葡聚糖磁性纳米颗粒在基因转染中的应用

目的:评价葡聚糖磁性纳米颗粒作为基因载体在体外转染中的可行性。方法:用紫外分光光度计及琼脂糖凝胶电泳法分析检测葡聚糖磁性纳米颗粒结合DNA的能力,再将葡聚糖磁性纳米颗粒作为基因载体连接绿色荧光蛋白pEGFP-C1质粒报告基因在体外转染人膀胱肿瘤细胞BIU87和人树突状细胞,并在转染后72 h采用MTT比色法测定这种载体对细胞增殖和功能的影响以了解其细胞毒性。结果:在葡聚糖磁性纳米颗粒表面修饰多聚赖氨酸后,以静电引力作用结合DNA,其DNA结合率可达到75.6%,修饰多聚赖氨酸的葡聚糖磁性纳米颗粒可作为基因载体将报告基因转染至各类型细胞内并成功表达,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光细胞。与相同条件下脂质体为对照,转染后的细胞增殖活性及功能略优于对照组,有效地证明了葡聚糖磁性纳米颗粒的细胞毒性稍低于脂质体的细胞毒性。结论:葡聚糖磁性纳米颗粒可作为有效的基因载体之一。     

聚乙烯亚胺包裹的磁性纳米颗粒用于基因载体的实验研究

目的：探讨聚乙烯亚胺(PEI)包裹的氧化铁磁性纳米颗粒中polyMAG-1000用于体外基因转导的可行性。方法：用扫描电镜观测polyMAG-1000的粒径；观察在不同的酸碱度下，将polyMAG-1000与pEGFP-N1质粒DNA按不同的比例(v：w)混合后，观察．polyMAG-1000结合和保护DNA的能力，并进行体外转染实验。结果：polyMAG-1000的直径约100nm，颗粒均匀，无论在酸性、中性和碱性条件下均能与质粒DNA稳定地结合；polyMAG-1000能把pEGFP质粒DNA导入肿瘤细胞中，进而表达绿色荧光蛋白。当polyMAG-1000与DNA比例为1：1时转染效率最高；加与不加磁场转染效率比较，差异具有显著性意义。结论：PEI包裹的氧化铁磁性纳米颗粒可用于体外基因转导，把PEI等基因导入载体与磁性纳米颗粒结合而形成的新型基因导入载体具有良好的应用前景。     

聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体制备及体外实验研究

目的 制备聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体并研究其理化性质的表征参数和体外转染效率.方法 通过化学还原法制备聚乙烯亚胺修饰的纳米金基因载体,用绿色荧光蛋白质粒(pAcGFP-N1)做报告基因,纳米基因载体可通过静电吸附的方式结合质粒DNA.用紫外分光光度计检测其吸收光谱,用透射电镜观察其形态特征,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),1％琼脂糖凝胶电泳检测该基因载体与质粒DNA的结合稳定性,CCK-8实验检测聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体及DNA-纳米金复合物对HEK293细胞的细胞毒性作用,通过荧光显微镜观察聚乙烯亚胺纳米基因载体介导pAcGFP-N1在体外培养的HEK293细胞中的表达,并分析其转染效率.结果 聚乙烯亚胺还原氯金酸可以得到带正电荷的纳米颗粒,呈单分散球形分布,其粒径为(12.3 ±3.3)nm.在pH =7.2时,Zeta电位为+(29.7±5.1)mV.1％琼脂糖凝胶电泳结果表明,当纳米金/质粒DNA≥0.5时,质粒DNA可完全结合到纳米金表面.体外转染实验表明,聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体能介导pAcGFP-N1转染HEK293细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白,其转染效率可达25％.结论 聚乙烯亚胺修饰纳米金是一种新型非病毒基因载体,具有转染效率高、对细胞毒性小等优势.     

免疫磁性纳米颗粒热疗治疗艾滋病初探

目的 探讨将HIV多抗与磁性纳米微粒偶联制备免疫磁性纳米微粒,用于HIV的靶向性加热治疗,并对其在交变磁场下的升温能力进行检测.方法 采用共沉淀法制备四氧化三铁纳米材料,选择氨基硅烷偶联剂对磁性纳米微粒进行修饰,通过一定浓度戊二醛活化将抗HIV多抗交联制备免疫磁性纳米微粒,并对其在交变磁场下的升温能力进行检测.结果 磁性纳米颗粒经氨基硅烷修饰后平均粒径为30 nm左右.戊二醛活化的磁性纳米微粒与抗HIV多抗具有较高的结合率,可在体外稳定保存,具有良好的交变磁场下升温能力.结论 抗HIV多抗免疫磁性纳米微粒的结合率、稳定性和交变磁场下升温能力可满足进一步的HIV靶向性加热治疗.     

聚乙二醇修饰的可控温磁性纳米颗粒制备与表征研究

目的磁性纳米颗粒(MNPs)是当前重要的肿瘤诊断与治疗载体平台,可在交变磁场作用下产生热效应,从而杀死肿瘤细胞。调节MNPs的居里温度,可提高其在肿瘤磁感应热疗中的安全性。方法用水热法合成可控温的Zn_0.54Co_0.46Cr_0.6Fe_1.4O₄,用相对分子质量为20 000的聚乙二醇(PEG)修饰包被。用透射电子显微镜(TEM)观测MNPs的大小、形貌、分散性等,X射线衍射仪(XRD)表征其晶体结构,振动样品磁强仪(VSM)测试磁性特性。用CCK-8检测修饰和未修饰的MNPs对正常人肝外胆管上皮细胞(HEBEpiC)的毒性作用。结果TEM结果显示,PEG修饰前Zn_0.54Co_0.46Cr_0.6Fe_1.4O₄存在明显的聚集现象;PEG修饰后,Zn_0.54Co_0.46Cr_0.6Fe_1.4...     

聚乙烯亚胺介导水通道蛋白5基因表达载体体外转染的研究

目的 探讨新型阳离子载体聚乙烯亚胺(PEI)介导水通道蛋白5(AQP5)体外转染人肺腺癌细胞系A549的效果。方法 将含绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1,以lipofectamine2000为阳性对照,流式细胞仪检测转染效率,根据不同N/P比(5、10、15、20、25)与PEI组成转染复合物转染A549细胞,优化最适 N/P比;将AQP5全长cDNA插入pEGFP-N1载体,构建pEGFP-N-AQP5,转染A549细胞,采用PCR与Western blot法检测被转染细胞中AQP5的表达。结果 流式细胞仪检测GFP发光率,N/P比为15时PEI/pEGFP-N1复合物转染效率最高,可达到89.72%,与脂质体91.44%相近;应用PEI与lipofectamine2000将 pEGFP-N-AQP5成功转染A549,与空白组比较,AQP5的基因及蛋白表达均增高。结论 新型阳离子载体PEI 可成功介导pEGFP-N-AQP5转染A549细胞。     

基于聚赖氨酸和聚乙二醇星形嵌段共聚物的基因载体研究

目的：合成以聚乙烯亚胺（PEI）为内核、聚赖氨酸（PLL）为内层、聚乙二醇（PEG）为外围的系列星形三嵌段共聚物（PEI-g-（PLL-b-PEG））,研究其作为基因载体的性能。方法：用超支化PEI表面氨基引发赖氨酸酸酐的开环聚合,再将活化的PEG以不同接枝率修饰得PEI-g-（PLL-b-PEG）。通过体外细胞实验测定系列共聚物对293T细胞毒性和转染效率。结果：成功合成PEI-g-（PLL-b-PEG）系列共聚物,在共聚物外围接入少量PEG时,不仅可降低细胞毒性,还可有效提高转染效率。结论：PEI-g-（PLL-b-PEG）可用作潜在的非病毒基因载体。     

新型低相对分子质量聚乙烯亚胺耦联载体(PEI-Bu)对大鼠原代骨髓间充质干细胞的基因转染效率及毒性评价

目的 构建新型低相对分子质量聚乙烯亚胺(PEI)耦联载体,评估其对原代大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的细胞毒性及转染效率。方法 利用可降解的氨基甲酸酯化学键耦联相对分子质量为800的PEI 制备低相对分子质量的PEI （PEI 800）衍生物纳米非病毒载体,命名为PEI-Bu;进一步对PEI-Bu压缩DNA的能力、体外降解效率及对原代BMSCs的细胞毒性和基因转染效率进行生物学评价。结果 PEI-Bu能有效压缩质粒DNA并形成稳定的复合物,所形成的复合物粒径约50 nm。与实验室常用的已商品化的相对分子质量为25 000 的PEI （PEI 25 000）相比,PEI-Bu对大鼠原代BMSCs的细胞毒性较小,且基因转染效率更高。结论 作为一种新型的非病毒纳米载体,PEI-Bu能有效转染BMSCs,且安全性较高,具有进一步研发的价值。     

磁性白蛋白纳米球作为基因载体的研究

目的 制备载基因的磁性白蛋白纳米球,评估磁性白蛋白纳米球作为基因载体的可行性及体外的磁靶向性。方法 采用去溶剂化-交联法制备载基因磁性白蛋白纳米球,分别运用透射电镜（TEM）、动态光散射分析（DLS）对其形态、粒径进行表征。应用绿色荧光蛋白基因系统（pGFP）,观察载基因磁性白蛋白纳米球体外释放基因速率的情况及转染细胞的情况。运用普鲁士蓝染色法观察磁性纳米球的体外磁靶向性。结果 载基因磁性纳米球在TEM检测下为球形,大小均匀,并且在载基因磁性纳米球中明显地观察到在电子密度较低的白蛋白纳米球中包裹着电子密度较高的磁性纳米粒。DLS显示载基因免疫磁性纳米球的水合粒径约为209nm。体外动态释放基因速率,计算其累积释放率显示,该材料13h释放基因为95.25%,曲线平缓;转染实验结果显示载基因磁性纳米球能够有效转染SMMC-7721细胞,且转染效率高于载基因纳米球。普鲁士蓝染色实验结果显示磁靶向组细胞内的铁颗粒明显多于非靶向组。结论 成功制备了载基因磁性白蛋白纳米球,具有缓释基因的作用,并且能高效转染人肝癌细胞SMMC-7721。磁性白蛋白纳米球基因载体具有体外靶向性,有望作为一种潜在的靶向基因载体应用到生物医学领域。     

聚乙烯亚胺介导的报告基因在体外转染效率的研究

目的　探讨阳离子聚合体载体PEI2 5 (分枝状 ,2 5KDa)在体外的转染效率。方法　PEI2 5和LipofectamineTM2 0 0 0作为转染试剂 ,瞬时转染CHO细胞系 ,通过检测荧光素酶来评估PEI和LipofectamineTM2 0 0 0的转染效率。结果　当N P =5 ,6 ,7时 ,PEI2 5的转染效率与LipofectamineTM2 0 0 0相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　经济实用的PEI适用于体外的瞬时转染。