乳腺癌雌激素受体表达与增殖细胞核抗原表达和AgNOR计数关系…

研究乳腺癌雌激素受体表达与增殖细胞核抗原表达和ＡｇＮＯＲ计数关系。方法 采用ＡｇＮＯＲ染色技术和免疫组化Ｓ－Ｐ法，用抗ＥＲ单克隆抗体及抗ＰＣＡ单克隆抗体，研究５０例乳腺癌ＥＲ与ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲ计数。结果 ３３例乳腺癌ＥＲ阳性者与１７例ＥＲ阴性者相比，ＰＣＮＡ表达低，ＡｇＮＯＲ平均颗粒少。     

前列腺癌DNA倍体和AgNORS计数及PCNA表达的检测

目的探讨前列腺癌细胞核ＤＮＡ倍体、核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲＳ）计数及增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）阳性指数变化与癌分级及预后的关系。②方法应用计算机图像分析技术、银染色方法及免疫组化ＬＳＡＢ法，测定３０例前列腺癌病人ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数和ＰＣＮＡ阳性指数的变化。③结果前列腺癌ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数均明显高于前列腺增生症（ｔ＝７．２６７～７．５０２，Ｐ＜０．０１），并且随着前列腺癌细胞分化程度降低，逐渐增加（Ｈ＝４２．５３４，ｔ＝２．１５６～６．７５６，Ｐ＜０．０５，０．０１；Ｆ＝１９４．７７１，１０５．６０５，ｑ＝１３．２１４～１５．８１３，Ｐ＜０．０１）；２年内死亡者，其ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数明显高于存活２年以上者（ｔ＝５．２５６～７．６０８，Ｐ＜０．００１）；前列腺癌病人ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数间均存在正相关关系（ｒ＝０．９６０～０．９６６，Ｐ＜０．００１）。④结论前列腺癌ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数与癌细胞分化程度有关，可作为前列腺癌的预后指标     

人喉部肿瘤PCNA表达及AgNORs计数的研究

采用免疫组化染色及银染技术，对５５例喉部病变中ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲｓ计数进行了检测。结果显示：慢性喉炎、喉乳头状瘤及喉癌的ＰＣＮＡ指数分别为１５０１％、２６３８％和４８０６％，组间两两比较有显著差异（Ｐ＜０００１）。ＡｇＮＯＲｓ计数分别为２６２，３３４和４８８，组间两两比较有明显差异（Ｐ＜００１）。高、中、低分化鳞癌的ＰＣＮＡ指数组间两两比较有显著差异（Ｐ＜０００１）；ＰＣＮＡ指数与ＡｇＮＯＲｓ计数间未见相关性。结果提示：ＰＣＮＡ表达与ＡｇＮＯＲｓ计数在喉不同病变间存在明显差异，对此两项指标的检测有助于了解喉良、恶性肿瘤的细胞增殖状态，在喉良、恶性肿瘤鉴别及恶性分级上有一定价值     

星形细胞瘤增殖活性表达的诊断意义

目的：探讨星形细胞瘤的增殖活性与组织学分级间的关系。方法：应用免疫组化技术对５４例脑星形细胞瘤增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）进行定量分析，结果：ＰＣＮＡ标记指数阳性率对照组与各组间差异有显著性（Ｐ〈０．０１）；ＡｇＮＯＲ平均计数及类型与组织学分级差异有显著性（Ｐ〈０．０１）。结论：ＡｇＮＯＲ，ＰＣＮＡ检测均能反映脑星形细胞瘤的恶性程度，可做为评价估星形细胞瘤增殖活     

眼睑鳞状细胞癌p53蛋白过度表达与PCNA、AgNOR关系的研究

为探讨ｐ５３基因突变与眼睑鳞状细胞癌（ＳＣＣ）发生的关系及其临床病理学意义,采用微波处理免疫组化ＬＳＡＢ法对３２例ＳＣＣ进行了ｐ５３蛋白及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）检测,同时应用银染法检测了核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）计数。结果显示,在正常眼睑皮肤及轻度不典型增生上皮未见ｐ５３蛋白表达,而中、重度不典型增生、原位癌、浸润癌ｐ５３蛋白阳性表达率逐渐增高,其ＰＣＮＡ指数及ＡｇＮＯＲ计数也有增加趋势;随着癌细胞分化程度的降低,ｐ５３蛋白阳性表达强度增高;ＰＣＮＡ平均指数和ＡｇＮＯＲ计数分别为３８３±３０１和３７５±１５３,ＰＣＮＡ指数和ＡｇＮＯＲ计数随ＳＣＣ分化程度的降低逐渐增高,差异有显著性（Ｐ＜００５）。ｐ５３蛋白阳性表达的肿瘤组织,其ＰＣＮＡ指数和ＡｇＮＯＲ计数均高于ｐ５３蛋白阴性表达者,差异有显著性（Ｐ＜００５）。结果表明,ｐ５３蛋白过度表达与ＳＣＣ发生密切相关,出现于ＳＣＣ发生的早期,将３项指标综合应用于ＳＣＣ的分化程度、增殖活性及早期诊断较为客观,对协助临床病理诊断及预后评价有一定参考价值     

前列腺癌DNA倍体和AgNORS计数及PCNA表达的检测

目的 探讨前列腺癌细胞核ＤＮＡ倍体、核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲＳ）计数及增殖细胞抗原（ＰＣＮＡ）阳性指数变化与癌分级及预后的方法。方法 应用计算机图像分析技术、银染色方法及免疫组化ＩＳＡＢ法，测定３０例前列腺癌病人ＮＤＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数和ＰＣＮＡ阳性指数的变化。结果 前列腺癌ＤＮＡ倍体、ＡｇＮＯＲＳ计数、ＰＣＮＡ阳性指数均明显高于前列腺增生症（ｔ＝７．２６７￣７．５０２，Ｐ〈０．０１），     

增殖细胞核抗原表达与AgNORS计数在胆囊癌中的意义

研究增殖细胞核抗原表达与ＡｇＮＯＲＳ计数在胆囊癌中的意义。方法：应用抗增殖细胞核抗原单克隆抗体，采用ＡＢＣ免疫组化方法和ＡｇＮＯＲＳ染色计数，对４０例原发性胆囊癌进行了研究。结果：ＰＣＮＡ表达阳性率与ＡｇＮＯＲＳ计数间存在着明显的相关性。结论：认为ＰＣＮＡ的表达和ＡｇＮＯＲＳ计数有助于原发性胆囊癌的分化及其预后的判断。     

大肠癌上皮c-myc蛋白、表皮生长因子受体和增殖细胞核抗原的表达及其与预后意义

应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ｃ－ｍｙｃ、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）对有随访资料的大肠癌的表达。结果提示：ｃ－ｍｙｃ阳性表达中，大肠癌（７０４９％）明显高于正常粘膜（２６６％，Ｐ＜０．０５）。正常大肠粘膜未发现ＥＧＦＲ阳性表达，而大肠癌有较高表达（７７０４％）。ＰＣＮＡ阳性表达中，大肠癌（４６４０±２６．５）％明显高于正常粘膜（１５１２±５．４４）％，Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ表达与大肠癌Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。ＰＣＮＡ表达与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。大肠癌４年生存率ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达＞６５％组均明显低于＜２５％组（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦＲ－ＬＩ和ＰＣＮＡ－ＬＩ与生存期均有明显负相关。结论表明：ｃ－ｍｙｃ、ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的大肠癌细胞增殖有相关性。ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的生存期均有明显负相关，该两项指标对大肠癌临床诊治和预后的评估有重要价值。     

非霍奇金淋巴瘤细胞增殖活性和组织学恶性程度及预后的关系

１３１例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）按国际工作分类分低、中、高度恶性（ＬＧ、ＭＧ、ＨＧ）３组。对ＮＨＬ和１４例反应性增生淋巴组织（ＲＬＨ）作核分裂计数（ＭＦ），银染核仁组成区（ＡｇＮＯＲｓ）计数，并用ＭＢＣ法检测部分病例的增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和Ｋｉ＿６７抗原。ＭＦ、ＡｇＮＯＲｓ、ＰＣＮＡ及Ｋｉ＿６７检测结果有较好相关性（ｒ值０．６１２，Ｐ＜０．０１），均和ＮＨＬ恶性度呈正相关，ＬＧ、ＭＧ、ＨＧ及ＲＬＨ组间有显著性差异（Ｐ＜０．０１，但ＬＧ和ＲＬＨ组Ｐ＞０．０５），表明细胞增殖活性的检测有助于了解ＮＨＬ恶性度，但不能区分ＬＧ和ＲＬＨ。ＭＧ中弥漫小裂细胞型（ＤＳＣ）细胞增殖活性低于同组其它类型（Ｐ＜０．０５），但与ＬＧ无显著性差异（Ｐ＞０．０５），预后相对较好，拟属ＬＧ。ＭＦ、ＡｇＮＯＲｓ和ＰＣＮＡ值越高，生存期越短，表明细胞增殖活性有助于预测ＮＨＬ预后。ＭＦ和ＡｇＮＯＲｓ经济易行；Ｋｉ６７全面反映增殖细胞的数量，仅用于冰冻切片；ＰＣＮＡ可用于石蜡切片，便于回顾性研究。     

原发性十二指肠癌核仁组成区嗜银蛋白的定量研究

用核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）的银染色技术研究了３０例原发性十二指肠癌、２０例十二指肠溃疡及２０例正常十二指肠粘膜的ＡｇＮＯＲ计数变化，以探讨ＡｇＮＯＲ计数对原发性十二指肠癌的诊断价值。结果显示：十二指肠溃疡组与正常十二指肠粘膜组ＡｇＮＯＲ计数无显著差异（Ｐ＞０．０５），原发性十二指肠癌与十二指肠溃疡和正常粘膜比较ＡｇＮＯＲ计数有显著性差异（Ｐ＜０．００１），且低分比腺癌及粘液腺癌与高分化腺癌及乳头状腺癌比较ＡｇＮＯＲ计数也有显著者差异（Ｐ＜０．０５）。结果表明ＡｇＮＯＲ计数能较好反映原发性十二指癌的增殖活性，可以作为评价原发性十二指肠癌恶性程度的定量参数     

EBV-LMP1基因杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达

目的：构建EBV-LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒，包装重组LMP1的杆状病毒，感染昆虫细胞进行表达。方法：先将已克隆的LMP1 cDNA与线性化的pFastBACHTb进行连接，使pFASTBACHTb-LMP1与DHl0BAC感受菌进行转座重组，利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid／LMPl克隆，提取Bacmid／LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒，利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达，通过免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot检测表达情况。结果:获得了重组LMP1的杆状病毒，细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白，分子量为63kDa左右，细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清。结论:LMPl能在昆虫细胞中获得良好表达，为研究肿瘤疫苗及LMPl在EBV致瘤分子机理中的作用奠定了基础。     

人脂联素球状结构域基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

目的 利用杆状病毒表达系统表达人脂联素球状结构域(gAd)基因.方法 以人基因组为模板,PCR法扩增人gAd基因,将gAd基因与供体质粒pFastBacHTB连接,转化含有穿梭载体:Bacmid的大肠杆菌DH10Bac.筛选转座成功的重组穿梭载体Bacmid-gAd,通过脂质体介导,转染昆虫细胞Sf9,经SDS-PAGE、免疫印迹法检测表达产物.结果 重组杆状病毒感染的Sf9细胞形态变化明显,SDS-PAGE电泳结果 显示,Bacmid-gAd组和对照组相比,在相对分子质量15 000～25 000之间多出一清晰的蛋白条带,免疫印迹法证实该条带能与相应的抗His标签抗体结合.结论 人gAd基因成功在真核细胞中表达,为后续的实验研究奠定了基础.     

利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白

目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBVC基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual—HBV core，转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座，提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9，获得含有HBVC基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达，然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况。结果成功构建了含HBVC基因的重组杆状病毒，而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白。结论利用Bac to Bac杆状病毒表达系统，成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白，为进一步研究奠定了基础。     

HBV全基因真核细胞表达载体的构建及表达

目的：构建全基因HBV真核细胞表达载体,并对其在细胞内的复制、转录、翻译进行研究。方法：采用分子亚克隆技术,将长约3.2Kb的HBV全基因克隆到真核细胞表达载体pBK-CMV折EcoPI位点,构建的pKB-HBV经FUGENE^TM6导入人肝癌细胞系SMMC－7721细胞中。结果：经PCR、RT－PCR验证pBK-HBV能够在SMMC－7721细胞中有效复制和转录。固相放免法显示HBV转染细胞内的HBsAg、HBeAg的合成和分泌。免疫组化法证明,胸内浆型分布为主的HBcAg的表达。结论：HBV全基因真核细胞表达载体pBK-HBV能够在SMMC－7721细胞中有效复制、转录及表达。     

人端粒酶启动子(hTERTp)真核表达载体的构建

目的克隆人端粒酶催化亚单位（hTERT）的启动子，构建真核表达载体pEGFP—hTERT。方法以人类基因组DNA为模板，应用PCR方法扩增hTERT上游序列长约1135bp的启动子片段，克隆入绿色荧光蛋白GFP的基因上游，测序鉴定。结果DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致，片段长度为1135bp。结论人端粒酶启动子的真核表达载体pEGFP—hTERT构建成功，为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗奠定了基础。     

IgE低亲和力受体基因的克隆、表达及初步鉴定

目的 利用基因重组的方法建立IgE低亲和力受体(FceR Ⅱ)基因的原核表达系统.方法 用RTPCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞扩增FceR Ⅱ cDNA基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建原核表达载体 FceR Ⅱ-pGEX-4T-1,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta,诱导表达FceR Ⅱ蛋白,通过割胶回收纯化,并用Western blot检测FceR Ⅱ的表达.结果 测序表明所扩增FceR Ⅱ cDNA基因,与已报道的序列一致.获得的重组蛋白经Western blot鉴定可以和人IgE特异性结合.结论 成功构建了FceR Ⅱ-pGEX-4T-1表达载体,获得了能和人lgE特异性结合的重组蛋白,为下一步FceR Ⅱ单克隆抗体的制备及应用研究打下了基础.     

Fas、Fas—L和Bcl—2蛋白在胃癌的表达及其意义

目的：研究凋亡相关蛋白Fas、Fas-L和Bcl-2在胃癌中的表达及其意义。方法：应用免疫组化S－P法对10例正常胃粘膜、66例胃癌及28例癌旁组织进行检测。结果：①Fas、Fas-L和Bcl-2在胃癌中表达的阳性率分别为57.58％、50.00％和51.51％;在癌旁为80.14％、53.33％和28.57％;在正常胃粘膜中为100％、0％和0％;②Fas表达在I、II期组织明显高于III、IV期组,在无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移 组;③Fas-L和Bcl-2在肠型胃癌中的表达明显高于弥漫型胃癌;④肿瘤周围浸润的淋巴细胞有明显的Fas及Fas-L表达。结论：Fas的下调表达及Fas-L的上调表达在胃癌的发生发展中起重要作用,Fas-L和Bcl-2在肠型胃癌的发病机制中发挥重要的作用,Fas的表达对估计病人的预后 有一定的价值。     

部分喉切除术后喉狭窄瘢痕组织中TGF-β1和α-SMA的表达

[目的]研究喉狭窄瘢痕组织的病理变化,了解转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在喉狭窄瘢痕组织中表达及意义.[方法]垂直喉部分切除术后2～3个月出现喉狭窄10例和未狭窄16例喉瘢痕肉芽组织为实验组及1O例正常声带组织为对照组,进行免疫组化染色,观察组织切片中TGF-β1和α-SMA的表达,并在KONTRON IBAS 2.5全自动图像分析系统下进行阳性细胞计数.[结果]TGF-β1阳性表达主要分布于炎症细胞及成纤维细胞的胞浆,α-SMA阳性表达的主要分布于肌成纤维细胞胞浆.比较非狭窄喉瘢痕组织及正常声带组织,喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1和α-SMA的表达均明显增强,阳性细胞数量差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]喉狭窄瘢痕组织的TGFβ1及α-SMA高表达,这些改变可能是喉狭窄发生重要内在因素.     

实验性病毒性心肌炎心肌MHCⅡ类抗原的表达

[目的]研究病毒性心肌炎(VMC)心肌组织相容性抗原Ⅱ类(MHCⅡ类抗原)的表达特点,探索轻度、不典型VMC的法医病理学诊断方法.[方法]以1035TCID50的CoxsackieB3病毒接种Balb/c小鼠,诱导小鼠轻度VMC.用免疫组化技术检测VMC小鼠心肌MHCⅡ类抗原的表达.[结果]VMC小鼠心肌组织内MHCⅡ类抗原异常表达,部分心肌细胞膜局灶性MHCⅡ类抗原阳性.[结论]心肌MHCⅡ类抗原的异常表达参与了轻度VMC的发病机制;心肌MHCⅡ类抗原-LSAB染色可望成为诊断轻度、不典型VMC的免疫病理学指标.