不同浓度硝酸银负载珊瑚羟基磷灰石的细胞毒性实验

背景:硝酸银负载珊瑚羟基磷灰石是一种具有抗菌性能的新型植骨材料,在国外已有大量的研究报道,但国内对其研究仅处于起步阶段.目的:制备载银珊瑚羟基磷灰石人工骨材料并观察其对L929细胞的毒性特征.设计、时间及地点:细胞学体外对比观察实验,于2008-10/11在解放军广州军区广州总医院中心实验室完成.材料:将自制的珊瑚羟基磷灰石浸泡于1×10-2,1×10-3,5×10-4,1×10-4,5×10-5,1×10-2 mol/L硝酸银溶液中制得不同浓度的载银人工骨材料.按1.25 cm2材料表面积/1 mL培养基比例加入培养基,37℃下浸提24 h.方法:将材料浸提培养基与L929细胞共培养48 h,运用MTT法测得细胞相对增殖度,用倒置相差显微镜观察细胞形态,结合中华人民共和国国家标准:GB/T16175-2008中的相关标准进行分析.主要观察指标:L929细胞在不同材料上的增殖情况及细胞的形态学变化.结果:MTT法检测结果表明硝酸银浓度≤5×10-5 mol/L时,材料对L929细胞生长无明显抑制作用;材料浸提液即使在高浸提比100%下,浸提产物也无细胞毒性作用.镜下观察发现5×10-5 mol/L组及1×10-5 mol/L组细胞形态正常,贴壁生长良好.结论:低浓度的载银珊瑚羟基磷灰石对体外培养的L929细胞的增殖、生长无明显毒性作用.     

自行设计模压增强法制备可塑形材料脱钙骨/聚乳酸重组人工骨的体外相容性

目的：脱钙骨和聚乳酸都是生物相容性良好的骨替代材料,观察脱钙骨/聚乳酸重组人工骨的体外相容性。 方法：实验于2004-05/2006-12在解放军成都军区总医院完成。①材料制备：将人成骨细胞与脱钙骨/聚乳酸重组人工骨薄片复合培养。实验分为两组,脱钙骨/聚乳酸重组人工骨组和盖玻片组。脱钙骨/聚乳酸重组人工骨组每孔中加入脱钙骨/聚乳酸重组人工骨薄片1片,盖玻片组加入盖玻片1片。②实验评估：相差显微镜逐日观察成骨细胞的生长及贴附情况;扫描电子显微镜下观察接种后第2,4,6,8天细胞在材料上的生长及附着情况;四甲基偶氮唑盐法分析脱钙骨/聚乳酸重组人工骨对成骨细胞生长及增殖的影响。 结果：①成骨细胞的生长及贴附：细胞接种24h后,脱钙骨/聚乳酸重组人工骨组和盖玻片组成骨细胞均完全贴壁。培养第2天,两组均开始出现细胞增殖;培养第4天,两组的细胞数量均明显增多,脱钙骨/聚乳酸重组人工骨周围的细胞继续保持数量上的优势;培养第6天,两组的细胞数量均迅速增多,脱钙骨/聚乳酸重组人工骨周围和培养孔周缘的细胞已连接成片;培养第8天,两组整个培养孔内的细胞均汇合成片,细胞形态无明显差别。②细胞在材料上的生长及附着：随着培养时间的延长,附着于材料表面和孔隙的细胞数量逐渐增多,并向孔隙内部长入,细胞形态以多角形为主。③脱钙骨/聚乳酸重组人工骨对人成骨细胞增殖的影响：除接种第2天外,各时间点脱钙骨/聚乳酸重组人工骨组细胞数量均显著高于盖玻片组（P〈0.01）。结论：脱钙骨/聚乳酸重组人工骨在体外能明显促进人成骨细胞的贴附和增殖,具有良好的细胞相容性。     

珍珠层人工骨对成骨细胞在体内外增殖的作用

目的:通过成骨细胞与珍珠层/聚乳酸人工骨复合后在体内外增殖的研究,探讨珍珠层/聚乳酸人工骨的生物相容性。方法:将新西兰大白兔成骨细胞种植到珍珠层/聚乳酸人工骨材料上,用四唑盐(MTT)比色法、扫描电镜研究成骨细胞在体外增殖情况;在体外用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记成骨细胞,并将标记的同种异体成骨细胞接种于珍珠层/聚乳酸人工骨表面,复合培养1周后植入体内,采用免疫组化法,与体外检测孔对比,检测成骨细胞在体内的存活、增殖情况。结果:MTT法显示随培养时间的延长,细胞在材料表面不断增殖;电镜显示,体外细胞在材料表面及孔隙中附着、生长良好,存在接触抑制现象;成骨细胞与珍珠层/聚乳酸人工骨复合后能在体内继续存活并增殖。结论:珍珠层/聚乳酸人工骨对成骨细胞在体内外增殖无明显影响,具有良好的生物相容性。     

生物运行骨材料与骨髓间充质干细胞体外的生物相容性

背景:生物衍生骨材料已在临床应用多年,但其作为组织工程骨支架材料的可行性还需验证.目的:评价异种生物衍生骨材料与骨髓间充质干细胞的生物相容性.设计、时间及地点:单一样本体外观察性实验,于2007-08/2008-01在中国辐射防护研究院医用组织库组织工程实验室完成.材料:山西省医用组织库生产的人松质骨;体外分离培养;周龄新西兰兔骨髓间充质干细胞.方法:经脱脂、脱钙、去抗原等步骤制各生物衍生骨材料,扫描电镜观察其表面超微结构.直接贴壁法分离培养兔骨髓间充质干细胞,MTT法和流式细胞仪检测生物衍生骨材料对骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响.PKH26标记骨髓间充质干细胞与生物衍生骨材料复合培养,荧光显微镜动态观察细胞在骨材料上的生长情况;扫描电镜观察细胞在骨材料上的贴附、生长情况.主要观察指标:①生物衍生骨材料的形态结构及骨髓间充质干细胞在其上的生长、增殖情况.②生物衍生骨材料的细胞毒性.结果:所制各的生物衍生骨材料呈白色,扫描电镜观察呈规则的疏松多孔结构,孔隙间有微孔相互连通.其对骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡无明显的影响;荧光显微镜下观察,在材料表面及孔隙内可见PKH26标记的细胞,显示红色荧光:扫描电镜观察可见细胞在材料上附着生长,细胞形态呈梭型或多角形,与材料贴附紧密.结论:实验制备的异种生物衍生骨材料细胞毒性低,与骨髓间充质干细胞具有良好的生物相容性.     

珍珠层人工骨对成骨细胞在体内外增殖的作用

目的：通过成骨细胞与珍珠层／聚乳酸人工骨复合后在体内外增殖的研究，探讨珍珠层／聚乳酸人工骨的生物相容性。方法：将新西兰大白兔成骨细胞种植到珍珠层／聚乳酸人工骨材料上，用四唑盐(MTT)比色法、扫描电镜研究成骨细胞在体外增殖情况；在体外用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记成骨细胞，并将标记的同种异体成骨细胞接种于珍珠层／聚乳酸人工骨表面，复合培养1周后植入体内，采用免疫组化法，与体外检测孔对比，检测成骨细胞在体内的存活、增殖情况。结果：MTT法显示随培养时间的延长，细胞在材料表面不断增殖；电镜显示，体外细胞在材料表面及孔隙中附着、生长良好，存在接触抑制现象；成骨细胞与珍珠层／聚乳酸人工骨复合后能在体内继续存活并增殖。结论：珍珠层／聚乳酸人工骨对成骨细胞在体内外增殖无明显影响，具有良好的生物相容性。     

胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜对犬血管内皮细胞的毒性

背景：前期实验利用脉冲激光沉积方法制作了胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜。目的：进一步分析胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜的组织相容性和毒性。方法：将传代的犬血管内皮细胞悬液接种在胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜材料上,1组置于含体积分数5%CO2、37℃恒温培养箱内静态培养3周,另1组置于含体积分数5%CO2、37℃恒温培养箱动态旋转培养3周,扫描电子显微镜下观察细胞在材料上的附着情况。采用MTT法测定血管内皮细胞与胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜材料复合培养的增殖能力。结果与结论：动态旋转培养中见人工机械瓣膜材料的表面有细胞附着,并且数目比静态培养多,细胞分布均匀,在培养第21天可见均匀细胞融合成片,将材料表面均匀覆盖;在静态培养中细胞成堆,分布不均匀。人工机械瓣膜材料对犬血管内皮细胞增殖无明显影响,细胞生长良好。表明胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜材料对血管内皮细胞的增殖无明显影响,无明显毒性,具有良好的生物相容性。     

松质骨基质材料应用于牙周组织工程的可行性

背景：松质骨基质材料具有骨诱导性和骨传导性双重特性,已被成功应用于骨再生及骨组织工程研究。目的：分析松质骨基质材料的细胞相容性与毒性,探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法：采用改良组织块法体外培养人牙周膜细胞,将其接种于松质骨基质三维支架上复合培养,采用细胞计数方法和扫描电镜观察人牙周膜细胞在松质骨基质支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶活性检测法观察松质骨基质浸提液对人牙周膜细胞增殖及功能表达的影响。结果与结论：扫描电镜可见松质骨基质具有良好的多孔网状结构,人牙周膜细胞在松质骨基质上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,而人牙周膜细胞在不同浓度材料浸提液中的生长、增殖及碱性磷酸酶活性与阴性对照组相比差异无显著性意义。表明松质骨基质具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望应用于牙周组织再生及牙周组织工程研究。     

胶原-生物衍生骨材料与兔成骨细胞的相容性及其体外附着特点

目的:观察胶原-生物衍生骨复合材料与兔成骨细胞的相容性及体外附着规律,为进一步的体内实验提供参考数据。方法:实验于2003-10/2005-02在华西医科大学组织工程实验室进行。①材料制备:新鲜捐献骨(人),经脱脂、脱蛋白等工艺制成单纯生物衍生骨材料,以Ⅰ型胶原通过真空吸附法修饰单纯生物衍生骨材料表面,构建出胶原生物衍生骨材料。②实验方法:将体外培养的兔骨膜成骨细胞分别复合于单纯生物衍生骨材料和胶原生物衍生骨材料,共同培养7d。③观察指标:分别于培养第1,3,5和7天取材,扫描电镜观察成骨细胞形态及附着情况;用紫外/荧光/可见光高效分析仪测定成骨细胞产生的碱性磷酸酶活性;MTT检测成骨细胞增殖情况;用流式细胞仪检测兔成骨细胞的细胞周期、DNA含量及倍体水平。结果:①扫描电镜结果:胶原生物衍生骨材料组成骨细胞黏附和增殖优于生物衍生骨材料组。②碱性磷酸酶活性:生物衍生骨材料组低于胶原生物衍生骨材料组(0.019±0.003,0.038±0.004,P<0.05)。③细胞增殖情况:在培养第1,3,5,7天胶原生物衍生骨材料组成骨细胞A值均高于生物衍生骨材料组(P<0.05)。④流式细胞检测生物衍生骨材料、胶原生物衍生骨材料对兔成骨细胞的细胞周期影响不大,各组细胞皆为正常的二倍体细胞,未见异倍体细胞形成,胶原修饰后无细胞毒性。结论:以单纯生物衍生骨作为载体,其表面经胶原修饰后的复合材料与成骨细胞有良好的细胞相容性,无细胞毒性。     

生物衍生骨材料与骨髓间充质干细胞体外的生物相容性

背景：生物衍生骨材料已在临床应用多年,但其作为组织工程骨支架材料的可行性还需验证。目的：评价异种生物衍生骨材料与骨髓间充质干细胞的生物相容性。设计、时间及地点：单一样本体外观察性实验,于2007-08/2008-01在中国辐射防护研究院医用组织库组织工程实验室完成。材料：山西省医用组织库生产的人松质骨;体外分离培养1周龄新西兰兔骨髓间充质干细胞。方法：经脱脂、脱钙、去抗原等步骤制备生物衍生骨材料,扫描电镜观察其表面超微结构。直接贴壁法分离培养兔骨髓间充质干细胞,MTT法和流式细胞仪检测生物衍生骨材料对骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响。PKH26标记骨髓间充质干细胞与生物衍生骨材料复合培养,荧光显微镜动态观察细胞在骨材料上的生长情况;扫描电镜观察细胞在骨材料上的贴附、生长情况。主要观察指标：①生物衍生骨材料的形态结构及骨髓间充质干细胞在其上的生长、增殖情况。②生物衍生骨材料的细胞毒性。结果：所制备的生物衍生骨材料呈白色,扫描电镜观察呈规则的疏松多孔结构,孔隙间有微孔相互连通。其对骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡无明显的影响;荧光显微镜下观察,在材料表面及孔隙内可见PKH26标记的细胞,显示红色荧光;扫描电镜观察可见细胞在材料上附着生长,细胞形态呈梭型或多角形,与材料贴附紧密。结论：实验制备的异种生物衍生骨材料细胞毒性低,与骨髓间充质干细胞具有良好的生物相容性。     

珍珠层聚乳酸人工骨的细胞毒性实验

目的研究珍珠层聚乳酸人工骨的细胞毒性。方法将人成骨细胞与珍珠层聚乳酸人工骨浸提液复合培养作为实验组,对照组单纯加细胞培养液。通过MTT法检测成骨细胞代谢活性;考马斯亮蓝测定细胞蛋白含量;金氏比色法检测细胞碱性磷酸酶活性。结果与人工骨材料浸提液复合培养的成骨细胞在细胞增殖状况、蛋白质含量、碱性磷酸酶活性等指标与正常组相比较差异无显著性。结论珍珠层聚乳酸人工骨材料对成骨细胞未产生毒性反应。     

四种正畸矫治弓丝的细胞毒性研究

目的评价四种临床常用正畸矫治弓丝经人工唾液浸泡腐蚀后的细胞毒性。方法选择正畸常用两种超弹性镍钛矫治弓丝和两种不锈钢矫治弓丝(A组:速航国产超弹性镍钛矫治弓丝;B组:Smart国产超弹性镍钛矫治弓丝;C组:PLASDENT国产不锈钢矫治弓丝;D组:ORMAER国产不锈钢矫治弓丝),在弱酸性(pH=6.0)人工唾液中浸泡4周后,取出试件制备浓度为20%、50%、100%的浸提液。使用不同浓度浸提液培养L-929细胞24 h、48 h后,分别使用SEM及MTT实验,初步评价四种矫治弓丝的细胞毒性。结果相同培养时间下,随浸提液浓度的增加,细胞相对增殖率减小,细胞毒性相对增加(P<0.05);相同浸提液浓度下,随培养时间的延长,细胞相对增殖率减小,细胞毒性相对增加(P<0.05)。100%浸提液浓度培养24 h后,四组浸提液均未对L-929细胞产生细胞毒性,培养48 h后,A、B、D三组浸提液对L-929细胞产生了轻微的细胞毒性,细胞毒性为1级,C组浸提液未对L-929细胞产生细胞毒性。结论经唾液浸泡腐蚀后的矫治弓丝,可能会引起轻微的细胞毒性,其结果应引起临床医生的重视。     

纳米载银磷酸锆抗菌聚氨酯的细胞毒性检测

背景：聚氨酯是一种研究热门的医用高分子材料,并在许多人工器官和医疗装置中发挥着至关重要的作用。目的：制备并观察纳米载银磷酸锆抗菌聚氨酯生物材料对 L929 细胞增殖活性的影响及细胞毒性反应。方法：采用 MTT 法检测各组抗菌聚氨酯对传代培养小鼠成纤维细胞 L929 的细胞毒性,L929 细胞接种于 96 孔板,随机分为 3 组进行培养,实验组用抗菌聚氨酯浸提液处理,阳性对照组用苯酚溶液,阴性对照组用高密度聚乙烯浸提液,于 24,48,72 h 后在倒置相差显微镜下观察细胞形态,通过 MTT 比色法检测各组细胞的相对增殖率,并评价材料的细胞毒性。结果与结论：实验组作用于小鼠成纤维细胞 24,48,72 h 后,相对增殖率分别为 94.3%～97.9%,94.5%～99.8%和90.8%～96.3%,材料细胞毒性评级为Ⅰ级。提示添加低浓度纳米载银无机抗菌剂 RHA-2（添加比例〈5%）的热塑性聚氨酯,无细胞毒性,符合医用生物材料安全标准。     

高精度快速成型模型的制作精度及其体外细胞毒性

背景：快速成型技术在手术模拟与组织工程研究的应用日益广泛,而现场手术模拟和术前指导对模型的精度要求非常高,且在术中使用模型应要求其对人体无毒性。目的：评估不同后处理方法快速成型模型的成型精度及其细胞毒性。方法：采用选择性激光烧结技术制作标准圆柱体样品模型,并经浸蜡或树脂处理后,测量模型的高度和底面直径,评估其成型精度。然后采用噻唑蓝法研究不同后处理的模型件对小鼠成纤维细胞L929和小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的毒性作用。实验分为石蜡处理组、树脂处理组、阴性对照组（未处理模型）、空白对照组（新鲜培养基）及阳性对照组（体积分数5%的DMSO）,培养2d后,490nm处测量吸光度,并计算其相对增殖率和评价细胞毒性等级。结果与结论：浸蜡、树脂处理后的模型以及模型原件的精度为95%～97%,误差为0.5～1mm。模型浸提液培养L929和MC3T3-E1细胞2d后,各实验组的细胞相对增殖率均大于80%,石蜡处理后的快速成型模型对L929和MC3T3-E1有较低的毒性作用,而树脂处理和未处理的模型对这两种细胞均无毒性作用,细胞毒性均为0～1级。     

Inhibition of the growth of Rickettsia prowazekii in cultured fibroblasts by lymphokines

The effect of lymphokine treatment of mouse and human fibroblast cell lines on the growth of Rickettsia prowazekii within the fibroblasts was studied. Treatment of mouse L929 cells with concanavalin A- or antigen- induced mouse lymphokines both before and after infection with R. prowazekii led to clearance of the rickettsiae from a substantial proportion of the cells and suppression of rickettsial growth in those cells which remained infected. Similar but less dramatic anti- rickettsial effects were observed in L929 cells treated with mouse lymphokines either only before or after infection with rickettsiae. Mouse lymphokine treatment of L929 cells had similar anti-rickettsial effects on the avirulent E strain and the virulent Breinl strain of R. prowazekii. Addition of cycloheximide or emetine to L929 cells at the same time as the lymphokines markedly suppressed the inhibition of rickettsial growth by the lymphokines. Mouse lymphokine treatment inhibited rickettsial survival and growth in mouse 3T3-A31 cells as well as in mouse L929 cells, but had no effect on rickettsial survival and growth in human foreskin fibroblasts. Conversely, concanavalin A- induced human lymphokines inhibited rickettsial survival and growth in human foreskin fibroblasts but had no effect on rickettsial survival and growth in mouse L929 cells. The rickettsia inhibitory activity in concanavalin A-induced mouse lymphokines was destroyed by heating the lymphokines at 80 degrees C for 10 min or by holding the lymphokines at pH 2 for 24 h but was retained after heating at 56 degrees C for 30 min.     

联合应用生长因子促骨髓间充质干细胞向韧带样细胞分化

背景：利用生长因子诱导骨髓间充质干细胞定向分化成韧带样细胞并促其分泌胶原蛋白是构建组织工程化韧带的关键。生长因子碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1在细胞定向分化过程中都起着十分重要的作用。目的：采用转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子诱导体外培养的兔骨髓间质干细胞,转化为韧带样细胞,并研究此种韧带样细胞的生物特性。方法：自幼兔四肢骨抽取骨髓分离纯化骨髓间充质干细胞并培养、增殖。采用10μg/L转化生长因子β1和25μg/L碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间质干细胞进行诱导分化,分为空白组、转化生长因子β1组、碱性成纤维细胞生长因子组、转化生长因子β1＋碱性成纤维细胞生长因子组。观察生长因子对骨髓间质干细胞生长、形态的影响,使用MTT法绘制细胞生长曲线,使用天狼腥红染色法定量对比骨髓间质干细胞分泌胶原蛋白量。把转化生长因子β1＋碱性成纤维细胞生长因子联合诱导的骨髓间质干细胞使用BrdU荧光染色标记,然后移植到脱细胞真皮基质上,观察细胞增殖分布情况,并与空白组对照。结果与结论：转化生长因子β1＋碱性成纤维细胞生长因子联合组,细胞形态优于空白组及单一因子组,细胞增殖率、胶原分泌量也较高。脱细胞真皮基质上,转化生长因子β1＋碱性成纤维细胞生长因子组细胞增殖分布情况明显优于空白组。提示联合使用生长因子转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子刺激兔骨髓间质干细胞,能够促使兔骨髓间质干细胞定向转化为韧带样细胞,对组织工程前交叉韧带的构建具有积极意义。     

Comparative studies of the toxicity of standard reference materials in various cytotoxicity tests and in vivo implantation tests.

Polyurethane films that contained various amounts of zinc diethyldithiocarbamate (ZDEC) and zinc dibutyldithiocarbamate (ZDBC) were prepared as standard reference materials (SRM). Using three cell lines of V79, L929, and Balb/3T3 cells, the cytotoxicity of the dithiocarbamates and the SRM films were compared by agar diffusion assay, filter diffusion assay, neutral red assay, cell growth assay, and colony assay. Among these in vitro cytotoxicity tests, colony assay was found to be the most sensitive method for detecting the cytotoxicity. The cytotoxic potentials of extracts from SRM films correlated well with the concentrations of ZDEC or ZDBC involved in SRM. When various rubber materials including SRM and surgical rubber latex materials were tested, cytotoxic potentials of these extracts were also correlated with the inflammatory tissue capsule thickness in short-term implantation tests. On the basis of these results, the SRM is judged to be useful for validating test sensitivity, and comparing the correlation between in vitro and in vivo responses.     

三种比色法评价4种牙科金属材料对L-929细胞的毒性

背景：采用不同方法评价材料的细胞毒性可能会得出不同的实验结果。目的：采用3种比色法评价镍铬合金、钴铬合金、3铬13及纯钛等牙科金属材料对小鼠成纤维细胞（L-929细胞）的细胞毒性。方法：以镍铬合金、钴铬合金、3铬13及纯钛4种牙科金属材料的浸提液分别作用于体外培养的L-929细胞24,72h。以体积分数10％小牛血清＋高糖DMEM培养液培养的L-929细胞为阴性对照组,以0.7％丙烯酰胺＋体积分数10％小牛血清＋高糖DMEM培养液培养的L-929细胞为阳性对照组,分别采用MTT、CCK-8及结晶紫3种比色法检测上述材料的细胞毒性。结果与结论：①4种材料浸提液中培养的细胞形态正常,胞内结构清晰,随着培养时间延长细胞大量增殖,与阴性对照组细胞形态无明显差异。阳性对照组细胞数量明显减少,形态完整性受破坏,形成大量细胞碎片。②培养24h时,CCK-8比色法检测中钴铬合金组的细胞相对增殖率低于阴性对照组沪〈0．05）,MTT及结晶紫比色法检测中钴铬合金组的细胞相对增殖率与阴性对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）;培养72h时,MTT比色法检测中4种牙科金属材料组细胞相对增殖率低于阴性对照组（P〈0．01）,CCK-8及结晶紫比色法检测中4组的细胞相对增殖率与阴性对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）,但材料细胞毒性均为0—1级。表明上述4种牙科金属材料细胞毒性均在临床应用的允许范围内,具有良好的生物安全性。     

Studies on the specificity of the L929 cell bioassay for the measurement of tumour necrosis factor

We report a study of the specificity of the L929 cell cytotoxicity assay for tumour necrosis factor (TNF) in clinical samples. Normal human serum caused marked killing and detachment of L929 cells. Despite heating at 56 degrees C for 30 min, followed by dilution, normal human serum still retained significant activity that could not be neutralized by a monoclonal antibody to TNF. In part this latter cytotoxicity was spurious, and related to detachment and clumping of viable cells. Recombinant human interleukin 1-beta (rhIL1-beta) and interferon-gamma (rhIFN-gamma) were not cytocidal, and did not synergize with recombinant human TNF (rhTNF) in the L929 cell bioassay. Although an antibody to TNF may be used to confirm specific activity, it is important to be aware of the limitations imposed by non-specific activity in serum and of the potential for synergy between TNF and other cytokines.     

Effect of calcitriol on peripheral blood lymphocyte cytotoxicity.

To clarify the biochemical mechanism responsible for the inhibition by calcitriol (1,25-dihydroxyvitamin D3) of cytotoxicity in peripheral blood lymphocytes (PBL), the human NK sensitive K562 cell line and the human tumor necrosis factor-sensitive murine L929 cell line were used as targets and subsequently compared. The cytotoxicity of PBLs for K562 cells was not changed by preincubation for 4 h with 10 ng/ml phorbol myristate acetate (PMA), but was reduced after an overnight preincubation with 10(-9) or 10(-8) M calcitriol. Using L929 cells, preincubation of PBLs with 10 ng/ml PMA for 4 h increased their cytotoxicity. Overnight incubation with calcitriol significantly reduced PBL cytotoxicity for L929 cells in a dose related manner and suppressed the enhancement of this cytotoxicity by PMA. Pretreatment of PBLs with cycloheximide reduced their cytolysis for L929 cells but did not change their cytotoxicity towards K562 cells. Consequently, the natural cytotoxicity of PBLs for K562 cells does not involve the same mechanism as their cytotoxicity for L929 cells and is therefore subject to different forms of regulation. However, calcitriol reduced PBL cytotoxicity towards both target cells.