LC-MS法测定人血浆中氨氯地平浓度及其生物等效性评价

目的建立液相-质谱联用（LC-MS）法测定人血浆中氨氯地平浓度，并进行两种制剂的生物等效性评价。方法采用随机双交叉试验设计，18名健康受试者口服受试制剂和参比制剂5mg，用LC-MS法测定人血浆中氨氯地平浓度。结果受试制剂和参比制剂的主要药动学参数：AUC0→t分别为（104．01±26．03）和（101．91±24．67）ng·h·ml^-1；AUC0→∞分别为（113．96±30．66）和（110．29±27．67）ng·h·ml^-1；Cmax分别为（2．44±0．40）和（2．43±0．38）ng·ml^-1；tmax分别为（7．28±2．92）和（7．50±3．04）h；t1／2分别为（33．33±6．30）和（30．93±4．18）h。受试制剂的相对生物利用度为（103．34±6．69）％。两种制剂主要动力学参数经统计学检验无显著性差异（P〉0．05）。结论该方法简单、快捷、准确，氨氯地平片的受试制剂和参比制剂具有生物等效性。     

液质联用多反应监测法定量肝纤维化非实质细胞中的ATPA蛋白质

目的建立液质联用多反应监测方法定量复杂样品中的蛋白质。方法合成标准多肽,建立较通用的蛋白质多肽定量方法;挑选目标蛋白质及其定量离子对。采用SDS-PAGE方法分离复杂样品中的蛋白质,切取目标蛋白质条带进行胶内酶解和液质联用MRM定量,运用定量PCR方法分析目标蛋白在蛋白质和mRNA水平的一致性。结果选择在二维凝胶电泳中具有3倍差异的ATPA蛋白质进行了MRM定量分析,ATPA的4条多肽513.8、586.4、644.5和777.3对应的10个离子对均能特异地被质谱MRM方法检测,与正常对照相比,酒精性肝纤维化样本中ATPA的10个离子的曲线下面积变化基本一致,均表现为上调。MRM定量结果也表明ATPA在酒精性肝纤维化样品中上调了3.19倍,与二维凝胶电泳检测结果一致。进一步的定量PCR分析结果显示,该蛋白质的表达变化同步发生在mRNA和蛋白质水平。结论本研究构建了一种简单有效的液质联用MRM定量SDS-PAGE分离的复杂样品中蛋白质的方法。     

Solid and liquid state characterization of tetrahydrocurcumin using XRPD,FT-IR,DSC, TGA,LC-MS,GC-MS,and NMR and its biological activities

Tetrahydrocurcumin (THC) is one of the major metabolites of curcumin (CUR), an ancient bioactive natural polyphenolic compound. This research article describes both the solid and liquid state characterization of THC using advanced spectroscopic and thermo-analytical techniques. Anti-inflammatory, anti-oxidant, and neuroprotective activities of THC were investigated using in vitro cell lines. Liquid chromatography-mass spectrometry analysis revealed that our sample comprised 95.15% THC, 0.51% tetrahydrodemethoxycurcumin (THDC), 3.40% hexahydrocurcumin, and 0.94% octahydrocurcumin. Gas chromatography-mass spectrometry analysis indicated the presence of 96.68% THC and 3.32% THDC. THC in solution existed as keto-enol tautomers in three different forms at different retention time, but the enol form was found to be dominant, which was also supported by nuclear magnetic resonance analysis. THC was thermally stable up to 335.55 °C. THC exhibited more suppression of cytokines (TNF-α, IL-1β, and MIP-1α) than CUR in a concentration-dependent manner in mouse splenocytes, while NK-cell and phagocytosis activity was increased in macrophages. THC showed a significant reduction of free radicals (LPO) along with improved antioxidant enzymes (SOD and catalase) and increased free radical scavenging activity against ABTS⁺ radicals in HepG2 cells. THC displayed higher protection capability than CUR from oxidative stress and neuronal damage by improving cell viability against H₂O₂ induced HepG2 cells and MPP⁺ induced SH-SY5Y cells, respectively, in a concentration-dependent manner. Thus, a variation of the biological activities of THC might rely on its keto-enol form and the presence of other THC analogs as impurities. The present study could be advantageous for further research on THC for better understanding its physicochemical properties and biological variation.     

药蜀葵种子挥发油的提取与分离鉴定

目的研究利用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)测定植物药蜀葵种子挥发油含量的方法。方法采用美国Perkin/Elmer公司的Auto Sys-tem XI GC和TurbMass高性能色谱-质谱-计算机联用技术对药蜀葵种子的挥发性成分进行分离鉴定。结果分离出19种成分,采用峰面积归一化法确定了各成分的相对含量,主要成分为亚油酸(56.0%)、油酸(16.8%)、棕榈酸(11.9%)、脂酸(8.05%)、亚麻酸(1.41%)、乙酸乙酯(0.85%)、苯(0.65%)、甲苯(0.56%)、2,3-二甲基-4-甲氧基苯酚(0.56%)、石竹烯(0.55%)、乙苯(0.51%)、对二甲苯(0.38%)、邻二甲苯(0.36%)、3-蒈烯(0.23%)、1-甲基-2-乙基苯(0.21%)、棕榈烯酸(0.20%)、肉豆蔻酸(0.18%)、月桂酸(0.12%)及葵酸(0.10%)。结论 GC-MS测定方法简便快捷,精密度高,准确性好,可用于维药蜀葵种子中挥发油的测定。     

降香及其伪品挥发性成分对比研究

目的 分析降香及其伪品挥发性成分的异同点,为降香的真伪优劣鉴别提供科学依据,并为降香的进一步研究提供参考.方法 采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)结合气质联用(GC-MS)技术对降香及其伪品挥发性成分进行分析鉴定,并用面积归一化法计算各成分的相对百分含量.结果 共检测出70种成分,鉴定出38种成分,主要为烯类、醇类和醛酮类,从降香挥发性成分中检测出42个峰,鉴定出25个成分,占挥发性成分的96.54%;从其伪品中检测出28个峰,鉴定出19种成分,占挥发性成分的80.7%.结论 降香及其伪品的挥发性成分差异较大,两者共有的成分有6种,含量差异大,降香的主要成分为橙花叔醇,占挥发性成分的61.47%,其伪品的主要成分为β-芹子烯,占总挥发性成分的59.04%.本实验为降香真伪优劣的鉴别提供科学指导,同时为降香的进一步开发提供参考依据.     

水蒸气蒸馏法和提取-共沸精馏耦合技术提取艾叶挥发油比较研究

目的:比较水蒸气蒸馏法(SD)和提取-共沸精馏耦合技术(WER)提取艾叶挥发油的效果.方法:分别采用SD和WER法提取艾叶挥发油,计算挥发油得率.采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对挥发油进行成分分析,比较两种提取方法制得的艾叶挥发油中成分及含量差异.结果:①SD法提取挥发油得率为0.502 ml/100 g,WE...     

气相色谱-质谱联用分析在有机酸尿症筛查与诊断中的应用

目的 探讨气相色谱-质谱联用分析（GC-MS）在有机酸尿症筛查与诊断中的应用方法及意义。对象和方法 收集1998年1月至2005年9月近8年期间的4265例智力运动障碍、癫痫、呕吐、意识障碍等有机酸尿症高危患者尿液，萃取有机酸，应用shimadzu GCMS-QP2010分析仪、GCMS solution软件工作站进行色谱和质谱分析，采用先天代谢异常筛查诊断软件对色谱和质谱图进行数据处理与化学诊断。结果 4265例高危患者中共发现了153例（3．59％）有机酸尿症患者，其中甲基丙二酸尿症最多，为85例，占55．6％。戊二酸血症Ⅱ型19例（12．4％）。丙酸血症14例（9．2％）。多种羧化酶缺乏症12例（7．8％），其中生物素酶缺乏症7例。戊二酸尿症Ⅰ型、高草酸尿症各5例，氧合脯氨酸尿症、异戊酸尿症各3例，甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症、甘油酸尿症、酮硫解酶缺乏症各2例。黑酸尿症1例。筛查中还发现了144例（3．38％）继发性有机酸代谢异常，经过血液氨基酸、脂肪酸、肉碱谱、基因分析进行了进一步病因分析。确诊后多数患者接受了相应饮食、药物与康复治疗，有不同程度改善。结论 GC-MS尿有机酸分析是有机酸尿症筛查与诊断的可靠方法。     

长春瑞滨磷脂复合物的制备及其性质研究

目的 制备长春瑞滨磷脂复合物,提高药物的脂溶性,以期进一步制备长春瑞滨微粒载药系统。方法 采用溶剂挥发法制备长春瑞滨磷脂复合物,以复合率为评价指标进行单因素优化试验。采用差示扫描量热法、X射线衍射法、紫外分光光度法对复合物进行鉴别,并考察复合物的体外溶解性质变化。结果 优化条件下制备的磷脂复合物复合率为89.3%～93.7%;差示扫描量热法、X射线衍射法、紫外分光光度法验证了复合物的形成;形成磷脂复合物后,长春瑞滨的脂溶性显著提高。结论 制备的长春瑞滨磷脂复合物能显著增加药物的脂溶性,为进一步制备长春瑞滨微粒载药系统奠定基础。     

TIC类型及ADC值在乳腺疾病中的诊断价值

目的：探讨MR动态增强曲线(TIC)类型和弥散表观系数(ADC)值在乳腺疾病中的诊断价值。方法回顾性分析2008年5月至2014年5月间经病理证实的107例乳腺疾病女性患者的临床资料,对病灶进行TIC类型分析及其ADC值的测量,并与对侧乳腺的相应正常区域做对照,探讨TIC类型与ADC值在乳腺癌病理分级中的诊断价值。结果108个乳腺病灶经病理证实良性病变49例,恶性病变59例,其中36例具有病理分级。良性病变曲线分布Ⅰ型33例、Ⅱ型8例、Ⅲ型8例,恶性病变曲线分布Ⅰ型12例、Ⅱ型14例、Ⅲ型33例,乳腺癌Ⅰ级8例、Ⅱ级21例、Ⅲ级7例,TIC类型分布在乳腺良恶性病灶间差异具有统计学意义(P<0.05),在乳腺癌病理分级间差异无统计学意义(P>0.05)。正常乳腺与不同病理分级乳腺癌ADC值多组间两两比较,正常乳腺组织ADC值为(1.89±0.061)×10-3 mm2/s,乳腺癌病理组织Ⅰ级为(1.09±0.122)×10-3 mm2/s,乳腺癌病理组织Ⅱ级为(0.579±0.067)×10-3 mm2/s,乳腺癌病理组织Ⅲ级为(0.203±0.648)×10-3 mm2/s,各组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。乳腺癌病理组织学分级与其呈负相关(r=-0.969,P=0.000)。结论 TIC类型对乳腺良恶性病变鉴别诊断具有重要应用价值,乳腺癌的ADC值可以预测乳腺癌的恶性程度,但MR动态增强曲线类型对乳腺癌病理分级的预测有一定难度。     

健康人尿纤维蛋白肽A水平及其影响因素的研究

目的:为了解健康人体内凝血活性状态,确定尿纤维蛋白肽A(FPA)的正常参考水平。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)定量检测60例健康人24小时尿纤维蛋白肽A(FPA)水平。结果:健康人24小时尿FPA从水平为59.3±27.1μg/24小时,不同年龄、性别或日内各时段间尿FPA水平无显著性差异。结论:健康人尿中含徽量FPA,其水平不受年龄、性别等因素的影响,认为单次晨尿FPA检测可取代24小时尿FPA总量检测。本研究结果为临床上研究某些伴随凝血系统紊乱的疾病提供了一个较为可靠而稳定的尿FPA正常参考指标。     

甘松地上和地下部位挥发油化学成分比较研究

目的 研究甘松地上与地下部分的挥发油化学成分.方法 通过水蒸汽蒸馏法提取甘松地上、地下部分挥发油,采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析、鉴定其化学成分.结果 首次对甘松地上部分挥发油进行提取并从中鉴定出40个化合物,占总挥发油的77.32%;地下部位挥发油鉴定出36个,占总挥发油的88.02%.两者共有成分20...     

CMIA、FPIA及MS在全血环孢霉素A浓度监测中的对比分析

目的通过荧光偏振免疫法(FPIA)、化学发光微粒子法(CMIA)和质谱法(MS)对全血环孢霉素A(CsA)谷浓度测定结果的比较,了解3种方法检测结果的差异,以便更加合理地选择CsA浓度监测方式。方法采集分离100例肾移植术后患者稳态浓度的血浆样品,以CMIA、FPIA以及MS法测定CsA浓度,并对3种方法测定结果进行统计分析。结果 FPIA的线性范围在0～800ng/ml,最低检测浓度为43.0ng/ml,而CMIA法测定的线性范围在0～1500ng/ml,最低检测浓度为24.1ng/ml;3种方法中,FPIA法和CMIA法的检测结果与和MS的相关系数r分别为0.96和0.97;FPIA和CMIA法的检测结果均高于MS(P<0.01),但相比FPIA法,CMIA的测定值明显更低,两组数据差异具有统计学意义(P<0.01);Bland-Alman一致性分析显示,CMIA法的测定结果较FPIA法普遍偏低,平均偏差为-76.5ng/ml。结论 CMIA相比FPIA法,灵敏度和特异度更高,是更为客观和理想的CsA血药浓度的检测方法,建议可推广入临床常规监测。     

HPLC法和FPIA法检测卡马西平血药体积百分比的比较研究

目的高效液相色谱法(HPLC)和荧光偏振免疫法(FPIA)测定血清中卡马西平体积百分比的比较研究。方法收集广州市精神病医院服用CBZ的21例癫痫患者血样。用本实验室已经建立的HPLC法和FPIA法分别检测卡马西平对照品的甲醇溶液、卡马西平对照品标准血清、患者血清中卡马西平体积百分比,采用配对t检验考察两种方法分别测定卡马西平对照品的甲醇溶液、卡马西平对照品标准血清、患者血清中卡马西平体积百分比有无显著性差异。结果HPLC法与FPIA法检测卡马西平对照品甲醇溶液、卡马西平对照品标准血清中卡马西平体积百分比无显著性差异(t值分别为-1.009、0.767,P值分别为0.325、0.452);检测患者血清中卡马西平血药体积百分比有显著性差异(t=4.919,P<0.05),FPIA法检测患者血清中卡马西平血药体积百分比较HPLC法偏高。结论FPIA法检测患者血清中卡马西平血药体积百分比过程中,CBZ的活性代谢产物环氧化卡马西平(carbamazepine-10,11-epoxide,CBZ-E)可能对FPIA法测定CBZ有干扰,导致结果偏高。     

Tuberculosis control priorities defined by using cost-effectiveness and burden of disease

Objective To define TB control priorities using cost-effectiveness and burden of disease. Methods An assumed cohort of 2 000 cases was set up based on age-specific incidence of 794 newly registered smear-positive cases in Beijing in 1994. Prognostic trees and model diagrams of infectivity with natural history and DOTS intervention were constructed based on the epidemiological parameters. Results DOTS reduced 89.19 % of YLL, 78.90% of YLD, and 99.98% of infectivity BOD. One DALY could be saved with 45.70 Yuan by DOTS with 3% discount. Sensitivity analysis showed that discount had effect on CER. Weight of age was insensitive to CER. The higher the DOTS cured rate, the more the cost-effectiveness. Conclusions DOTS is a good cost-effectiveness TB control strategy. Cost-effectiveness and burden of disease can be used to define TB control priorities.     

液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测血浆肾素活性(PRA)的方法学建立和临床应用评估

 目的    建立高血压患者血浆肾素活性(plasma renin activity,PRA)液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的检测方法,用于早期筛查高血压患者中的原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism,PA)。方法    arginine 13C 15N作为内标,采用Phenomenex Kinetex C18柱(2.6 μm,100 mm×3.0 mm)进行分离,柱温55 ℃。流动相为0.2%甲醇水溶液和0.2%甲酸甲醇溶液,流速为0.5 mL/min,梯度洗脱。考察该方法的特异性、基质效应、携带污染、重复性、定量下限(lower limit of measuring interval,LLMI)、线性、不精密度、回收率、稀释一致性和血浆标本稳定性。采用LC-MS/MS方法测定296名表面健康人群(男性153名,女性143名,平均年龄48岁)及360名高血压患者(平均年龄52岁,确诊为PA 27例)的血浆样本PRA,并与放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)进行比较。结果    该方法通过了特异性、基质效应、携带污染、重复性的性能评价。PRA的检测线性范围为0.084 4～30.000 0 ng/mL;PRA的LLMI为0.084 4 ngmL-1h-1;日间和批内的不精密度变异系数(coefficient of variation,CV)均＜15%;准确度偏差均<15%,回收率为92.28%～102.62%;建立的生物参考区间为0.25～5.12 ngmL-1h-1 (立位);与RIA比较,结果相关性较好(r2=0.81,P＜0.05),但存在-18.5%的偏倚;LC-MS/MS所得PRA的醛固酮/肾素活性比值(aldosterone to renin ratio,ARR)对PA的诊断特异性与灵敏度分别为96.3%与91.0%,诊断性能更佳(AUC:0.983 vs.0.894)。结论    我们建立了准确检测PRA的LC-MS/MS方法,适合于临床早期快速筛查PA。     

蜈蚣藻和带形蜈蚣藻脂肪酸成分和无机元素含量分析

目的分析蜈蚣藻和带形蜈蚣藻的脂肪酸成分和无机元素含量。方法采用三氯甲烷-甲醇法提取南海大型经济海藻蜈蚣藻和带形蜈蚣藻中的粗脂肪,利用气相色谱-质谱联用仪分析其脂肪酸的组成。采用Optima 2000DV原子发射光谱仪测定蜈蚣藻和带形蜈蚣藻中几种人体必需无机元素Ca、P、Zn、Mg、Fe、Mn、Cu、Cr、Se、Sr和一些有害元素As、Cd、Pb的含量。结果蜈蚣藻和带形蜈蚣藻的粗脂肪含量分别为5.6%和3.4%,其中不饱和脂肪酸含量分别占其总脂肪酸含量的7.18%和1.08%。蜈蚣藻和带形蜈蚣藻的无机元素含量均较丰富,其中人体必需的Fe、Ca、Mg、P、Zn含量较高,而有害元素As、Cd、Pb含量很低。结论蜈蚣藻和带形蜈蚣藻主要的脂肪酸成分为棕榈酸。相比而言,蜈蚣藻的营养价值更高。     

NLR、血清胱抑素C及IL-6检测在冠心病患者中的应用价值

目的探讨NLR、CysC及IL-6联合检测在冠心病患者中的应用价值。方法选取本院在2016年6月～2018年6月住院的85例冠心病患者作为研究对象,选取同期40例健康人群作为对照组,对两组的血清中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血清胱抑素C(CysC)、白细胞介素6(IL-6)水平进行分析测定,并对结果进行分析。同时测定患者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等生化指标,并对结果进行分析。结果冠心病患者的NLR、CysC、IL-6检测水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。在冠心病患者中又以急性心肌梗死的NLR、CysC及IL-6各项检测值最高,稳定型心绞痛(SAP)各项检测值相对最低,且三组间检测水平差异有统计学意义(P0.05)。结论 NLR、CysC、IL-6在冠心病尤其是急性心肌梗死中显著升高,可作为冠心病的评价指标之一。     

磁共振扩散加权成像(DWI)评估前列腺癌Gleason评分(GS):单指数模型与峰度模型比较

 目的 探讨扩散加权成像（diffusion-weighted imaging,DWI）中单指数模型和峰度模型在评估前列腺癌的Gleason评分（Gleason score,GS）方面的应用及差别。方法 连续收集复旦大学附属中山医院2017年5月至2018年12月期间疑诊前列腺疾病患者,进行多参数磁共振成像（multiparametric magnetic resonance imaging,mpMRI）,包括常规序列、DWI、DCE-MRI。使用后处理软件分析DWI图像分别获得单指数模型参数表观扩散系数（apparent diffusion coefficient,ADC）及峰度模型参数Kapp及校正后的ADC-Dapp。使用Spearman相关分析检验癌区DWI参数与GS的相关性;单因素方差分析和独立样本t检验用于三组及两组间参数差异显著性分析,使用Kruskal-Wallis单因素方差分析（即κ样本）及Mann-Whitney U检验分别行三组及两组间非参数检验分析;通过ROC曲线来评估各参数鉴别诊断不同GS分组的效能。结果 参数ADC、Dapp均与肿瘤的GS存在负相关,Kapp与肿瘤的GS呈正相关。3个参数在GS≤3+4和GS>3+4、GS≤3+4和GS>3+4组间均存在显著差异（P均<0.05）,Kapp仅在GS=4+3和GS>7组间差异有统计学意义（P<0.01）;ADC、Dapp、Kapp鉴别诊断GS≤3+4和GS>3+4组的AUC分别为0.751、0.756和0.785,AUC间差异无统计学意义（P=0.58~0.76）。结论 DWI单指数模型参数和峰度模型参数均有助于术前评估前列腺癌的Gleason分级;Kapp可能是肿瘤侵袭性的优秀预测因子,推荐将扩散峰度成像应用于临床。     

八味地黄方与人参汤共煎液中毒性物质的电喷雾质谱研究

目的采用电喷雾质谱技术研究附子的配伍规律,阐明八味地黄方与人参汤共服时产生毒性的化学物质基础。方法采用电喷雾质谱技术分别对八味地黄方加人参汤、附子加人参汤、附子加人参、附子加干姜、附子加甘草、附子加白术、次乌头碱对照品加白术共煎液中生物碱成分的相对质量分数及其变化规律进行研究。结果次乌头碱与白术、附子与白术、附子与人参汤、八味地黄方与人参汤共煎液中次乌头碱质量分数较高。结论八味地黄方与人参汤共煎液产生的毒性是由人参汤中的白术抑制了附子中次乌头碱等双酯型生物碱的水解,导致双酯型生物碱水平过高而引起的。甘草和干姜对附子具有解毒作用,人参亦不会导致共煎液的毒性增加。     

人转铁蛋白受体特异性单克隆抗体的研制及其初步鉴定

目的 建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定. 方法 将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合,用含HAT培养基筛选杂交瘤细胞;采用间接ELISA和Cell-ELISA法筛选TfR抗体阳性的杂交瘤细胞;采用有限稀释法进行克隆和多次亚克隆以建立稳定分泌TfR抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射经石蜡油致敏的小鼠腹腔以产腹水抗体,采用硫酸-辛酸法纯化腹水抗体;采用秋水仙素处理,计数细胞染色体数以进行杂交瘤细胞鉴定;采用免疫荧光染色法和Western blot法初步鉴定抗体与细胞表面或细胞总蛋白中TfR的结合. 结果 提取纯化的人TfR蛋白免疫小鼠获得成功,其1∶5 000稀释的血清抗体光吸收值(A490)是对照小鼠血清(1∶200稀释)的16倍以上;细胞融合率为42.22%,其中TfR抗体阳性孔20个,抗体阳性率为13.16%;抗体阳性孔B6和孔E8中杂交瘤细胞经克隆和亚克隆后建立起稳定分泌抗体的细胞株;B6杂交瘤细胞染色体数量位于56~60条之间,应为B细胞和SP2/0细胞融合而来;腹水抗体染色使HepG2细胞表面出现明亮荧光,并且能使HepG2细胞提取的总蛋白电泳图谱在95 000处出现清晰条带,表明该杂交瘤细胞分泌的抗体能特异性结合TfR蛋白.结论 分泌抗人TfR抗体的小鼠杂交瘤细胞株已被筛选和建立;其分泌的抗体能与HepG2细胞的TfR特异性结合.