灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠附睾细胞线粒体Ca~(2+)细胞色素C的影响

目的:研究灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠附睾组织中细胞色素C(Cyt-C)、线粒体Ca2+的影响。方法:青春期Wistar大鼠50只,大鼠尾静脉一次性注射2%链脲佐菌素(STZ)或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液制备2型糖尿病大鼠模型和对照组模型。糖尿病大鼠模型随机分模型组和灵芝组,每组20只,分别给以高脂高糖饮食、高脂高糖+灵芝孢子粉[250mg/(kg.d)],对照组10只,正常饮食。10周后,取双侧附睾,检测附睾细胞线粒体Ca2+、Cyt-C含量。结果:2型糖尿病模型制备成功,模型组附睾细胞线粒体Ca2+含量[(3.279±0.502)mg/L]明显高于对照组[(2.606±0.048)mg/L,P<0.01],灵芝组[(2.693±0.196)mg/L]明显低于模型组(P<0.05),与对照组差异无显著性(P>0.05)。模型组线粒体Cyt-C含量[(3.213±1.511)μmol/L]明显少于对照组[(5.688±1.679)μmol/L,P<0.05],胞质Cyt-C含量[(2.484±0.661)μmol/L]明显高于对照组[(1.574±0.329)μmol/L,P<0.01];灵芝组线粒体Cyt-C含量[(5.258±1.560)μmol/L]高于模型组,但差异无显著性(P>0.05),胞质Cyt-C含量[(1.727±0.396μmol/L]明显低于模型组(P<0.05),与对照组差异无显著性(P>0.05)。结论:2型糖尿病大鼠附睾细胞钙稳态失衡、线粒体有损伤,附睾细胞可能存在细胞凋亡过度。灵芝孢子粉在糖尿病状态下,对附睾组织有保护作用或有对抗细胞凋亡作用。     

青春期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾细胞线粒体Ca~(2+)和细胞色素C的影响

目的 :探讨外科所致的精索静脉曲张对青春期大鼠附睾细胞线粒体Ca2 + 及细胞色素C的影响。　方法 :对 4 0只青春期雄性Wistar大鼠 ,通过部分结扎左肾静脉或显露左肾静脉建立精索静脉曲张模型 (VG ,2 0只 )和假手术模型 (SOG ,2 0只 ) ,术后 10周 ,取双侧附睾 ,检测附睾头、体部细胞线粒体Ca2 + 、细胞色素C含量。　结果 :与SOG组相比 ,VG组附睾细胞线粒体Ca2 + 含量显著降低 (P <0 .0 0 1) ,细胞色素C含量显著增高 (P <0 .0 5 )。　结论 :外科所致精索静脉曲张大鼠附睾细胞钙稳态失衡、线粒体有损伤 ,这些变化可能是影响其生育能力的机制之一。     

糖尿病大鼠睾丸组织黄嘌呤氧化酶、髓过氧化物酶和线粒体琥珀酸脱氢酶的变化和灵芝孢子粉的干预

目的:探讨糖尿病大鼠睾丸组织黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)和线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)的变化及灵芝孢子粉对睾丸组织的保护作用。方法:将清洁级Wistar大鼠50只,随机分成3组(对照组10只、模型组20只、灵芝孢子粉组20只)。模型组及灵芝孢子粉组以25mg/kg的剂量一次性腹腔注射2%链脲佐菌素,对照组腹腔注射等量柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。正常饮食喂养2周后,进行糖耐量试验,模型组和灵芝孢子粉组糖耐量异常者保留,余去除,并改喂高脂高糖饮食,灵芝孢子粉组另加灵芝孢子粉[250mg/(kg.d)]持续10周,动物均单独喂养,实验结束前1d做糖耐量试验,取睾丸。检测睾丸组织XOD、MPO和线粒体SDH。结果:模型组睾丸组织的SDH较对照组和灵芝孢子粉组明显降低(P<0.05),而XOD和MPO明显高于对照组和灵芝孢子粉组(P<0.05)。模型组生精小管层次不清,精子生成量减少或消失,管腔不规则,腔周围纤维组织(间质)增生,基膜增厚,血管壁纤维组织样增生硬化。灵芝孢子粉组生精小管层次比较清析,管腔规则,有大量精子生成,间质无增生,血管基膜增生硬化不明显。结论:灵芝孢子粉能减少自由基对睾丸组织的损伤,提高SDH活性,从而对糖尿病大鼠睾丸组织起保护作用。     

线粒体细胞色素C释放在H2O2诱导内皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨线粒体及其细胞色素C释放,在过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡信号途径中的作用。方法：人脐静脉内皮细胞和100umol/L H2O2共同培养24h,或内皮细胞先与环孢霉素A（cyclosporin A,CsA)孵育30min后加入H2O2;在不同时相点取细胞作DAPI染色计数凋亡细胞数量,同时用Rhoadminel23聚集法观察线粒体通透性的变化。Western bolt检测早期线粒体和血浆中细胞色素C浓度的变化。结果：H2O2处理细胞后,细胞呈现出典型的凋亡形态：细胞皱缩,胞核致密,凋亡小体形成,从处理后4h起凋亡细胞数量迅速增加,至12h达峰值,CsA可以明显抑制H2O2诱导内皮细胞亡的作用。H2O2可诱导线粒体细胞色素C浓度的下降,使得胞浆中细胞色素C浓度升高,同样线粒体中Rhoadminel23浓度下降,线粒体通透性增加,而CsA则可以明显抑制二的变化。结论：H2O2促进细胞色素C释放进入胞浆,导致内皮细胞的凋亡,CsA抑制凋亡的机制是通过保护线粒体膜的正常功能来实现的。     

米诺环素对大鼠脊髓损伤后线粒体细胞色素C的释放及神经细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用米诺环素（minocycline）对线粒体细胞色素C的释放及神经细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠脊髓损伤后分为应用米诺环素腹腔注射的治疗组（A组）和应用生理盐水的对照组（B组），于损伤后不同时间点取材，采用流式细胞仪磷脂结合蛋白V，碘化丙啶（AnnexinV／PI）双标检测凋亡细胞，HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，免疫组化染色检测胞浆中细胞色素C表达阳性的神经细胞以及BBB运动评分观察术后动物行为学。结果：HE染色镜检发现损伤脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组；免疫组化染色A、B两组均发现凋亡的神经细胞以及胞浆中细胞色素C的阳性表达，神经细胞凋亡率及细胞色素C表达的阳性细胞率B组均〉A组（P〈0．01）；术后动物行为学观察显示，与B组比较A组大鼠后肢的运动功能显著增强，后肢反射的恢复较快。BBB运动评分B组明显小于A组（P〈0．05）。结论：米诺环素能有效抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡以及线粒体中细胞色素C的释放，促进神经功能的恢复。     

烯丙基半胱氨酸对糖尿病大鼠睾丸功能的影响

目的 探讨抗氧化物烯丙基半胱氨酸( S-allyl cysteine,SAC)对糖尿病大鼠睾丸功能的影响.方法 将21只SD大鼠随机分成3组,每组7只:正常对照组(N)、糖尿病组(DM)和糖尿病SAC治疗组(SAC).通过腹腔注射链脲佐菌素(60mg/kg)诱导糖尿病模型.糖尿病SAC治疗组大鼠每天灌胃SAC 150 mg/kg,其余组大鼠用纯水替代.30d后检测各组大鼠血清睾酮、睾丸组织丙二醛含量,观察睾丸组织学差异,TUNEL法检测睾丸细胞凋亡情况.结果 与正常对照组大鼠相比,糖尿病组大鼠生精小管形态发生严重紊乱,血清睾酮含量显著减少,睾丸组织丙二醛含量显著增高,生精细胞凋亡明显增加.糖尿病大鼠经SAC治疗后,生精小管形态显著改善,血清睾酮水平明显提高,睾丸组织丙二醛含量明显降低,生精细胞凋亡显著减少.结论 SAC可能通过抗氧化作用,减轻糖尿病对大鼠睾丸功能的损害.     

营养性肥胖对青春期雄性大鼠睾丸发育过程的影响

目的:探讨以高脂饲料配方建立的营养性肥胖大鼠模型对青春期雄性大鼠睾丸发育过程的影响。方法:21日龄雄性清洁级SD大鼠80只,断奶适应性饲养3 d后,随机分为对照组(n=32)和实验组(n=48)。以高脂饲料建立营养性肥胖动物模型。观察喂养后第3、4、5、6周末(即鼠龄为6、7、8、9周)大鼠体重、Lee's指数、睾丸重量、附睾重量的变化;全自动生化分析仪检测外周血甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC);全自动微粒子化学发光免疫分析系统检测血清T、E2;HE染色观察睾丸发育的形态学改变。结果:高脂喂养的实验组大鼠在第3周末平均体重已明显增加(P<0.05),至第6周末,实验组大鼠较对照组超重达26.6%(P<0.01),Lee's指数也明显大于对照组(P<0.01);实验组大鼠第5、6周末的睾丸系数下降明显(P<0.05);实验组每周龄大鼠血清TG,TC水平均比对照组明显升高;实验组每周龄大鼠的T水平均明显低于对照组(P<0.05),E2水平在第3、4、5周虽低于对照组,而在第6周则呈现明显增加趋势,且显著高于对照组(P<0.01);光镜下可见实验组大鼠睾丸生精上皮细胞排列紊乱,细胞层次减少,成熟的精子数量较少。结论:高脂、高能量饮食可诱发青春期雄性大鼠营养性肥胖,随着肥胖程度的逐渐加重,可造成睾丸发育不全、睾丸生殖内分泌功能障碍。     

细胞色素C在ATP耗竭诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 研究线粒体细胞色素C的释放在ATP耗竭导致的肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制。方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断细胞内ATP的生成，诱导细胞凋亡。利用JC-1测定线粒体膜电位的变化。以间接免疫荧光和western印迹检测细胞色素C在细胞内的分布。荧光肽法测定Caspase3的活性。琼脂糖凝胶电泳分析DNA碎解。结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭时，线粒体膜电位显著降低，细胞浆内细胞色素C的含量增多，Caspase3活性增强。细胞内ATP再恢复时，细胞色素C的释放和Caspase3活性继续增加，并出现DNA的碎解。结论 肾小管上皮细胞ATP耗竭时，线粒体细胞色素C的释放在介导Caspase依赖的细胞凋亡通路中发挥重要作用。     

解脲支原体对雄性大鼠睾丸组织的影响

目的 探讨解脲支原体(UU)体对雄性大鼠睾丸组织的影响.方法 建立UU血清型8型感染大鼠睾丸模型,观察模型鼠睾丸组织病理改变,应用免疫组化法标记Toll样受体,观察模型鼠睾丸组织感染UU后局部免疫反应.结果 (1)接种UU 40d后,大鼠睾丸组织感染率为91.2%;(2)睾丸小叶明显萎缩,生精小管变性坏死,与对照组有明显差异;(3)睾丸组织中无明显炎症细胞浸润;(4)TLR2标记阳性,TLR4标记阴性.结论 UU对睾丸组织有明显损伤作用,但局部免疫反应未被启动,损伤作用并非免疫反应引起.     

细胞色素C在缺血/再灌注损伤中的作用

细胞色素C为线粒体呼吸链复合体Ⅲ的成分,在复合体Ⅲ和Ⅳ之间传递电子。许多因素可刺激细胞色素C从线粒体释放,一旦其释放到胞浆中就可依赖于细胞内ATP水平诱导细胞凋亡或坏死。研究表明缺血／再灌注损伤与细胞色素C释放密切相关。现从细胞色素C的结构和特性、释放及其调控、缺血再灌注损伤对细胞色素C释放的影响以及其在缺血再灌注损伤中的作用等方面进行综述。     

柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量

目的:建立用于测定灵芝孢子粉中氨基酸含量的柱前衍生化高效液相色谱方法.方法:采用邻苯二甲醛(OPA)和9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)联用对灵芝孢子粉中的氨基酸进行衍生,色谱条件为:Advance Bio AAA(100 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,流动相A为0.01 mol/L磷酸氢二钠和0.01 mol/L...     

灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠氧化应激的影响

目的研究灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病大鼠氧化应激的影响。方法 采用斯泼累格·多雷（SD）大鼠高脂饮食4周后,腹腔注射小剂量链脲佐菌素30 mg.kg-1造模。成模后将大鼠随机分为模型对照组、灵芝多糖组（给予灵芝多糖600 mg.kg-1）、二甲双胍组（给予二甲双胍600 mg.kg-1）及联合用药组（给予灵芝多糖300 mg.kg-1＋二甲双胍300 mg.kg-1）,另设正常对照组。给药治疗12周末测量大鼠空腹血糖;测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）水平。结果用药组空腹血糖水平均低于模型对照组（P<0.01）,其中联合用药组血糖显著低于单独用药组（P<0.01）。与模型对照组比较,用药组血清TC、TG水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,与单独用药组比较,联合用药组血清TC、TG水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组比较,用药组血清SOD水平明显升高（P<0.01）;与单独用药组比较,联合用药组血清SOD水平明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清MDA水平明显降低（P<0.01）,联合用药组血清MDA较单独用药组明显降低（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清CAT、GSH-Px水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,联合用药组血清CAT、GSH-Px水平较单独用药组明显升高（P<0.05）。结论 灵芝多糖、二甲双胍联合用药能够有效对抗2型糖尿病大鼠体内氧化应激作用,效果优于单独用药,其机制可能与增强体内SOD、CAT、GSH-Px水平及调节血脂障碍有关。     

灵芝壳聚糖的特性及其在生物医学材料领域中的应用

灵芝壳聚糖是带有正电荷的天然多糖,具有良好的生物相容性与降解性,还具有抗炎、抗氧化、 抗菌、促进伤口愈合等作用。灵芝壳聚糖作为灵芝的有效成分之一,在理化性能等方面区别于下虾蟹壳 中的壳聚糖,具有独特的优势。目前商品化的壳聚糖多数来源于虾蟹壳等,以灵芝为来源的壳聚糖商品较 少。本文综述了灵芝壳聚糖的特性以及在生物医学材料行业中的应用优势,以期为灵芝壳聚糖的开发与生 物医学应用提供参考。     

eNOS和P450在大鼠性成熟期睾丸的表达及意义

目的:探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和细胞色素P450(芳香化酶)在雄性SD大鼠性成熟期睾丸中的表达及意义。方法:选取出生后5周、7周和10周的雄性SD大鼠各6只,左侧睾丸行石蜡切片,运用免疫组化ABC法观察eNOS和P450在雄性SD大鼠性成熟期睾丸中的表达变化情况。结果:出生后5周、7周和10周,睾丸间质细胞胞质eNOS和P450免疫反应阳性,阳性程度皆为(+++)、(+)和(++);精母细胞胞质eNOS和P450免疫反应阳性表达,但细胞数量较少,且无规律可循。结论:在性成熟期雄性SD大鼠的睾丸间质细胞中,随着性成熟发育的进展过程,eNOS和P450的表达强弱有所不同,且两者具有关联性。     

灵芝壳聚糖促进轻医美项目导致的创面修复研究进展

轻医美项目后形成创面、伤口愈合过程的生理机制复杂,涉及不同成分之间的相互作用,表现为 出血、疼痛、红斑等。炎症因子介入、细菌数量的控制等相关因素均可影响创面修复进程。灵芝壳聚糖是 具有正电荷的天然多糖,具有高生物相容性和低免疫原性,不会引起排异反应或过度免疫反应,还具有抗 炎、抗氧化、抗菌、促进伤口愈合等作用,是创面修复的天然生物材料。近几年来灵芝壳聚糖在轻医美项 目导致的创面中展示出良好的修复效果,本文主要综述了医疗美容分类、轻医美后创面表现及灵芝壳聚糖 在轻医美创面修复中的应用优势,以期为灵芝壳聚糖生物材料在医疗美容领域的发展提供一定参考。     

苯甲酸雌二醇对大鼠睾丸组织发育的影响

目的:研究苯甲酸雌二醇(E2B)对雄性大鼠睾丸组织发育的影响。方法:选取新生雄性SD大鼠40只,随机均分为实验组和对照组,在生后1d分别皮下注射E2B(0.2mg/5g体重)、等体积的溶剂玉米油,分别于生后14、21、28、42、56d取睾丸并称重。测量头段及尾段生精小管管径(TD)及上皮高度(SEH),并计算头段及尾段TD/SEH比值、尾段SEH/头段SEH比值,分析生精小管内生精细胞发育状况。结果:各年龄段实验组大鼠睾丸重量显著下降(P<0.01),睾丸始终停留在腹腔。睾丸网内始终有液体潴留,从出生后21d开始,实验组大鼠头段睾丸的生精小管的TD/SEH比值明显大于对照组(P<0.01),尾段SEH/头段SEH比值也显著增加(P<0.01);实验组生精细胞发育明显迟滞于对照组(P<0.01)。结论:E2B可以造成雄性大鼠睾丸内液体潴留、隐睾,从而阻滞睾丸组织的正常发育。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响

目的:研究青春期大鼠实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对睾丸和附睾中胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(CRES)蛋白表达的影响,探索精索静脉曲张导致不育的机制。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化及蛋白印迹方法检测CRES蛋白在ELV 2周组(n=8)、4周组(n=8)及其相应的对照组(n均=5)大鼠睾丸和附睾头、体、尾中的表达变化。结果:免疫组化显示,CRES蛋白在ELV实验组和对照组大鼠睾丸和附睾中均有表达。在睾丸中,CRES蛋白主要定位于圆形和长形精子细胞的胞质、精子的顶体以及残余体中,其表达与生精周期密切相关,Ⅰ~Ⅲ和Ⅸ~ⅩⅣ期表达最强,Ⅶ~Ⅷ期表达次之,Ⅳ~Ⅵ期表达减弱。在附睾中,CRES蛋白主要表达于从附睾起始段到尾部的上皮主细胞的胞质中,且以体、尾部表达最强,头部次之,管腔分泌物也呈阳性表达。实验组比对照组CRES蛋白表达增强。W estern印迹显示:实验组和对照组大鼠睾丸和附睾在相对分子质量(Mr)为19 000和14 000处均可见CRES蛋白条带,其中以Mr19 000处表达更为明显。实验组CRES蛋白的表达比对照组明显增强。对免疫组化和W estern印迹结果进行灰度值和积分吸光度值(IA)测定,并经统计学分析显示:ELV 2周组和4周组比其相对应的对照组表达增强且差异有显著性(P<0.05或P<0.01),而ELV各组间未见CRES蛋白表达有明显差异(P>0.05)。结论:CRES蛋白在大鼠睾丸和附睾中均有表达,睾丸中表达呈现生精周期特异性和细胞特异性,附睾中表达呈现附睾上皮区段和细胞特异性;CRES蛋白在青春期ELV大鼠睾丸和附睾中的表达比对照组明显增强。这些结果提示CRES蛋白在精子发生和精子成熟过程中可能起着重要的作用,并且可能与ELV引起的不育或生育力低下有关。