测定司帕沙星间接竞争酶联免疫检测方法建立及应用

目的 建立快速、灵敏的司帕沙星残留间接竞争酶联免疫检测方法。方法 采用混合酸酐法,将司帕沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(sparfloxacin-BSA)和包被抗原(sparfloxacin-OVA)。通过背部多点免疫法免疫大白耳兔,制备了抗司帕沙星的特异性抗血清。结果 利用所获得的特异性抗血清,建立了测定司帕沙星的间接竞争酶联免疫检测方法(ciELISA),其线性范围为5ng/mL～2μg/mL(R2=0.9942),且与HPLC方法具有良好的相关性(R2=0.9918)。样品牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为93.7～110.3％、105.6～113.3％和90.2～98.1％％。应用所建立的方法,对司帕沙星大鼠体内药物分析及药品中的含量进行了测定。结论 本研究所建立的检测司帕沙星残留的酶联免疫检测方法具有样品处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,非常适合于生物样品分析及药品残留的筛选工作。     

超高效液相色谱法测定罗汉果中7种成分含量

目的 建立超高效液相色谱法(UPLC)测定罗汉果中11-O-罗汉果苷Ⅴ、罗汉果皂苷Ⅴ、赛门苷Ⅰ、罗汉果苷Ⅳ、罗汉果苷Ⅲ、罗汉果苷Ⅲe、罗汉果苷Ⅱe的含量。方法 采用Waters BEH C₁₈色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm),流动相为水-乙腈溶液,梯度洗脱;柱温35℃;流速为0.3 mL·min^-1;进样量为1μL;采用紫外检测器进行定量测定,检测波长203 nm;采用质谱检测器进行定性鉴别,检测模式为选择离子监测,监测离子的质荷比为1307.8,1309.8,1147.8,1147.8,985.7,985.7和823.7。结果 11-O-罗汉果苷Ⅴ、罗汉果皂苷Ⅴ、赛门苷Ⅰ、罗汉果苷Ⅳ、罗汉果苷Ⅲ、罗汉果苷Ⅲe、罗汉果苷Ⅱe分别在0.50～20.10,5.03～201.20,0.51～20.24,0.52～20.63,0.51～20.22,0.51～20.56,0.50～19.92μg·mL^-1范围内线性关系良好(r≥0.999);平均回收率分别为100.7%,98.4%,100.4%,99.0%,100...     

岩沙海葵毒素人工抗原的合成及鉴定

目的制备岩沙海葵毒素(PTX)的人工抗原和抗血清,为建立PTX的酶联免疫检测方法提供技术基础。方法用小分子succinimidyl3-(2-pyridyldithio)propionate(SPDP)将PTX巯基化成半抗原PTX-PDP,用2-iminothiolane将大分子载体蛋白质匙眼血蓝蛋白(KLH)巯基化成KLH-SH,再将PTX-PDP和KLH-SH反应合成人工抗原PTX-PDP-KLH免疫雌性6~8周龄Balb/c小鼠,进行多抗的制备。用同样的方法制备酶联免疫反应之包被抗原PTX-PDP-BSA,用于检测血清抗体效价。结果根据紫外检测图谱,PTX的最大吸收波长在264nm处,KLH及BSA的最大吸收波长在278及279nm处,而合成的人工抗原PTX-PDP-KLH和PTX-PDP-BSA的最大吸收波长分别在267和273nm处。抗血清经间接酶联免疫吸附法检测,效价达到1∶3200,且与正常Balb/c小鼠、昆明种小鼠及兔血清间无交叉反应。结论合成的人工抗原纯度高,具有较好的免疫原性。     

山楂叶不同采收期多种有效成分含量的比较

目的探索山楂叶最佳采收期。方法 HPLC条件:金丝桃苷检测采用Shim-pack C18(150mm×4.6mm,5μm);乙腈-甲醇-四氢呋喃-5 mL·L~(-1)醋酸溶液(1∶1∶19.4∶78.6)为流动相,检测波长为363nm。牡荆素鼠李糖苷检测采用Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);四氢呋喃-甲醇-乙腈-乙酸-水(38∶3∶3∶4∶152)为流动相;检测波长为330nm。总黄酮检测利用可见分光光度法,以芦丁对照品为对照,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系作显色剂,在500nm波长处测定总黄酮含量。结果金丝桃苷进样量在0.080 5~0.402 4μg范围内,质量浓度与峰面积线性关系良好(r=0.999 3);牡荆素鼠李糖苷进样量在0.418~2.090μg范围内,质量浓度与峰面积线性关系良好(r=0.999 1)。结论 5月采收的山楂叶中牡荆素鼠李糖苷含量最高;8~11月采收的山楂叶中金丝桃苷及总黄酮的含量较高。     

高效液相色谱法测定双水杨酯片的有关物质

目的建立HPLC法测定双水杨酯有关物质的方法。方法采用waters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20∶5∶5∶70)为流动相,流速为1.0 mL/min,波长为303 mm。结果双水杨酯中杂质游离水杨酸在2.97～29.7μg/mL的浓度范围内有良好的线性关系(r=0.997)。结论此法简便、快速、准确,适用于双水杨酯片中杂质游离水杨酸的测定。     

海洋真菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立及方法学评价

目的建立酶联免疫吸附法(ELISA)以检测海洋真菌多糖YS4108发酵过程中抗肿瘤多糖(YCP)的含量。方法以CDAP(1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐)为交联剂制备YCP-BSA偶联产物,利用该偶联产物为包被抗原,YCP为竞争抗原,两者与定量的YCP-McAb反应,建立检测YCP的间接竞争ELISA测定法。结果最佳抗原包被浓度为2.5 mg/L,最佳单抗工作浓度为1∶5 000,HRP-抗小鼠IgG工作浓度为1∶4 000。得到回归方程lg(B/B0%)=-0.171 8 lgCYCP+1.963 8,r=0.991 6,可测量最适范围为1~1 000μg/L,最小检测量为0.1μg/L,批内和批间RSD分别小于5.45%和8.37%。结论建立了快速测定YCP含量的间接竞争ELISA法。     

HPLC法测定利通淋胶囊中总黄酮醇苷的含量

目的建立HPLC法测定利通淋胶囊中总黄酮醇苷含量。方法采用Kromasil C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45);流速:1.0mL.min-1;测定检测波长为360nm。结果槲皮素在浓度4.067μg·mL-1~40.67μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9998);山奈酚在浓度0.871μg·mL-1~8.71μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9998);异鼠李素在浓度0.616μg·mL-1~6.16μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9996)。结论本方法简便、准确、专属性强,可测定利通淋胶囊中总黄酮醇苷的含量。     

间接竞争酶联免疫吸附法检测骨肽的研究

目的：研究酶联免疫吸附法对骨肽的检测。方法：考察抗原浓度、竞争时间、二抗浓度、工作时间、显色时间等对间接竞争酶联免疫吸附结果的影响。结果：检测抗原浓度为0.25μg/ml,竞争时间30min,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶400,二抗反应时间40min,显色时间15min。结论：本实验通过优化间接酶联免疫检测条件,建立了骨肽的间接竞争酶联免疫吸附检测方法,试验结果稳定,且精确度较好。     

反相高效液相色谱法测定橘红胶囊中柚皮苷含量

目的建立测定橘红胶囊中柚皮苷含量的反相高效液相色谱法。方法采用Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-醋酸(35∶61∶4),检测波长为283 nm,流速为1.0 mL/min。结果柚皮苷质量浓度线性范围为21.76～108.80μg/mL,平均回收率为98.47%,RSD=0.66%(n=6)。结论所用方法简便、结果准确,能有效控制橘红胶囊的质量。     

HPLC法测定阿扎胞苷中残留溶剂二甲基亚砜含量

建立高效液相色谱法(HPLC)测定阿扎胞苷中残留溶剂二甲基亚砜(DMSO)含量。采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX C8(4.6×250mm,5um);流动相为水-乙腈95∶5(V∶V),等度洗脱;检测波长为214nm;流速1.0mL/min。二甲基亚砜与相邻杂质峰分离度良好,在5.060～48.576μg/mL浓度范围内,线性关系良好(r=0.9995),定量限为5.06μg/mL,检测限为0.12μg/mL,平均回收率为100.5%。     

凝胶色谱法测定头孢克洛胶囊聚合物的含量

目的建立凝胶色谱法(SEC)测定头孢克洛胶囊聚合物.方法采用依利特色谱柱(填料:Sephadex G-10;尺寸:10.0mm×300mm);流动相A为pH 7.0的0.05mol?L-1的磷酸盐缓冲液[0.05mol?L-1的磷酸氢二钠溶液-0.05mol?L-1的磷酸二氢钠溶液(61∶39)],流动相B为超纯水;流速1.0mL?min-1;检测波长为254nm;进样量为100μL;以头孢噻肟对照品为替代对照品进行测定,按外标法定量.结果 头孢噻肟的线性范围为1.03μg?mL-1～10.29μg?mL-1(r=0.9999),定量限为1×10-3mg?mL-1,重复性良好(RSD为0.44%,n=5);供试品测定的线性范围为11mg?mL-1～46mg?mL-1(r=0.9997),重复性良好(RSD为2.76%,n=5).结论 该方法能够较好地分离头孢克洛和聚合物,可用于头孢克洛胶囊聚合物的检验.     

HPLC法同时测定活血止痛液中阿魏酸和咖啡酸的含量

目的：建立同时测定活血止痛液中阿魏酸和咖啡酸含量的HPLC方法。方法：采用Inertsil ODS-SP C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（17∶83）,流速为1.0 mL· min-1,柱温为30℃,检测波长为320 nm,进样量为10μL。结果：阿魏酸和咖啡酸与其他杂质峰分离良好。阿魏酸在1.766~35.328μg· mL-1范围内线性关系良好（r =0.9999）;咖啡酸在0.835~16.704μg· mL-1范围内呈现良好的线性关系（r=0.9993）,阿魏酸和咖啡酸的平均加样回收率分别为100.79%、101.05%,RSD分别为1.73%（n=9）、1.87%（n=9）。结论：本方法简便,测定结果准确,重复性好,可作为活血止痛液的质量控制方法。     

HPLC法测定注射用炎琥宁中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的含量

目的建立HPLC法测定注射用炎琥宁中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的含量。方法色谱柱watersC18（4．6μm×150μm）,乙腈-0．05mol·mL-1的磷酸二氢钾溶液（35：65）为流动相．流速为1．OmL·min-1,检测波长251nm。结果实验结果表明。脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯在39．87μmg·mL-1 -398．70μmg·mL-1。范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=O．9999）,平均回收率为100．34％,RSD=0．25％（n=9）。结论该方法简便快速,重现性好,可用于炎琥宁的质量控制。     

麻醉诱导期间靶控输注舒芬太尼对丙泊酚镇静作用的影响

目的:探讨麻醉诱导期间不同浓度舒芬太尼对睫毛反射、意识消失时丙泊酚血药浓度的影响。方法:选择40例择期手术患者靶控输注舒芬太尼、丙泊酚全凭静脉麻醉,根据舒芬太尼目标浓度将患者分为4组,分别为0ng·mL-(1A组)、0.2ng·mL-(1B组)、0.4ng·mL-(1C组)、0.8ng·mL-(1D组),每组10例。应用高效液相色谱-质谱联用法测定舒芬太尼血药浓度,反相高效液相色谱法测定丙泊酚血药浓度。结果:麻醉诱导睫毛反射与意识消失时,单用丙泊酚血药浓度分别为2.74μg·mL-1、3.87μg·mL-1;舒芬太尼靶浓度从0.2ng·mL-1升至0.8ng·mL-1,睫毛反射消失时丙泊酚血药浓度从2.67μg·mL-1降至1.58μg·mL-1、意识消失时从3.90μg·mL-1降至2.61μg·mL-1;舒芬太尼与丙泊酚在睫毛反射、意识消失时的量效关系均呈直线关系;D组分别与A、B组比较,在睫毛反射与意识消失时丙泊酚的效应室浓度均明显减少(P<0.05);D组与C组比较,在睫毛反射消失时丙泊酚的效应室浓度也明显减少。结论:麻醉诱导期舒芬太尼与丙泊酚在镇静催眠作用方面表现为相加作用,舒芬太尼靶浓度0.4～0.8ng·mL-1时可明显降低丙泊酚在睫毛反射与意识消失时的血药浓度,推荐临床应用舒芬太尼靶浓度0.4～0.8ng·mL-1为宜。     

酚酞片中荧光母素的限量检查方法研究

目的 建立RP-HPLC法测定酚酞片中荧光母素的含量.方法 采用 Agilent C18色谱柱（5μm,4.6mm×150mm）,柱温为25℃,以甲醇-0.05mol·L-1 NH4H2PO4（用磷酸调pH至3.31）（70：30）为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为284nm.结果 荧光母素在1.988μg·mL-1～11.928μg·mL-1的范围内线性关系良好（r=0.9995,n=5）,测得平均回收率为99.78%,RSD=0.45%（n=9）.结论 该方法稳定可靠,重现性好,灵敏度高,能更好的控制酚酞片的质量.     

HPLC法测定颠胃酸口服液中山楂酸的含量

目的 建立颠胃酸口服液中山楂酸的含量测定方法.方法 高效液相色谱法,色谱柱：Diamonsil-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-甲醇-磷酸三乙胺水溶液（其中含磷酸0.1%,三乙胺0.2%）（60：25：15）;检测波长210nm,进样量10μL,流速1.0mL·min-1,柱温25℃.结果 山楂酸在2.1～63.0μg·mL-1 范围内线性关系良好,y=0.4438X＋0.786（r=0.9990）,回收率为97.7%,RSD=1.32%（n=6）.结论 所建方法便捷、专属性强,适用于颠胃酸口服液中山楂酸的含量测定.     

甘草酸差向异构体在大鼠体内的药动学研究

目的研究甘草酸的差向异构体在大鼠体内的药物动力学特征。方法大鼠按25mg.kg-1的剂量分别灌胃给予甘草酸2种差向异构体,使用HPLC测定血药浓度,以DAS2.0软件拟合药动学参数,并用SPSS统计软件对α-甘草酸组和β-甘草酸组的药动学参数进行比较。结果甘草酸的差向异构体在体内转化为甘草次酸后主要药动学参数分别为：α-甘草酸组AUC0-36为（57.04±14.64）μg.mL-1.h,Cmax为（4.68±2.56）μg.mL-1t1/2为（5.56±1.65）h,tmax为（10.0±4.0）h;β-甘草酸组AUC0-36为（36.55±13.18）μg.mL-1.h,Cmax为（4.24±1.69）μg.mL-1,t1/2为（7.88±2.40）h,tmax为（9.0±1.1）h。结论甘草酸的差向异构体在体内转化为甘草次酸后的主要药动学参数存在显著性差异。     

吗替麦考酚酯软胶囊的药动学及生物等效性研究

目的:研究吗替麦考酚酯软胶囊与吗替麦考酚酯胶囊在健康人体内的相对生物利用度及药动学,评价2种制剂的生物等效性。方法:采用双周期随机交叉设计,20名男性健康志愿者单剂量口服试验软胶囊或参比胶囊4粒(每粒0.25g),以高效液相色谱法测定血浆中霉酚酸(MPA)浓度。运用DAS2.0软件处理血药浓度数据和计算药动学参数,对2种制剂做出生物等效性评价。结果:受试者口服1.0g吗替麦考酚酯软胶囊试验药或参比胶囊,其AUC0→t分别为(69.95±14.13)、(66.95±19.05)μg·h·mL-1,AUC0→∞分别为(85.18±20.51)、(77.39±23.78)μg·h·mL-1,Cmax分别为(31.26±13.09)、(31.90±14.45)μg·mL-1,tmax分别为(0.875±0.358)、(0.775±0.291)h,t1/2分别为(20.342±12.546)、(18.837±11.579)h。20名健康志愿者单剂量口服吗替麦考酚酯软胶囊试验药的相对生物利用度为(109.6±26.9)%。结论:试验软胶囊与参比胶囊具有生物等效性。     

HPLC法测定益心颗粒中五味子醇甲的含量

目的 建立益心颗粒中五味子醇甲的含量.方法 采用高效液相色谱法.Welch Materials Cl8色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：甲醇-水（68：32）;检测波长：250nm;流速：1.0mL·min-1;柱温：25℃;进样量：10μL.结果 五味子醇甲在2.172μg·mL-1～34.752μg·mL-1范围内与其峰面积线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为98.93%,RSD为1.07%.结论 该方法快速、简便、结果可靠,可用于控制益心颗粒的质量.     

市售不同批次西洛他唑片人体药动学参数比较

目的:比较市售不同批次西洛他唑片的人体药动学参数。方法:18～22名健康志愿受试者单剂量口服中国大冢制药有限公司生产的不同批次西洛他唑片后,用高效液相色谱法测定血药浓度,以3p97计算机软件计算药动学参数。结果:该厂生产的5个批次西洛他唑片在人体内的药-时曲线均符合二室模型,主要药动学参数分别为:cmax(0.99±0.37)、(0.87±0.38)、(0.81±0.27)、(0.92±0.30)、(1.09±0.46)μg·mL-1,tmax(3.88±1.19)、(3.22±1.26)、(3.33±1.50)、(3.28±0.96)、(3.05±1.05)h,AUC0～48h(12.84±4.10)、(11.07±3.72)、(10.77±3.39)、(10.65±2.44)、(11.09±4.09)μg·h·mL-1。主要药动学参数经t检验,无显著性差异。结论:该厂家生产的不同批次的西洛他唑片在人体内的药动学过程基本一致,质量稳定,可用作西洛他唑片仿制药品的参比制剂。