肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体

0引言细胞内抗体（intrabody）技术是近几年来完善的一种新的基因治疗策略[1]。细胞内抗体具有结合、灭活肿瘤细胞癌蛋白、诱导细胞凋亡的作用[2]。未见有关在肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体的研究报道。本研究在肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体，观察单链抗体在肝癌细胞内表达对肝癌细胞的影响。1方法抗人肝癌单链抗体基因由本室制备。该基因长700加，由重链可变区基因和轻链可变区基因I－inker（Gly4Ser）。连结组成，重链5’端含有EcoRI酶切位点和A”l’G启始码，删除了轻链可变区分端57个碱基，轻链3’端含有一个Sail酶切位点。将含有…     

99mTc标记抗癌胚抗原单抗C50片段Fab'及其生物分布研究

目的:研究克服99mTc标记抗癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)单抗体内生物半衰期长、血液廓清速度慢、晚时相放射性信号弱等缺点的方法,用直接标记法进行了99mTc标记抗CEA抗体C50片断Fab'的研究.方法:经胃蛋白酶切得的C50片断F(ab')2用适量的2-巯基乙醇还原,Sephadex G50柱分离获得纯度大于90%的Fab'片断.取0.6～1.0 mg纯化的片段Fab'(体积<1.0 ml),加入0.4～0.8 mg葡庚糖酸钠及新鲜配制的SnCl2溶液5～10μg,然后加入新鲜淋洗的Na99mTcO4淋洗液,反应10～15min.用高压液相色谱监测放化纯度和抗体纯度.荷CL-187(结肠癌)裸鼠静脉注射99mTc-Fab',观察标记抗体片段在不同时相的体内分布.结果:标记率大于90%.荷瘤裸鼠体内分布结果显示:在注射99mTc-Fab' 4 h后瘤/血、瘤/肝、瘤/肺放射性摄取比分别为1.93、2.35和3.13,24 h后则分别为4.91、2.62和5.26,肿瘤的ID(%)/g(每克组织的摄取率)为2.73.虽然注射99mTc标记的全抗C50后24 h,肿瘤的ID(%)/g高达12.5,但瘤/血比值仅为1.51.结论:采用99mTc直接法标记Fab'是成功的,肿瘤与非肿瘤(T/NT)的比值除肾外在早期4 h时均大于2.0,明显高于全抗的T/NT比值,有利于在注射后短时间内获得清晰的图像,因而99mTc-C50 Fab'是很有希望的放射免疫显像药物.     

肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体对肝癌细胞的杀伤作用

为研究抗肝癌单链抗体基因在肝癌细胞内表达对肝癌细胞的作用。采用脂质体转梁技术把含抗人肝癌ｓｃＦｖ基因的逆转录病毒载体导入人肝癌细胞系ＨＣＣ９２０４中，Ｇ４１８筛选阳性细胞克隆。ＲＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交分析ｓｃＦｖ基因在ＨＣＣ细胞中的表达。光镜及电镜技术观察转染细胞结构的变化。     

99mTc标记葡萄糖99mTc-EC-DG在正常小鼠体内的分布研究

目的研究^99mTc标记葡萄糖99mTc-EC-DG在正常小鼠体内的生物学分布规律,用于临床肿瘤显像作基础研究.方法正常昆明小鼠48只,分8组,每组6只,实验前小鼠禁食8 h以上.尾静脉注射^99mTc-EC-DG 3.7 MBq (100 μCi) 后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h和24 h放血处死,取心、肝、脾、肺、脑、肾、肌肉、骨、小肠、胃和血液等组织或器官,称重并测量其放射性,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g).结果^ 99mTc-EC-DG主要经肾脏代谢,脑不吸收^99mTc-EC-DG,肌肉组织摄取亦较少.各组织、器官的百分剂量率在1 h内除血液下降稍慢外,其余均有明显下降.结论^ 99mTc-EC-DG标记方便,体内外稳定性好,小鼠体内生物学分布表明其可能是一种较好的葡萄糖代谢显像剂.     

抗肝癌单链抗体基因库的制备

目的构建抗肝癌噬菌体单链抗体(Single-chainvariblefragments,ScFv)库并加以鉴定。方法从经肝癌细胞免疫小鼠脾淋巴细胞中提取mRNA,RT-PCR扩增轻、重链可变区基因片段,连接成ScFv基因并扩增,克隆到pCANTAB5E,导入大肠杆菌TG1培养并计数。PCR检测ScFv基因插入情况并对ScFv进行基因序列分析和ELASA检测。结果抗体库库容为2.14×106;90%的噬菌体基因中有ScFv基因的插入;核酸序列分析显示抗体库基因结构正确;ELASA检测证实ScFv的表达。结论所建抗肝癌噬菌体ScFv库库容大,质量良好,对肝癌的基础研究和临床有潜在的应用价值。     

^99mTc标记Laminin—YIGSR肿瘤小显像的实验研究鼠模型

目的探讨^99mTc—YIGsR作为一种新型的肿瘤显像剂在埃氏腹水肿瘤受体显像中的应用价值。方法①制备^99mTc—MAG3-YIGSR探针．以S-乙基-琥珀酰亚胺-巯乙苷肽（S—Acetly-NHS-MAG3）为螯合剂，将^99mTc标记到层黏素多肽片断YIGSR上；②对肿瘤模型组及封闭模型组行^99mTc—YIGSR生物学分布实验；③观察肿瘤模型组、炎症模型组及封闭模型组动物模型显像。结果①反相Sep-PakC18柱层析结果表明，YIGSR可以很好地与S-Acetly—NHS-MAG3偶联，偶联物在室温及中性条件下可完成^99mTc标记，标记率为62形．纯化后放射化学纯度〉95％。室温放置1、2、4h，放射化学纯度分别是91％，86％及81％。未与S—Acetly—NHS-MAG3偶联之YIGSR进行标记时，标记率为4％；②生物学分布结果显示^99mTc—YIGSR在小鼠血液内清除迅速，主要经。肾脏排泄，其次为肝脏；③^99mTcYIGSR静脉注入肿瘤模型组小鼠体内后，15min肿瘤部位有摄取．3h摄取达高峰，肿瘤／对侧肢体比值为11．36．此后显像剂清除较为缓慢，8h时下降至7．50。封闭模型组肿瘤细胞的摄取明显低下，肿瘤／对侧肢体比值是4．61（3h）、0．89（8h）；炎症模型组中，炎症／对侧肢体比值是3．72（3h）、1．29（8h）。与炎症模型组及封闭模型组比较．肿瘤模型组3h、8h肿瘤／对侧肢体的比值明显增高（P〈0．01）。结论通过螯合剂S-Acetly—NHS-MAG。可顺利完成层黏素多肽片段YIGSR的^99mTc标记^99mTcTc—YIGSR用于肿瘤显像具有显像时间早，显像清晰．灵敏度高．特异性强，靶／非靶比值高等特点，是一种有发展前景的新型肿瘤受体显像剂。     

几种^99mTc标记人免疫球蛋白（HIG）方法的比较

用４种还原剂即抗坏血酸、氯化亚锡、２－巯基乙醇（２－ＭＥ）、２－巯基乙胺（２－ＭＥＡ）还原人免疫球蛋白（ＨＩＧ），并进行＾９９ｍＴｃ直接标记，比较了４种还原剂所制备标记产物的稳定性、标记条件与过程。同时研究了间接标记产物＾９９ｍＴｃ－ＤＴＰＡ－ＨＩＧ与直接标记产物的一些性质差异，以期寻找一种标记率高、产物稳定、操作简便的＾９９ｍＴｃ标记ＨＩＧ方法，为临床炎症显像提供方便。     

^99mTc标记抗癌胚抗原单抗C50片段Fab‘及其生物分布研究

目的：研究克服＾９９ｍＴｃ示记抗癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ,ＣＥＡ）单抗体内生物半衰期长、血液廓清速度慢、晚时相放射性信号弱等缺点的方法,用直接标记法进行了＾９９ｍＴｃ标记抗ＣＥＡ抗体Ｃ５０片断Ｆａｂ’的研究。方法：经胃蛋白酶切得的Ｃ５０片段Ｆ（ａｂ’）２用适量的２－巯基乙醇还原,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０柱分离获得纯度大于９０％的Ｆａｂ’片断。取０．６～１．０ｍｇ纯化的片段Ｆａｂ’（体积〈１．０ｍｌ）,加入０．４～０．８ｍｇ葡庚糖酸钠及新鲜配制的ＳｎＣｌ２溶液５～１０μｇ,然后加入新鲜淋洗的Ｎａ＾９９ｍＴｃＯ４淋洗液,反应１０～１５ｍｉｎ。用高压液相色谱监测放化纯度和抗体纯度。荷ＣＬ－１８７（结肠癌）裸鼠静脉注射＾９９ｍＴｃ－Ｆａｂ’,观察标记抗体片段在不同时相的体内分布。结果：     

新型心肌灌注显像剂^99mTc—Q3的标记方法学研究

为获得高质量的心肌灌注显像剂,作者进行了９９ｍＴｃ－Ｎ,Ｎ'－亚乙基－二（乙酰丙 酮亚胺）二「三（３－甲氧基－１－丙基）膦」（＾９９ｍＴｃ－Ｑ３）的制备方法学研究。采用多元正交试验法进行了制备＾９９ｍＴｃ－Ｑ３最佳配方的筛选;用氯化亚锡化学还原法制备＾９９ｍＴｃ－Ｑ３;用柱沉析法进行＾９９ｍＴｃ－Ｑ３的分离和纯化、质量控制及体外稳定性试验;完成了无菌、热原、安全试验及家兔显像验证。制备９９ｍＴｃ－Ｑ     

NHS-MAG3为螯合剂的99mTc-寡核苷酸标记特性

目的 探讨以NHS-MAG,作为螯合剂的^99mTc-寡核苷酸(^99mTc-ON)的标记特性。方法将NHS-MAG,与长度为15个碱基的c-myc mRNA的反义(ASON)、正义(SON)和无义寡核苷酸(MON)偶联,进行^99mTc标记,Sephadex G25 柱层析分离纯化,评价^99mTc-ON的标记率、放化纯和稳定性;将ON-MAG,偶联物置-20℃贮存15 d、1月、2月后进行^99mTc标记,观察标记率的变化,评价ON-MAG3的稳定性;用三氯乙酸沉淀法测定^99mTc-ON的血浆蛋白结合率。结果 ^99mTc-ASON、^99mTc-SON和^99mTc-MON的标记率分别为68．41％、66．24％和69．38％,纯化后放化纯分别为96．98％、95．34％和94．62％。三者在室温和血清中均较稳定。ON-MAG3在-20℃保存2月后,标记率未见明显下降。三种^99mTc-ON的血浆蛋白结合率均小于13％。结论以NHS-MAG3作为螯合剂的^99mTc-ON具备优良的标记特性,标记率、放化纯较高,稳定性好,血浆蛋白结合率低,是一种有临床应用潜力的放射性标记药物。     

99mTc甲氧基异丁基异腈定位显像诊断甲状旁腺功能亢进症

目的：评价^99mTc甲氧基异丁基异腈（MIBI）双时相显像法对甲状旁腺功能亢进（甲旁亢）的诊断价值。方法：21例临床诊断甲状旁腺功能亢进患者，静注注入T99mTc MIBI 740MBq（20mCi），分别于10～20min（早期显像）、2h（延迟显像）采集颈部至上胸部的前位平面像。结果：5例原发性甲旁亢患者均表现为孤立的放射性浓聚灶；16例继发性甲旁亢中，2例显示为单个放射性浓聚灶，10例显示为2个放射性浓聚灶，2例显示为3个放射性浓聚灶；另有2例显示有异位甲状旁腺病灶。10例经手术证实甲旁亢患者中，术前^99mTc MIBI甲状旁腺显像和超声诊断检查，对原发性甲旁亢患者定位诊断阳性率均为100％，对继发性甲旁亢患者定位诊断阳性率分别为55％和70％。结论：^99mTc MIBI双时相法显像在甲旁亢患者中有较高的定位诊断价值。     

~(99m)Tc(V)DMSA评价普通骨显像过度暴光影像特征的作用

目的 :本研究的目的是评价常规骨闪烁显像图呈“过度暴光”的患者99mTc(V)DMSA显像图的分布 ,并解释99mTc(V)DMSA在鉴别潜在病因中的价值。方法 :常规骨闪烁显像呈“过度暴光”征像的 12例患者 (7例骨转移癌和 5例代谢性疾病 )被纳入研究对象。所有病例都需有放射学和生物化学检查资料。99mTc(V)MDP全身显像 5～ 7d后 ,再行99mTc(V)DMSA全身显像表现为弥漫性骨摄取增加 ,另 1例99mTc(V)DMSA显像呈正常分布。结果 :所有代谢性疾病的患者99mTc(V)DMSA显像均有明显骨摄取增加。结论 :骨转移癌和代谢性骨疾病在常规骨显像图上呈“过度暴光”表现的患者99mTc(V)DMSA显像证实有骨摄取增高。因而在常规骨显像图上不能肯定或者怀疑有“过度暴光”征像者 ,99mTc(V)DMSA显像可能对评价“过度暴光”的存在与否起着重要作用。     

The value of 99mTc methylene diphosphonate bone scintigraphy in diagnosing relapsing polychondritis

Relapsing polychondritis （RP） is a recurrent disease involving cartilage mainly of the ear,nose, larynx, trachea, and bronchus. The typical manifestations of the disease in the ear and nose can be easily recognized, but the symptoms could be ignored or easily confused with those of other diseases when the cartilage of other sites is involved. Thus, it is necessary to develop a new technique for the diagnosis of this disease. Few cases of abnormal accumulation of radioactivity at cartilage shown by ^99mTc methylene diphosphonate （MDP） bone scintigraphy are described in the literature. In this report, we present 4 patients of whom 3 had positive findings on ^99mTc MDP bone scintigraphy with an assessment of ^99mTc MDP bone scintigraphy in the diagnosis of RP.     

~(99m)TcO_4~-联合~(99m)Tc-RBC对小儿下消化道出血的诊断

目的:评价99mTcO4-联合99mTc-RBC显像对小儿下消化道出血的诊断价值。方法:94例下消化道出血患者先进行99mTcO4-显像,阴性者再进行99mTc-RBC,显像资料均参照临床最终结果进行评价。结果:94例患者中99mTcO4-显像阳性者32例,其中29例证实为Meckel憩室,2例为小肠重复畸形,1例为空肠黏膜下血管畸形9。9mTcO4-显像阴性62例,进行99mTc-RBC显像阳性28例,经手术及胃、肠镜证实胃溃疡或肠息肉18例,空肠黏膜下血管畸形5例,其余5例及阴性病例治疗好转出院9。9mTcO4-联合99mTc-RBC显像诊断下消化道出血的灵敏度为82.1%,特异度为100%,准确度为91.9%。结论:99mTcO4-联合99mTc-RBC显像对小儿下消化道出血具有较高的定位诊断及鉴别诊断价值,且无创、简单易行、快速可靠。     

甲状腺球蛋白与甲状腺^99mTc04^-显像对甲状腺结节临床诊断的分析

目的：了解甲状腺球蛋白（Thyroglobulin,TG）与甲状腺^99mTc04^-显像对不同甲状腺结节的诊断价值。方法：用化学发光方法检测血清甲状腺球蛋白的含量;采用静脉注射^99mTc04^-185MBq15m in后行甲状腺前位静态显像,采集总计数300K。217例患者按术后病理诊断分为三组：甲状腺癌38例,甲状腺腺瘤33例,结节性甲状腺肿146例。结果：217例甲状腺患者甲状腺球蛋白阳性的有102例,总阳性率占47%,其中甲状腺癌占19.6%（20/102）,甲状腺腺瘤占25.5%（26/102）,结节性甲状腺肿占54.9%（56/102）;217例患者中131例做了甲状腺^99mTc04^-显像,冷结节为83例,其中甲状腺癌占31.3%（26/83）,甲状腺腺瘤占18.1%（15/83）,结节性甲状腺肿占50.6%（42/83）;凉结节为43例,其中甲状腺癌占27.9%（12/43）,甲状腺腺瘤占34.9%（15/43）,结节性甲状腺肿占37.2%（16/43）。结论：TG的阳性不能作为判断甲状腺结节良恶性的金指标,但TG的升高不可忽视,应引起重视;多种性质的甲状腺疾病均可表现为冷结节,其反映了甲状腺局部组织的无功能或功能低下,但不同的疾病其病理基础和改变不同,冷结节的定性诊断和鉴别诊断必须紧密联系病人的病史及血清甲状腺指标等其他相关检查。     

摄~(99m)锝率测定快速诊断甲状腺功能的临床应用研究

目的探讨摄99m锝率快速诊断甲状腺功能的临床应用价值。方法用核多功能仪分别对49例甲状腺功能亢进症未服药者(甲亢组)、13例甲亢服药者(甲亢服药组)、9例亚急性甲状腺炎者(亚甲炎组)以及18例正常健康体检者(对照组)进行甲状腺摄131碘率和摄99m锝率检测。结果甲亢组、甲亢服药组其甲状腺摄99m锝率在第30、60min时高于正常对照组,而亚甲炎组低于正常对照组。甲亢组摄131碘率在第2h、6h和24h高于正常对照组,甲亢服药组与对照组差别不大,而亚甲炎组低于正常对照组。结论摄99m锝率与摄131碘率均可反映甲状腺的功能状态,摄99m锝率检查可快速诊断,方便患者,是测定甲状腺功能的一种实用、简便又敏感的方法。     

新型心肌灌注显像剂99mTc-Q3的临床前药理研究

为了给临床应用研究提供依据 ,作者对新型心肌灌注显像剂 99m Tc- N,N′-亚乙基 -二 (乙酰丙酮亚胺 )二〔三 (3-甲氧基 - 1 -丙基 )膦〕(99m Tc- Q3)进行了临床前药理研究。其内容包括 :99m Tc- Q3在兔体内的血药清除动力学、血浆蛋白结合率、小鼠体内分布、家犬显像及异常毒性试验等。结果显示 :1 9m Tc- Q3的放化纯度 >99% ,室温下放置 6小时稳定 ;2兔血药清除动力学符合一次静脉给药的药代动力学二室模型 ;3小鼠体内分布显示 99m Tc- Q3在小鼠心肌摄取早 ,摄取值高 ,且放射性滞留时间长 ,血、肺及肝药物清除均快 ;4从家犬显像可见 ,99m Tc- Q3在肺中清除迅速 ,1小时后肺部放射性水平接近本底 ,1 5分钟时心肌影像已清晰可见 ,3小时后才逐渐消退 ;5 99m Tc- Q3的兔血浆蛋白结合率低 (7.1 3± 0 .42 % ) ;6小鼠对药物的耐受剂量为人的 5 0 0倍。上述结果表明 ,99m Tc- Q3的体外性质稳定 ,心肌摄取早 ,摄取率高 ,且放射性滞留时间长 ,血、肺及肝清除快 ,安全 ,具有临床研究价值     

放射性核素131I联合99mTc显像对甲状腺癌的诊断价值

目的:观察乳腺癌组织放射性核素131I及99mTc显像的差异,探讨131I联合99mTc显像对甲状腺癌的诊断价值.方法:34例疑诊为甲状腺癌的患者,应用放射性核素131I及99mTc显像,并同手术病理结果对照,观察甲状腺癌患者131I、99mTc显像特点.结果:34例疑诊为甲状腺癌患者,99mTc显像放射性充填28例,131为冷结g32例,温结节2例,病理证实甲状腺癌29例,27例99mTc显像放射性充填,28例表现为131I显像冷结节,1例肿瘤内坏死表现为131I显像冷结节,99mTc无充填.结论:131I联合99mTc显像,能够准确判断甲状腺结节的性质,有助于提高甲状腺癌的定性诊断率.