 mmol/L庚烷磺酸钠;30 mmol/L磷酸二氢钠-磷酸溶液)-甲醇(85∶15);流速：1.0 mL/min;柱温：35 ℃。荧光检测：激发波长为280 nm,发射波长为315 nm。采用建立的方法,鉴别出小鼠脑中存在去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、酪氨酸、色氨酸、3,4-二羟苯乙酸和5-羟吲哚乙酸等物质;对NE、DA和5-HT进行定量研究,确定它们的线性范围分别为2.4～471.0 ng/mL(r=0.999 6),2.6～519.5 ng/mL(r=0.999 4),2.4～469.3 ng/mL(r=0.999 1),日内、日间RSD均小于9.0%,准确度达到限度要求,提取回收率大于90%。本法专属性好,准确度高,可以反映不同鼠脑区域单胺类神经递质及相关物质含量上的差异。     

高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物

[目的]建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法。[方法]色谱柱采用WatersC18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每500mL中含辛烷磺酸钠1.25g,磷酸二氢钾6.8g,乙二胺四乙酸18mg,pH值3.3)∶甲醇∶乙腈=78∶19∶3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V。[结果]5种物质保留时间分别为:去甲肾上腺素3.6min,5-羟吲哚乙酸4.5min,高香草酸5.2min,多巴胺6.2min,5-羟色胺11.9min;线性范围均为20～1000μg/L,最低检测限为4～8μg/L。[结论]此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物,简便,快速且灵敏度高。     

高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中的单胺类神经递质

目的 建立同时检测小鼠脑内的去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)3种神经递质的高效液相色谱方法 .方法 采用的色谱条件为:C18柱分离,梯度洗脱.结果方法 的检测限(以3倍信噪比计算)2.5μg/L以下,回收率均在87.8%～105.7%之间,样品日内测定峰面积的相对标准偏差在3.4%以下.结论 该方法 具有检测灵敏度高、样品制备简便等优点,对小鼠脑内的3种单胺类递质的检测具有实用价值.     

酸枣仁总黄酮抗抑郁作用的实验研究

[目的]研究酸枣仁总黄酮对行为绝望小鼠抑郁模型的影响。[方法]采用小鼠强迫游泳实验和悬尾实验等抑郁模型,小鼠行为绝望的不动时间作为指标,考察酸枣仁总黄酮抗抑郁活性。[结果]酸枣仁总黄酮低、中、高剂量组均能减少小鼠强迫游泳和悬尾不动时间,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);与阳性药组比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]酸枣仁总黄酮具有显著的抗小鼠实验性抑郁作用。     

Comparative pharmacokinetics of six major compounds in normal and insomnia rats after oral administration of Ziziphi Spinosae Semen aqueous extract

Ziziphi Spinosae Semen (ZSS), a traditional Chinese medicine, is used in clinics for the treatment of insomnia in China and other Asian countries. Herein, we described for the first time a comparative pharmacokinetics study of the six major compounds of ZSS in normal control (NC) and para-chlorophenylalanine (PCPA)-induced insomnia model (IM) rats that were orally administered the aqueous extract of ZSS. An ultra-high-performance liquid chromatography coupled with quadrupole orbitrap mass (UHPLC-Q-Orbitrap-MS) method was developed and validated for the simultaneous determination of coclaurine, magnoflorine, spinosin, 6‴-feruloylspinosin, jujuboside A (JuA), and jujuboside B (JuB) in ZSS in rat plasma. The established approach was successfully applied to a comparative pharmacokinetic study. The systemic exposures of spinosin and 6‴-feruloylspinosin were decreased in the IM group compared to the NC group, while plasma clearance (CL) was significantly increased. The T_max values of JuA and JuB in IM rats were significantly lower than those in NC rats. The T_1/2 of JuA in the IM group was significantly accelerated. The pharmacokinetic parameters of coclaurine and magnoflorine were not evidently affected between the two groups. These results indicate that the pathological state of insomnia altered the plasma pharmacokinetics of spinosin, 6‴-feruloylspinosin, JuA, and JuB in the ZSS aqueous extract, providing an experimental basis for the role of ZSS in insomnia treatment. The comparative pharmacokinetics-based UHPLC-Q-Orbitrap-MS using full-scan mode can therefore provide a reliable and suitable means for the screening of potentially effective substances applied as quality markers of ZSS.     

十四味建中汤对氧惊厥小鼠惊厥潜伏期及脑组织炎症细胞因子含量的影响

目的：探讨十四味建中汤对氧惊厥小鼠惊厥潜伏期及脑组织白细胞介素-1β（IL -1β）和白细胞介素-10（IL -10）含量的影响及意义。方法将56只小鼠随机分为7组：氧惊厥6 h组、氧惊厥24 h 组、氧惊厥48 h 组、十四味建中汤＋氧惊厥6 h 组（建中汤6 h 组）、建中汤24 h 组、建中汤48 h 组以及正常对照组。建中汤组小鼠在惊厥发生2周前每日灌胃1次十四味建中汤煎剂。将氧惊厥组和建中汤组小鼠置于高压氧（500 kPa）环境中至惊厥发作,建立氧惊厥小鼠模型。用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织 IL -1β和 IL -10含量。结果建中汤组小鼠氧惊厥潜伏期与氧惊厥组比较,差异无统计学意义（P ﹥0.05）。氧惊厥24 h 组和48 h 组小鼠脑组织 IL -1β含量均显著高于正常对照组,两组比较,差异有统计学意义（P ﹤0.05）;建中汤组24 h 组和48 h 组小鼠脑组织 IL -1β含量均显著低于同时间点氧惊厥组,两组比较,差异有统计学意义（P ﹤0.05）。在同时间点,氧惊厥组、建中汤组和正常对照组之间小鼠脑组织 IL -10含量比较,差异无统计学意义（P ﹥0.05）。结论十四味建中汤处理未能显著延长小鼠的氧惊厥潜伏期,但可有效降低氧惊厥后脑组织 IL - lβ含量,有助于重建促炎和抗炎细胞因子的平衡,减轻惊厥性脑损伤。     

电离辐射对小鼠胎脑NO含量及SOD活力的影响

目的探讨孕鼠受γ射线照射后对旁效应器官胎鼠脑组织中NO含量和SOD活力的影响。方法将孕9 d昆明小鼠随机分为7组：空白对照组、0.5 Gy全身照射组、0.5 Gy头部照射组、1.0 Gy全身照射组、1.0 Gy头部照射组、2.0 Gy全身照射组及2.0 Gy头部照射组,照射组用~（60）Co治疗机对小鼠于孕9 d单次急性γ射线垂直照射,于孕18 d取胎鼠脑组织匀浆,测定其NO含量和SOD活性。结果与空白对照组相比,2.0 Gy头部照射组胎脑组织匀浆中NO含量明显增加（P〈0.05）,SOD活力显著下降（P〈0.05）;同时1.0 Gy头部照射组较1.0 Gy全身照射组SOD活力高（P〈0.05）;1.0 Gy头部照射组较1.0 Gy全身照射组NO含量低（P〈0.05）;而2.0 Gy头部照射组较2.0 Gy全身照射组NO含量明显增加（P〈0.05）;1.0 Gy全身照射组、2.0 Gy全身照射组NO含量均明显增加（均P〈0.05）,SOD活力均显著下降（均P〈0.05）。结论孕鼠早期头部受到电离辐射后,诱发体内旁效应,NO自由基增加,SOD活力下降,导致脑组织神经发育损伤,其效应与全身受照时胎脑出现的损伤效应类似。     

灯盏花素对大鼠脑挫裂伤脑组织线粒体ATP酶活性及SOD和MDA水平的影响

探讨灯盏花素治疗对创伤性脑损伤后脑组织线粒体功能的影响。建立自由落体脑挫裂伤模型 ,伤后立即腹腔注射灯盏花素注射液 ,采用生化检测的方法分别测定伤后 4h、2 4h和 48h及各自的对照组大鼠脑组织线粒体ATP酶活性水平及SOD和MDA水平。结果 :颅脑损伤后大鼠脑组织线粒体Na K -ATP酶 ,Ca2 -ATP酶 ,Mg2 -ATP酶活性及SOD水平均明显下降 (P <0 0 5 ) ,灯盏花素治疗后 2 4h和 48h脑组织线粒体ATP酶活性及SOD水平均高于各自时间点对照组 (P <0 0 5 ) ,而MDA水平则明显低于各自对照组 (P <0 0 1)。结论 :灯盏花素治疗可以通过影响线粒体功能而减轻创伤性脑损伤后的继发性脑损害 ,从而改善其预后。     

安神益智方对AD模型小鼠学习记忆及脑组织NO、AchE含量的影响

目的：观察“安神益智方”对AD模型小鼠学习记忆能力的影响及其脑组织中NO、AchE含量变化。方法：采用AlCl3灌胃制造AD模型小鼠，中药组用“安神益智方”治疗，西药组用脑复康治疗，造模7天后开始灌胃给药。疗程结束时，测AD模型小鼠学习记忆能力的变化及脑组织中NO、NOS及AchE含量。结果：小鼠跳台试验显示，中药能明显减少东莨菪碱所致学习记忆障碍小鼠5min内错误次数，对亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固障碍有明显的改善作用，有拮抗乙醇所致小鼠学习记忆再现障碍的作用，与西药组比较，差异有统计学意义（P〈0．05—0．01）；中药还可降低AD小鼠脑组织中NO、NOS含量及AchE活性，与模型组比较，差异有统计学意义（P〈0．05—0．01）。结论：“安神益智方”能增强AD小鼠学习记忆的能力。     

电针神庭穴和百会穴对脑缺血/再灌注损伤后学习记忆障碍大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的影响研究

背景 自由基代谢异常是造成缺血性脑卒中患者认知障碍的病理机制之一,而电针神庭、百会穴可改善认知障碍患者的学习记忆能力。 目的 观察电针对脑缺血/再灌注损伤后学习记忆障碍大鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量变化的影响,探讨电针改善脑缺血/再灌注损伤后学习、记忆功能障碍的可能机制。 方法 2019年8月至2020年8月,采用SPSS 22.0软件将18只雄性、SPF级SD大鼠进行完全随机化分组,分为假手术组（6只）、模型组（6只）和电针组（6只）。假手术组大鼠仅切开颈部皮肤,分离颈部动脉;造模大鼠采用大脑中动脉阻塞法制作脑缺血/再灌注损伤模型,在造模大鼠完全清醒后,按照Zea-Longa法筛选分值为1~3分的大鼠随机纳入模型组和电针组。于造模后1 d对电针组大鼠的神庭、百会穴施以疏密波,1 Hz/20 Hz、1次/d、30 min/次,共连续2周的电针治疗。模型组和假手术组大鼠只固定时间抓取,不给予任何干预措施。治疗结束后采用Morris水迷宫实验观察各组大鼠学习记忆能力的变化,采用总超氧化物歧化酶比色法测试盒（WST-1法）检测脑组织SOD活性,丙二醛比色法测试盒（TBA法）检测脑组织MDA含量。 结果 模型组和电针组大鼠均造模成功。模型组大鼠第13天逃避潜伏期长于假手术组,穿越平台次数少于假手术组（P<0.05）;电针组大鼠第13天逃避潜伏期短于模型组,穿越平台次数多于模型组（P<0.05）。模型组大鼠SOD活性低于假手术组,MDA含量高于假手术组（P<0.05）;电针组大鼠SOD活性高于模型组,MDA含量低于模型组（P<0.05）。 结论 电针神庭、百会穴可改善脑缺血/再灌注损伤后大鼠的学习记忆障碍,其机制可能与改善脑组织抗氧化酶SOD活性、减轻脂质过氧化产物MDA蓄积有关。