慢性乙型肝炎患者PBMC Fas表达和凋亡的检测及意义

目的探讨活化诱导细胞死亡（Activation-inducedcelldealth,AICD）在乙型肝炎发病机制中的意义。方法分离30例乙型肝炎患者和12例健康献血员外周血单个核细胞(PBMC),利用间接免疫荧光染色法,通过流式细胞仪检测PBMCFas的表达;分离20例乙型肝炎病人和10例健康献血员PBMC,在PHA-P的刺激下短期培养,采用PI染色法,经流式细胞仪检测PBMC的凋亡。结果慢性乙型肝炎组PBMCFas表达率[(53.31±14.53)%]高于正常对照组PBMCFas表达率[(39.32±11.28)%,P<0.05]和慢性重型乙型肝炎组PBMCFas表达率[(37.93±15.89)%,P<0.01]。慢性乙型肝炎组PBMC凋亡率[(30.57±13.43)%]高于正常对照组PBMC凋亡率[(11.45±5.27)%,P<0.01]和慢性重型乙型肝炎组PBMC凋亡率[(13.59±6.44)%,P<0.01];HBeAg(+)组PBMC凋亡率高于正常对照组PBMC凋亡率[(29.50±12.25)%vs(11.45±5.27)%,P<0.01]。结论HBV感染能诱导慢性乙型肝炎外周血淋巴细胞Fas表达增加,通过Fas/FasL途径使Fas+淋巴细胞发生AICD,这可能是形成HBV慢性感染免疫耐受的一个重要机制。     

拉米夫啶联合甘草甜素治疗慢性乙型肝炎病人的近期疗效

研究拉米夫啶联合甘草甜素治疗慢性乙型肝炎病人的近期疗效和安全性。选择 16例慢性乙型肝炎患者用拉米夫啶 ( 10 0mg/d)和甘草甜素 (其注射液为强力宁 ) ,选择 15例患者单独服用拉米夫啶 ( 10 0mg/d)作对照 ,共治疗 12周。疗效评估包括肝功能和HBV复制指标。治疗 12周结束时 ,即HBVDNA转阴率在两组间差异无显著性 ( 10 0 %对80 8% ,P >0 0 5 ) ,观察组HBeAg阴转率显著高于对照组 ( 87 5 %对 2 6 7% ,P <0 0 1) ,HBeAg血清转换率在两组差异显著性 ( 78 5 %对 2 5 0 % ,P <0 0 5 ) ,观察组ALT的复常率显著高于对照组 ( 10 0 0 %对 66 7% ,P <0 0 5 ) ,未发生不良反应。拉米夫啶联合甘草甜素治疗慢性乙型肝炎病人的近期疗效肯定、经济 ,安全性好。     

乙型肝炎患者血清和PBMC培养上清IL-2与IL-10的检测及意义

目的　探讨Th1/Th2细胞因子在乙型肝炎发病机制中的意义。方法　采集 7例急性病毒性肝炎、12例慢性乙型肝炎、10例慢性重型乙型肝炎患者和 10例健康献血员血清 ;分离 15例慢性乙型肝炎、14例慢性重型乙型肝炎和 10例健康献血员PBMC ,在PHA P刺激下培养 72h ,收取培养上清。采用双抗体夹心ELISA法检测血清和PBMC培养上清IL 2与IL 10水平。结果　急性肝炎血清IL 2高于正常对照 (P <0 .0 1)、高于慢性乙型肝炎 (P <0 .0 5 )、高于慢性重型乙型肝炎 (P <0 .0 5 )。慢性重型乙型肝炎血清IL 2高于正常对照 (P <0 .0 1) ,慢性重型乙型肝炎PBMC培养上清IL 2高于正常对照 (P <0 .0 5 )。血清IL 2与ALT呈正相关 (P <0 .0 1) ,PBMC培养上清IL 2与ALT呈正相关 (P <0 .0 5 )。血清IL 10与PBMC培养上清IL 10与ALT无相关性 ,血清IL 2与IL 10呈正相关 (P <0 .0 1)。结论　Th1型细胞因子IL 2上调与乙型肝炎肝脏的炎症活动相关 ,IL 2的分泌低下可能造成细胞免疫力低下 ,与HBV的持续感染有关。IL 10可能作为IL 2的拮抗因子随IL 2分泌增加而升高。     

乙型肝炎病毒Amplisensor定量分析

目的 :探讨定量分析乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)的意义。方法 :用Amplisensor法检测 36 1例不同类型乙型肝炎患者血清中的HBVDNA拷贝数 ,并与HBV血清标志物ELISA法测定结果相比较。结果 :HBsAg+/HBeAg +/HBcAb +组HBVDNA阳性率高达 98.6 7% ,该组患者Amplisensor定量对数值 4 .94± 1.0 4 ,高于其他各组 (P <0 .0 1)。HBsAg +/HBeAb +/HBcAb +组和HBsAg +/HBcAb +组仍有较高比例的患者检出HBVDNA(阳性率分别为 5 8.5 4 %和 6 1.0 4 % ,定量对数值分别为 2 .4 6± 1.2 4和 2 .4 9± 1.38)。在HBsAg已消失的各组中 ,也有部分患者血清内存在低拷贝数的HBVDNA。结论 :Amplisensor定量分析可为判断病毒是否复制、复制程度及病情变化提供可靠依据     

HBIG联合HBVac阻断HBV宫内感染的研究

目的探讨孕期多次联合注射乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)和乙型肝炎疫苗(HBVac)阻断乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染效果。方法对30例HBsAg阳性孕妇从孕20周开始联合注射HBIG和HBVac，另23例未行注射的HBsAg阳性孕妇作对照。采用敏感特异的套式聚合酶链反应检测孕妇及新生儿血清及外周血单个核细胞(PBMC)中HBVDNA。结果阻断组和对照组新生儿血清HBVDNA检出率分别为10％(3／30)和34．8％(8／23)，二组差异显著，而PBMC中HBVDNA检出率二组无显著性差异；阻断组孕妇血清HBVDNA水平下降率38．5％(10／26)，而对照组10．5％(2／19)，差异显著，PBMC中HBVDNA水平二组无显著性差异。结论孕期多次联合注射HBIG和HBVac可有效降低孕妇体内HBVDNA水平，从而降低HBV宫内感染率，但对孕妇PBMC中HBV影响不太，并不降低新生儿PBMC中HBVDNA的检出率。     

致死性慢性重型乙型肝炎患者临终前HBV DNA载量的动态变化及其临床意义

目的探讨致死性慢性重型乙型肝炎患者临终前不同时段HBVDNA载量的动态变化及其临床意义。方法检测并比较了56例致死性慢性重型乙型肝炎患者不同HBVe系统状态的HBVDNA载量以及临终前62次不同时段的HBVDNA载量。结果致死性慢性重型乙型肝炎患者的HBVDNA载量在HBeAg阳性组和抗-HBe阳性组分别为(5·01×106±1·35×102)拷贝/ml和(2·81×105±1·73×102)拷贝/ml,两组比较差异有显著性(P<0·05)。致死性慢性重型乙型肝炎临终前1~10d、~20d和~50d时段的HBVDNA载量分别为(4·04×105±1·57×102)拷贝/ml及(4·13×105±2·53×102)和(3·66×106±1·58×102)拷贝/ml,临终前各时段HBVDNA载量之间的两两比较,差异无显著性(P>0·05)。结论在致死性慢性重型乙型肝炎的启动过程中,HBVDNA的载量水平在HBeAg阳性组和抗-HBe阳性组之间存在不同。HBV载量随着致死性慢性重型乙型肝炎的病程向终末期发展,未见到有升高或降低的趋向。     

乙型肝炎病毒1896A变异对HBV复制的影响

目的 :研究乙型肝炎病毒 1896A变异对HBV复制的影响。方法 :采用错配引物聚合酶链反应 (PCR)—限制性片段长度多态性 (RFLP)分析 ,对 10 5例HBVDNA阳性的HBV感染者进行HBV 1896A变异及HBVDNA定量检测。结果 :1896A变异组HBeAg阴性率较非 1896A变异组高 (P <0 .0 0 5 )。HBV 1896A变异组HBVDNA含量在HBeAg+ 病例 (10 8.2 3± 0 .96 copy/ml,vs 10 7.6 7± 0 .6 7copy/ml,P <0 .0 1)及HBeAg- 病例 (10 7.99± 1 .33copy /mlvs 10 7.0 8± 1 .4 9coyp/ml,P <0 .0 1)中均较非HBV 1896A变异组高。 结论 :1896A变异在阻断HBeAg表达的同时促进HBV的复制。     

乙型肝炎病毒携带者外周血单个核细胞凋亡和培养上清液中的细胞因子水平测定

目的：探讨外周血单个核细胞（PBMC）凋亡和Th1／Th2型细胞因子（干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4））表达在乙型肝炎病毒慢性化中的作用。方法：分离21例健康人、45例慢性乙型肝炎病毒携带者PBMC，植物血凝素（PHA，P）刺激培养72h后，以ELISA法检测细胞培养上清液中的IL-4和IFN-γ水平，流式细胞仪以膜联蛋白V，异硫氰酸荧光素／碘化丙锭（AnnexinV，FITC／PI）法检测PBMC凋亡率。结果：慢性乙型肝炎病毒携带者PBMC凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）；培养上清液IFN，1水平低于对照组（P〈0．01），且与PBMC凋亡率呈负相关（r=-0．647，P〈0．01）；IL-4水平高于正常对照组（P〈0．01），且与PBMC凋亡率正相关（r=0．598，P〈0．01）。结论：淋巴细胞凋亡和Th1／Th2的失衡在乙型肝炎病毒慢性化中起一定的作用。     

慢性丙型肝炎血清IL-2、TNF及丙肝病毒基因型与干扰素疗效的关系

应用放射免疫法及 HCV- RNA NS5 酶切分型法检测 48例慢性丙型肝炎患者血清中 IL - 2、TNF及 HCV基因型 ,并以 2 0例健康人为正常对照。结果显示 :HCV基因型 型的慢性丙型肝炎干扰素疗效 (显效率 2 3% )差于 型(显效率 80 % ) (P<0 .0 5 ) ;慢性丙型肝炎患者干扰素治疗无效组 IL- 2水平 [(2 .5 3± 0 .5 7) ng/ ml]低于显效组 [(3.6 8± 0 .84) ng/ ml](P<0 .0 5 ) ;慢性丙型肝炎患者干扰素治疗显效组 TNF水平 [(3.15± 0 .77) ng/ ml]与无效组[(3.47± 1.10 ) ng/ ml]相仿 (P>0 .0 5 )。提示 :HCV基因型及 IL - 2可能影响干扰素的疗效 ;TNF不影响干扰素的疗效。     

不同状态乙型肝炎病毒感染患者血清中HBV DNA定量聚合酶链反应测定

目的 :采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)测定不同状态乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒 (HBV)的载量 ,为乙型肝炎的临床诊断、病程判断和治疗提供参考。方法 :采用实时定量PCR方法 ,检测不同病程状态的乙肝患者血清样本 1 90份 ,其中HBeAg阳性的慢性乙型肝炎 (CHB)患者 2 5例 4 7份样品 ,HBeAg阴性的 4例CHB患者 4份样品 ,接受α-干扰素治疗后发生HBeAg血清学转归的患者 5例 4 0份样品 ,非活动性HBV携带者 37例 5 7份样品。由CHB康复患者 2 1例 4 2份样品。结果 :HBeAg阳性的CHB血清中HBVDNA水平为 8.3× 1 0 8拷贝 /ml,明显高于HBeAg阴性的CHB患者 (7.0× 1 0 6拷贝 /ml)和HBeAg血清转归患者HBVDNA水平 (6 .2× 1 0 3 拷贝 /ml)以及非活动性HBsAg携带者HBVDNA水平 (5 .6× 1 0 3 拷贝 /ml)。乙型肝炎康复者中未检出HBVDNA。结论 :定量PCR方法可以作为确认HBV感染不同状态的一种有效手段     

慢性乙型肝炎病人血液单核细胞中HBV标志物的检出

本文报告在慢性乙型肝炎38例的外周血单核细胞(PBMC)和T、B淋巴细胞中检测到HBV标志物阳性29例(76.3％)。其中17例病人的PBMC中HBsAg,HBeAg和HBV-DNA阳性者分别为4,2和14例。21例病人分离出T,B淋巴细胞,其中T细胞中HBsAg,HBeAg与HBV-DNA阳性分别为2,2和1例;B细胞中分别为3,6,1例。血清HBV标志物阳性的病人其PBMC中这些标志物的检出率(13/15例)明显高于血清抗HBc和抗HBe阳性的稳定期病人(3/7例)。提示HBV可能感染和损害慢性乙型肝炎病人的淋巴细胞,这也许是乙型肝炎病人免疫功能异常的原因之一。     

急慢性乙型肝炎患者外周血调节性T细胞鉴定与临床意义分析

目的观察不同类型HBV感染患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的频率和临床指标的相关性。方法采集72例慢性乙型肝炎患者(CHB)、16例急性乙型肝炎患者(AHB)、32例健康人的外周血,流式细胞仪分析Treg频率及Treg细胞表面和细胞内分子表达。所有病例及对照均经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBVDNA载量,同时进行肝功能检测。结果CD4+CD25highTreg表面高表达CD45RO,低表达CD45RA,细胞内高表达CTLA-4。比较Treg占CD4+T细胞频率,慢性乙型肝炎组(3·9%±1·4%)与正常对照(3·5%±0·7%)比较差异无统计学意义(P>0·05),但是明显高于急性乙型肝炎组(3·1%±0·9%)(P<0·05),急性乙型肝炎组与正常对照比较差异无统计学意义(P>0·05)。慢性乙型肝炎组Treg频率在高病毒载量组(HBVDNA>107拷贝/ml,4·5%±1·9%)明显高于低病毒载量组(HBVDNA<107拷贝/ml,3·4%±0·6%)和正常对照组,并与病毒载量成正相关(r=0·32,P<0·01)。8例随访急性乙型肝炎患者Treg频率在恢复期(6·0%±1·7%)明显高于急性期(3·0%±0·6%),配对t检验P<0·001。结论CD4+CD25highTreg在慢性乙型肝炎患者高病毒载量组明显升高,这提示Treg可能通过抑制细胞免疫反应影响病毒清除;Treg在急性肝炎早期较低,随后增高,可能与Treg在急性肝炎的不同发病阶段中所起的作用有关。     

乙型肝炎患者外周血Ⅱ型树突状细胞表型和功能鉴定及其意义的研究

目的　探讨Ⅱ型树突状细胞 (typeII dendriticcells,DC2 )数量和功能的变化及其与乙型肝炎 (乙肝 )患者病程、淋巴细胞亚群和HBVDNA病毒载量的关系。方法　采用流式细胞分析技术对 10 3例乙肝患者 (包括HBV携带者 11例 ,慢性乙肝轻度 35例 ,中度 33例 ,重度 13例 ,急性乙肝11例 )和 2 5例健康人 (对照组 )的外周血DC2进行检测 ,同时检测患者血常规 ,计算出DC2绝对数 ;用体外灭活的 1型单纯疱疹病毒 (HSV 1)刺激外周血单个核细胞 (PBMC)并与PBMC进行 2 4h共培养 ,检测上清中DC2的α干扰素产生能力 ;统计分析DC2数量、功能变化及其临床意义。结果　对照组外周血DC2占PBMC比例为 0 32 %± 0 13% ,绝对数为 (7 2± 2 4 ) 10 6个 /L。与对照组比较 ,HBV携带者DC2的比例 (0 32 %± 0 12 % )和绝对数 (6 9± 3 4 ) 10 6个 /L无明显下降 ;急性乙肝患者的DC2比例和绝对数下降 ,但无统计学意义 ;而慢性肝炎患者DC2的比例和绝对数随病程加重而降低 ,中、重度肝炎的DC2下降较轻度更为显著。DC2产生α干扰素的功能在急、慢性乙肝患者及HBV携带者均降低 ,各组患者之间差异不显著 ;DC2的数量与HBVDNA病毒载量未发现相关性 ,但与自然杀伤 (NK)细胞及CD8+ T数量高低存在正相关。结论　慢性乙肝患者外周血DC2数量和     

输血传播病毒（TTV）基因变异的临床意义

OBJECTIVE: To investigate the clinical significance of gene variant of transfusion transmitted virus (TTV). METHODS: A nested polymerase chain reaction (nested-PCR) assay with specific primers from open reading frame one (ORF1) of TTV genome was established to detect TTV DNA in the serum samples from patients with hepatitis B and blood donors. Asymmetric PCR was established to get single strand DNA in the TTV DNA positive cases, and then single strand conformation polymorphism (SSCP) was applied. RESULTS: 1.25 +/- 0.50, 1.60 +/- 0.55, 3.36 +/- 1.36 and 4.59 +/- 1.83 SSCP bands were detected in the blood donors, chronic HBV carriers, chronic hepatitis B patients and chronic severe hepatitis B patients respectively. SSCP bands were much more complicated in chronic hepatitis patients and chronic severe hepatitis than those of chronic HBV carriers and blood donors (P < 0.05). CONCLUSION: There is gene variant in TTV infection. The complication of gene variant strain or quasispecies infection of TTV may be one of the causes responsible for clinical exacerbation of TTV superinfection in chronic hepatitis patients.     

T-cell sensitisation to hepatitis B virus surface antigens

The present study was conducted to explore the immunity to hepatitis B surface antigens (HBsAg) of ad and ay subtypes at the cellular level among adult individuals. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) obtained from acute hepatitis B virus (HBV) infected patients, chronic HBV infected patients, recovered subjects from HBV infection and uninfected vaccinated controls were stimulated with HBsAg ad and HBsAg ay subtypes in vitro. Stimulated PBMCs were incubated in CO(2) for production of interferon-gamma (IFN-gamma), which was measured from the supernatant of cultured PBMCs by an in-house ELISA technique. The mean +/- SE of IFN-gamma levels produced by PBMCs in response to HBsAg ad among the acute, chronic, recovered and control groups were 282.5+/-134.51 pg/ml, 307.45+/-94.84 pg/ml, 915.62+/-170.80 pg/ml and 511.67+/-161.22 pg/ml respectively, while on stimulation by HBsAg ay, the levels were 246.25+/-103.50 pg/ml, 374.70+/-104.02 pg/ml, 1040 +/-140.76 pg/ml and 465.83+/-166.26 pg/ml respectively among the above mentioned groups. The results of this study showed that PBMCs were non-responsive to stimulation by both HBsAg ad and HBsAg ay subtypes in acute and chronic patients with HBV infection. The recovered group responded significantly to both subtypes of HBsAg and the control group did not. The study indicates that although the patients with acute and chronic HBV infection showed weak or no IFN-gamma response to the HBsAg, subjects showed strong IFN-gamma response to the surface antigens on recovery from HBV infection.     

Therapeutic effectiveness of interferon alpha on hepatitis B virus DNA in peripheral blood mononuclear cells

ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｐｈａｏｎｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓＤＮＡｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓＧｕｏＹａｂｉｎｇ（郭亚兵）；ＺｈａｎｇＪｉｓｕｏ（张继锁）；...     

乙型肝炎患者CD4~+CD25~+调节性T细胞水平与HBV病毒载量相关性

目的了解乙型肝炎患者外周血Tregs水平并探讨其在乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测乙型肝炎患者及对照组外周血Tregs的水平及应用PCR技术测定其HBVDNA载量。结果1.CSHB组Tregs的百分率较CHB组有明显差异(P0.05),比无症状携带者组及健康对照组则有显著差异(P均0.01);2.AHB组较健康对照组的稍低,但无统计学意义(P0.05),且明显低于CHB组(P0.01);3.CHB组与无症状携带者组及健康对照组相比,具有明显的差异(P0.05);无症状携带者组与健康对照组相比无显著差异(P0.05)。4.CSHB组外周血HBVDNA载量较其他三组明显偏低(P均0.01);CHB组与无症状携带者组、AHB组相比,差异性不大(P均0.05);无症状携带者组与AHB组相比,差异性不大(P均0.05)。5.不同乙型肝炎病人外周血Tregs的百分率与HBVDNA载量正相关。结论1.Tregs的水平与乙肝患者病情轻重有一定关系,它在HBV的持续感染中可能发挥了重要作用。2.不同乙型肝炎患者外周血Tregs的百分率与HBVDNA载量呈正相关。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD5+B细胞的变化及其与HBV-DNA的关系分析

目的了解慢性乙肝病人外周血CD5+B细胞水平及其与HBV-DNA含量之间的关系;方法分别用流式细胞术及荧光定量PCR技术检测了28例慢性乙肝病人外周血CD5+B细胞水平及HBV-DNA水平;结果两组(DNA阳性组和DNA阴性组)慢性乙肝患者外周血CD5+B细胞水平分别为35.1±8.27%和45.6±8.26%,均显著高于正常组(P>0.01),DNA阳性组患者升高更明显(P<0.01);DNA阳性组患者CD5+B细胞水平与患者HBV-DNA含量见呈显著正相关,r为0.8124(P<0.01);结论CD5+B细胞可作为观察病情变化及疗效的辅助指标。     

职业献血浆员HBV和HCV感染状况的研究

本文采用ELISA法检测247名职业健康献血浆员中抗-HCV和HBV感染标志(HB-VM),并用PCR技术检测其中85人血清HBV-DNA的存在状况.发现抗-HCV阳性率为4.0%,HBVM阳性率为29.1%,HBV-DNA阳性率为11.8%≥40岁人群抗-HCV阳性率明显高于30岁以下人群(7.7%比0,P=0.042).HBVM阳性者抗-HCV阳性率明显高于HBVM阴性者(8.3%比2.3%,P=0.038),HBV感染与HCV感染之间存在一定的伴随关系.HBVM阳性者血清HBV-DNA阳性率明显高于HBVM阴性者(18.2%比 0,P<0.05).结论认为目前常规筛选献血员的方法不安全,建议加以改进.