外环境对骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的影响

目的:研究外环境对骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)定向分化成心肌样细胞的影响。方法:取SD大鼠骨髓,通过贴壁法进行MSCs培养,经过多次传代后获得较纯的MSCs。用5-氮胞苷进行诱导分化,显微镜下观察其形态变化,通过RT-PCR鉴定心肌特异基因心房利尿肽和脑钠肽表达。实验分Ⅰ组为在玻片上的5-氮胞苷干预的MSCs移入到心肌细胞培养环境中;Ⅱ组为5-氮胞苷干预的MSCs;Ⅲ组为玻片上未用5-氮胞苷干预的MSCs移入到心肌细胞培养环境中;Ⅳ组为未用5-氮胞苷干预的MSCs。显微镜下观察4组形态变化,并通过免疫组化鉴别结蛋白和心肌肌钙蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)表达及其出现时间的早晚。结果:RT-PCR显示诱导6周后有心房利钠肽,脑钠肽的表达。Ⅱ组MSCs诱导后10d可见细胞由原来扁平多角形变成长梭状,15d后部分细胞胞体明显增粗,可见到有些细胞间有融合样情况发生,20d左右类似肌管样细胞出现;而Ⅰ组在17d左右可以看到类似肌管样细胞;Ⅲ,Ⅳ组未见上述形态改变。免疫组化表明Ⅲ,Ⅳ组未见阳性细胞出现;Ⅰ,Ⅱ组可见阳性结果,且Ⅰ组阳性结果出现的比Ⅱ组更早。结论:MSCs在体外的化学诱导物条件下可以诱导分化成心肌样细胞,心肌细胞培养环境对其定向分化成心肌样细胞有促进作用。     

骨髓间充质干细胞向早期神经元样细胞诱导分化的研究

背景骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)不仅能分化成间质细胞,而且能向实质细胞(如心肌细胞)转化.在体外定向诱导MSCs分化成神经细胞,是目前国内外研究热点,具有重大理论意义.目的探讨大鼠MSCs体外诱导分化成神经元的能力.设计随机空白对照实验的研究.地点、材料和干预实验在吉林大学公共卫生学院毒理教研室完成.实验动物采用Wistar大鼠(吉林大学实验动物中心),6周龄,雌雄不限.将2～4代的rMSCs接种在铺有盖玻片的24孔板中.分为3个实验组,一个对照组.实验组分别加入终浓度为0.25,0.50和1.00 mmol/L异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethlxanthine,IBMX)诱导传代的rMSCs,待细胞分化后进行形态学观察,对照组中不加诱导剂,并用免疫细胞化学方法进行细胞鉴定.主要观察指标培养MSCs的生长情况,诱导后细胞的形态学变化及nestin(小鼠抗大鼠,单克隆),神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)抗体(兔抗鼠,多抗)、微管相关蛋白-2a,bmicrotubule-associated protein-2a,b,MAP-2a,b)的免疫细胞化学检测.结果加入IBMX后,0.25mmol/L组分化成神经元样细胞较少.1.0mmol/L组细胞加入IBMX第2天开始可见细胞陆续死亡.0.5 mmol/L组2 d即可见有神经元样细胞出现,细胞具有典型的神经元形态特征,0.5 mmol/LIBMX诱导细胞效果最好,2 d即可见有神经元样细胞出现,6 d神经元样细胞占细胞总数的(23.2±2.3)%,NSE染色阳性.对照组中未诱导细胞表达nestin,诱导后3 d阳性细胞增多,6 d减少.实验组和对照组均不表达MAP-2a,b.结论体外rMSC能扩增、传代,并被诱导分化成早期神经元样细胞.     

骨髓间充质干细胞与心肌再生的研究进展

心肌受损后,心肌细胞一般无法再生,可导致起搏、传导、或心肌舒缩功能受损。目前,随着对干细胞研究的深人,利用干细胞移植对受损心肌进行再生性治疗成为最有潜力治疗手段。骨髓问充质干细胞（MSCs）获取相对容易,不涉及道德伦理学及法律问题,在体外培养容易大量扩增而仍然保留“于细胞”特性,而成为修复损伤心肌的最佳种子细胞。本文将就目前MSCs对心肌再生治疗的研究进展进行综述。     

骨髓间充质干细胞向肝细胞的横向分化

目的：综合分析骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的研究现状及应用前景。资料来源：应用计算机检索Pubmed 2000—01／2005—04有关干细胞及其向肝细胞横向分化方面的文献，检索词“stem cell，hepatoeyte．transdifferentiation”，并限定文章种类为English。资料选择：对检索到的有关干细胞及其向肝细胞横向分化方面的文献进行整理，选取针对性强的文章。同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。资料提炼：共检索到45篇相关文献，其中38篇符合要求，7篇为重复同一研究而排除。资料综合：利用骨髓间充质干细胞在肝损伤等病理状态下具有分化为肝细胞的特性，实现肝组织重建，纠正肝细胞代谢和合成功能障碍，为治疗肝炎、肝硬化、肝癌及肝代谢性疾病提供了新的策略。干细胞在肝病治疗中的应用无疑是对传统治疗方式的挑战。结论：多数学者的研究表明，干细胞具有分化为肝细胞及胆管细胞样细胞的潜能，但也有少数学者持否定意见。目前对于移植后干细胞是产生细胞融合还是分化作用尚存在争议。     

地黄多糖诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的效应

目的:探讨地黄多糖对骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的诱导效应.方法:实验于2004-03/06在湖南省中医学院内科实验室进行,取1月龄SD大鼠1只,取股骨和胫骨,利用贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞.将骨髓间充质干细胞分为3组:地黄多糖组用地黄多糖诱导其向神经细胞分化,β-巯基乙醇组β-巯基乙醇诱导,对照组不做任何处理.光镜下观察细胞形态,采用免疫细胞化学方法鉴定神经细胞特异性抗原标志神经丝蛋白和神经胶质细胞特异性抗原胶质纤维酸性蛋白的表达.结果:地黄多糖组经地黄多糖诱导培养24 h后细胞显示为典型的神经细胞样形态,神经丝蛋白阳性为(82.3±6.1)%,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞为(10.5±2.1)%.β-巯基乙醇组的细胞神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数较少,分别为(22.3±4.7)%,(42.3±5.3)%.对照组神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白染色均为阴性.结论:地黄多糖具有诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的作用,其机制需探讨.     

体外诱导骨髓间质干细胞分化为心肌样细胞及其低免疫源性实验

目的:通过体外诱导骨髓间质干细胞向心肌样细胞分化,验证其多能分化特性,检测分化后的细胞进行免疫源性。方法:①实验于2003-03/2004-09在华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科实验室完成。实验选用1月龄Wistar大鼠20只。②贴壁法体外培养骨髓间质干细胞,用化学物质5-氮杂胞苷诱导24h,免疫组化检测诱导后的细胞心肌特异性蛋白的表达,单向混合淋巴细胞反应检测诱导分化后的骨髓间质干细胞的免疫源性。③实验分组如下,对照组1:单独的反应细胞组;对照组2:刺激细胞+反应细胞。实验组1:不同数量诱导分化后的骨髓间质干细胞1×107,1×108,1×109L-1+反应细胞;实验组2:不同数量诱导分化后的骨髓间质干细胞1×107,1×108,1×109L-1+刺激细胞+反应细胞。以抑制率表示诱导分化后的骨髓间质干细胞的免疫调控活性。④多均数比较采用方差分析,进行方差齐检验后,均数间两两比较采用LSD法。两样本均数比较采用t检验。结果:20只大鼠均进入结果分析。①部分诱导后的细胞胞浆结蛋白,心肌特异性肌钙蛋白,连接蛋白-43免疫组化呈阳性反应。②实验组1(加入的骨髓间质干细胞为1×107,1×108,1×109L-1时)同种异体淋巴细胞的每分钟脉冲值明显低于对照组1(4610.106±276.16,3704.55±159.50,2881.317±114.62,8232.333±351.71,P<0.05),各剂量骨髓间质干细胞组间差异明显(P<0.05)。③实验组2(加入的骨髓间质干细胞为1×107,1×108,1×109L-1时)对混合淋巴细胞反应的抑制率明显高于对照组1(43.9%,55.1%,65.7%,1.65%,P<0.05),各剂量骨髓间质干细胞组间差异明显(P<0.05)。结论:骨髓间质干细胞具有向心肌样细胞分化的潜能,分化后的骨髓间质干细胞能呈剂量依赖性地抑制同种异体淋巴细胞增殖,可以抑制正在进行的混合淋巴细胞反应,具有低免疫源性,可用于同种异体移植。     

骨髓间充质干细胞向肝细胞的横向分化

目的:综合分析骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的研究现状及应用前景。资料来源:应用计算机检索Pubmed2000-01/2005-04有关干细胞及其向肝细胞横向分化方面的文献,检索词“stemcell,hepatocyte,transdifferentiation”,并限定文章种类为English。资料选择:对检索到的有关干细胞及其向肝细胞横向分化方面的文献进行整理,选取针对性强的文章。同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。资料提炼:共检索到45篇相关文献,其中38篇符合要求,7篇为重复同一研究而排除。资料综合:利用骨髓间充质干细胞在肝损伤等病理状态下具有分化为肝细胞的特性,实现肝组织重建,纠正肝细胞代谢和合成功能障碍,为治疗肝炎、肝硬化、肝癌及肝代谢性疾病提供了新的策略。干细胞在肝病治疗中的应用无疑是对传统治疗方式的挑战。结论:多数学者的研究表明,干细胞具有分化为肝细胞及胆管细胞样细胞的潜能,但也有少数学者持否定意见。目前对于移植后干细胞是产生细胞融合还是分化作用尚存在争议。     

地黄多糖诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的效应

目的：探讨地黄多糖对骨髓问充质干细胞分化为神经细胞的诱导效应。方法：实验于2004-03／06在湖南省中医学院内科实验室进行，取1月龄SD大鼠1只，取股骨和胫骨，利用贴壁法分离纯化骨髓问充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分为3组：地黄多糖组用地黄多糖诱导其向神经细胞分化，β-巯基乙醇组β-巯基乙醇诱导，对照组不做任何处理。光镜下观察细胞形态，采用免疫细胞化学方法鉴定神经细胞特异性抗原标志神经丝蛋白和神经胶质细胞特异性抗原胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：地黄多糖组经地黄多糖诱导培养24h后细胞显示为典型的神经细胞样形态，神经丝蛋白阳性为(82．3&;#177;6．1)％，胶质纤维酸性蛋白阳性细胞为(10．5&;#177;2．1)％。β-巯基乙醇组的细胞神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数较少，分别为(22．3&;#177;4．7)％，(42．3&;#177;5．3)％。对照组神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白染色均为阴性：结论：地黄多糖具有诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的作用，其机制需探讨。     

骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的诱导分化

骨髓间充质干细胞以其心肌横向分化的可塑性和多重优势,移植至缺血心肌中可分化为心肌细胞,增加有功能心肌细胞数量,在心肌损伤性疾病的治疗上展现着强大潜能,成为心肌再生的种子细胞之一,其向心肌样细胞的体外诱导分化是其中的一个研究热点。     

干细胞因子促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化

背景：骨髓间质干细胞体内、外均能分化为心肌细胞，但数量少且定向分化率较低。 目的：探讨干细胞因子促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的作用。 设计：开放性实验。 单位：咸宁学院心血管疾病研究所，华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科。 材料：实验于2003-10／2004—08在咸宁学院心血管疾病研究所实验中心完成。选取出生1-2d的SD新生大鼠20只，用于心肌细胞的培养。另选取清洁级成年SD大鼠25只，随机数字表法分为干细胞因子组、空白对照组，12只／组，剩余1只大鼠用于骨髓间充质干细胞的提取、培养及纯化。 方法：①在共培养前用4，6-联脒-2-苯基吲哚标记骨髓间充质干细胞。干细胞因子组对大鼠进行体内动员，连续5d皮下注射重组鼠干细胞因子，20μg／（kg&;#183;d），然后提取其骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养。空白对照组皮下注射相等剂量的生理盐水，未施加任何干预的骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养。②用数码显微摄像及免疫荧光技术分别记录和检测MHC α／β、肌钙蛋白T的表达，测定4，6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的百分率。 主要观察指标：①骨髓间充质干细胞生长情况。②检测4，6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的核标记率。③拟做共培养的心肌细胞活力、纯度分析。④共培养后骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化情况。 结果：①骨髓细胞悬液接种于塑料培养皿，细胞呈圆形散在分布于瓶底，24h换液后可见稀少的长梭形贴壁细胞，4d后梭形贴壁细胞开始增多，进入对数增长期，8～12d达到80％的融合。传代细胞增殖更加迅速，随着换液与传代，骨髓间充质干细胞逐渐得到纯化。②4，6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的胞核标记率为100％。③心肌细胞体外培养第3天，搏动细胞的百分比为63％，搏动频率40～60次／min。免疫细胞化学技术检测肌钙蛋白T表达的阳性细胞百分比为75％。④在共培养的第2，3天，干细胞因子组4，6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达MHC α／β的阳性百分率均显著高于空白对照组（P〈0.01）；在共培养的第3，4，5天，干细胞因子组4，6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达肌钙蛋白T的阳性百分率亦均显著高于空白对照组（P〈0．01）。 结论：干细胞因子对骨髓间充质干细胞具有明显的促增殖分化作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养纯化及生物学特性的鉴定

【目的】探讨大鼠骨髓间充质干细胞（rat bonemarrow—derived mesenchymal stem cells，rBMSCs）体外分离、培养和纯化方法，鉴定其生物学特性，为BMSCs应用奠定技术基础。【方法】采用密度梯度离心法结合贴壁分离法分离培养纯化SD大鼠BMSCs，观察其形态，测定细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞表面标记，成骨诱导试剂盒检测rBMSCs向成骨细胞分化的潜能。【结果】显微镜下rBMSCs呈梭形、多角形成纤维细胞样形态，大小均一，漩涡状生长。生长曲线分析rBMSCs贴壁2d基本无增殖，处于潜伏期，对数增殖期为3～7d，d8后进入平台期，细胞出现接触抑制现象。rBMSCs表面标志显示第3代rBMSCs纯度可达97％以上，CD44、CD90呈阳性表达，CD34呈阴性表达；向成骨诱导rBMSCs10d后细胞表现成骨细胞特性，碱性磷酸酶活性明显升高。【结论】本实验建立了一种理想的体外分离扩增纯化rBMSCs的培齐体系。实验结果表明所分离培养的rBMSCs纯度高、生物学特征稳定，适用于对BMSCs进一步的应用研究。     

小鼠间充质干细胞培养扩增后生物学特性研究

本研究目的是分离富集小鼠骨髓间充质干细胞（mMSC）,鉴定其生物学特性和多向分化潜能。取4-5周龄雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞,采用全骨髓贴壁法和单克隆培养法分离、纯化和扩增mMSC;分析细胞免疫表型、生长曲线、细胞周期;进行多向分化潜能鉴定;传代培养达30代后,进行成瘤性检测。结果表明：建立的小鼠间充质干细胞系在体外可连续传代培养达30代,细胞仍保持多向分化潜能,细胞高表达CD29、CD44、Sca-1、MHC-Ⅰ,中度表达CD13、CD90.2,不表达CD117、CD45、Flk-1、MHC-Ⅱ类抗原。mMSC体外能诱导分化成骨、脂肪、软骨细胞。结论：全骨髓贴壁法和集落培养法富集可获得mMSC,其在体外连续传代30代以上仍能维持生物学特性稳定,具有高度的增殖和多向分化潜能,无成瘤性。     

人骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞

骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)是一群存在于骨髓腔内的能向骨、软骨、脂肪、肌肉和基质细胞等分化的细胞。最近的骨髓移植动物模型研究显示 ,在体内骨髓细胞具有形成神经元的能力[1 ,2 ] 。与造血细胞相同 ,骨髓中的间充质干细胞也具有可移植性[3] 。因此 ,骨髓移植后形成神经元的细胞可能来源于间充质干细胞。为验证此推测 ,我们进行了如下实验。材料与方法肝素抗凝骨髓取材于异基因骨髓移植过程中正常献髓者。间充质干细胞分离、纯化和体外培养按我们以前报道的方法进行[4] 。形成致密贴壁层的间充质干细胞用 0 .0 5 %…     

胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状研究

为研究胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状,取胎龄为4-5个月水囊引产胎儿,将骨髓和肝脏细胞在SF（含2?S）培养基中培养,进行电镜观察,测定生长曲线,用流式细胞术对培养细胞进行表型测定。细胞周期分析。用SA方法测定Ⅰ,Ⅲ型胶原和vWF因子表达。结果表明;从胎儿骨髓和肝脏培养出的间充质干细胞,两在形态学,生长特性,免疫表型上是相似的,肝脏间充质干细胞有更好的支持造血的功能。结论提示,从胎儿骨髓和肝脏可分离培养出间充质干细胞。在体外有效扩增且保持其低分化状态。     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞的生物学特点

为了观察和比较再生障碍性贫血患儿、正常同年龄段儿童和胎儿3种来源的骨髓间充质干细胞（MSC）的体外增殖能力及表面标志的表达,利用体外培养的方法从再生障碍性贫血患儿的骨髓分离培养MSC,以胎儿和儿童的MSC作为对照;通过对细胞形态和生长特性的观察,并用流式细胞术和免疫细胞化学方法进行检测以比较三者之间的异同.结果表明：从再生障碍性贫血患儿骨髓中分离、培养、扩增得到了MSC,与胎儿和正常儿童骨髓来源的MSC在细胞形态、流式表达模式和免疫细胞化学表达方面基本一致,但再生障碍性贫血患儿骨髓MSC的体外扩增能力有别于胎儿及正常儿童.虽然在早期培养时再生障碍性贫血患儿的骨髓MSC具有与正常儿童相似的扩增速度,但当群体倍增值（population doubling,PD）达20之后基本不再有增殖能力了,而正常儿童和胎儿来源的MSC却可稳定扩增到30 PD.结论：再生障碍性贫血患儿骨髓MSC在表面抗原标志方面与对照组相比无明显异常,但体外增殖能力弱于对照组.     

不同年龄段人骨髓间充质干细胞生物学特性的研究

本研究通过对不同年龄段人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)的研究探讨MSC生物学特点与年龄的关系,从而为临床寻找合适供体,迅速获取所需MSC提供实验依据。骨髓供体按年龄分为4组:A组(胚胎)、B组(0-20岁)、C组(20-40岁)和D组(40岁以上)。观察各组骨髓MSC的生长、增殖、分化特点;用流式细胞仪检测细胞表面标志,用ELISA方法检测培养上清造血相关因子的水平;进行核型分析及成瘤试验;评价不同年龄段供体骨髓MSC在临床造血干细胞移植中的应用价值。结果显示:各组骨髓均可培养出MSC,各组MSC表面标志无显著差异;各组MSC均具有向脂肪细胞和成骨细胞分化的能力;原代培养B组骨髓MSC含量较多,贴壁时间早,传代时间短,P0至P1时间为5.5天,传至P10需33天,8×106MNC培养至P10时MSC数达(5.19±2.15)×1010;A、C、D组P0至P1时间分别为15、7和13天,传至P10分别需50、60和72天,8×106MNC培养传代至P10时MSC数分别为(4.98±2.08)×1010、(1.86±0.47)×1010、(0.64±0.22)×1010。A组MSC较细长,细胞融合后生长无接触抑制,P15增殖速度开始减缓;B、C、D组MSC形态相似,有生长接触抑制B组P10开始增殖减缓,C、D组P8开始增殖减缓;B组MSC培养上清中SCF、FLT3L、IL6及SDF1水平高于其它各组。各组间细胞的增殖指数无显著差异。核型分析均为正常核型,成瘤实验为阴性。结论:MSC增殖生长特性与年龄密切相关;根据临床造血干细胞移植的需要,0-20岁年龄组骨髓是短时间内获取足够细胞数的理想供体,分泌HGFs水平亦占优势;0-20岁组骨髓MSC的生物学特性优于其他各组,可以作为MSC的供源。     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的探讨骨髓问充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是否能体外诱导分化为心肌样细胞。方法用浓度梯度法分离和纯化Wistar大鼠MSCs，贴壁法培养，培养的第2代细胞分别用终浓度为0、0．1、1．0、10．0、50．0、100．0μmol／L的5-氮杂胞苷（5-azacytidine，5-aza）诱导分化，用光学显微镜观察细胞的形态并用免疫细胞化学方法鉴定细胞内的心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）。结果以终浓度10．0μmol／L 5-aza为诱导组，细胞从原来的梭形变为排列趋向较为一致的长梭形，且体积增大，诱导10d后，细胞内cTnI蛋白染色阳性。终浓度为0、0．1、1．0μmol／L组细胞形态变化不明显，细胞内cTnI染色阴性。终浓度为50．0、100．0μmol／L组细胞死亡。结论大鼠MSCs细胞可经5-aza诱导分化为心肌样细胞，且5-aza的最佳诱导浓度为10．0μmol／L。     

急性白血病儿童骨髓间充质干细胞的生物学特点的初步研究

本研究探讨密度梯度离心法加贴壁法方式培养白血病儿童骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcell,MSC）的条件并观察其体外增殖能力、生长曲线、多向分化等生物学特性。通过密度梯度离心、贴壁法分离白血病患儿的MSC,观察细胞的形态变化及生长曲线、流式细胞术测定其CD29、CD105、CD45、CD34、CD14、HLA—DR等表达,通过成脂、成骨诱导研究其多向分化能力。结果表明：密度梯度离心法联合贴壁法可以培养出白血病儿童骨髓来源的MSC,初诊白血病儿童骨髓来源的MSC培养成功率为57．1％,缓解白血病儿童骨髓来源的MSC成功率为41．2％,接种密度越大成功率越高,初诊白血病儿童的MSC形成集落数目较多且生长较快。形态学观察显示,骨髓间充质干细胞接种24小时即贴壁,呈集落生长,形态多样;3天后贴壁细胞增殖,逐渐以梭形细胞为主;2—3周细胞基本达80％-90％融合,第3代后细胞呈均匀一致的长梭形。细胞传代后3天内处于潜伏期,3天后进入生长期,8天后进入平台期。检测第2代后细胞免疫表型显示,MSC的CD29、CD105表达率达95％以上,CIM5、CD34、CD14、HLA．DR极低表达或不表达。MSC能成功诱导成脂肪细胞及成骨细胞,油红O染色和茜素红染色为阳性。在合适的条件下冻存对细胞影响不大。结论：①白血病患儿骨髓培养出的贴壁细胞是MSC,骨髓含量在1ml以上且方法得当可以培养出MSC;②初诊的白血病患儿的骨髓相对容易培养出骨髓间充质干细胞,形成的集落较缓解期白血病患儿多,增长速度较快;⑧白血病儿童来源的MSC具有MSC的共同生物学特性。     

兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应

为了研究兔骨髓间充质干细胞（rBM—MSC）的生物学特征及其对不同生长因子的反应，使用贴壁培养法从兔骨髓单个核细胞中获得间充质干细胞（MSC），在光学显微镜和电子显微镜下观察其基本生长行为和生物学特征；使用流式细胞仪检测rBM—MSC的免疫学表型；RT—PCR法检测其胶原表达；诱导rBM—MSC多向分化并使用特异性染色和RT—PCR予以鉴定；最后使用MTT法检测IL—1、3、8和HGF对rBM—MSC生长增殖的影响。结果显示：贴壁生长的rBM—MSC具有典型的成纤维样细胞形态，可传15代以上，第5代rBM—MSC高表达基质受体CD44（32％），低表达造血细胞标记CD45（4．7％）；RT—PCR显示高表达Ⅰ型胶原，弱表达Ⅱ型胶原，不表达X型胶原；在不同的诱导条件下．rBM—MSC可被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞。rBM—MSC对IL-3最为敏感．10ng／ml的低浓度IL-3可显著促进细胞增殖达32％以上（P〈0．01），而高浓度IL-3能显著抑制其生长。结论：分离培养了rBM—MSC，其生物学特征与人和猕猴等BM—MSC相似的生物学特性，低浓度IL-3可有效促进其增殖。     

肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

骨髓间充质干细胞的增殖、分化及迁移等生物学特性受骨髓微环境的调节.肝细胞生长因子（HGF）是骨髓微环境分泌的主要因子之一,但它对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响并不清楚.本研究目的是观察重组人HGF对骨髓MSC生物学特性的影响.用免疫组织化学方法检测c-Met的表达,用MTT法测定细胞增殖,定量测定ALP的活性,进行细胞迁移分析和失巢凋亡（anoikis）诱导MSC凋亡分析.结果表明,重组人HGF不影响骨髓间充质干细胞的增殖和向成骨细胞的分化,但可明显促进骨髓间充质干细胞的迁移并抑制anoikis诱导的细胞凋亡;PI-3K和MAPK途径参与了HGF促进细胞迁移的作用.结论：肝细胞生长因子通过受体c-Met影响骨髓间充质干细胞的生物学特性.