用荧光原位杂交（FISH）方法研究人类卵巢癌和胃癌细胞系17号染色 …

目的 研究载有多种癌变相关基因的１７号染色体在不同器官,不同组织类型肿瘤单个细胞内拷贝数的变化规律。方法 以正常外周血淋巴细胞为对照,采用ＦＩＳＨ方法检测各细胞株１７号染色体拷贝数。结果１７号染色体在各细胞株单个细胞中拷贝数表现为：ＳＫＯＶ３以六倍体为主,占４８％,七倍体率占２３％;３ＡＯ以三倍体为主,占９３％;ＯＶ２以四倍体为主,占６７５,ＭＧＣ８０３以六倍体为主,占６４％￥;ＢＧＣ８２３以二倍     

17号染色体上癌基因和抑癌基因的变异在卵巢癌发生及发展中的研究进展

本文通过综述位于17号染色体上的某些癌基因、抑癌基因的变异与卵巢癌发生及发展的相关性,初步揭示卵巢癌演变过程中的分子生物学及分子遗传学特征.BRCA1基因作为家族性卵巢癌-乳腺癌的连锁基因,其突变存在于约90%的家族性卵巢癌中;OVCA1、OVCA2基因的丢失为卵巢正常上皮细胞向恶性转化过程中较早的遗传物质改变特征;nm23、p53、C-erB2基因的变异和卵巢癌疾病恶性程度、预后及生存期相关,并和肿瘤细胞对化疗药物的耐药性及肿瘤免疫相关.深入探讨这些基因的变异将为卵巢癌的预防、早期诊断、预后判断、病情监测及个体化治疗方案的选择提供良好指标,最终可能减少卵巢癌的发病率、复发率,提高五年生存率.     

乳腺浸润性导管癌17号染色体拷贝数变异与临床病理特征相关性分析

目的 乳腺癌是影响妇女健康的主要癌症之一,且发病率呈现明显上升趋势.DNA拷贝数变化(copy number variation,CNV) 能够影响基因表达,从而引起肿瘤发生,研究CNV对探索肿瘤的发病机制有很大帮助.本研究探讨乳腺癌17号染色体拷贝数变异和临床病理特征关系.方法 应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH) 法检测2010-01-01-2011-01-01新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺润性导管癌标本283例,观察17号染色体拷贝数情况及人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2) 基因扩增情况,并用免疫组织化学法检测HER2受体蛋白的表达水平.结果 283例乳腺癌中17号染色体拷贝数多倍体为43例(15.19%),双倍体为226例(79.86%),单倍体为 14例(4.95%),乳腺癌17号染色体多倍体HER2基因阳性率为53.49%(23/43).283例乳腺癌中HER2基因表达阳性为84例,阳性率为29.68%(84/283);17号染色体拷贝数不同在HER2基因是否扩增方面差异有统计学意义,χ2=9.564,P=0.007;乳腺癌17号染色体拷贝数变异在p53基因表达(χ2=8.181,P=0.017)、病理组织学分级(χ2=11.203,P=0.019)方面差异有统计学意义,与年龄、肿瘤大小和淋巴结转移等指标差异无统计学意义.17号染色体拷贝数不同组中预后存在差异,差异有统计学意义,χ2=241.363,P=0.001.结论 17号染色体拷贝数变异和乳腺癌病理特征及预后相关,检测乳腺癌中17号染色体拷贝数变异可作为指导临床治疗和判断预后的参考指标.     

间期荧光原位杂交技术(FISH)在急性淋巴细胞性白血病(ALL)8号染色体三体检测中的应用

目的　探讨间期荧光原位杂交 (FISH)技术对于ALL三体 8检测的价值。方法　采用荧光素SpectrumRed直接标记 8号染色体着丝粒探针 ,检测了 5 9例ALL病例和 8例正常对照组骨髓细胞 ,并与细胞遗传学 (CG)结果相比较。结果　 5 9例ALL病例中 ,8例FISH检测为三体 8阳性 ;CC检测仅 3例为阳性。结论　间期FISH对ALL三体 8检测有重要意义 ,是CG的重要补充。     

胃癌8号染色体等位基因杂合性缺失及其临床相关性研究

近年来，人们认为染色体上等位基因缺失或失活是肿瘤形成和演进的一个重要机制。应用从人类染色体上分离出的克隆──Ｄ８Ｓ７作为探针，采用ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法检测了２０例胃癌病员的癌组织及其相应的癌旁组织基因组ＤＮＡ８号染色体等位基因杂合性丢失（ＬＯＨ），结果发现，２５％（５／２０）的胃癌组织以及１５％（３／２０）的癌旁组织中存在染色体８Ｐ上等位基因缺失或丢失，早期和晚期胃癌均存在这种分子遗传学改变，提示人类８号染色体短臂上存在肿瘤抑制基因，此基因正常等位基因缺失或丢失参与胃粘膜细胞癌变及其胃癌的演化和进程。     

荧光原位杂交（FISH）检测人精子染色体非整倍体率方法的研究

本研究建立了荧光原位杂交方法，并测定了十名正常健康男子精子Ｘ染色体非整倍体率。取少量精液经洗后制片，用二梳苏糖醇和二碘水杨酸锂处理，使精子头部紧密的染色质去凝集，然后与生物素标记的α－卫星Ｘ染色体特异ＤＮＡ探针作原位杂交；用Ｃｙ３－链亲和素检测杂交信号。     

应用荧光原位杂交方法检测鼻咽癌细胞系中EGFR基因拷贝数变化

目的 检测鼻咽癌细胞系中表皮生长因子受体(EGFR)基因拷贝数扩增情况.方法 以人鼻咽癌细胞系CNE-1、CNE-2、HONE-1、 SUNE-1、HNE-1、HNE-2作为研究对象.应用探针LSI EGFR SpectrumOrange/CEP 7 SpectrumGreen probe(Vysis,Abbott Laboratoriesm,IL)以荧光原位杂交(FISH)方法进行EGFR基因拷贝数的检测.结果 经FISH法检测的6株鼻咽癌细胞株中,HNE-2存在基因扩增,其余细胞系为三倍体或多倍体.结论 鼻咽癌细胞系中存在EGFR基因拷贝数的扩增,能否作为酪氨酸激酶抑制剂有效的分子标记,值得进一步研究.     

胃癌7号染色体长臂的杂合性缺失分析

目的:检测胃癌患者7号染色体长臂微卫星位点的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH),以初步确定7号染色体长臂上与胃癌相关基因连锁最密切的微卫星多态位点及LOH的临床意义.方法:在70例原发性胃癌中应用多重PCR技术扩增覆盖整个7号染色体长臂的9个微卫星位点(平均遗传距离为10cm),聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物,用GeneScan、Genotyper软件进行分析.结果:9个微卫星位点的LOH均可发生于原发性胃癌,总的LOH频率为34.3%(24/70),其中D7S486和D7S798位点的LOH频率较高,分别为24.0%(12/50)和19.2%(5/26);总的LOH频率随临床分期而显著增高(P=0.046),D7S486位点的LOH频率在淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P=0.015).结论:在7号染色体长臂D7S486和D7S798位点附近,可能存在与胃癌发展相关的抑癌基因.     

11株肝癌细胞系染色体17P13.3和p53基因状况的研究

目的了解１１株肝癌细胞系染色体１７ｐ１３．３区基因组结构和ｐ５３基因状况，为今后更好使用这些细胞株提供信息。方法应用染色体微卫星标志ＰＣＲ扩增，同位素标记，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析以及染色体可变数目重复排列序列ＶＮＴＲ标志ＹＮＺ２２的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测各细胞株染色体１７ｐ１３．３区基因组结构和ｐ５３基因状况。结果通过上述检测，获得了１１株肝癌细胞在染色体１７ｐ１３．３区８个位点的结构状况。发现来源于我国上海地区构建的６株细胞系在染色体１７ｐ１３．３区各个位点的结构状况基本一致。ＣＣＬ细胞株在该区的两个位点呈纯合子缺失。上述６株细胞系在染色体１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点呈杂合子，且微卫星重复序列的大小一致，ＣＣＬ及Ｈｅｐ３Ｂ细胞系在ｐ５３基因外显子５，６，７，８基因组片段有缺失，其它细胞系在该区有正常大小的基因组片段。结论本研究提供了１１株肝癌细胞系在染色体１７ｐ１３．３区和ｐ５３基因的结构状况信息     

多色荧光原位杂交方法同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变

背景与目的:建立可以同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变的多色荧光原位杂交技术.材料与方法:使用2条1号染色体探针(着丝粒和末端探针),2条18号染色体着丝粒探针,分别用地高辛或生物素标记,与人精子核DNA进行荧光原位杂交,用CY3-链亲和素检测生物素探针杂交信号;用与FITC结合的抗地高辛抗体检测地高辛信号,结果:在Nikon荧光显微镜下,可以清楚看到精子头部呈现兰色的荧光信号背景下,有红色荧光点信号(1号染色体着丝粒),绿色荧光信号(1号染色体末端),和黄色荧光信号(18号染色体着丝粒部位红、绿两种荧光信号的混合色).本方法能够同时检测到精子1号,18号染色体非整倍体率(双体率,缺体率),1号染色体短臂和着丝粒结构畸变(重复率,缺失率),以及二倍体精子率3种染色体异常.用建立的方法检测14名正常人135 937条精子,测得1号染色体双体率、缺体率分别为0.045%和0.048%;18号染色双体率、缺体率分别为0.053%和0.045%;二倍体精子率为0.061%;1号染色体末端重复率、缺失率分别为0.082%、0.069%,1号着丝粒重复率、缺失率分别为0.075%,0.060%;均在文献报道范围内.结论:本研究建立的多色FISH可用于测定正常人和环境化学物接触人群精子染色体数目畸变和结构畸变.     

维甲酸对人胃癌细胞表型的逆转作用

人胃癌细胞ＳＧＣ７９０１在含有维甲酸１０μｍｏｌ／Ｌ的培养液中，其生长受到非常明显的抑制，胃细胞分化标志酶胃蛋白酶原（ＰＧ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活力发生显著的改变，ＰＧ活力显著高于培养相同天数未用ＲＡ处理的对照胃癌细胞，而ＬＤＨ活力则显著低于对照。与肿瘤相关的标志酶β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇ）和神经氨酸苷酶（ＮＡＮａｓｅ）活力在ＲＡ处理下，两项酶活力比对照细胞均显著降低。总唾液酸（ＴＳＡ）含量比对     

双色荧光原位杂交检测丙烯腈接触男工精子性染色体数目畸变

本研究用荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）对９名丙烯腈接触男工和９名健康者精子性染色体数目畸变率进行了检测,结果显示,精子性染色体杂交点荧光信号强,背景清楚,在镜下容易观察;接触组和对照组杂交效率均大于９９％。９名对照者Ｘ和Ｙ精子分别为４９１％和４９６％,Ｘ、Ｙ精子比例接近于１∶１。对照人群精子性染色体数目畸变率与其它试验室检出结果基本一致。接触组和对照组分别共计数了９１０１５和７４６７９个精子细胞核,两组精子性染色体数目畸变率分别为０．７０％和０．３５％,有显著性差异;其中接触组ＸＸ、ＹＹ、ＸＹ分别为０．１０％、０．２３％、０．３７％,明显高于对照组的０．０５％、０１０％和０２０％,表明使用荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）能检出接触丙烯腈引起的精子性染色体数目畸变。     

体外不同胃癌细胞株对表阿霉素敏感性测定的意义

采用MTT方法测定体外MKN－45、SGC-7901、MKN－28胃癌细胞株对不同浓度表阿霉素的敏感性。结果显示0．6μg／ml的表阿霉素对胃癌细胞的抑制率在24小时分别为10.6％、20．9％和11％，到48小时明显增高至43．8％、66.7％和42％（P＜0.01）；表阿霉素浓度增至40μg／ml，72／小时之抑制率进一步上升为78.1％、77.4％和77.3％。分化差的癌细胞对表阿霉素敏感性高于分化好的癌细胞．实验提示，表阿霉素在胃癌化疗时，除考虑肿瘤生物学特性外，还应使用合理的给药方法，以增加与癌细胞接触的浓度和时间，提高有效率。     

骆驼蓬总碱体内、外对人体肝癌和胃癌瘤株的抑制作用

用MTT法检测骆驼蓬总碱对人肝癌BEL—7402,胃癌MGC—803和鼻咽癌CNE—2细胞株均有杀伤作用,IC_(50)分别为4.0,17.3及24.3μg/ml,尤其肝癌细胞株最敏感。在可耐受剂量下,骆驼蓬总碱(60mg/kg)对裸鼠移植人肝癌BEL—7402和胃癌MGC—803的生长有明显的抑制作用,抑制率分别为60％和48.4％;与DDP合并用药对裸鼠异体移植肝癌BEL—7402有增效作用。     

耐阿霉素人胃腺癌细胞亚株的分离及其特征

通过间歇性加药逐步提高培养液中阿霉素(ADM)的浓度,我们从人胃腺癌细胞SGC—7901中获得了耐ADM的细胞亚株。该耐药亚株对ADM具有25倍的耐受性,同时对其它多种抗癌药具有交叉耐受性。与亲代细胞相比,耐药细胞的某些生物学特性发生了改变:细胞内ADM的聚积量降低1倍;细胞内ADM的分布也发生了改变。该耐药亚株的获得,将为深入研究人胃癌耐药机制以及寻找克服耐药性的药物和方法,提供一个重要的体外实验模型。     

紫杉醇对浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨紫杉醇对体外培养的浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养卵巢癌细胞HO-8910,用浓度1×10-9 mol/L、1×10-8 mol/L、1×10-7 mol/L和1×10-6 mol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行2.0 mg/L 琼脂糖凝胶电泳;消化HO-8910细胞并经碘化丙锭(IP)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HO-8910细胞进行形态学分析。结果:体外培养的卵巢癌HO-8910细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于1×10-7 mol/L 紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7 %;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变。结论:卵巢癌HO-8910细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对卵巢癌细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

维拉帕米等6种药物对人卵巢癌细胞系顺铂耐药性的逆转作用

目的　研究维拉帕米（ 异博定,钙离子阻滞剂）、双嘧达莫（ 潘生丁） 、丹参、黄体酮、环孢菌素Ａ、他莫昔芬等药物对人卵巢癌细胞系（ 具有多药耐药的特征） 顺铂（ＤＤＰ） 耐药性的逆转作用。　方法　用ＭＴＴ 法测定上述药物对Ａ２７８０／ＤＤＰ耐药细胞的细胞毒性作用,用高效液相色谱仪（ＨＰＬＣ） 测定细胞内ＤＤＰ 含量。　结果　除丹参以外的其他５ 种药物,能不同程度地逆转耐药细胞对顺铂的耐药性;可增加耐药细胞内顺铂的药物浓度。　结论　耐药细胞逆转作用主要是由于这些药物使耐药细胞内对顺铂解毒系统功能降低,致使细胞内药物浓度增加,与多药耐药基因（ ＭＤＲ１） 关系不大。     

荧光原位杂交技术检测慢性B-CLL第12号染色体三体畸变

目的 检测２０例慢性Ｂ淋巴细胞白血病（Ｂ－ＣＬＬ）中第１２号染色体三体畸变。方法 运用荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）。结果 ６例（３０％）患者有１２号染色体三体（＋１２）,其中５例经染色体核型分析发现的＋１２均得到证实。在１例Ｂ－ＣＬＬ中,染色体分析未发现任何分裂相,而ＦＩＳＨ检测发现了＋１２克隆。在另１例Ｂ－ＣＬＬ中,ＦＩＳＨ不仅证实了染色体核型检查发现的存在于扁桃体的＋１２,同时还发现了染色体分     

应用FISH技术对我国早期从事医用X线工作者的细胞遗传学评价

目的:对受到长期、低剂量率照射的我国早期从事医用X线工作者辐射损伤的远期效应进行细胞遗传学观察和评价.方法:用4号和7号全染色体探针和荧光原位杂交技术,分析25名早期X线工作者和10名对照者外周血淋巴细胞染色体畸变,并用Giemsa染色验证.结果:直观地表现出正常靶染色体和多种畸变.X线工作者的易位占其染色体总畸变的84 %;其他各种畸变率分别为插入(Ins)1.9%、双着丝粒(Dic)4.5%、无着丝粒断片(Ace)9.7 %;X线工作者的染色体易位率和总畸变率均明显高于对照组(P＜0.005).结论:早期医用X线工作者外周血淋巴细胞的染色体畸变以易位为主.