融合基因pCEAcd-tk/前体药物体系的体外旁观者效应的差异性

目的：观察用白细胞介素－２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｒｔ－２,ＩＬ－２）基因修饰小鼠骨髓来源的树太细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ,ＤＣ）后,ＤＣ表达细胞因子和趋化因子的变化及ＤＣ体内免疫后,小鼠体内主要脏器中ＩＬ－２表达情况。探讨其对抗原提呈微环境的改善及其可能的机制。方法：用ＥＬＩＳＡ方法检测ＤＣ培养上清和小鼠血清及脏器中ＩＬ－２的含量,用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＤＣ中ＩＬ－２,ＩＦＮ－γ,ＩＬ－     

细胞之间介质传导的pCEAcd-tk/前药体系的旁观者效应

目的 :探讨融合自杀基因 pCEAcd tk/前药体系的旁观者效应的机理。 方法 :质粒 pCEAcd tk提取后 ,脂质体介导的方法转染到SPCA 1细胞中 ,与未转染的SPCA 1细胞混合 (2∶8)后接种到 96孔培养板中 (每孔 3× 10 3 ) ,加前体药物 5 氟胞嘧啶 [5 Fluorocytesine ,5 FC(5 μmol/L) ]和 [丙氧鸟苷 (Ganciclovir ,GCV(10 μmol/L) ],培养 5天 ,MTT法测定细胞存活率而观察旁观者效应。利用细胞种植密度的稀密和取转导了 pCEAcd tk融合基因的SPCA 1细胞 (处理细胞 )加前体药物的培养液和细胞裂解液对未转染细胞SPCA 1的毒性探讨旁观者效应的传递方式。结果 :融合基因pCEAcd tk/前药体系的旁观者效应在细胞密度较低时更明显 ,处理细胞的细胞培养液具有细胞毒性。结论 :融合自杀基因 pCEAcd tk/前药体系的旁观者效应的传递方式之一是通过细胞之间的某些介质传递。     

缝隙连接与自杀基因旁观者效应研究进展

在自杀基因治疗中,旁观者效应表现为转染细胞对临近未转染细胞的毒性作用,是决定自杀基因疗效的关键因素。研究证实：细胞缝隙连接（gap-junctions,GJs）是旁观者效应的主要机制;检测这种连接的基本组成元件一接合素,可供筛选肿瘤细胞对自杀基因的敏感性;通过生化或基因转移的方法诱导细胞GJs,可增强GJs功能缺陷细胞自杀基因的旁观者效应。     

Tet-On调节的自杀基因对人乳腺癌细胞的体外杀伤和旁观者效应研究

目的探讨Tet调控下的自杀基因HSVtk对人乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法构建重组逆转录病毒载体pRevTRE／HSVtk，通过磷酸钙共沉淀法，分别将pRevTRE／HSVtk和pRevTet-On导入乳腺癌细胞株MCF-7。以RT—PCR法检测不同Dox浓度下转染乳腺癌细胞中HSVtk基因的表达，MTT法检测细胞生长抑制率，通过检测混合细胞生长克隆来评价Tet调控下的自杀基因的旁观者效应和对乳腺癌细胞的杀伤作用。结果建立了一株稳定的受多西环素（Doxcycline，Dox）诱导、表达HSVtk基因的乳腺癌细胞株MCF／TRE／tk／Tet—On。当Ganciclovir（GCV）及Dox浓度增加时，细胞存活率下降。MCF／TRE／tk／Tet—On在总细胞中的比例〉10％时，有明显的旁观者效应。结论在Tet—On调控下，导入乳腺癌细胞中的HSVtk基因产物能将药物前体GCV转变为毒性代谢物质，并诱发旁观者效应进一步杀灭乳腺癌细胞。     

rhGM-CSF/LIF融合蛋白的体外抗肿瘤效应研究

本文利用基因重组技术获得的一种人GM-CSF与LIF融合蛋白rhGM-LIF,比较研究了不同浓度rhGM-LIF融合蛋白、rhGM-CSF与rhLIF单独使用及合用的体外抑瘤作用.结果表明,融合蛋白不但能够诱导髓系白血病细胞分化,而且能够抑制其生长,其抑制作用与用药剂量相关,在一定剂量范围内,这种作用显著地高于单个因子和两者合用的效果.值得重视的是,融合蛋白对人肝癌细胞的生长也有明显的抑制作用.实验结果提示,重组的融合蛋白具有潜在的抗肿瘤作用.     

胞嘧啶脱氨酶基因旁观者效应与宿主免疫状态关系

目的 :研究胞嘧啶脱氨酶自杀基因 (E .Coli.cytosingedeaminasegene ,EC CD)旁观者效应与宿主免疫状态的关系。方法 :CT2 6细胞分别接种于Balb/c小鼠及Balb/cnu/nu裸鼠皮下 ,每只动物接种相互分离的两处 ,在其中一处瘤体内接种AdCMVCD ,腹腔给予氟胞嘧啶 (5 fluorocytosine ,5 FC) ,观察肿瘤体积的变化。并用FCM检测肿瘤浸润淋巴细胞CD3、CD4、CD8的表达情况。结果 :Balb/c小鼠中 ,治疗组接种病毒侧瘤体积为 2 4 95 2± 898 6 5mm3 ,其对侧为 2 5 74 8± 339 0 5mm3 ,均明显小于对照组 (P =0 0 0 9,P =0 0 12 )。Balb/cnu/nu裸鼠中 ,治疗组接种病毒侧瘤体积为 2 4 32 6± 36 8 5 3mm3 ,明显小于对照组(P =0 0 15 ) ,而其对侧为 396 0 9± 12 80 76mm3 ,明显大于治疗组接种侧 (P =0 0 4 9) ,但与对照组两侧间均无差异。FCM显示Balb/cnu/nu裸鼠体内肿瘤浸润淋巴细胞主要是CD3+、CD4 +的淋巴细胞 ,而Balb/c小鼠体内肿瘤主要是CD3+、CD8+的淋巴细胞。结论 :EC CD/ 5 FC系统的旁观者效应特别是远距离旁观者效应与宿主免疫状况有关 ,在免疫健全宿主中旁观者效应较强。     

胶质瘤基因介导酶前体药物治疗及其优化方案

基因介导酶前体药物治疗（GDEPT）是近年来胶质瘤基因治疗的研究热点，在体外和动物实验中疗效显著，但临床Ⅰ、Ⅱ期试验的结果不能令人满意，目前已提出多种优化其疗效的方案；（1）通过突变方式提高酶活性，修改酶活性位点，使其更好地结合前体药物；（2）提高GDEPT的旁效应；（3）探索不同GDEPT系统之间以及与其他癌症疗法的协同作用以提高疗效。     

胶质瘤基因介导酶前体药物治疗及其优化方案

基因介导酶前体药物治疗(GDEPT)是近年来胶质瘤基因治疗的研究热点，在体外和动物实验中疗效显著，但临床Ⅰ、Ⅱ期试验的结果不能令人满意。目前已提出多种优化其疗效的方案①通过突变方式提高酶活性，修改酶活性位点，使其更好地结合前体药物；②提高GDEPT的旁效应；③探索不同GDEPT系统之间以及与其他癌症疗法的协同作用以提高疗效。     

辐射诱导的旁观者效应研究进展

直接受到照射的细胞通过信号转导引起临近细胞的损伤,称为旁观者效应。其具体机制非常复杂,目前仍不完全清楚。本文从旁观者效应对细胞DNA损伤的类型,旁观者效应中的分子信号转导及体内存在的旁观者效应等不同方面进行综述。     

辐射诱导的旁观者效应研究进展

直接受到照射的细胞通过信号转导引起临近细胞的损伤,称为旁观者效应.其具体机制非常复杂,目前仍不完全清楚.本文从旁观者效应对细胞DNA损伤的类型,旁观者效应中的分子信号转导及体内存在的旁观者效应等不同方面进行综述.     

放射诱导旁观者效应的研究进展

20年来的研究表明,暴露于离子照射的细胞群会出现明显的生物效应,这种效应在放射细胞群和未放射细胞群都会发生。这一现象人们称之为旁观者效应。在体内和体外实验中已表明确实存在这一效应。现对旁观者效应的测量、发生机制以及它对低剂量离子照射的放射防护和放射治疗的影响作一综述。     

放射诱导旁观者效应的研究进展

20年来的研究表明,暴露于离子照射的细胞群会出现明显的生物效应,这种效应在放射细胞群和未放射细胞群都会发生。这一现象人们称之为旁观者效应。在体内和体外实验中已表明确实存在这一效应。现对旁观者效应的测量、发生机制以及它对低剂量离子照射的放射防护和放射治疗的影响作一综述。     

基因导向性酶前体药物疗法在肿瘤治疗中的研究进展

基因导向性酶前体药物疗法(GDEPT)为肿瘤生物治疗最引人注目的研究领域,是继手术、放疗和化疗等传统疗法之后,一种具有良好应用前景的肿瘤治疗新措施,主要包括HSV-tk-GCV系统疗法和CD-5-FC系统疗法.为克服传统GDEPT疗法的不足,目前多主张联合基因治疗肿瘤,有人还提出一种全新的GDEPT疗法.现综述近几年来GDEPT在肿瘤基因治疗中的研究进展.     

基因导向性酶前体药物疗法在肿瘤治疗中的研究进展

基因导向性酶前体药物疗法(GDEPT)为肿瘤生物治疗最引人注目的研究领域，是继手术、放疗和化疗等传统疗法之后，一种具有良好应用前景的肿瘤治疗新措施，主要包括HSV-tk-GCV系统疗法和CI)-5-FC系统疗法。为克服传统GDEPT疗法的不足，目前多主张联合基因治疗肿瘤，有人还提出一种全新的GDEPT疗法。现综述近几年来GDEPT在肿瘤基因治疗中的研究进展。     

缝隙连接蛋白43对双自杀基因系统旁观者效应的影响

Objective： To observe the influence of connexin 43 （Cx43） on the bystander effect induced by cytosine deaminase （CD） and herpes simplex virus thymidine kinase （HSV-tk） coexpression suicide genes system in human cholangiocarcinoma QBC939 cells and transplantation tumors in nude mice. Methods： In vitro, the CD＋tk＋ and CD＋tk＋Cx＋ cells were respectively treated with 5-fluorocytosine （5-Fc） and Ganciclovir （GCV）. The cytotoxic effect was evaluated by MTT method. In order to investigate the influence of Cx43 on the bystander effect, the size of transplantation tumors of the CD＋tk＋ and CD＋tk＋Cx＋ cells was measured before and after application of 5-Fc and GCV. Results： CD and tk genes were stably expressed in transfected QBC939 cells. The increased expression of Cx43 was determined by testing for the presence of Cx43 mRNA by RT-PCR and the presence of Cx43 protein by Western Blot in CD＋tk＋Cx＋ cells. The killing effect of 5-Fc and GCV on CD＋tk＋Cx＋ cells was more effective than that on CD＋tk＋ cells both in vitro and in vivo. Conclusion： Double suicide genes system CD/5-Fc＋tk/GCV could induce remarkable killing effect on cholangiocarcinoma cells in vitro and transplantation tumors in vivo. The cotransfection of Cx43 gene could enhance the bystander effect and hence the inhibition of carcinoma cells.     

慢病毒介导YCD/5-FC自杀基因系统对白血病Jurkat细胞杀伤和旁观者效应

目的:探讨慢病毒介导的酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)自杀基因对人白血病Jurkat细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法:制备YCD-GFP慢病毒上清,转染Jurkat细胞(即Jurkat/YCD-GFP细胞),流式细胞术检测YCD-GFP基因的表达。体外观察前体药物5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)对Jurkat/YCD-GFP细胞的杀伤情况和旁观者效应;建立Jurkat/YCD-GFP荷瘤小鼠模型,体内观察5-FC对移植瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应。以上实验均以Jukut/GFP细胞为对照。结果:成功制备YCD-GFP慢病毒和感染YCD-GFP慢病毒的Jurkat/YCD-GFP细胞,YCD-GFP慢病毒对Jurkat细胞的感染率达96.93%。232μmol/L的5-FC作用72h可使(95.61±2.07)%的Jurkat/YCD-GFP细胞死亡,且上清中5-FC含量下降80%左右。体外实验显示,Jurkat/YCD-GFP和Jurkat细胞效靶比1∶10混合培养[(68.69±4.97)%vs(97.87±1.11)%,P<0.05)]和Transwell1∶25分层培养[(1.46±0.27)×105vs(3.00±0.16)×105,P<0.01]均存在旁观者效应。体内实验显示,YCD/5-FC自杀基因系统对Jurkat/YCD-GFP荷瘤小鼠亦具有较强的杀伤作用和旁观者效应(P<0.05)。结论:慢病毒介导的YCD/5-FC自杀基因系统对人Jurkat白血病细胞具有显著的杀伤作用和旁观者效应。     

旁观者效应的机制及加强措施

旁观者效应在肿瘤自杀基因疗法中起着相当重要的作用，其产生机制可能与细胞凋亡、缝隙连接及免疫炎症系统有关。探索加强旁观者效应的措施对优化自杀基因疗法具有重要意义。     

一氧化氮前体药物与前列腺癌的研究进展

前列腺癌是男性最常见的肿瘤之一。一氧化氮（nitric oxide, NO）作为生物信使或效应分子在体内发挥重要的生理作用,且其体内水平异常与多种疾病的发生和发展密切相关。因此,一氧化氮前体型药物的研究备受关注。一些NO前体药物已被证实具有良好的抗肿瘤活性,显示出广泛的临床应用潜力和价值。目前,NO前体药物中显示出显著抗肿瘤效应的主要有有机硝酸酯、硝普盐、S-亚硝基硫醇和偶氮二醇烯鎓盐等。一氧化氮前体药可通过靶向释放NO,直接杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡、增强免疫系统作用、削弱肿瘤细胞增殖及侵袭能力,并抑制其转移,提高肿瘤细胞对放化疗的敏感度,从而发挥抗肿瘤作用。本文就近年来NO前体药物对前列腺癌作用的研究进展作一综述。     

大肠杆菌CD自杀基因转染诱导肿细胞凋亡及旁观者效应的研究

以重组腺病毒AdCD为载体将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因体外传染小鼠红白血病细胞FBL3,结果显示,转染了CD基因的FBL3细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性显著提高,进一步研究发现,AdCD/5-FC系统可以诱导肿瘤细胞发生凋亡;将经AdCD/5-FC处理过的FBL3细胞上清倍比稀释后,加入到野生型FBL3细胞中,发现当上清仅占6.25％时,即对野生型FBL3细胞发挥明显的杀伤作用,提示旁观者效应在AdCD介导的细胞毒作用中起着重要的作用。本实验还观察了CD基因体内转染后的杀伤效果,荷瘤小鼠局部注射AdCD并连续10天给予5-FC(300mg/kg)治疗后,小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制。     

转染融合基因的DC抗肿瘤免疫效应

 目的 研究转染融合基因（GM-CSF-survivin GM-ΔSur）的树突状细胞（DC）在体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应 。方法 用jetPEI^TM-Macrophage转染体系,将构建的GM-ΔSur融合基因转染入DC,用流式细胞仪检测DC的表面分子 HLA-DR、CD83、CD80、CD86表达的高低;用LDH法测定转染融合基因的DC诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）杀伤肿瘤细胞（HT-29和OVCAR-3）的能力。结果 转染融合基因的DC细胞中可检测到GM-ΔSur融合蛋白的表达;DC表面高表达HLA-DR、CD83、CD80、CD86;PHA/rhIL-2长期培养（21d）的T细胞CD8^＋比例明显增加;转染融合基因的DC 对HT-29肿瘤细胞的杀伤率显著高于未修饰的DC的杀伤率。结论 GM-ΔSur基因转染修饰的DC能选择性诱导MHC-I类分子限制的CTL的特异性,显著提高DC的抗原提呈功能和诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应。