白血病K562/A02细胞Mdrl基因的表达及解毒化淤药干预作用研究

目的 探讨解毒化淤药含药血清对白血病K562/A02细胞Mdrl耐药基因表达的影响.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化淤药含药血清处理后K562/A02细胞Mdrl基因的表达,并与干扰素作对照.结果 解毒化淤药含药血清能够降低K562/A02细胞Mdrl基因的表达.结论 解毒化淤药含药血清通过降低K562/A02细胞Mdrl耐药基因的表达,逆转白血病细胞耐药.     

解毒化淤药血清对K562/A02细胞P-gp、Bcl-2影响的研究

目的探讨解毒化淤中药血清对白血病K562/A02耐药细胞P-gp、Bcl-2基因表达的影响。方法应用血清药理学方法制备解毒化淤药的兔血清,以MTT法检测含药血清处理后K562/A02耐药细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化方法检测P-gp、Bcl-2的表达。结果 MTT结果显示不同浓度中药血清对K562/A02细胞均有耐药逆转作用,其逆转倍数随剂量增加而增大;免疫组化结果显示解毒化淤药中药血清能够下调K562/A02细胞P-gp和Bcl-2的表达。结论解毒化淤药逆转K562/A02细胞耐药的机制可能是通过下调P-gp、Bcl-2的表达而逆转耐药的。     

姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用研究

目的:研究姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用,初步探讨其逆转机制。方法:MTT法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性的变化;免疫组织化学法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞与其亲本K562细胞膜P-gp的表达;流式细胞术检测K562和K562/A02细胞内柔红霉素(DNR)的平均荧光强度(mean fluo-rescene intendity,MFI);RT-PCR法检测K562/A02细胞mdr1 mRNA。结果:用2.5 mg.L-1姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性提高;姜黄素水解物能降低K562/A02细胞膜P-gp的表达(P0.05)。K562/A02细胞内DNR的MFI低于K562细胞(P0.01),姜黄素水解物能增加K562/A02细胞内DNR的MFI(P0.05);姜黄素水解物处理后K562/A02细胞内mdr1 mRNA下降。结论:姜黄素水解物具有体外逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,且降低K562/A02细胞膜P-gp的表达降低化疗药物外排增强化疗药物在细胞内的潴留可能是其逆转作用的机制之一。     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡干预作用的初步研究

目的:探讨益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡作用的影响。方法:采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562/A02白血病细胞,采用MTT比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测益气养阴解毒含药血清诱导K562/A02细胞凋亡的影响。结果:不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。高、中、低剂量的益气养阴解毒方含药血清可诱导K562/A02细胞的凋亡,其凋亡作用以中、高剂量中药血清组最强。结论:益气养阴解毒方含药血清具有抑制K562/A02白血病细胞增殖作用,可诱导K562/A02白血病细胞明显凋亡,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

解毒化瘀药逆转白血病K562/A02细胞多药耐药作用的研究

目的:探讨解毒化瘀中药复方含药血清对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用。方法:应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀药的兔血清,以MTT法检测经含药血清、干扰素、川芎嗪处理后K562/A02细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测K562/A02耐药细胞内柔红霉素(DNR)的潴留情况。结果:MTT结果显示,3组药物对K562/A02细胞的耐药逆转倍数分别为9.30倍、5.27倍和3.36倍,其耐药逆转率均在70%以上;流式细胞仪检测结果显示3种药物均可明显增加K562/A02细胞内DNR的浓度,解毒化瘀药含药血清作用最强,与川芎嗪组相比具有显著差异(P<0.01),但与干扰素组相比无明显差异(P>0.05)。结论:3种药物均对K562/A02细胞的耐药具有逆转作用,逆转强度依次为解毒化瘀药含药血清、干扰素、川芎嗪。     

解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞耐药逆转作用的研究

目的研究解毒化瘀方对白血病K562／A02细胞的耐药逆转作用。方法应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀方的兔血清,以MTT法检测经含药血清处理后K562／A02细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化法检测含药血清对K562／A02耐药细胞内柔红霉素（DNR）潴留的影响。结果解毒化瘀方含药血清中、高剂量组可增加化疗药物对K562／A02细胞的细胞毒作用,明显提高K562／A02耐药细胞内DNR的浓度（P〈0．05）。结论解毒化瘀方含药血清能逆转K562／A02细胞的耐药性,并呈剂量依赖性。     

士的宁对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制作用的实验研究

目的:研究士的宁(Strychnine)对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制的逆转作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测士的宁的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)分别检测非细胞毒浓度(IC10)的士的宁对K562/A02细胞MDR1基因、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)基因、拓扑异构酶Ⅱ(topoi-someraseⅡ,TopoⅡ)基因、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione s-transferase,GST-π)基因及其表达产物的影响。结果:非细胞毒浓度(IC10)的士的宁作用后,K562/A02细胞的MRP基因及其表达产物表达降低;而MDR1、TopoⅡ、GST基因及其蛋白的表达无明显变化。结论:士的宁能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MRP基因及其蛋白的表达有关。     

半夏醇提取液逆转多药耐药细胞系K562/A02的耐药性

目的:观察非细胞毒性浓度(抑制率≤5％)半夏醇提取液对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.方法:将细胞悬液接种于72孔培养板中,细胞数为2 ×108个/L,半夏醇提取液(2.5,5,10,20,40μg·L-1)处理K562/A02细胞72 h后,采用MTT法测定半夏醇提取液的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的半夏醇提取液处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白p170表达的变化与细胞内柔红霉素的浓度,应用SPSS 16.0软件包对实验结果进行统计学处理.结果:半夏醇提取液对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为6.5 μg·L-1,非细胞毒性浓度半夏醇提取液可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度( IC50),使K562/A02细胞的IC50由原来的(30.9±0.11) μg·L-1降低至(10.1±0.21) μg·L-1,其逆转倍数为3.06倍;半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,细胞膜糖蛋白p170的表达从91.21％下调至45.12％ (P ＜0.01);柔红霉素外渗试验显示,半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,可使细胞内化疗药物的浓度明显增加.结论:半夏醇提取液可部分逆转多药耐药细胞系K562/A02细胞对阿霉素的耐药性,半夏醇提取液逆转白血病细胞耐药性是通过下调了白血病细胞膜糖蛋白p170的表达,使其将化疗药物泵出细胞外的功能受到了抑制,从而使化疗药物在白血病细胞内能达到有效浓度,从而可以杀灭耐药的白血病细胞系.     

当归药物血清逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药性的初步观察

目的:以白血病多药耐药细胞系K562/A02为对象,观察当归能否逆转其对阿霉素的耐药性.方法:采用MTT法观察当归药和血清对阿霉素细胞抑制率的影响(IC50).结果:经MTT法发现当归药物血清能增加K562/A02对阿霉素的敏感性,使阿霉素半数抑制浓度(IC50)由14.9mg/L,降至9.17mg/L,部分逆转了K562/02对阿霉素耐药性,逆转倍数为1.63倍.而当归对K562/S敏感细胞系无上述作用.结论:当归能部分逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性.     

药根碱诱导白血病K562细胞凋亡的研究

 目的 研究药根碱对白血病K562细胞的生长抑制及凋亡作用,探讨药根碱诱导K562细胞凋亡的可能途径。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药根碱对K562细胞的生长抑制作用;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法、碘化丙啶(PI)染色法观察药根碱对K562细胞凋亡的诱导作用;利用活细胞高内涵成像系统检测细胞内线粒体膜电位以及氧自由基的变化。结果 药根碱可明显抑制K562细胞的生长(IC₅₀ = 90 μmol·L-1 )。AO/EB染色可明显看到凋亡细胞和死亡细胞。PI染色显示,药根碱使K562细胞周期阻滞在G₀/G₁期。活细胞高内涵成像系统检测结果显示,37、75、150 μmol·L-1 药根碱作用后,细胞内活性氧荧光强度由1 305.1±15.3上升为26 243.6±165.3、30 106.7±153.2、34 682.6±174.1,线粒体膜电位由1 025.3±20.1下降为484.6±10.2、202.9±6.3、153.1±5.3。结论 药根碱能明显抑制白血病K562细胞生长,促进K562细胞凋亡,且其可通过增加细胞内活性氧、降低线粒体膜电位这一线粒体信号传导通路来诱导K562细胞凋亡。     

毛冬青甲素和异搏定对体外培养K562/A02细胞内柔红霉素蓄积的影响

目的观察中药钙通道阻滞剂毛冬青甲素(IA)和异搏定(VP)对体外培养K562/A02细胞内柔红霉素蓄积的影响。方法采用流式细胞仪测定细胞内柔红霉素(DNR)浓度。结果采用非细胞毒性剂量的IA(40uM)和VP(10uM)均能提高细胞内DNR的浓度,其效果比较,IA+VPIAIA+VPVP。结论毛冬青甲素和异搏定均能影响K562/A02细胞内柔红霉素的蓄积。     

尼洛替尼诱导K562/A02细胞凋亡及对HO-1基因表达的影响

 目的 研究尼洛替尼(nilotinib,AMN107诱导K562/A02细胞凋亡及对血红素加氧酶-1(HO-1基因表达的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH法检测K562/A02细胞中的BCR-ABL融合基因;用不同浓度的AMN107分别处理K562/A02细胞24 h后,通过实时荧光定量PCR(RQ-PCR法检测BCR-ABL融合基因mRNA的表达水平;采用MTT法观察细胞增殖变化;通过Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡和细胞周期;采用RT-PCR法和Western Blot法检测HO-1基因的表达。 结果 FISH法分析结果显示,K562/A02细胞BCR-ABL融合基因阳性细胞占细胞总数98%;RQ-PCR法检测结果显示,0,5,10,20 μmol·L-1 AMN107作用于K562/A02细胞24 h后BCR-ABL融合基因表达随AMN107浓度增加而逐渐下降;MTT法和Annexin V/PI法显示与对照组相比,细胞存活率随AMN107浓度升高而下降,凋亡率逐渐增加;细胞周期分析显示,经AMN107处理的细胞,G₀/G₁期和S期细胞明显减少,细胞阻滞在G₂/M期;RT-PCR法和Western blot法均检测到HO-1基因表达随AMN107浓度升高而降低。结论 AMN107可抑制BCR-ABL融合基因和HO-1基因表达,从而诱导慢性粒细胞白血病（CML耐药细胞的凋亡,说明HO-1是CML细胞生长以及BCR-ABL基因存在的一个相关因子,HO-1基因是克服慢性粒细胞白血病耐药的一个潜在靶向。     

姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响

Ｋ５６２细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性，本文以ＡＯ／ＥＢ染色法、细胞分光光度术、ＤＮＡ凝胶电泳及电镜观察等方法，发现姜黄素可显著诱导Ｋ５６２细胞凋亡，提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。     

槲皮素和山柰酚逆转白血病细胞系K562/A02多药耐药性的机制及相关基因表达谱的研究

目的研究槲皮素(quercetin,Que)及山柰酚(kaempferol,Kae)单用及联合应用时对K562/A02细胞系多药耐药的影响及机制。方法体外培养K562和K562/A02细胞经Que及Kae处理,采用噻唑蓝(MTT)法计算药物单独及联合作用后细胞的生长抑制率及对多柔比星(adriamycin,ADM)的增敏倍数;流式细胞术检测药物作用后细胞内ADM浓度的变化;Annexin V/PI法观察细胞凋亡情况;Real-time PCR基因芯片检测药物转运蛋白及凋亡相关基因表达的变化。结果药物作用48 h后,Que及Kae在5～160μmol.L-1时对K562和K562/A02细胞均有剂量依赖性的生长抑制作用,K562/A02对ADM的敏感性显著增强,二者联用效果有协同性;在ADM为5μmol.L-1时,药物与细胞共培养2 h即可检出Que能增加细胞内ADM的浓度,而Kae则对ADM浓度无明显影响,两药联合作用的效果不及Que单独作用。Que和Kae均可剂量依赖性地诱导K562和K562/A02细胞的凋亡。二者可影响ABC、SLC家族等药物转运蛋白相关基因的表达,并可调节Bcl-2、TNF等凋亡相关基...     

欧白芷素对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用(英文)

目的:探讨欧白芷素对耐药细胞株K562/A02中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multi-drug resistance,MDR)提供新方法。方法:采用MTT法观察阿霉素对细胞活力的影响。应用流式细胞术检测欧白芷素对K562和K562/A02细胞内阿霉素累积和细胞中P-gp功能的影响。采用实时定量RT-PCR技术检测MDR1基因在mRNA表达水平的变化。结果:欧白芷素对耐药细胞株K562/A02有显著的逆转耐药活性,最大逆转倍数为7.36。在K562/A02细胞中,欧白芷素明显增加阿霉素的累积,增加了罗丹明123(rhodaminel123,Rh123)蓄积,抑制了Rh123的外排,同时欧白芷素还在mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达。结论:欧白芷素能够抑制K562/A02耐药细胞株中MDR1基因表达和P-gp的功能。     

Growth Inhibition Effects of Isoalantolactone on K562/A02 Cells: Caspase‐dependent Apoptotic Pathways,S Phase Arrest,and Downregulation of Bcr/Abl

Isoalantolactone, a sesquiterpene lactone, is the active component of Inula helenium (Compositae). It has been reported that isoalantolactone has the capacity to inhibit tumor cell growth through induction of apoptosis. The purposes of this study were to evaluate the effects of isoalantolactone on the human erythroleukemia drug‐resistant cell line K562/A02 and to provide evidence of its function as a potent therapeutic agent in patients with chronic myelogenous leukemia with the Bcr/Abl phenotype. Our results showed that isoalantolactone significantly inhibited K562/A02 cell growth by downregulating Bcr/Abl expression. Isoalantolactone also induced apoptosis via increase generation of reactive oxygen species, modulation of the protein levels of Bcl‐2 family members, caspase activation, poly ADP‐ribose polymerase (PARP) cleavage, and release of cytochrome c. We also observed that isoalantolactone inhibited proliferation by inducing cell cycle arrest in the S phase. Taken together, all these findings support that growth inhibition effects of isoalantolactone on K562/A02 cells may be mediated through caspase‐dependent apoptotic pathways, S phase arrest, and downregulation of Bcr/Abl. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

益气养阴解毒方对K562/A02裸鼠移植瘤逆转作用研究

目的:研究益气养阴解毒方对K562/A02多药耐药移植瘤的逆转作用。方法:建立K562/A02裸鼠移植瘤多药耐药模型;选用维拉帕米作阳性对照,用流式细胞仪(FCM)检测各组移植瘤耐药细胞P糖蛋白(P-gp)与bcl-2的表达情况和移植瘤细胞内注射用盐酸多柔比星(ADM)蓄积浓度及移植瘤耐药细胞的凋亡情况。结果:移植瘤P-gp表达与维拉帕米组相比,生理盐水组与中药小剂量组有差异(P<0.05);bcl-2的表达与维拉帕米组相比,中药大剂量组有差异(P<0.05);益气养阴解毒方能使移植瘤耐药细胞内ADM的浓度升高。结论:益气养阴解毒方具有部份逆转白血病K562/A02移植瘤多药耐药性的作用,其逆转移植瘤裸鼠多药耐药性的机制不是通过下调肿瘤细胞膜上P-gp的表达实现的,而与降低bcl-2的表达、促进耐药细胞凋亡有关。