5种方法筛查入境旱獭皮携带鼠疫菌的对比分析

目的采用5种检测方法筛查入境旱獭皮携带鼠疫情况,通过阳性检出率比较5种方法在旱獭皮携带鼠疫菌检测中的的敏感性,从而找出适合口岸入境旱獭皮鼠疫菌快速检测的方法,并根据检测结果对入境旱獭皮进行评估,提出检疫建议。方法细菌学培养、反向间接血球凝集试验（RIHA）、胶体金快速试验、上转磷光免疫层析试验（UPT）和聚合酶链反应（PCR）。结果细菌学培养和胶体金试验阳性率均为0,RIHA阳性率为0.74%,UPT阳性率为0.56%,PCR阳性率为0.87%;PCR、RIHA检测方法检出率较高,UPT检出率较低。结论在部分陈旧性旱獭皮中携带有鼠疫菌抗原成分,目前尚不能排除新鲜旱獭皮携带鼠疫菌的可能性,因此对入境旱獭皮需要实施必要的消毒、熏蒸等卫生检疫处理措施。     

2338份入境旱獭皮鼠疫菌反相间接血凝试验检测结果分析

目的了解内蒙古边境口岸2009年-2011年期间蒙古国入境旱獭皮染疫鼠疫菌的情况,从而指导口岸鼠疫疫情通过旱獭皮传播的防控方向。方法分析内蒙古二连浩特、阿日哈沙特、满都拉、甘其毛都等口岸的2 338份入境旱獭皮样品鼠疫菌反相血凝试验(RIHA)检测结果。结果内蒙古边境4个口岸的旱獭皮鼠疫菌检出阳性率分别为0.82%、0.65%、1.12%、0.86%,平均阳性率为0.86%;第二、三季度鼠疫菌阳性率分别为0.64%、0.94%。结论各口岸蒙古国入境旱獭皮存在染疫鼠疫菌的可能性,应该积极关注旱獭皮贸易及主要季节的管理监督工作。     

2012年理塘县人间鼠疫疫情分析

目的通过对2012年四川理塘县人间鼠疫疫情综合处置分析,为今后有效预防和控制鼠疫疫情积累经验。方法依据《国家鼠疫控制应急预案》、《人间鼠疫疫区处理标准及原则（GB15978-1995）》、《鼠疫诊断标准（WS279-2008）》和《四川省鼠疫应急预案》,对鼠疫患者与接触者进行隔离管理,并对隔离区和现场进行相关卫生学处置,鼠疫细菌培养、鼠疫间接血凝试验（IHA）、鼠疫反向血凝试验（RIHA）和鼠疫胶体金免疫层析法（GICA）,按照卫生部行业标准-《鼠疫诊断标准（WS279-2008）》执行。结果细菌检测患者体材料15份、细菌阳性5份,确诊病例为腺型继发败血型鼠疫。自毙旱獭1份分离鼠疫菌1株;IHA检测接触者人体血清23份、结果阴性;RIHA检测病人体材料15份、阳性7份,滴度1∶80~40960不等;鼠疫胶体金免疫层析法（GICA）抗原检测病人体材料15份、阳性7份;旱獭检材1份RIHA和GICA抗原检测均阳性。结论鼠疫疫情发生后,根据鼠疫传播特点,因地制宜,控制传染源、切断传播途径、保护易感者等效防措施,防止了鼠疫疫情扩散;同时证实理塘县为喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地。     

2008年德格鼠疫自然疫源地实验检测结果分析

目的研究德格县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地情况。方法对2008年在德格县捕获的喜马拉雅旱獭等材料进行细菌分离培养、胶体金免疫层析法(GICA)与鼠疫间接血凝(IHA)和反向血凝(RIHA)。结果细菌培养检测自毙喜马拉雅旱獭26份,分离鼠疫菌9株;IHA检测旱獭血清79份、阳性3份,牧犬血清29份、阳性3份;RIHA检测组织悬液30份、阳性9份均为旱獭;GICA检测旱獭血清79份、阳性2份,牧犬血清29份、阳性9份,藏系绵羊血清32份、阳性8份;GICA抗原检测组织悬液30份,阳性11份(旱獭10份、家猫1份)。结论从德格县喜马拉雅旱獭分离出鼠疫菌,说明四川省德格县2008年正在发生动物鼠疫流行。     

2009年德格鼠疫自然疫源地检测结果分析

目的研究德格县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫流行状况。方法对喜马拉雅旱獭等材料进行细菌分离培养、鼠疫间接血凝试验（IHA）和反间接向血凝试验（R IHA）。结果细菌培养检测自毙喜马拉雅旱獭18份,分离鼠疫菌10株,细菌培养检测活体喜马拉雅57份,分离菌株2株;IHA检测旱獭血清56份、阳性1份,牧犬血清24份、阳性2份;RIHA检测组织悬液18份,阳性9份均为旱獭。结论从喜马拉雅旱獭分离出鼠疫菌,说明四川省德格县2009年正在发生动物鼠疫流行。     

胶体金技术在鼠疫监测中的应用

目的 选择快速、敏感的鼠疫检测方法,为鼠疫防治提供科学依据.方法 胶体金免疫层析法(GICA)与鼠疫间接血凝(IHA)和反向血凝(RIHA)同步检测鼠疫抗体/抗原.结果 在四川省191份动物肝脾标本中,GICA检出阳性10份,RIHA阳性6份;检测动物血清标本417份,GICA与IHA均检出阳性13份.结论 GICA简便快速,适合现场鼠疫监测.     

3种方法检测鼠疫现场鼠类脏器的结果分析

[目的] 分析比较双重式PCR、细菌学分离和反向血凝试验检测鼠疫现场鼠类脏器的结果。[方法] 对52份鼠疫现场材料分别用3种方法进行检测。[结果] PCR检测阳性率42．3％为最高，反向血凝试验25．0％次之，细菌分离法9．6％最低。[结论] 提示对鼠疫或疑似鼠疫的脏器材料3种方法可联合使用，以提高检出率。     

2007-2010年德格县鼠疫相关标本检测结果分析

目的分析2007-2010年德格县鼠疫自然疫源地相关标本的检测结果,为四川省喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地防治提供科学依据。方法对鼠疫常规监测中的喜马拉雅旱獭等材料进行鼠疫菌分离培养、鼠疫间接血凝实验（IHA）和鼠疫反向血凝实验（RIHA）。结果 2007-2008年,细菌培养活体喜马拉雅旱獭223份,分离鼠疫菌2株,细菌培养自毙喜马拉雅旱獭汉89份,分离鼠疫菌27株;IHA检测喜马拉雅旱獭血清229份,阳性血清4份I,HA检测牧犬血清105份,阳性血清7份I,HA监测藏系绵羊血清117份,阳性血清0份;RIHA检测喜马拉雅旱獭脏器悬液89份,阳性32份,阳性率36.00%。结论 2007-2010年每年都分离出鼠疫菌,说明四川省德格县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地处于活跃期,应加强人间鼠疫监测,防止人间鼠疫发生。     

UDPE在鼠疫腐败材料检测中的应用

[目的]探讨UDPE在鼠疫腐败材料检测中的实际应用价值。[方法]用鼠疫EV菌感染小白鼠,未腐败前同时进行反向血凝试验(RIHA)及UDPE检测,确认感染;经实验室模拟自然腐败不同天数后,再次检测。[结果]经16d以下(含16d)腐败的脏器(肝、脾)RIHA和UDPE法检测均阳性,经50d腐败取骨髓材料,UDPE法检测阳性率比RIHA法高。[结论]UDPE法适用于鼠疫腐败材料的检测。     

PCR技术在口岸鼠疫监测中的应用研究

目的 应用PCR检验技术在口岸进行鼠疫检测,以提高鼠疫诊断的准确性和灵敏度,建立适合于口岸鼠疫检测的快速诊断方法,提高鼠疫检测水平.方法 首先,根据口岸地区样品的特点确定相应PCR检测方法,然后对样品进行PCR检测、鼠疫细菌学检验和反向间接血球凝集试验.结果 形成了一套适合于口岸地区鼠疫PCR检测的方法,灵敏度为7cfu的鼠疫菌.PCR反应体系中以dUTP代替DTTp,加入UDG酶防止产物污染,对特异性和敏感性无影响.对在口岸地区采集的鼠类标本111份、进口旱獭皮张500份进行了PCR检测,并分别进行鼠疫细菌学、反向间接血球凝集试验.PCR检测出3份阳性鼠类标本,与鼠疫细菌学检验结果一致:对进口旱獭皮张的PCR检测和反向间接血球凝集试验均为阴性.结论 经实验研究建立了一套完整的鼠疫PCR检测方法,本方法特异性和敏感性强、操作简便、快捷、成本较低,适合在口岸地区推广应用.     

广西西林鼠疫疫情发生及应对措施实施的研究

目的掌握动物鼠疫向人间传播规律,对鼠疫宿主动物(鼠类)、指示动物(犬类)进行日常监测,发现动物鼠疫早期活动迹象。方法采用间接血凝试验(IHA)、胶体金法检测动物血清中鼠疫F1抗体;病原学检测包括分离培养、反向间接血凝试验(RIHA)、胶体金检测动物脏器中鼠疫F1抗原。结果血清(鼠、人、犬)利用IHA法检测鼠疫F1抗体总阳性率为0.57%(1/175)、其中指示动物犬血清鼠疫F1抗体阳性率为2.1%(1/48)、而宿主动物鼠血清、人血清均为阴性;鼠脏器应用RIHA法、胶体金法检测鼠疫F1抗原阳性率分别为0.59%(1/168)、4.17%(7/168)、分离培养为阴性。结论广西西林县存在微弱的动物鼠疫流行。掌握指示动物、宿主动物阳性标本涉及的疫源地,能尽快对疫区进行有效的灭鼠灭蚤处理、切断鼠疫由动物向人间传播的途径、达到最终遏制鼠疫的目的 。     

西林县鼠疫流行的实验室检测结果分析

目的 用不同检测方法，探讨鼠疫情的快速诊断和鼠疫菌对不同抗菌药物的敏感性。方法 鼠脏器用1／20万龙胆紫胰酶消化液溶血琼脂培养基，溶血琼脂培养基进行鼠疫菌分离培养，用RIHA检测FI抗原，IHA测FI抗体。对菌株进行药物敏感试验。结果 从20只自死鼠分离出12株鼠疫菌，225只活鼠分离出2株鼠疫菌。15只死鼠RIHA阳性12份。7份死鼠同时进行RIHA和鼠疫菌分离培养，两种方法均为阳性，符合率100％。人血清检测247份，猫血清43份，狗血清80份，阳性分别为7份，5份，3份。鼠疫菌对26种抗菌药物中的22种敏感。结论 RIHA是动物间鼠疫最快速诊断方法，而IHA检测指示动物FI抗体是新疫点早期发现发现鼠疫疫情的线索之一。鼠疫菌对氟哌酸敏感优于其他抗菌药物。     

应用实时荧光定量PCR检测鼠类生境样本鼠疫耶尔森氏菌的研究

目的评价应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测鼠类生境样本中鼠疫耶尔森氏菌的可行性和有效性。方法优选、评价鼠类生境样本DNA提取方法,提取疫区鼠类洞穴土壤、粪便等生境样本中DNA,应用RT-PCR试剂盒检测鼠疫耶尔森氏菌特异性pla基因。结果柱式土壤DNAout法提取DNA效果最好,回收率是24.54%。联合应用柱式土壤DNAout法和RT-PCR法检测鼠类生境样本,鼠疫耶尔森氏菌pla基因的阳性率为3.44%(10/291)。结论应用柱式土壤DNAout法提取鼠类生境样本DNA,RT-PCR法可以检测到鼠类生境中鼠疫耶尔森氏菌pla基因。     

双抗原夹心ELISA检测鼠疫F1抗体技术的应用

目的研究双抗原夹心酶联免疫吸附试验（DAgS—EusA）检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫监测中的实用性。方法用DAgS—ELISA和间接血球凝集试验（IHA）微量法对比检测558份标本鼠疫F1抗体。结果IHA检测出阳性33份,DAgS—ELISA检出阳性31份,阳性符合率为90．91％,阴性符合率99．81％,总符合率99．28％,二者检出阳性率分别为5．91％和5．56％,差异无统计学意义（X^2=0．25,P=0．625）。2种方法测定27份鼠疫免疫血清均阳性,IHA微量法的敏感性高于DAgS—ELISA（t=3．023,P=0．006）。结论DAgS—ELISA检测鼠疫F1抗体敏感性低于IHA微量法,但特异性好,无前滞反应,可避免初筛漏检问题。     

复合探针荧光定量PCR法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的建立用复合探针荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法研究根据鼠疫耶尔森氏菌pla基因的核苷酸序列设计特异引物,通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究,建立了复合探针荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,用于鼠疫的筛选和诊断。结果该检测方法的特异性为100%,最低可检出10个拷贝的质粒DNA分子,可对1×101~1×106拷贝范围内的模板进行定量,最低可检测至1×102cfu/ml细菌。该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果Cv值均<5%。结论本研究建立的复合探针实时荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,可对鼠疫耶尔森氏菌进行快速检测、准确辨别和早期诊断,对鼠疫的早期快速诊断具有重要意义。     

鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测

目的 建立一种快速检测鼠疫耶尔森菌的方法.方法 以编码F1抗原的基因caf1为靶序列,人工合成基因序列,制备重组质粒作为鼠疫耶尔森菌检测的标准样品;用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术,针对pMT1质粒上的caf1基因设计引物和TaqMan荧光探针,进行实时FQ-PCR检验,评价该方法的准确性、敏感性及特异性.建立鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时FQ-PCR检测方法.结果 本研究成功构建了质粒pUC57-caf1,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.03×102～5.03×107拷贝数之间,具有较好的线性关系,相关系数1.0.实时FQ-PCR检验最低可检测出5.03×102拷贝数的重组质粒,灵敏度比普通PCR高100倍.特异性检测试验可选择性检测出鼠疫耶尔森菌,与其他细菌无交叉反应,结果与普通PCR一致.对同一浓度的重组质粒进行15个平行样品的重复性试验,Ct值标准差为0.28.结论 建立TaqMan探针实时FQ-PCR检测技术,能够快速、准确、特异的检测鼠疫耶尔森菌,为鼠疫监控、诊断提供技术支持.     

2017年云南省剑川县新发疫点动物间鼠疫疫情调查

目的 对2017年剑川县一起动物间鼠疫疫情进行调查。方法 以距离鹤庆县疫点马厂最近的大庆自然村为中心进行调查,搜集自毙鼠、用鼠笼和自制的油条为诱饵捕鼠,解剖采集鼠类组织和血清,并采集调查地区的狗血清。用间接血凝试验检测鼠疫F1抗体,对采集到的鼠组织和蚤样本进行鼠疫细菌学检测和鼠疫F1抗原检测,分离到的鼠疫菌进行噬菌体裂解试验鉴定。结果 共捕获鼠222只,捡获自毙鼠14只。齐氏姬鼠占38.14%（90/236）,大绒鼠占32.63%(77/236),黄胸鼠占12.71%(30/236),其它鼠种占16.53%(39/236)。鼠染蚤率为47.03%（111/236）。共获蚤345匹,其中棕形额蚤占54.78%（189/345）,特新蚤指名亚种占22.61%(78/345),方叶栉眼蚤占21.45%(74/345),其它蚤种占1.16%(4/345)。以上样本经细菌学检验、反向间接血凝试验,从一只自毙黄胸鼠分离到鼠疫菌1株,鼠疫F1抗原阳性。并从该自毙鼠捡获的棕形额蚤和一只捕获的齐氏姬鼠染带的特新蚤指名亚种中各分离到鼠疫菌1株。共采集狗血清52份,间接血凝试验检测鼠疫F1抗体阳性率57.69%（3/52）。采集鼠血清69份,鼠疫F1抗体阳性率72.46%（5/69）。结论 在剑川县大庆自然村确定了动物鼠疫流行,提示我们应进一步加强鼠疫监测及防控工作。     

基因和抗原检测技术在鼠疫监测中的应用与评价

目的 对鼠疫特异性基因和抗原检测新技术进行鼠疫监测现场的应用及评价。方法检测来自鼠疫自然疫源地的各类标本中鼠疫菌DNA和F1抗原,采用多重PCR、胶体金免疫技术和酶联免疫吸附试验,与鼠疫菌培养和反向间接血凝试验进行平行对照。结果 使用5种方法平行检测鼠类、蚤类标本1798份,共判定鼠疫标本132份,总阳性率为7．34%;与单纯鼠疫菌培养阳性相比（113份,阳性率为6．28%）,其中鼠疫菌培养与基因、抗原检测的总阳性率为7．34%,与单纯检菌阳性率比较检出率提高16．81%,符合率达到97．13%。结论 在鼠疫监测中增加基因与抗原联合检测,可以提高鼠疫的确诊率。