三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌细胞系SKOV3细胞侵袭转移能力及其对尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及尿激酶受体(uPAR)表达的影响。方法:采用0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 3种浓度的As2O3处理人卵巢癌SKOV3细胞,48h后收集细胞,采用Transwell检测细胞的侵袭转移能力,实时定量PCR及免疫细胞化学方法检测uPA、uPAR mRNA及蛋白表达的变化。结果:经不同浓度As2O3处理的细胞,穿过模拟基底膜的数目逐步减少,As2O3明显抑制SKOV3细胞的侵袭转移能力(P<0.05);细胞uPA及uPARmRNA及蛋白表达水平与对照组相比显著降低(P<0.05),其表达水平随着药物浓度的增加而降低。结论:As2O3可抑制卵巢癌细胞的侵袭转移能力,其机制可能与抑制uPA、uPAR的表达有关。     

uPA系统在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)及其受体(uPAR)和纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)在子宫内膜异位症中的表达和意义。方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)分别检测30例子宫内膜异位症患者的异位内膜及其相应的在位内膜(研究组)以及30例正常子宫内膜(对照组)中uPA、uPAR、PAI-1的表达。结果:异位内膜和在位内膜及对照组子宫内膜组织中,uPA的表达分别为0.198、0.112、0.079;uPAR的表达分别为0.162、0.119、0.076;PAI-1的表达分别为0.230、0.158、0.080;异位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1与在位内膜及对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);在位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1与对照组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。无论是增殖期还是分泌期,异位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1的表达均高于在位内膜及对照组(P<0.05,P<0.01),在位内膜中uPA、uPAR、PAI-1的表达高于对照组(P<0.05)。结论:异位和在位子宫内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1表达的变化可能与子宫内膜异位症的发生、发展有关。     

子宫内膜癌患者血清uPA和PAI-1的含量变化及临床意义

目的:探讨子宫内膜癌患者血清尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)含量的变化及其临床意义。方法:用ELISA法测定35例子宫内膜癌(内膜癌组)、18例子宫内膜增生(内膜增生组)和16例正常子宫内膜患者(正常对照组)血清uPA和PAI-1含量及计算两者的比值。结果:内膜癌组患者血清uPA和PAI-1含量及uPA/PAI-1值均显著高于内膜增生组及正常对照组,差异有极显著性(P均<0.01)。内膜增生组及正常对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。内膜癌组Ⅲ~Ⅳ期患者血清uPA和PAI-1含量与Ⅰ期相比差异有极显著性(P<0.01),Ⅲ~Ⅳ期患者血清uPA和PAI-1含量高于Ⅱ期(P<0.05),Ⅱ期患者血清uPA、PAI-1含量高于Ⅰ期(P<0.05)。内膜癌组患者血清uPA、PAI-1含量及uPA/PAI-1值随着手术病理分期及组织学分级的增高、肌层浸润深度的增加及淋巴结的转移而升高,差异有显著性(P均<0.05),而与患者病理类型无关(P>0.05)。结论:子宫内膜癌患者血清uPA和PAI-1含量及uPA/PAI-1值明显升高,并与其手术病理分期、浸润转移有关,提示其可能在内膜癌的发生、发展及浸润过程中起重要作用。     

卵巢恶性肿瘤组织中u-PA、t-PA mRNA的表达

目的 :检测尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u PA)和组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)两因子的mRNA在卵巢肿瘤组织中的表达水平 ,初步探讨肿瘤细胞纤溶活性的变化与相关基因间的联系。方法 :采用实时监测荧光定量RT PCR技术 ,检测并比较卵巢恶性肿瘤组织和良性囊肿组织 (卵巢巧克力囊肿 )中u PA及t PA基因的表达。结果 :u PAmRNA在恶性肿瘤组织中的表达较良性卵巢囊肿组织中的表达显著升高 (P <0 .0 5 )。良性囊肿组织所表达的t PAmRNA较恶性组织显著升高 (P <0 .0 5 )。在高、中、低 3种分化程度的恶性肿瘤中 ,u PAmRNA拷贝数随肿瘤分化程度的降低而增加 (P <0 .0 5 ) ,t PAmRNA拷贝数随其分化程度的降低而降低 (P <0 .0 5 )。结论 :恶性肿瘤组织的u PA基因在转录水平上调 ,可能与卵巢肿瘤的恶性进展相关。t PA基因在转录水平下调 ,t PA在mRNA水平的高表达可能是组织分化较好的特征。     

卵巢肿瘤患者血清尿激酶型纤溶酶原激活物及其抑制物1含量检测的临床意义

目的:探讨血清尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其抑制物1(PAI-1)含量的检测对卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断的临床意义.方法:采用酶联免疫吸附反应(ELISA)检测49例卵巢恶性肿瘤,49例卵巢良性肿瘤和49例正常健康妇女血清中uPA和PAI-I含量.并对其中22例卵巢上皮性癌患者手术治疗前后外周血uPA和PAI-1含量进行动态观察,分析其与临床病理因素及预后关系和作为卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断标志物的可能性.结果:①卵巢恶性肿瘤患者血清中uPA和PAI-1含量明显高于正常对照和良性肿瘤(P＜0.01).②卵巢恶性肿瘤患者术后血清uPA和PAI-1含量较术前有明显下降(P＜0.01).③低分化恶性肿瘤、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者术前血清uPA和PAI-1含量均明显高于高中分化者(P＜0.05,P＜0.01)、Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.05,P＜0.01)、无淋巴结转移者(P＜0.05,P＜0.01),大网膜转移者术前血清uPA含量高于无大网膜转移者(P＜0.05).④uPA或PAI-1阳性者和阴性者的中位生存时间相比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:卵巢恶性肿瘤患者血清uPA和PAI-1含量高低与其疾病进展相关,血清uPA和PAI-1含量测定有助于判断卵巢恶性肿瘤浸润转移.     

VEGF,β-连环素及uPA在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、β-连环素(β-catenin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在子宫内膜癌组织中的表达和临床意义.方法:用免疫组化SP法检测VEGF,β-catenin和uPA在49例子宫内膜癌和13例正常子宫内膜组织中的表达.结果:VEGF,β-catenin和uPA在子宫内膜癌中的阳性率分别为69.4%,61.2%和77.6%.VEGF的表达在子宫内膜癌不同的子宫肌层的浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.004),β-catenin的表达在子宫内膜癌不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.036,P=0.016);uPA表达在不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度间差异有统计学意义(P=0.044,P=0.038).三者在子宫内膜癌中的表达具有相关性.结论:VEGF,β-catenin及uPA与子宫内膜癌的发展侵袭相关.三者的异常表达共同作用促进子宫内膜癌的发展和侵袭.     

VEGF，β-连环素及uPA在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、β-连环素(β-catenin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在子宫内膜癌组织中的表达和临床意义。方法:用免疫组化SP法检测VEGF,β-catenin和uPA在49例子宫内膜癌和13例正常子宫内膜组织中的表达。结果:VEGF,β-catenin和uPA在子宫内膜癌中的阳性率分别为69.4%,61.2%和77.6%。VEGF的表达在子宫内膜癌不同的子宫肌层的浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.004),β-catenin的表达在子宫内膜癌不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.036,P=0.016);uPA表达在不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度间差异有统计学意义(P=0.044,P=0.038)。三者在子宫内膜癌中的表达具有相关性。结论:VEGF,β-catenin及uPA与子宫内膜癌的发展侵袭相关。三者的异常表达共同作用促进子宫内膜癌的发展和侵袭。     

子宫肌瘤及子宫平滑肌PA/PAI差异表达与腹腔镜子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤相关性的研究

目的:观察纤溶酶原激活因子及纤溶酶原激活物抑制因子(PA/PAI)在子宫肌瘤及子宫平滑肌组织及原代细胞中表达的差异,为腹腔镜子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤提供理论依据。方法:组织学:采用荧光定量PCR检测子宫肌瘤及子宫平滑肌组织中组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(u-PA)以及纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)的表达;用免疫组织化学方法检测3种蛋白的表达;细胞学:选取8例子宫肌瘤患者,分别培养子宫肌瘤及子宫平滑肌细胞并传代,应用实时定量PCR及免疫细胞检测u-PA及PAI-1。结果:组织学:(1)肌瘤组织中u-PA mRNA相对表达为(1.34±2.18)%,显著低于平滑肌组织的(2.84±2.97)%,差异有统计学意义(P0.05);t-PAmRNA在肌瘤组织中表达为(1.46±1.64)%也低于平滑肌组织的(1.65±3.08)%,但差异无统计学意义(P0.05)。PAI-1 mRNA在肌瘤组织中的表达为(2.67±1.82)%,显著高于平滑肌组织的(1.27±1.99)%,差异有统计学意义(P0.05);(2)肌瘤组织u-PA蛋白表达显著低于平滑肌组织,差异有统计学意义(P0.05);肌瘤组织PAI-1蛋白表达显著高于平滑肌组织(P0.01);两种组织t-PA蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。细胞学:(1)肌瘤细胞中u-PA mRNA相对表达为0.123±0.189,显著低于平滑肌细胞的0.331±0.306,差异有统计学意义(P0.05);PAI-1 mRNA在肌瘤细胞的表达为0.091±0.036,显著高于平滑肌细胞的0.016±0.020,差异有统计学意义(P0.05);(2)肌瘤细胞u-PA蛋白表达8.805±1.645显著低于平滑肌细胞的22.173±4.381,差异有显著的统计学意义(P0.05);肌瘤细胞PAI-1蛋白表达44.765±1.090显著高于平滑肌细胞35.928±5.351(P0.05)。结论:PA/PAI系统在子宫肌瘤及平滑肌细胞中表达存在差异,并与组织中的差异基本一致,提示该系统差异表达机制可以为腹腔镜子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤提供理论依据。     

uPA、uPAR与p38在子宫内膜癌组织的表达及意义

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)与其受体uPAR及丝裂原活化蛋白激酶p38在子宫内膜癌组织的表达及相关性,并结合临床病理特征分析其在子宫内膜癌浸润、侵袭转移过程中的作用。方法:采用免疫组织化学方法(PV-6000二步法)检测12例正常子宫内膜(对照组)、20例子宫内膜增生组织(内膜增生组)及50例子宫内膜癌组织(内膜癌组)中uPA、uPAR及p38的表达,并研究其相关性,分析探讨各因子与子宫内膜癌临床病理分期、组织学分级、组织学类型等的关系。结果:(1)内膜癌组患者uPA、uPAR、p38阳性表达率均显著高于内膜增生组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05);内膜增生组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);(2)内膜癌组患者uPA和uPAR、p38的表达与临床病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及有无淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05);而与患者病理类型不相关(P>0.05);(3)子宫内膜癌组织uPA与uPAR的表达呈正相关(r=0.389,P<0.05);uPA与p38的表达也呈明显正相关(r=0.353,P<0.05)。结论:uPA与uPAR在子宫内膜癌发生发展侵袭转移过程中起着协同作用,p38MAPK信号通路在此过程中可能参与调节uPA,促进癌细胞浸润转移,因此uPA、uPAR、p38可能成为推测子宫内膜癌预后的重要参考指标。     

孕激素对体外培养的在位和异位子宫内膜基质细胞尿激酶纤溶酶原激活物及其抑制物分泌的影响

子宫内膜异位症（内异症）是生育期妇女最常见的妇科疾病之一，其发病机制不清，多数观点认为是由于经血中所含的子宫内膜细胞逆流进入腹腔，种植于卵巢和腹膜，并在该处继续生长和侵袭所致。已有研究显示，尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）及其抑制物1（PAI-1）参与子宫内膜细胞增殖、转移及侵袭生长的过程。另有研究指出，孕激素对子宫内膜基质细胞分泌PAI-1和尿激酶纤溶酶原激活物受体（uPAR）有促进作用。本研究采用酶联免疫方法，     

血小板活化因子对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制

目的 探讨血小板活化因子(PAF)对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制,为卵巢癌的治疗提供新的靶点.方法 (1)以100 nmol/L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞,均以仅加入二甲基亚砜(DMSO)为对照,采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数.(2)以不同浓度(分别为0、0.1、1、10、100、1000 nmol/L)的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平;以100 nmol/L的PAF处理不同时间(分别为0、5min、10 min、30 min、1h及12 h)后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、CREB及p-CREB蛋白的表达水平,上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测.(3) OVCA429细胞在加入PAF( 100 nmol/L)的基础上,分别加入各蛋白的抑制剂,即PAF受体(PAFR)抑制剂-WEB2076(50 μmol/L)、p-p38 MAPK抑制剂-SB203580(10 μmol/L)、CREB结合蛋白(CBP)-CREB相互作用抑制剂-217505(25 μmol/L).实验分为6组:PAF组、PAF+WEB2076组、PAF+ SB203580组、PAF+ 217505组、PAF+ SB203580 +217505组及空白对照组,采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB、MMP-2蛋白的表达强度.结果 (1)体外侵袭实验显示,予PAF处理后,OVCA429细胞的穿膜细胞数[(118±23)个]明显多于其对照细胞[(36±8)个,P＜0.01],而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[(45±13)个]与其对照细胞[(53±9)个]比较无明显变化(P＞0.05).(2)不同浓度的PAF处理后,OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性(P＜0.01),0.1 nmol/L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平明显升高,至100 nmol/L时达高峰;而CREB蛋白的表达无明显变化.100nmoL/L的PAF处理不同时间后,OVCA429细胞中p38 MAPK、CREB蛋白表达无明显变化;而p-p38 MAPK、p-CREB蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),至处理10 min时达高峰,随后逐渐降低.(3)与空白对照组比较,PAF组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显增强.与PAF组比较,PAF+ WEB2076组、PAF+SB203580组、PAF+ SB203580+ 217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显减弱,但PAF+ SB203580+ 217505组与PAF+ WEB2076组及PAF+ SB203580组相比无明显差异;PAF +217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB蛋白的表达强度无明显变化,但其MMP-2蛋白的表达强度明显减弱.结论 PAF可促进卵巢浆液性癌OVCA429细胞的侵袭,这一作用可能是通过p38MAPK激活转录因子CREB,进一步上调MMP-2蛋白的表达而实现的.