用流式细胞计检测表皮生长因子对肝细胞DNA合成的刺激作用

用流式细胞术和单克隆抗溴脱氧脲嘧啶抗体标记 DNA 技术检测了表皮生长因子、胰高血糖素和胰岛素对大鼠初代培养肝细胞 DNA 合成的刺激作用。结果表明表皮生长因子对肝细胞DNA 合成具有明显的增强作用,并且这种作用可以被胰岛素进一步加强。当表皮生长因子、胰岛素和胰高血糖素三者联合使用时,肝细胞 DNA 合成显著增强。提示表皮生长因子,特别是它与胰岛素和胰高血糖素联合使用可以明显刺激肝细胞的再生。     

肝再生刺激因子、胰岛素和胰高血糖素对体外肝细胞增殖的作用

本研究采用体外细胞培养分组对比法检测肝再生刺激因子（HSS），胰岛素或／胰高血糖素对大鼠原代培养肝细胞和人肝肿瘤细胞株HEPg2DNA合成（肝细胞再生）的作用。结果发现，HSS无论对大鼠肝细胞成人肝肿瘤细胞均具有较强的刺激DNA合成的作用（与对照组相比分别增加1．14和1．05倍，P＜0．01）。而对人纤维母细胞则无促进DNA的合成的作用。低浓度胰岛素或／和胰高血糖素对肝细胞DNA合成无作用。高浓度胰岛素（10^-5M)具有中等度促进肝再生的作用（与对照组相比增加40％，P＜0．05）。两者联合应用（G＋1）似无协同作用。据此，我们认为：HSS是一种潜在的促进肝再生的有效因素，可能具有临床实用价值。体外应用优于现在临床广泛应用的胰岛素加胰高血糖素（G＋I）疗法。     

肝细胞再生剌激因子与肝损伤的修复

哺乳类动物的肝脏再生能力很强,当肝脏遭到各种理化或生物因素受损后,肝细胞的再生受到许多体液因子的调控.一种是具有抑制作用的因子,如抑肝素(hepaticchalone,HC)、血小板源性生长抑制因子(Platelet derived growth inhibitor,PDGI)、转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)等.另一种是具有刺激作用的因子,包括外源性刺激因子和肝源性刺激因子.前者如胰岛素、胰高血糖素、表皮生长因子(epi-dermal growth factor,EGF)等.胰岛素、胰高血糖素由胰岛分泌后,经门静脉回流进肝,对肝再生和营养起着重要作用.Starzl等也将其称为门静脉营养因子(portal hepatotroph-     

细胞因子

1.与肝脏再生相关的细胞因子:现发现在肝再生时,成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGFα)、和肝细胞生长因子(HGF)对肝细胞的DNA合成可能起生理上的诱导因子作用。它们通过自身分泌和旁分泌机制起作用。转化生长因子β使EGF和TG     

胰高血糖素与2型糖尿病及其肾病的关系

胰高血糖素是调控糖代谢平衡的重要激素之一,血清胰高血糖素的异常升高与2型糖尿病的起始和进展相关.糖尿病肾病是糖尿病常见的微血管并发症之一,胰高血糖素及其受体信号系统可能在它的发生、发展中发挥重要作用.其可能机制是通过cAMP、一氧化氮和前列腺素等诱导肾小球高滤过,通过增加DNA和蛋白质的合成诱导系膜细胞的增生、肥大,并可与肾素-血管紧张素系统(RAS)相互作用,最终引起肾小球损伤.胰高血糖素及其受体可作为治疗2型糖尿病及其肾脏并发症的靶点.     

胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成的作用

目的：观察胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成的作用影响。方法：将大鼠胆道结扎４８ｈ后,用胶原酶灌流后分离肝细胞,加入胰岛血糖素温育,用分光光度计按标准酶学方法检测葡萄糖,乙酰乙酸和三羟基丁酸。结果;在基础或最大刺激条件下,加胰高血糖素结扎组,假手术葡萄糖异生均明显大于未加胰高血糖素组,加胰高血糖素对结扎组和假手术组的酮体异生无促进作用。     

胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成的作用

目的：观察胰高血糖素对胆道梗阻大鼠肝脏葡萄糖和酮体合成作用的影响。方法：将大鼠胆道结扎４８ ｈ后,用胶原酶灌流后分离肝细胞,加入胰高血糖素温育,用分光光度计按标准酶学方法检测葡萄糖、乙酰乙酸和三羟基丁酸。结果：在基础或最大刺激条件下,加胰高血糖素结扎组、假手术组葡萄糖异生均明显大于未加胰高血糖素组（Ｐ＜ ０．０５）,加胰高血糖素对结扎组和假手术组的酮体异生无促进作用。结论：胰高血糖素对胆道梗阻４８ ｈ大鼠肝细胞的糖异生存在有意义的刺激作用,对酮体异生则无刺激作用     

吡格列酮对胰岛α细胞胰岛素抵抗的影响

目的 研究高脂饲养大鼠胰岛α细胞的分泌功能和胰岛素信号转导分子基因的表达变化以及吡格列酮干预的影响.方法 雄性SD大鼠分为正常饲养组(NC)、高脂饲养组(HF)、高脂+吡格列酮组(HP).喂养20周后检测空腹血胰岛素(FINS)、胰高血糖素、游离脂肪酸(FFA)水平;正常血糖高胰岛素钳夹试验评价外周胰岛素抵抗程度;胰岛表面灌注检测高糖状态胰高血糖素的动态分泌变化;同时各组大鼠随机人组8只给予大剂量链脲佐菌素去β细胞处理,得到去β细胞正常组(NC-B)、高脂组(HF-B),高脂+吡格列酮干预组(HP-B).实时定量PCR方法比较3组去β细胞大鼠α细胞胰高血糖素、胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物2(IRS-2)、磷脂酰肌醇3激酶(P13K)的mRNA表达.结果 (1)HF组葡萄糖输注率(GIR)明显低于NC组,血FINS、胰高血糖素、FFA均显著高于NC组(P＜0.05或P＜0.01);而HP组以上各项指标较HF组均明显改善.(2)胰岛表面灌注HF组基础胰高血糖素的分泌高于NC组(P＜0.01),16.7 mmol/L葡萄糖灌注后NC组胰岛胰高血糖素的分泌明显下降,HF组胰岛的胰高血糖素分泌灌注后未受高糖抑制,HP组逆转了这种变化.(3)与NC-B组相比,HF-B组α细胞胰高血糖素mRNA的表达增高34.2%,IRS-2及P13K mRNA分别降低28.5%、21.3%(均P＜0.01),而IRS-1仅降低7-1%(P＞0.05).HP-B组较HF-B组胰高血糖素、IRS-2及P13K mRNA分别增加40.6%、57.2%、60.6%.结论 高脂饲料诱导的肥胖大鼠胰岛α细胞胰高血糖素分泌功能亢进并存在胰岛素信号转导分子表达降低,二者均与血FFA水平升高有关,而吡格列酮能逆转这种变化.     

绞股蓝总皂甙对原代培养大鼠肝细胞四氯化碳损伤的影响

采用四氯化碳(CCl_4)制成原代培养大鼠肝细胞损伤模型,观察了绞股蓝总皂甙(GPS)对肝细胞损伤的保护作用。结果表明,预先用 GPS 处理肝细胞 lhr,可明显减轻 CCl_4引起的肝细胞 DNA 合成速率降低,减少肝细胞 ALT 逸出,抑制培养上清液中 MDA 含量的升高和 SOD/MDA 比值的缩小,并与 GPS 浓度呈依赖关系。提示 GPS 能减轻 CCl_4对离体培养的大鼠肝细胞损伤,保护肝细胞 DNA 合成,其作用机理与抗脂质过氧化有关。     

γ-干扰素对四氯化碳诱导的大鼠损伤肝细胞DNA和胶原合成及Ⅳ型胶原03链mRNA的影响

目的在四氯化碳诱导的大鼠原代肝细胞损伤模型的基础上,探讨γ-干扰素对损伤肝细胞DNA和胶原合成以及Ⅳ型胶原α3链mRNA的影响.方法利用3H-胸腺嘧啶核苷和3H-脯氨酸掺入量测定方法、逆转录PCR技术,观察γ-干扰素对四氯化碳诱导的大鼠损伤肝细胞DNA和胶原合成及Ⅳ型胶原α3链mRNA的影响.结果①低浓度的INF-γ对损伤肝细胞DNA的合成就有明显的抑制作用,5,10,25,50,100μ/mL浓度组抑制率分别达到19.89%,30.92%,38.24%,52.23%,65.54%,呈浓度依赖性.②低浓度的INF-γ对损伤肝细胞胶原的合成也有明显的抑制作用,5,10,25,50,100μ/mL浓度组抑制率分别达到21.16%,35.71%,47.45%,61.40%,71.36%,呈浓度依赖性.③逆转录PCR发现从浓度(5～100)μ/mL的INF-y作用损伤肝细胞Ⅳ型胶原α3链其mRNA含量逐渐减少.结论γ-干扰素抗肝纤维化作用的机制之一是能抑制损伤肝细胞的增殖及胶原合成.     

γ-干扰素对四氯化碳诱导的大鼠损伤肝细胞DNA和胶原合成及Ⅳ型胶原a3链mRNA的影响

目的在四氯化碳诱导的大鼠原代肝细胞损伤模型的基础上,探讨γ-干扰素对损伤肝细胞DNA和胶原合成以及Ⅳ型胶原α3链mRNA的影响.方法利用3H-胸腺嘧啶核苷和3H-脯氨酸掺入量测定方法、逆转录PCR技术,观察γ-干扰素对四氯化碳诱导的大鼠损伤肝细胞DNA和胶原合成及Ⅳ型胶原α3链mRNA的影响.结果①低浓度的INF-γ对损伤肝细胞DNA的合成就有明显的抑制作用,5,10,25,50,100μ/mL浓度组抑制率分别达到19.89%,30.92%,38.24%,52.23%,65.54%,呈浓度依赖性.②低浓度的INF-γ对损伤肝细胞胶原的合成也有明显的抑制作用,5,10,25,50,100μ/mL浓度组抑制率分别达到21.16%,35.71%,47.45%,61.40%,71.36%,呈浓度依赖性.③逆转录PCR发现从浓度(5～100)μ/mL的INF-y作用损伤肝细胞Ⅳ型胶原α3链其mRNA含量逐渐减少.结论γ-干扰素抗肝纤维化作用的机制之一是能抑制损伤肝细胞的增殖及胶原合成.     

胰高血糖素的研究现状

众所周知,1923年有学者在制备天然胰岛素的实验中,偶然发现在胰岛内有一种血糖因子,当时即被命名为胰高血糖素。1953年得知其氨基酸组成序列。1967年已明确其合成部位(胰岛的α-细胞)及其合成过程,胰高血糖素是由29个氨基酸所组成的单肽链,分子量为3485。在许多动物种属,胰高血糖素的一级结构已明确。其前身物质叫Glec-entin,分子量为1165。也有实验证明胰高血糖素的Ⅱ级结构。1981年Lund等     

胰高血糖素样肽-1与糖尿病心肌病变

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的生物学作用主要是促进胰岛素的分泌和合成、抑制胰高血糖素的分泌、增加胰岛β细胞的数量并抑制其凋亡等.研究显示,GLP-1有独特的心肌保护效应,如:抗心肌细胞凋亡、减轻微小血管病变、改善心肌能量代谢紊乱等.因此,进一步对GLP-1及其心肌保护作用机制做深入研究,可为治疗2型糖尿病及其心肌病...     

胰高血糖素的生物化学、生理学和病理生理学

生物化学:1923年Murlin等曾在狗胰腺的粗制胰岛素制剂中发现一种高血糖因子,他们称之为胰高血糖素”。1967年合成了胰高血糖素。它是一种单链肽,含有29个氨基酸根,分子量为3485。 胰高血糖在朗罕氏胰岛的A细胞中合成。业已确定,一种分子量18000的蛋白质为前胰高血糖素。对胰高血糖素分子羟基端的抗血清常用以测定胰高血糖素。     

壶腹周围局部应用胰高血糖素(1—21)肽使奥狄氏括约肌松弛

胰高血糖素(1—21)肽是一种胰高血糖素类似物。当胃肠外给药时,已显示出它对奥狄氏括约肌的松弛作用。作者研究了局部应用胰高血糖素(1—21)肽对人体奥狄氏括约肌运动的作用。给五位志愿者行内镜下逆行胰胆管造影术,用压力测量计测出奥狄氏括约肌的压力     

肝硬化大鼠胰岛α、β细胞的功能变化

目的探讨肝硬化大鼠胰岛α、β细胞功能及其与循环血液中胰岛素及胰高血糖素水平变化的关系。方法对采用ＣＣＬ４制作的肝硬化鼠和正常鼠的胰岛进行分离和纯化，并对其体外生物学活性进行检测。结果肝硬化鼠循环血液中胰岛素及胰高血糖素水平明显高于正常对照组鼠（Ｐ＜０．０１）；其分离纯化的胰岛经体外培养４８小时及在含糖基质中孵育２小时后释放胰岛素的量明显低于正常鼠（Ｐ＜０．０ｌ）；而胰高血糖素释放量明显高于正常鼠（Ｐ＜０．０１）。结论①肝硬化时循环血液中胰岛素及胰高血糖素水平增加；②胰岛α细胞分泌功能增加可能有助于肝硬化高胰高血糖素血症的发生；③肝硬化时，虽循环血液中胰岛素水平增加，但β细胞分泌功能低于正常。     

胰高血糖素与糖尿病及其临床问题

胰高血糖素（Glucagon，Gg）是由胰岛α细胞分泌的由29个氨基酸组成的直链多肽。分泌后进入血循环，经门静脉到达肝脏，在门静脉中含量最高，一般可高达300～500pg／ml。肝脏是胰高血糖素作用的主要靶器官。当与受体结合后，与鸟嘌呤核苷酸结合调节蛋白Gs相互作用，使Gs的α亚单位释放激活腺苷酸环化酶，催化ATP转化为cAMP发挥其生物学效应。肝中胰高血糖素的许多生物活性即是通过腺苷酸活化酶的活化介导的。主要生理功能是①迅速分解肝糖原，抑制糖酵解，抑制肝糖原的合成；②促进肝细胞对氨基酸的主动摄取，主要是使丙氨酸，谷氨酸，甘氨酸等生糖氨基酸水平下降；③促进脂肪组织的水解及脂肪酸的氧化，使血中游离脂肪酸水平增加；④促进肝脏摄取有利脂肪酸，以致肝脏储存甘油三酯，同时有轻微生酮的作用。     

绞股蓝总皂甙对原代培养大鼠肝细胞四氯化碳损伤的影响

采用四氯化碳（CCl4)制成原代培养大鼠肝细胞损伤模型，观察了绞股蓝总皂甙(GPS）对肝细胞损伤的保护作用。结果表明，预先用GPS处理肝细胞1hr，可明显减轻CCI4引起的肝细胞DNA合成速率降低，减少肝细胞ALT逸出，抑制培养上清液中MDA含量的升高和SOD/MDA比值的缩小，并与GPS浓度呈依赖关系，提示GPS能减轻CCI4对离体培养的大鼠肝细胞损伤，保护肝细胞DNA合成，其作用机理与抗脂质过敏化有关。     

血浆双调蛋白水平在肝炎、肝硬化、肝癌患者中的变化及意义

<正>在慢性肝病进展为肝硬化甚至肝癌的过程中有多种细胞因子参与。其中表皮生长因子 (epidermal growth factor , EGF)和肝细胞的生长、再生及肝脏胶原纤维合成密切相关。已有研究发现,在慢性肝损伤中均有EGF异常表达。双向调节蛋白 (amphiregulin ,AR)与EGF有较高的序列同源性,均是表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通路上游配体,可以促进上皮细胞     

门脉高压大鼠胰岛功能障碍的研究

目的探讨门脉高压时胰岛功能的变化。方法应用放免法检测肝硬化门脉６高压、肝前性门脉高压及正常大鼠循环血液中胰岛素及胰高血糖素水平。采用非酶法分离并纯化以上三组大鼠胰岛,检测其体外生物学活性。结果二种门脉高压模型鼠循环血液中胰岛素及胰高血糖素水平均明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）;其分离纯化的胰岛经体外培养４８小时及在含糖基质中孵育２小时后,胰岛素释放量明显低于正常对照组,胰高血糖素释放量明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。结论门脉高压时：①循环血液中胰岛素及胰高血糖素水平增加;②胰岛α细胞分泌增加可能有助于门脉高压高胰高血糖素血症的发生;③循环血液中胰岛素水平增加,但胰岛β细胞功能明显低于正常。