脊髓脑源性神经营养因子表达水平评估大鼠坐骨神经缺损修复程度

目的研究应用脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)表达程度评价大鼠坐骨神经缺损修复情况。方法取大鼠30只,随机分成正常组、自体神经组和硅胶管组,每组10只。自体神经组将剪断的10 mm神经缝合于原处,硅胶管组用10 mm医用硅胶管桥接神经缺损,正常组不手术。饲养4个月,于脊髓腰膨大处取材,切片,免疫荧光染色,荧光显微镜下观察。结果各组脊髓前角内均有BDNF表达,表现为点状红色荧光,均匀弥漫分布,胶质细胞内及周围均有分布,未染出神经元。光密度正常组>自体神经组>硅胶管组。结论应用脊髓脑源性神经营养因子表达程度可以评价周围神经损伤的修复情况。     

脑源性神经营养因子通过PI3K/Akt信号通路促进大鼠坐骨神经再生修复的研究

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)促进坐骨神经再生修复的作用及其机制。方法 选取10只SPF级雄性SD大鼠制备脱细胞神经移植物(ANA)。取5只大鼠设为正常(N)组。另取20只大鼠建立坐骨神经损伤模型，然后再随机分为模型(M)组、ANA组、LY294002(LY)组、溶剂对照(LYC)组。M组不再处理，其余3组均桥接ANA于损伤神经的两断端处，LY组和LYC组分别于桥接术后第2日腹腔注射LY294002或DMSO(2.0 ng·mL^-1·kg^-1)，连续注射4周。测定各组大鼠运动神经传导速度(MNCV)和胫前肌湿重比率，尼氏染色观察各组大鼠脊髓前角运动神经元的形态结构，免疫荧光染色和Western blotting法检测脊髓内BDNF和p-Akt1蛋白的表达。结果 与M组比较，ANA组大鼠MNCV和胫前肌湿重比率明显升高(P <0.05)；与ANA组比较，LY组MNCV和胫前肌湿重比率显著降低(P <0.05)。尼氏染色结果显示，各组脊髓内均可见蓝紫色呈斑块状的尼氏体，定量分析结果显示ANA组尼氏体数量明显多于M组(P &l...     

PLGA导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的观察多孔PLGA[poly（1actide-CO-glycolide）]导管修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法健康成年SD大鼠12只，分为自体神经移植组和PLGA导管组。两组动物分别人工造成右侧10mm的坐骨神经缺损后，PLGA导管组采用聚乳酸（polylactic acid，PLA）和聚羟基乙酸（polyglycolic acid，PGA）按75：25的比例制成多孔PLGA管修复坐骨神经缺损。自体神经移植组采用坐骨神经进行桥接。术后4、8、12周，分别行坐骨神经功能指数检测，术后12周行快蓝（Fast Blue）逆行示踪观察背根神经节（dorsal root ganglion，DRG）和脊髓神经元数目及行胫前肌湿质量测量；半薄和超薄切片观察再生纤维数目、直径及髓鞘厚度。结果坐骨神经功能指数比较，术后4周无显著性差异（P〉0．05），但8周和12周有显著性差异（P〈0．05），自体神经组优于PLGA管组。PLGA组DRG及脊髓中快蓝标记的神经元数目及胫前肌湿质量均不及自体神经组，差异有统计学意义（P〈0．05）；单位面积再生有髓纤维数目、直径和髓鞘厚度在PLGA管组与自体神经组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论单用PLGA导管对坐骨神经缺损有一定的修复效果，但不及自体神经。     

羊膜包裹的自体神经-肌复合移植物桥接大鼠坐骨神经缺损

目的： 探讨羊膜包裹的自体神经-变性骨骼肌复合移植物桥接修复大鼠坐骨神经缺损的可行性。方法：Wistar大鼠54只,分别以羊膜包裹的“神经-肌”并联桥（A组）、自体神经 (B组)和变性骨骼肌桥（C组）,桥接10 mm右侧坐骨神经缺损。术后行Fast Blue逆行示踪,神经丝（NF）免疫组织化学和胫前肌湿重、再生纤维数目、直径及髓鞘厚度等检测。结果： A和B组脊髓和背根节荧光标记细胞均多于C组; C组再生神经丝排列稀疏、紊乱,而A和B组稠密、整齐;胫前肌湿重、单位面积再生有髓纤维数目、直径和髓鞘厚度在A与B组比较,差异无显著性(P>0.05);与C组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论：羊膜包裹的自体神经-肌复合移植物能很好地桥接修复大鼠坐骨神经缺损。     

BDNF基因修饰神经干细胞移植后大鼠脊髓损伤移植处的基因表达变化

目的：了解脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）基因修饰神经干细胞移植到大鼠脊髓损伤处后的基因表达变化，为脊髓损伤修复提供基础研究资料。方法：大鼠随机分为4组：正常对照组，手术对照组，神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）移植组，BDNF－NSCs移植组，各组分4个时相点（7d、1个月、2个月、3个月），利用细胞移植、X-gal组化、免疫组化、原位杂交等方法，观察了移植处细胞的标记基因（LacZ）表达和BDNF、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经丝－200（NF－200）的表达。结果：大鼠脊髓损伤移植处细胞中，有标记基因阳性细胞，BDNF强烈表达，尤其是BDNF－NSCs移植组的移植后1周和1个月时。各组各时相点均有GFAP和NF－200免疫反应阳性细胞和纤维。结论：BDNF基因修饰神经干细胞能在脊髓损伤移植处存活，强烈表达BDNF，BDNF基因修饰神经干细胞可以作为脊髓损伤修复的移植材料。     

冻干去细胞异种神经和类许旺细胞共移植修复外周神经缺损的实验研究

目的 研究冻干化学去细胞异种神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 48只成年雌性DA大鼠分别用4种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损:冻干化学去细胞异种神经与类许旺细胞共移植组、冻干化学去细胞异种神经移植组、化学去细胞异种神经移植组、异种神经移植组.术后4周、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果.结果 术后24周A组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率优于B、C、D组(P＜0.05);组织学检测发现,术后24周A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主.结论 种植类许旺细胞的冻干化学去细胞异种神经能有效的修复大鼠周围神经缺损.     

肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的OECs修复大鼠脊髓损伤

目的探讨自体肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的嗅神经鞘细胞（OECs）修复大鼠脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）。方法SD大鼠72只,经T11、T12间隙平面切取2mm的半侧脊髓,制成半切伤模型。动物分为A、B、C三组,每组24只。A组：将自体肋间神经纤维损伤脊髓近端前角灰质与远端前索白质桥接连接,伤侧L1、L2、L3、L4脊神经节与近端后索白质及远端后角灰质与近端后索白质桥接连接,并植入NGF、BDNF基因修饰的OECs;B组：同上述方法移植肋间神经,不植入OECs;C组：单纯脊髓损伤,脊髓半切缺损处填充明胶海棉,术后4、8周对各组动物进行神经功能检查（斜板实验检查,BBB评分）,感觉诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检测以及组织学检查。结果术后4周时,A、B组和动物神经功能,斜板试验,BBB评分及SFP、MEP检测结果均优于C组,8周时,A组动物神经功能,斜板试验,BBB评分,SEP、MEP检测结果均优于B组和C组,镜下见移植组织存活,充填于缺损处,部分脊髓组织融合,结论肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的OECs对SCI的修复有一定的疗效。     

同种异体神经与自体神经瘤联合修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨用优化法处理后的脱细胞同种异体神经和自体神经瘤组成的联合体修复大鼠坐骨神经缺损的效果. 方法 30只SD大鼠随机分为2组(每组15只):A组(自体神经瘤模型组),行同种异体神经与自体神经瘤联合移植;B组(坐骨神经缺损模型组),做自体神经移植.将30只成年Wistar大鼠作为神经供体,取其单侧坐骨神经,制备为脱细胞同种异体神经.在术后的8周、16周进行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查. 结果 两组模型制备成功后,术后8周时大鼠均出现肢体躲避反应;术后16周时均有大量神经纤维通过移植体,两组再生神经的纤维数量、直径及髓鞘比较,差异无统计学意义;术后8周电生理检测发现A组再生神经的传导速度明显慢于B组(P<0.05),术后16周两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后16周A组和B组坐骨神经功能指数比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 同种异体神经与自体神经瘤组成的联合体能修复周围神经缺损,恢复神经的传导功能,有效地促进神经的再生,此联合体是一种良好的自体神经移植替代材料.     

自体神经-变性骨骼肌并联复合桥接物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的:研究自体神经-变性骨骼肌并联复合桥修复大鼠坐骨神经缺损的效果及可行性。方法:成年Wistar大鼠54只,雌雄不限,随机分为3组。各组动物均切除一段坐骨神经形成10mm缺损,A组(n=18)行缺损远端神经原位束间分离后,切取10mm一束,与经过热变性处理的自体骨骼肌条“并联”形成复合桥桥接缺损坐骨神经;B组(n=18)行自体神经桥接;C组(n=18)行单纯变性骨骼肌桥接。术后24周,对各组胫前肌湿重恢复率,桥体再生神经纤维数目、直径和髓鞘厚度进行图像测量分析。结果:胫前肌湿重恢复率、桥体单位面积再生有髓神经纤维数量(密度)、纤维直径和髓鞘厚度统计学分析显示:A、B两组与C组相比有统计学差异(P<0.05),A、B两组再生效果优于C组;A、B组的胫前肌恢复率和单位面积再生有髓神经纤维数目比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:损伤神经远端束间分离自体神经与变性骨骼肌“并联”复合桥修复大鼠坐骨神经缺损效果接近自体神经,优于变性骨骼肌桥,有深入研究的必要。     

大鼠坐骨神经损伤后脑源性神经营养因子对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43 表达的影响

目的探讨大鼠坐骨神经损伤后内源性脑源性神经营养因子(BDNF)对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43表达的调节。方法大鼠坐骨神经压榨损伤后,腹腔注射BDNF抗体中和内源性BDNF,对照组注射生理盐水,动物存活7d或14d,用Western blot与RT-PCR观察GAP-43在脊髓腰骶膨大部前角的表达。结果与对照组相比,注射BDNF抗体后坐骨神经损伤侧脊髓前角内GAP-43蛋白与其mRNA的表达明显下降,上述改变在统计学上均有显著意义(P<0.01)。结论大鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角内GAP-43表达的调节。     

针刺对大鼠坐骨神经损伤修复的影响

为探讨针刺对大鼠坐骨神经损伤修复的作用机理．取66只SD大鼠．用钳夹法制成大鼠坐骨神经损伤模型，针刺委中、环跳穴．2、4、6周观测坐骨神经功能恢复率、电生理恢复率、脊神经节、脊髓前角细胞辣根过氧化物酶标细胞计数等指标．结果表明针刺对促进大鼠坐骨神经损伤修复的作用明显。     

银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子蛋白表达的影响

目的研究银杏酮酯对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子（nerve growth factor,NGF）蛋白表达的影响。方法SD大鼠78只,随机分成正常组、损伤对照组与实验组,后两组切断右侧坐骨神经并缝合。实验组给予银杏酮酯每日200mg／kg溶于1mL生理盐水中灌胃,损伤对照组给予生理盐水1mL灌胃,正常组不做处理。分别于术后1、3、7、14、21及28d取吻合口远段的神经、相应节段的脊神经节及脊髓,应用免疫组织化学和图像分析的方法研究所取组织中NGF的表达并进行定量分析。结果实验组坐骨神经、脊神经节及脊髓中NGF蛋白免疫阳性区域面积和平均灰度值在术后7、14、21和28d明显高于对照组（P〈0．05,P〈0．01）。结论大鼠坐骨神经损伤后用银杏酮酯治疗,在早期可促使坐骨神经及相应节段脊神经节和脊髓组织中的NGF蛋白表达增加。     

周围神经损伤后脊髓神经元退变与组织型纤溶酶原激活物及其抑制物表达的关系研究

目的：探讨周围神经损伤后脊髓神经元退变与组织型纤溶酶原激活物（tPA）及其抑制物1（PAI-1）、神经丝氨酸蛋白酶抑制剂（NSP）表达的关系。方法：雄性SD大鼠（56只）随机分为实验组（50只）和对照组（6只。无手术）。实验组行坐骨神经离断术（SCNT）,于术后1、4、7、14和21 d取伤侧脊髓L4~6节段,观察前角神经元形态学改变及tPA、PAI-1和NSP表达。结果：与对照组比,实验组L4~6tPA、NSP表达增加,NSP在1 d内达峰值后逐渐下调,tPA水平则在7 d升达最高峰,此时前角外侧核神经元存活率开始减少（P〈0.01）。术后21 d,tPA仍未恢复正常水平（P〈0.05）,脊髓前角运动神经元存活率61.6%。两组脊髓均未测到PAI-1表达。结论：SCNT后L4~6前角神经元退变,可能与损伤刺激脊髓灰质内神经元和小胶质细胞合成、释放tPA增加有关,同时,损伤也促使tPA抑制物NSP表达上调,后者可能发挥神经保护作用。     

坐骨神经阻滞对后足切割大鼠脊髓中脑源性神经营养因子表达的影响

目的探究坐骨神经阻滞能否影响大鼠后足切割后脊髓背角中脑源性神经营养因子(BDNF)表达的升高。方法雄性SD大鼠32只,体重150～250g,随机分为两组,各16只。坐骨神经阻滞组大鼠先行坐骨神经阻滞后后足切割手术,全麻组在全麻下行后足切割手术。两组均于术后1h、6h、1d、3d各取4只大鼠处死,检测腰段脊髓背角中BDNF的水平。结果后足切割后1h、6h、1d,全麻组大鼠切割侧腰段脊髓背角中BDNF水平显著高于对侧(P<0.05),坐骨神经阻滞组大鼠切割侧腰段脊髓背角中BDNF水平未见明显变化(P>0.05),两组大鼠切割后1h、6h、1d切割侧腰段脊髓背角中BDNF水平间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论坐骨神经阻滞能显著抑制大鼠后足切割引起的腰段脊髓背角中BDNF的表达升高。     

化学萃取同种异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的 :通过化学萃取同种异体神经 ,去除髓鞘和雪旺细胞 ,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损 ,研究神经再生效果。方法 :正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管 ,桥接鼠坐骨神经 2 0mm缺损。实验分 3组 :无细胞基膜管移植组 (A组 )、自体神经移植组 (B组 )和异体神经移植组 (C组 )。术后进行肌电图、组织形态学及图像分析仪检查。结果 :A组再生神经有大量轴突通过移植体 ,术后 2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组 (P <0 .0 5 ) ,3个月时差异无显著性。髓鞘厚度在术后 3个月时亦低于B组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。轴突直径及数目两组无差异。结论 :这种无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移 ,是一种良好的神经移植替代材料。     

大鼠坐骨神经切断后谷氨酰胺合成酶在脊髓后角内的表达变化

目的观察坐骨神经切断后不同时间点脊髓后角内谷氨酰胺合成酶（GS）的表达，探讨GS对神经元的保护机制。方法48只SD大鼠随机分为实验组（n=40）和对照组（n=8），其中实验组右侧坐骨神经切断，大鼠手术后分别存活1、3、7、14和21d（每时间点8只大鼠）。免疫组织化学方法检测脊髓后角内GS的表达变化。结果GS主要表达于神经胶质细胞胞体内。坐骨神经切断后GS表达开始增多，7d时GS表达最显著，之后GS表达下降，实验组各时间点与对照组相比具有统计学意义（P〈0．05），而实验组双侧后角相比无统计学意义（P〉0．05）。结论坐骨神经切断后脊髓后角内GS表达升高，这可能是GS对神经元保护作用的反应。     

大鼠脊髓损伤BDNF基因修饰神经干细胞移植后HRP逆行示踪

目的：检测大鼠脊髓损伤脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰神经干细胞移植后，神经纤维的再通及后肢功能恢复情况。方法：大鼠L4脊髓全横断后，在横断处立即移植BDNF基因修饰神经干细胞，分四个时相点（1周，1、2、3个月）进行辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪，并观察损伤移植处的形态学变化及大鼠后肢运动功能恢复情况。结果：损伤移植处脊髓的形态学明显好转；损伤移植处上段脊髓中，移植1个月组有HRP阳性细胞，以后两组逐渐增多；移植组大鼠后肢运动功能明显恢复。结论：大鼠脊髓损伤BDNF基因修饰神经干细胞移植后，在损伤移植处有HRP阳性神经元和神经纤维，大鼠后肢运动功能明显恢复，提示BDNF基因修饰神经干细胞有修复大鼠脊髓损伤的作用。     

神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达和蛋白合成的实验研究

目的：研究周围神经损伤与再生过程中生长相关蛋白（Growth-associated protein,GAP-43)mRNA表达和蛋白质合成的变化规律。方法：建立大鼠坐骨神经中段钳夹损伤模型，用原位杂交和免疫组化技术观察大鼠腰髓和背根神经节的GAP－43mRNA表达和蛋白质合成变化。结果：大鼠坐骨神经损伤后，腰髓腹角运动神经元和感觉神经元GAP－43mRNA表达和蛋白质合成增强。结论：周围神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达显著增强，神经再生完成后表达减弱，表明GAP－43在神经再生过程中起重要作用。