乙型肝炎病毒宫内感染相关因素的探讨

目的探讨孕妇乙型肝炎病毒感染状态及胎盘感染与宫内感染关系，进而分析乙型肝炎病毒宫内感染的危险因素。方法采用荧光定量PCR技术及酶联免疫吸附试验，对92例HBsAg阳性孕妇及其新生儿的外周血行HBV DNA及乙肝血清标志物检测。采用免疫组化S-P法，对92例HBsAg阳性孕妇分娩时胎盘组织行HBsAg及HBcAg的检测。结果（1）HBeAg阳性孕妇与HBeAg阴性孕妇HBV宫内感染率分别为21．2％（11／52）和0（0／40），差异有显著性（P〈0．01）；HBV DNA阳性孕妇与HBV DNA阴性孕妇HBV宫内感染率分别为18．64％（11／59）和0（0／33），差异有显著性（P〈0．025）。（2）92例HBsAg阳性孕妇的胎盘中共检测出43例HBsAg和（或）HBcAg阳性，阳性率由胎盘的母面至胎儿面有逐渐下降的趋势。由胎盘屏障的蜕膜细胞（DC）、滋养层细胞（TC）、绒毛间质细胞（VSC）和绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）感染而致的宫内传播的相对危险度比值比（0R）分别为4．53、7．15、9．33和24．33，0R值从胎盘的母面至胎儿面有逐渐上升的趋势。结论新生儿宫内感染与孕妇乙肝感染状态有关，HBV宫内感染以经胎盘感染为主，感染胎儿的途径可能是通过细胞转移方式实现的，胎盘屏障对胎儿有一定的保护作用。HBeAg阳性、HBV DNA阳性及绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）感染是新生儿宫内HBV感染的危险因素。     

HBV-经胎盘感染胎儿的机理研究

目的 研究HBV经胎盘感染胎儿机理。方法 应用PCR技术检测59例HBsAg( )孕妇血清、胎盘及新生儿脐血清中HBV DNA。采用免疫组化ABC染色法检测胎盘中HBsAg及HBcAg。结果 新生儿宫内感染率为45．8％(27／59)；胎盘HBV DNA( )者宫内感染率达78．8％(26／33)，均显著高于其HBV DNA(-)者。免疫组化染色HBsAg阳性率为81．4％(48／59)，HBcAg阳性率达61．6％(36／59)。HBsAg及HBcAg在胎盘中分布由蜕膜细胞、滋养层细胞、绒毛间质细胞，绒毛毛细血管内皮细胞依次递减，羊膜上皮细胞中可检出HBsAg及HBcAg。结论 HBV经胎盘感染胎儿机理可能是HBV经母血和／或细胞直接蔓延感染胎儿，或HBV经母血和／或细胞蔓延至羊膜，经羊水感染胎儿。     

HBV-DNA的含量与宫内感染的关联性

目的：探讨孕妇血清中HBV—DNA含量与胎儿宫内感染及造成宫内感染的相关因素．方法：用ELISA方法筛选HBsAg阳性孕妇228例,并用定量PCR技术检测HBsAg阳性孕妇血清以及脐血中HBV—DNA．新生儿根据有无HBV感染分为胎儿感染组及非感染组（对照组）,调查宫内感染的相关因素,结果：HBsAg,HBeAg、抗HBc阳性孕妇的新生儿脐血HBV—DNA捡出率21％（14／68）;HBsAg．抗HBe,抗HBc阳性者为1．7％（2／117）;HBsAg和HBeAg双阳性者为20％（3／15）;HBsAg和抗HBc阳性者为11％（2／19）;HBsAg单一抗原阳性者脐血中未捡出HBV—DNA．胎儿总感染率为9,2％（21／228）．胎儿宫内感染率随孕妇血清中HBV—DNA含量增加而升高,宫内感染的危险性越大．胎儿感染组与非感染组在多种临床相关因素中先兆早产孕妇胎儿感染者多于非感染组（P〈0．05）．结论：孕妇不同的感染状态影响宫内HBV感染率,HBeAg与HBV—DNA高滴度是胎儿宫内感染的高危因素．孕妇出现先兆早产使胎儿的感染率增加．     

太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染状况的研究

目的 了解目前太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染状况。方法 ELISA法检测新生儿外周血HBsAg；巢式聚合酶链反应(nPCR)检测新生儿外周血HBV DNA；选择性聚合酶链反应(sPCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)HBV DNA，其中任一项阳性即判为发生新生儿HBV宫内感染。结果 151例HBsAg阳性孕妇所生新生儿，ELISA法检测5例HBsAg阳性，nPCR检测29例HBV DNA阳性，sPCR检测36例PBMC HBV DNA阳性，新生儿任一项阳性者57例，合计宫内感染率37．75％(57／151)。结论 检测PBMC内HBV DNA是对外周血HBV DNA的一个重要补充，太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV宫内感染率37．75％，与国内外同类研究结果相比，处于低水平。     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒在母婴垂直传播中的作用

目的：探讨HBsAg、HBeAg阳性孕妇外周血单个核细胞(PBMC)内乙型肝炎病毒(HBV)DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用。方法：对HBsAg／HBeAg双阳性共67对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯PBMC后，经抽提、纯化后的DNA进入PCR扩增反应，引物为HBVC区基因序列。结果：67名HBsAg及HBeAg双阳性的孕妇中有35例(52．2％)PBMC中HBV DNA阳性，25例孕妇在血清及PBMC中均发现HBV DNA。67名新生儿有22例感染HBV DNA，感染率32．8％，其中血清HBV DNA阳性者10例，PBMC HBV DNA阳性者19例，二者均阳性者7例。结论：母亲PBMC内HBV DNA阳性可能导致新生儿PBMC中HBV DNA阳性，PBMC内的HBV DNA可能是HBV母婴垂直传播的一条重要途径，同时，HBsAg及HBeAg阳性母亲若血清HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染HBV的危险性。     

孕母乙肝标志物及HBV—DNA含量与新生儿宫内感染关系的探讨

目的探讨HBsAg阳性孕妇血清乙肝标志物及HBV—DNA含量与其新生儿宫内感染的关系。方法选择HBsAg阳性的孕妇1237例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测其分娩前血清乙肝标志物含量,荧光定量聚合酶链反应法（PCR）定量检测HBV—DNA,并同时检测其新生儿血清乙肝标志物及HBV—DNA水平。结果（1）在1237名孕妇中,其新生儿发生宫内感染者39例,感染率为3．15％（39／1237）,其中PIBeAg阳性孕妇其新生儿宫内感染率为11．4％（37／324）,较HbeAg阴性孕妇的新生儿宫内感染率[0．2％（2／913）]明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。血清HBV高复制状态（HBV—DNA≥10^6copy·ml^-1）的孕妇其新生儿宫内感染率为23．4％（33／141）,较血清HBV低复制状态（HBV—DNA〈10^6copy·ml^-1）孕妇的新生儿宫内感染率[1．9％（6／316）]明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）发生宫内感染的39例新生儿血清HBV—DNA水平显著低于其母血HBV—DNA水平,但两组数值之间无相关（r=-0．03,tr=0．18,P=0．86）。结论孕妇分娩前HBeAg阳性和HBV—DNA高滴度是发生新生儿HBV宫内感染的危险因素,但孕妇分娩前血清HBV—DNA滴度与新生儿血清HBV—DNA滴度之间无相关性。     

HBV宫内感染的危险因素及与HBV DNA的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的危险因素及HBV DNA含量对HBV宫内感染的影响。方法 分别用酶联免疫吸附法及荧光定量PCR法检测230例HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血HBV血清标志物和HBV DNA含量,发生宫内感染的为病例组,余为对照组,运用非条件Logistic回归模型对宫内感染的危险因素进行分析。结果 （1）230例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿中,有22例发生宫内感染。其中HBsAg阳性7例,HBV DNA阳性18例,HBsAg和HBV DNA均阳性的3例,总的HBV宫内感染率为9．6％（22／230）。（2）非条件Logistic多元回归分析表明,仅HBV DNA浓度分级有统计学意义,OR为1．57（1．12．2．21）。（3）230例HBsAg阳性孕妇中HBV DNA阳性者119例,发生宫内感染18例,感染率为15．1％（18／119）,并且当孕妇血清HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,HBV宫内感染率显著增加,（χ^2=-7．92,P〈0．05）。结论 孕妇血清HBV DNA浓度分级是HBV宫内感染的危险因素,并且当HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,其宫内感染率显著增加。     

乙型肝炎病毒宫内传播的分型

目的：研究乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）分型在乙肝病毒宫内传播的特点。方法：对广州市三家医院的135例HBsAg孕产妇及其139例新生儿外周血及部分婴儿随访标本，巢式PCR扩增HBV S区基因部分片段，限制性核酸内切酶酶切PCR产物，比较酶切片段长度多态性（RFLP），以确定HBV基因型。直接测序与Genebank相应序列比较。结果：7例新生儿发生HBV的宫内传播，阳性率为7／139（5．0％），PCR－RFLP方法检测到B，C型各3／7例，D基因型1／7例。宫内传播过程中母婴HBV的基因型保持一致。S基因直接分型与上述结果一致。该7组母婴均无乙肝临床症状与体征。结论：广州地区母婴宫内传播HBV以C，B基因型为主，宫内传播过程及免疫压力下HBV－DNA发生碱基突变，但未发生在限制性内切酶的酶切位点上，尚不能由HBV基因分型对HBV感染儿的预后进行推测。     

孕母乙肝标志物及HBV-DNA含量与新生儿宫内感染关系的探讨

目的探讨HBsAg阳性孕妇血清乙肝标志物及HBV—DNA含量与其新生儿宫内感染的关系。方法选择HBsAg阳性的孕妇1237例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测其分娩前血清乙肝标志物含量,荧光定量聚合酶链反应法（PCR）定量检测HBV—DNA,并同时检测其新生儿血清乙肝标志物及HBV—DNA水平。结果（1）在1237名孕妇中,其新生儿发生宫内感染者39例,感染率为3．15％（39／1237）,其中PIBeAg阳性孕妇其新生儿宫内感染率为11．4％（37／324）,较HbeAg阴性孕妇的新生儿宫内感染率[0．2％（2／913）]明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。血清HBV高复制状态（HBV—DNA≥10^6copy·ml^-1）的孕妇其新生儿宫内感染率为23．4％（33／141）,较血清HBV低复制状态（HBV—DNA〈10^6copy·ml^-1）孕妇的新生儿宫内感染率[1．9％（6／316）]明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）发生宫内感染的39例新生儿血清HBV—DNA水平显著低于其母血HBV—DNA水平,但两组数值之间无相关（r=-0．03,tr=0．18,P=0．86）。结论孕妇分娩前HBeAg阳性和HBV—DNA高滴度是发生新生儿HBV宫内感染的危险因素,但孕妇分娩前血清HBV—DNA滴度与新生儿血清HBV—DNA滴度之间无相关性。     

HBsAg与HBeAg阴性孕妇乙肝垂直传播的临床观察

目的观察HBsAg与HBeAg阴性孕妇的新生儿乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染状况。方法选择HBsAg和HBeAg阴性、其他HBV血清标志物阳性孕妇的新生儿作为观察组,同期HBV血清标志物全部阴性孕妇的新生儿作为对照组。采用套式PCR方法检测两组新生儿血清及外周血单个核细胞（PBMC）中的HBV—DNA。结果观察组32例新生儿中,血清HBV—DNA阳性4例,阳性率12．5％（4／32）,PBMC中HBV—DNA阳性8例,阳性率25％（8／32）,其中血清与PBMC均阳性1例,宫内感染率34．3％（11／32）。对照组21例新生儿血清HBV—DNA和PBMC中HBV—DNA均为阴性。结论HBsAg及HBeAg阴性而其他HBV血清标志物阳性的孕妇也可能发生HBV的垂直传播。     

Relationship between heterogeneity of HBV preS/S gene and intrauterine transmission

Objective: To study the relationship of the mutation of HBV preS/S gene in HBsAg carrying pregnant women and intrauterine transmission. Methods: Polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify HBV preS/S gene from sera of 8 HBsAg carrying pregnant women, 4 women's neonates infected with HBV, and the other's neonates non-infected with. The PCR products were cloned and 5 clones were chosen from every woman for DNA sequencing. Results: Heterogeneity of HBV preS/S gene in HBsAg carrying pregnant women having intrauterine transmission was much higher than that from having not intrauterine transmission, and the divergence rate of nucleotide sequences also higher strikingly. Conclusion: High heterogeneity of HBV preS/S gene of HBsAg positive pregnant women may be relative to high rate of intrauterine transmis-     

HBV相关肝细胞癌患者HBV前S/S基因变异的分析

目的:研究肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者体内乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)前S/S基因变异特点.方法:分别对9例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性肝癌患者及其家族中11例HBsAg阳性者血清乙肝病毒前S/S基因PCR扩增克隆.测序并进行结构分析.找出基因变异活跃位点,再对两组资料作统计学分析.结果:除对照组中1例未能扩增出前S/S基因,仅能扩增出S基因,其它样本均扩增出前S/S基因片段.所有HBV株均为B或C基因型和adrq 或adw2血清型.肝癌患者来源的HBV在包膜蛋白抗体结合区点突变发生率较高,但与对照组相比,没有统计学差异(P＞0.05).肝癌组4例发生HBV前S区删除变异,具有特异性.与对照组(0/10)相比,有统计学差异(P＜0.05).结论:HBV前S/S区点突变可能与肝癌发生没有相关性,而前S区删除变异可能与肝癌发生有密切联系,应当对HBV感染者进行前S区基因变异监测.     

乙型肝炎病毒变异在母婴传播中的初步研究

目的 探索肝细胞癌相关乙肝病毒变异在母婴传播和婴儿慢性感染中变化规律,为肝细胞癌的防控提供理论支撑。方法 将413名HBV表面抗原(HBsAg)阳性产妇及其新生儿纳入本研究。应用定量PCR检测产妇外周血和新生儿脐带血HBV DNA,应用套式PCR和克隆测序方法测定前S区和核心启动子区的HCC相关HBV变异。出生经标准HBV免疫,7个月后对104名婴儿HBV感染情况进行成功随访,对外周血HBV DNA阳性婴儿测定HCC相关HBV变异发生情况。结果 在413名新生儿中,41名(9.9%)新生儿HBV DNA水平≥10₃ copies/mL。随访到104名婴儿中,4名(占3.8%)HBV DNA≥10₃ copies/mL。与未发生HBV跨胎盘传播的产妇相比,发生HBV跨胎盘传播者外周血HBV核心启动子变异没有增加,但在C2基因亚型的前S区中,T2898G/C, C3000T, C3116T, T31C和T52C变异显著增加HBV跨胎盘传播的风险。HBV基因组中前S区和核心启动子区的HCC相关变异的频率在产妇外周血和新生儿脐带血中无明显差别,但是在母婴传播的7月龄HBV DNA阳性婴儿中,这些变异几乎不存在。结论 HBV C2基因亚型的前S区某些变异可能影响HBV跨胎盘传播,但是HCC相关HBV变异准种并没有造成婴儿慢性感染的优势,促进HBV致癌的变异体是在漫长的慢性感染过程中逐渐被选择出来的。     

反义基因转移表达及抗乙型肝炎病毒的作用

目的观察重组逆转录病毒载体－包装细胞系统介导反义基因转移表达和抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用。方法将ＨＢＶａｙｗ１４０２－２９０６片段和２８３９－１９８６片段反向插入重组逆转录病毒载体质粒，分别转染ＰＡ３１７包装细胞，分别感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞和２．２．１５细胞。结果转导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞内有ＨＢＶ反义ＲＮＡ转录表达。ＨＢＶ反义基因重组逆转录病毒感染２．２．１５细胞后第３天，表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）表达量减少，感染后第５天，ＨＢＶ抗原表达抑制率达高峰。ｐｒｅＳ／Ｓ片段反义基因转移后，ＨＢｓＡｇ表达抑制率为７１％，ＨＢｅＡｇ抑制率为２３％；ｐｒｅＣ／Ｃ片段反义基因转移后，ＨＢ－ｓＡｇ表达抑制率为２３％，ＨＢｅＡｇ抑制率为５９％。结论逆转录病毒载体－包装细胞系统能够介导ＨＢＶ反义基因在真核细胞内转移和表达，并对ＨＢＶ复制和表达均有抑制作用。     

胎儿乙型肝炎病毒感染的研究——胎盘组织HBVDNA、HBcAg的检测及其意义

用ELISA、RIA及DNA斑点杂交法检测30例HBsAg阳性母亲及7例HBsAg阴性但血清其他HBV感染指标阳性母亲的新生儿脐血Anti-HBclgM,HBV-DNA等指标,分别发现4例(4/30)及2例(2/7)胎儿HBV感染病例。1年后的随访结果表明,部分胎儿HBV感染病例对出生后的疫苗注射有反应,而部分则无。用DNA原位杂交及PAP法检测HBsAg阳性产妇胎盘组织HBV-DNA、HBcAg,阳性率分册为20/29,19/30。表明胎盘组织受HBV感染,可能导致胎儿HBV感染,但非胎儿感染HBV的唯一途径,其他途径如经生殖细胞传播也可能存在。HBsAg阴性但其他血清HBV感染指标阳性者及血清HBV感染指标全阴产妇的胎盘组织中也可检出HBV-DNA、HBcAg,表明组织HBV感染指标较敏感,以及HBV相关变型病毒感染等因素存在的可能性。     

妊娠晚期应用拉米夫定阻断血清高HBV-DNA水平孕妇乙肝病毒宫内感染的疗效观察

目的探讨妊娠晚期应用拉米夫定抗病毒治疗血清高HBV-DNA水平孕妇阻断乙肝病毒宫内感染的疗效及孕妇血清HBV-DNA水平对新生儿宫内感染的影响。方法选择拟于我院进行生产的60例血清高HBV-DNA水平的乙肝病毒感染妊娠晚期孕妇,经知情同意后作为治疗组,孕检均检测孕妇静脉血清HBV-DNA〉1×106copies/mL,自孕28周始口服拉米夫定100 mg,1次/d,至分娩后1个月停服;按孕妇血清HBV-DNA水平选择80例作为观察组,不作抗病毒治疗干预。两组新生儿出生时采脐血检测HBsAg和HBV-DNA阳性率。结果治疗组新生儿脐血HBsAg和HBV-DNA阳性率明显低于观察组新生儿（P〈0.05）;观察组新生儿宫内感染率与乙型肝炎感染孕妇血清HBV-DNA含量呈正相关。结论妊娠晚期应用拉米夫定抗病毒治疗可有效阻断血清高HBV-DNA水平孕妇乙肝病毒宫内感染,拉米夫定对母体血清HBV-DNA水平的强效抑制可能是阻断感染的主要原因。     

母婴传播中慢性乙型重型肝炎病毒相关变异的研究

目的 研究乙型肝炎病毒基因(HBV DNA)preS区内与慢性乙型重型肝炎(chronic severe hepatitis B, CSHB)相关变异在母婴传播过程中的进化趋势。方法收集879例HBsAg阳性孕妇外周血,孕妇分娩后将其新生儿脐带血、完成乙肝疫苗注射后的7月龄婴儿外周血亦纳入队列。通过基因分型和系统发育分析鉴定HBV的母婴传播情况,运用单克隆测序方式检测母子体内HBV preS区中CSHB相关突变情况。结果 HBV B/C基因型中CSHB相关变异C2875T、C2980T、G2988A、C3067T、C3097A、T25G、A76C、A79G、T100C、C102T、C106A、T109G、C135T、T147C、A148G,可通过宫内感染途径传播给新生儿;C2基因型中变异A3097C/G、G132C在HBV宫内感染中存在明显优势(P<0.05;P<0.05)。B2基因型中,变异C3057G、T3060C、C3097A、T3169A、A20G、A76C、C129T,能够通过MCTC途径由母亲传播给7月龄婴儿;C2基因型中以上变异突变率低。结论 在母婴传播过程中,HBV B2基因型中CSHB相关变异较多;婴儿完成接种免疫后,野生型HBV在母婴传播中具有感染优势,进化具有保守性。     

用荧光探针定量多聚酶链反应技术检测乙肝病毒宫内传播的研究

目的探讨孕妇血中乙肝病毒(HBV)DNA数量与宫内传播的关系.方法用荧光探针定量多聚酶链反应(FQ-PCR)方法,检测76例乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性孕妇血清中HBV DNA数量.26例HBV DNA阳性者肌注乙肝免疫球蛋白,新生儿出生后24h内取末梢静脉血检测HBV DNA.结果孕妇血中HBV DNA阳性者其宫内感染率为33.3%,宫内感染与孕妇血中HBV DNA数量有关,HBV DNA数量高易导致胎儿宫内感染,乙肝免疫球蛋白免疫注射后可降低HBV宫内感染率.结论孕妇血中HBV DNA数量高易导致胎儿宫内感染,孕期应用乙肝免疫球蛋白可减少宫内传播.     

HBsAg阳性孕妇血清中乙肝病毒前S/S基因的相似株现象

目的：探讨HBsAg阳性孕妇体内HBV病毒前S/S基因变异的状况。方法：应用全长PCR技术从4例表面抗原阳性孕妇血清中扩增出HBV全长基因,将其克隆于pUC19载体,每例随机筛选5个阳性克隆,对其前S/S区进行序列分析。结果：4例患各克隆间均存在碱基的差异,此类患体内HBV株同源性较差。结论：HBsAg阳性孕妇体内HBV株呈“相似株”分布。