半人工合成手性多西紫杉醇对肺腺癌细胞株A549的细胞毒性及放射增敏作用

目的:探讨半人工合成手性多西紫杉醇对人肺癌细胞株A549的细胞毒性及放射增敏作用。方法:半人工合成手性多西紫杉醇,测定其对A549细胞的生长抑制作用,观察其对A549细胞的形态学影响及其放射增敏作用和对动物荷瘤模型的作用。结果:不同浓度半人工合成紫杉醇对A549细胞均有抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞,抑制荷瘤小鼠模型肿瘤的生长,其中空白对照组、单纯药物组、单纯放射组和联合处理组的肿瘤体积分别为(7780±1050)mm3、(4610±950)mm3、(5540±1035)mm3和(560±112.5)mm3,各组间有明显差异。结论:半人工合成紫杉醇对A549细胞株具有明显的抑制作用,且与射线照射有协同作用。     

多西紫杉醇放射增敏治疗非小细胞肺癌研究进展

多西紫杉醇对多种肿瘤细胞系有毒性作用，可以直接诱导肿瘤细胞凋亡，临床上治疗非小细胞肺癌（NSCLC）有较好效果。目前研究表明该药还具有放射增敏作用。文章对多西紫杉醇放射增敏机制和放射增敏治疗晚期NSCLC的临床Ⅰ期、Ⅱ期试验结果及多西紫杉醇放射增敏的优势进行综述。     

三氧化二砷对人肺腺癌A549细胞的放射增敏作用

[目的]探讨三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞的放射增敏作用.[方法]MTT法确定As2O3对A549细胞的半数致死浓度(LD50),采用集落形成法观察20％LD50的As2O3对A549细胞的放射增敏作用.[结果]细胞生长抑制随As2O3浓度的增加而增强.As2O3+照射组的细胞存活率低于单纯照射组,D0值小于单纯照射组(1.46Gy vs 2.03 Gy),Dq值也小于单纯照射组(0.49 Gy vs 1.35Gy),存活曲线肩区(Dq)变小,放射增敏比(SER)为1.39.[结论]As2O3对肺腺癌A549细胞有明显的放射增敏作用,抑制A549细胞的修复能力使照射后细胞存活分数降低是其放射增敏的可能机制.     

紫杉醇对骨肉瘤细胞放射增敏作用的研究

目的观察体外环境下紫杉醇对骨肉瘤（osteosarcoma,OS）细胞的放射增敏效果及其与药物作用时间的关系。方法以MG-63细胞为实验对象,采用MTT法检测不同浓度紫杉醇（6、0.6、0.06、0.006和0.000 6μg/mL）对MG-63细胞的抑制作用,确定IC10作为后续实验的药物浓度;采用克隆形成分析法分别测定MG-63细胞在紫杉醇作用24h后照射以及单纯照射的存活分数（SF）,拟合细胞生存曲线并计算放射增敏比,分析紫杉醇对MG-63细胞的放射增敏作用;采用克隆形成分析法测定紫杉醇作用于MG-63细胞12、24和36h后细胞生存率的变化,确定最佳照射时间。组间比较采用单因素方差分析。结果 MTT实验结果显示,当紫杉醇浓度分别为0.000 6、0.006、0.06、0.6和6μg/mL时,其细胞抑制率分别为（3.25±2.58）%、（9.98±3.83）%、（20.35±3.91）%、（21.55±3.70）%和（55.36±4.67）%。提示,紫杉醇对MG-63细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性,F=83.70,P〈0.01,IC10为0.01μg/mL;IC10浓度紫杉醇増敏比分别为1.14（D0比）、1.20（Dq比）和1.08（SF2比）;MG-63细胞α/β值为2.23,IC10浓度紫杉醇作用后α/β值为2.32。紫杉醇作用于MG-63细胞12、24和36h后再进行照射,细胞存活分数分别为（9.21±0.81）%、（5.39±0.75）%和（0.38±0.13）%,显著低于对照组的（12.86±1.07）%,差异有统计学意义,F=144.11,P〈0.01。结论紫杉醇对MG-63细胞有放射增敏作用,增敏作用呈时间依赖性,有一定的临床应用前景。     

奥沙利铂对肺腺癌A549细胞株的放疗增敏作用

目的观察奥沙利铂（L—OHP）对体外培养非小细胞肺癌A549株的放疗增敏作用。方法体外培养非小细胞肺癌株A549,分为放疗＋药物组、单纯药物组、单纯放疗组和对照组。采用MTT法观察相同L．OHP药物浓度（≤IC10）、不同放射剂量（1Gy、1．4Gy、1．8Gy、2Gy、3Gy）及不同药物浓度（0．488mg／mL、0．244mg／mL、0．122mg／mL、0．06lmg／mL、0．031mg／mL）、相同放射剂量（2Gy）对A549细胞株的抑制作用。计算细胞抑制率和增敏比,应用SPSS13．0处理数据,分析各因素对人肺癌细胞A549的抑制作用。结果MTT检测显示L—OHP浓度为0．488mg／mL为最佳实验浓度。非小细胞肺癌A549细胞生长抑制率与放射剂量、药物浓度呈正相关。流式细胞仪分析结果显示各处理组细胞在S期时的比例有显著性差异（P〈0．05）。结论使用L—OHP可增强放射线对非小细胞肺癌细胞的作用。     

紫杉醇联合放射线照射对肺腺癌细胞放射增敏作用的研究

目的 探讨化疗药紫杉醇是否对肺腺癌A973细胞有放射增敏作用.方法 取指数生长期的人肺腺癌细胞A973,采用成克隆分析法检测紫杉醇毒性,确定IC10、IC50和IC90剂量作为药物浓度.分析照射前后紫杉醇IC10、IC50和IC90浓度下作用24 h,照射剂最分别为0、1、2、4、6、8、10 Gy时的细胞存活分数,并用多靶单击模型拟合细胞存活曲线.采用流式细胞术分析不同浓度紫杉醇作用0、2、4、6、10、18、24 h,A973细胞周期分布变化.结果 紫杉醇对A973细胞的IC10、IC50和IC90剂量分别为0.5、2.6和8.7 nmol/L.IC10剂量紫杉醇照前给药增敏比为0.97(D0值比)、1.01(D0值比)、1.00(SF2值比),照后给药为0.97、1.02、1.02;IC50剂量照前给药为1.06、129.00、2.61,照后给药为0.94、129.00、2.14;IC90剂量照前给药为1.00、120.00、2.09,照后给药为0.98、120.00、2.09.IC10剂量紫杉醇对A973细胞无明显的G2+M期阻滞作用,而IC50和IC90剂量紫杉醇分别于2和18 h将A973细胞阻滞在G2+M期.结论 紫杉醇对肺腺癌细胞A973产生明显的放射增敏作用,且照射前后给药均有相似的增敏作用,中高浓度剂量联合小剂量X线照射增敏效果最好.     

扶正增效方对肺腺癌细胞放射增敏研究

已知扶正增效方(由生黄芪、白术、太子参、枸杞子、鸡血藤、红花、苏木、茯苓、鸡内金、石斛、沙参、银花组成)在临床上配合肺癌放射治疗49例患者有效率为69.4%,1、2、3年生存率分别为79.4%、49.4%、23.3%。现将其对肺腺癌细胞放射增敏作用实验研究报道如下。1　材料与方法1.1　在体实验:选用Ｃ57雄性小鼠,体重18～20ｇ,共58只;Ｌｅｗｉｓ肺癌瘤株。将每只Ｃ57小鼠右大腿内侧皮下注射2×105个(0.2ｍＬ)Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞后,随机分为空白组、放射组、放射加增效方组。照射方法:接种后第10ｄ给予瘤体5,10,15,20Ｇｙ单次Ｘ射线照射(空白组不照…     

曲古霉素A对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用

目的探讨曲古霉素A（TSA）对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用。方法MTT法检测TSA处理宫颈癌HeLa细胞12、24、48、72 h的细胞毒性及TSA作用24 h的10%细胞抑制浓度（10％ inhibition concentration,IC10）和半数抑制率IC50对HeLa细胞不同分割放疗方式的增敏效果;克隆形成法分析IC10 的TSA对HeLa细胞放射增敏作用的影响,单击多靶模型拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比（sensitive enhencement ratio,SER）。结果0.05~0.8 μmol/L TSA对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈一定的时间－剂量依赖性,TSA作用24 h的IC10和IC50分别为0.0312和0.5865。0.6 μmol/L以上浓度及药物作用时间超过48 h的TSA对HeLa细胞的增殖抑制作用并无明显增加。IC10曲古霉素A的SER为1.6858,IC10的TSA对每次2.0 Gy、1.0 Gy（×2）、0.5 Gy（×4）分割放射组的SER分别为1.4496、1.6410、1.9554。结论TSA对宫颈癌HeLa细胞具有良好的细胞毒性及放射增敏作用,且对低剂量多次分割放疗的增敏作用更强。     

紫杉醇联合放射线照射对鼻咽癌细胞的放射增敏效应

目的探讨化疗药紫杉醇(PTX)联合放射线照射对鼻咽癌细胞的放射增敏作用。方法取指数生长期的CNE-I细胞,采用克隆形成分析法检测PTX的单药毒性,确定IC10、IC50和IC90剂量作为实验的药物浓度。分析照射前后PTX IC10、IC50和IC90浓度下作用24 h,照射剂量分别为0～10 Gy时对CNE-I细胞的放射增敏效应。采用流式细胞术分析不同浓度PTX作用0、2、6、12、18和24 h CNE-I细胞周期分布的变化。结果PTX对CNE-I细胞的IC10、IC50和IC90剂量分别为0.05、1.0和2.5 nmol/L。当小剂量照射前后,分别用0.05和1.0 nmoL/L PTX作用24 h,具有一定放射增敏作用。PTX浓度为2.5和10.0 nmol/L时,CNE-I细胞出现明显的G2/M期阻滞,高峰出现在18 h。结论在适当的结合序贯的基础上,PTX联合放射线照射对CNE-I细胞具有放射增敏效应,其增敏作用可能与PTX导致的细胞G2/M期阻滞相关。     

美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨烟碱型胆碱能受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)拮抗剂美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响。方法:应用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法和FCM法检测美加明对人肺腺癌A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验检测美加明对细胞迁移能力的影响;激光共聚焦显微镜下观察美加明对A549细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达的影响。结果:美加明可抑制A549细胞的增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制作用随着药物浓度的增加而增强。FCM检测结果显示,美加明作用后,G0/G1期细胞比率增多,S期和G2/M期细胞比率下降,而细胞凋亡未发生明显变化。划痕实验结果显示,美加明可降低A549细胞的迁移能力。激光共聚焦显微镜下观察发现,美加明可上调A549细胞E-cad的表达。结论:美加明可能通过阻滞细胞周期于G0/G1期而抑制A549细胞增殖,并通过上调E-cad的表达而降低细胞迁移。     

光动力疗法对人肺腺癌细胞系A549杀伤作用的实验研究

目的　探讨光动力疗法 (PDT)对体外培养的人肺腺癌细胞系A5 49的杀伤效应。方法　以人肺腺癌细胞系A5 49作为研究对象 ,以血卟啉衍生物 (HPD)为光敏剂 ,以半导体激光器为光源 ,采用连续照射的方式 ,将经不同浓度HPD处理的A5 49细胞照射不同剂量的激光 ,用MTT法测定OD492 值。结果　HPD浓度为 5mg/L时基本无治疗作用 ;在相同的激光照射剂量下 ,10mg/LHPD即有治疗作用 ,再增大HPD浓度对细胞的杀伤效应增加不明显 ;在相同的HPD浓度下 ,激光剂量为 10J/cm2 时OD492 值降低达平台。综合两方面因素 ,在HPD浓度 10mg/L、激光剂量 10J/cm2 时PDT对A5 49细胞发挥有效的杀伤作用。当能量密度均为 10J/cm2 时 ,采取三组不同的功率时间组合 :2 14mw× 10min、42 8mw× 5min、714mw× 3min进行照射 ,测得的的OD492 值无统计学差异。结论　光动力疗法对体外培养的人肺腺癌细胞系A5 49有明确的杀伤效应 ,HPD浓度 10mg/L、激光剂量 10J/cm2 是本实验PDT的最佳作用参数。在该最佳能量密度下采取不同的功率时间组合对PDT效应无明显影响。     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用

目的 探讨多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞A549和PC-9的生长影响及其细胞学机制。方法 qPCR-HRM法检测人肺腺癌细胞EGFR和K Ras基因突变,MTT法检测细胞增殖, Western blotting检测细胞信号蛋白及磷酸化表达,FCM法检测细胞周期变化。结果 人肺腺癌A549细胞为EGFR基因野生型,PC-9细胞为EGFR第19外显子突变型。多西他赛和吉非替尼单药或联合用药均能抑制A549和PC-9细胞生长,呈浓度依赖性。多西他赛对A549和PC-9细胞生长的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为5.24×10^-7和2.13×10^-8mol／L,吉非替尼分别为1.28×10^-5和4.58×10^-8mol／L。在IC₅₀浓度时,多西他赛序贯吉非替尼对A549和PC-9细胞的生长抑制率分别为60.00%和57.45%,均较单药组明显增高（P＜0.05）;而同时用药只对PC-9细胞有增效作用,抑制率为53.46％,较单药组明显增高（P＜0.05）。多西他赛表现为增强A549、PC-9细胞EGFR和ERK磷酸化,吉非替尼表现为抑制,两药均抑制PC-9细胞IGF-1R磷酸化。多西他赛序贯应用吉非替尼显著抑制EGFR和ERK磷酸化,两药同时应用对抑制PC-9细胞的IGF-1R磷酸化具有增强作用。多西他赛将A549及PC-9细胞阻滞在G₂期,吉非替尼将PC-9细胞明显阻滞在G₁期。结论 多西他赛序贯吉非替尼能够抑制EGFR野生型和突变型的A549及PC-9细胞生长,且呈增效作用,可能与影响细胞EGFR和ERK磷酸化有关;两药同时应用仅对PC-9细胞具有增效作用,可能与IGF-1R磷酸化抑制有关;不同时序应用的效果均可能与细胞周期相关。     

单唾液酸神经节苷脂3对人肺腺癌细胞增殖凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究外源性单唾液酸神经节苷脂3(GM3)对人肺腺癌细胞增殖、凋亡和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨GM3的抗肿瘤作用.方法 以不同浓度外源性GM3干预人肺腺癌A549细胞48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞学技术检测细胞凋亡变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞VEGF mRNA的表达水平,激光共聚焦显微镜观察细胞VEGF蛋白的表达变化.结果 2.5、10、40、160和640 μmol/L GM3干预A549细胞48 h,增殖抑制率分别为4.1%、8.9%、29.9%、34.2%和52.6%,GM3作用于A549细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为412 μmol/L.与对照组相比,当GM3＞10 μmol/L时,对细胞增殖抑制作用明显(P＜0.05),且具有浓度依赖性.10、40和160μmol/L GM3干预A549细胞48 h,A549细胞的凋亡率分别为(1.3±0.6)%、(4.8±0.4)%、(14.2±1.0)%.与对照组相比,当GM3＞40 μmol/L时,其促进细胞凋亡作用明显(P＜0.05).与对照组相比,经浓度＞40 μmol/L的GM3干预后,A549细胞的VEGF mRNA表达水平显著下降(P＜0.05).随着GM3浓度增高,A549细胞的VEGF荧光强度明显减弱.结论 GM3能呈浓度依赖性抑制人肺腺癌细胞株A549增殖,促进A549细胞凋亡,下调A549细胞VEGF mRNA和蛋白水平的表达,提示GM3可能通过调节肿瘤细胞凋亡和肿瘤血管生成而发挥双重抗肿瘤作用.

Abstract：

Objective To determine the effect of exogenous GM3 on proliferation, apoptosis and VEGF expression in human lung adenocarcinoma cell line A549 cells.Methods A549 cells were treated with GM3 at different concentrations for 48 hours.MTT assay was used to detect the cell proliferation and flow cytometry was applied to analyze cell apoptosis.RT-PCR was used to detect the expression level of VEGF mRNA and confocal laser scanning microscopy was applied to observe the localization and fluorescence intensity of VEGF.Results Comparing with the control, being treated with higher than 10μmol/L GM3 significantly inhibited A549 cell proliferation ( P ＜ 0.05 ), and the suppressive effect could be enhanced following increasing doses.The IC50 was 412 μ mol/L.Comparing with the control, being treated with higher than 40 μmol/L GM3 significantly promoted the apoptotic rate of A549 cells ( P ＜ 0.05 ).Comparing with the control, being treated with higher than 40 μ mol/L GM3 significantly decreased the VEGF mRNA level of A549 cells (P＜0.05), and the fluorescence intensity of VEGF distinctly weakened.Conclusions Exogenous ganglioside GM3 can inhibit the proliferation, promote apoptosis, and down-regulate the VEGF expression level in A549 cells.This may be considered as two mechanisms of GM3 for its anti-tumor effect by modulating cell apoptosis and angiogenesis.     

双氢青蒿素抗人肺腺癌A549细胞生长的实验研究

背景与目的　研究发现,青蒿素类药物具有抗肿瘤活性。双氢青蒿素是青蒿素类药物中活性较强的衍生物。本研究的目的是观察双氢青蒿素对肺腺癌A549细胞生长的影响,以便为肺癌治疗提供实验依据。方法　双氢青蒿素对体外培养肺腺癌A549 细胞的生长抑制作用采用MTT检测法,用细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算对数生长期群体倍增时间,用流式细胞术检测细胞DNA含量,同时分析药物对细胞周期的影响。体内实验采用裸鼠移植瘤模型进行实验。结果　双氢青蒿素有较强的抑瘤效应,半数抑瘤浓度为0.23μmol/l。人肺腺癌A549细胞对数生长期群体倍增时间在对照组为21. 3 h,在双氢青蒿素作用组为38.5 h,两组比较有显著性差异(P<0.01)。流式细胞仪显示双氢青蒿素作用后G0 +G1 期细胞数增加。移植瘤体内试验显示双氢青蒿素的抑瘤率为54.3%。结论　双氢青蒿素对人肺腺癌A549 细胞在体内外均有生长抑制作用,体外作用与G0+G1 期阻滞有关。     

洛铂对肺癌Ａ５４９细胞作用的初步探讨

目的　探讨洛铂对肺癌Ａ５４９细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法　取对数生长期的肺癌Ａ５４９细胞进行实验,分为阴性对照组和实验组（加入不同浓度洛铂：２.５、５、１０、２０和４０μｍｏｌ／Ｌ）。采用ＭＴＴ比色法、流式细胞技术检测洛铂对肺癌细胞的增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导等作用,应用蛋白印迹法分析洛铂对Ａ５４９细胞Ｂｃｌ-２蛋白表达的影响。结果　洛铂能够抑制肺癌Ａ５４９细胞的增殖并诱导其凋亡,并呈浓度和时间依赖;流式细胞检测示细胞周期Ｇ１期前有低于二倍体细胞的凋亡峰;蛋白印迹检测结果显示洛铂可使Ａ５４９细胞Ｂｃｌ-２蛋白表达下降。结论　洛铂能显著抑制肺癌Ａ５４９细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期变化,可能与调节Ａ５４９细胞Ｂｃｌ-２蛋白的表达有关。     

人肺腺癌A549细胞系干细胞相关亚群的分离与鉴定

目的 分离人肺腺癌A549细胞系中的侧群(SP)细胞亚群并探讨其细胞特性.方法 采用免疫组化法检测人肺腺癌A549细胞系中ABCG2蛋白的表达.采用流式细胞术分选A549细胞系中的SP和非SP细胞亚群,并检测两亚群细胞的分化功能.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两亚群细胞的ABCG2蛋白表达,通过两亚群细胞的生长曲线、细胞分裂指数、细胞周期各时相分布、平板克隆形成实验、体外侵袭和迁移实验、化疗药敏试验、细胞内药物浓度测定以及裸鼠移植瘤实验,比较两亚群细胞的生物学行为,并用RT-PCR和免疫组化方法检测移植瘤组织中ABCG2的表达.结果 A549细胞系中ABCG2蛋白的阳性表达率为2.13%.通过流式细胞术能成功分选得到SP细胞和非SP细胞,SP细胞亚群可产生SP及非SP两种细胞,而非SP细胞只能产生非SP细胞.SP细胞表达ABCG2,非SP细胞则不表达.两细胞亚群的增殖、迁移能力相似,吸光度、分裂指数、细胞周期时相分布和细胞体外迁移实验穿过滤膜的细胞数差异均无统计学意义(均P＞0.05),但SP细胞的侵袭能力和成瘤能力强于非SP细胞,细胞体外侵袭实验穿过滤膜的细胞数、体外细胞克隆形成数和移植瘤成瘤率均高于非SP细胞(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05).SP细胞和非SP细胞对顺铂(DDP)的敏感性和细胞内药物浓度相似,非SP细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、依托泊苷(VP-16)、长春瑞滨(NVB)和吉西他滨(GEM)的敏感性及细胞内药物浓度则高于SP细胞(均P＜0.01).结论 人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群富集了肺癌干细胞,通过流式细胞仪分选肺腺癌SP细胞亚群是分离肺腺癌干细胞的有效方法.

Abstract：

Objective To isolate and characterize the side population cells(SP cells) in the lung adenocarcinomas cell line A549. Methods The protein expression of ABCG2 in human lung adenocarcinoma cell line A549 was detected by immunohistochemistry.SP and NSP cells in the cell line A549 were isolated by FACS,and their differentiation was analysed.ABCG2 expression in the two cell subsets was detected by RT-PCR.The cell growth curves,cell division indexes,cell cycles,plate clone formation tests,migration and invasion assays,chemotherapeutic susceptibility tests,tests of the intracellular drug levels,and the tumor cell implantation experiments on nude mice were applied to study the biological properties of the two cell subsets.The expression of ABCG2 in the transplanted tumor in nude mice was detected by immunohistochemistry and RT-PCR. Results The positive rate of ABCG2 expression in the A549 cells by immunohistochemistry was 2.13%.SP and NSP cells were isolated by FACS.The SP cells could produce both SP and NSP cells,while NSP cells only produced NSP cells.SP cells expressed ABCG2,but NSP cells did not.The proliferation and migration abilities of the two cell subsets were similar,but the invasion and tumorigenic ability of SP cells was significantly higher than that of NSP cells.The susceptibilities to DDP and its intracellular levels of the two cell subsets were similar,but the susceptibilities to 5-FU,VP16,NVB and GEM and their intracellular levels of NSP cells were significantly higher than those of the SP cells. Conclusions SP cells in the human lung adenocarcinomas cell line A549 is enriched with tumor stem cells.An effective way to get lung adenocarcinomas stem cells is to isolate SP cells by FACS.     

紫杉醇与吉非替尼对人肺腺癌细胞SPC-A1生长及细胞周期的作用

背景与目的既往研究显示,细胞毒化疗药物与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)吉非替尼同时使用治疗晚期非小细胞肺癌无临床获益。本研究观察紫杉醇与吉非替尼序贯应用对人肺腺癌细胞SPC-A1生长及细胞周期的影响,探索二者序贯用药是否比单药更有效及其可能的细胞学机制。方法RT-PCR法及Western blotting法分别检测SPC-A1细胞EGFRmRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果SPC-A1细胞EGFRmRNA及蛋白呈过表达,在(1×10-14-1×10-6)M范围内,紫杉醇和吉非替尼均明显抑制SPC-A1细胞生长,作用呈浓度和时间依赖性。二者联合作用对细胞生长的影响与给药的次序有关:跟单药组比较,同时给药或先用吉非替尼后用紫杉醇组对抑制细胞生长无显著增强作用,先用紫杉醇后用吉非替尼组对抑制细胞生长有明显增强作用。细胞周期显示:紫杉醇和吉非替尼分别将SPC-A1细胞阻滞于G2期和G1期,同时用药组或先用吉非替尼后用紫杉醇组G1期细胞显著增多而G2期细胞显著减少,先用紫杉醇后用吉非替尼组G2期细胞显著增多而G1期细胞显著减少。结论紫杉醇和吉非替尼都能抑制SPC-A1细胞的生长,二者联合作用对细胞生长的影响与给药次序有关,同时给药或先用吉非替尼后用紫杉醇对抑制细胞生长无显著增强作用可能与它们对细胞周期的影响相关,先用紫杉醇后用吉非替尼对抑制细胞生长的增强作用可能与对细胞周期的影响无关。