应激及其损伤时HSP70表达及调控机制

<正>应激反应及应激保护是近年来应激损伤领域研究的热点。热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类广泛存在于动植物体内的,在进化上高度保守的蛋白家族。由应激诱导的热休克蛋白可以保护细胞免受由应激所致的损伤。在细胞受到应激刺激或其损伤时,能够迅速合成,对生物体细胞起到一定的保护作用。HSPs家族按其分子量及等电点可分为五个家族:低分子量HSP家族,中等分量HSP家族,HSP70     

热休克蛋白70在心肌保护中的作用

热休克蛋白70（HSP70）是生物体在应激原刺激下细胞内迅速增加的一组蛋白质,本文探讨了其生物学特性以及在心肌保护中的作用并指出了其应用前景。其对心肌的保护作用,体现在抑制细胞凋亡,与缺血预处理相关,减弱心肌缺血再灌注损伤,及减少心肌顿抑范围等方面。     

高温氧化条件下人品状体上皮细胞内HSP70mRNA的表达

目的：通过研究高温氧化作用对人晶体上皮细胞内热休克蛋白质（HSP）的效应来探讨白内障的发病机制。方法：细胞分别在高温（45℃）、氧化（50mmol／LH2O2）条件下，培养30min后恢复至正常条件下，在生物介质中恢复于不同时间段（Oh，2h，4h，6h，16h，24h），采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测HSP70的水平。结果：生理状态下和应激状态下均有热休克蛋白质的表达。热应激和氧化应激后2h导致HSPmRNA的水平增加。但是每组HSP70的表达到达峰值的时间间隔2～6h。以后逐渐降低，但是他们在16h仍维持较高水平。结论：HSPs在晶状体上皮细胞里存在，并且在应激之后可被诱导产生。数据表明它可能在应激状态下对晶状体上皮细胞起重要保护作用。     

热应激和短暂心肌缺血对大鼠心肝组织热休克蛋白70表达的影响

目的探讨热应激及短暂心肌缺血对大鼠心、肝组织损伤及热休克蛋白（HSP70）表达的影响。方法24只雄性SD大鼠随机分为：对照组、假手术组、热休克组和短暂心肌缺血组,每组6只,应激后20h取心、肝组织,采用Western blotting、免疫组化及HE染色方法,观察大鼠心、肝组织的病理变化和HSP70的表达。结果（1）热应激及短暂心肌缺血后大鼠心、肝组织均有病理改变且HSP70表达与对照相比均显著增加（P〈0．05）;（2）短暂心肌缺血后心肌中HSP70表达量显著高于热应激后的表达量（P〈0．05）,而肝脏在两种刺激后HSP70表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论短暂心肌缺血对心脏组织中HSP70表达的影响强于热应激,而对肝脏的影响两者无显著差异,这可能与不同刺激引起心、肝组织中HSP70表达机制不同有关。     

丙氨酰谷氨酰胺二肽对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用

目的观察丙氨酰谷氨酰胺二肽（丙谷二肽）对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法在以低氧低糖培养人脐静脉内皮细胞ECV304为细胞损伤模型的基础上,以噻唑蓝（MTT）比色法优化丙谷二肽的最佳作用浓度,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位。自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,比色法检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的浓度,RT-PCR方法检测细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、热休克蛋白70（HSP70）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的表达。结果丙谷二肽能够使细胞在缺氧缺糖应激下存活率增加,线粒体损伤减轻,LDH分泌降低,GSH产生增加,HSP70和HIF-1α mRNA的表达增加。结论丙谷二肽对细胞缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与保护线粒体、维持细胞膜结构完整、上调细胞中应激基因HSP70和HIF-1α的表达有关。     

热休克蛋白70抗原肽提取及活性测定

热休克蛋白（HSP）是一类应激性蛋白，具有分子伴侣的作用，通常以热休克蛋白-抗原肽的形式存在，能诱导针对该肿瘤细胞的特异性免疫反应。在HSP家族中，HCA70肿瘤免疫原性最强，但其纯化过程需要快速蛋白液相层析系统（FPLC）。这对缺乏FPLC设备的实验室来说，要分离纯化HSP是极其困难的。故探讨一条简便、实用的HCA的提取方法，以便用于临床对热休克蛋白的应用。     

四种镇痛方法对子宫切除患者热休克蛋白水平的影响

热休克蛋白（HSP）是生命体在高温、发热、缺血、缺氧、病毒感染、炎症等不良环境作用下所产生的一组蛋白质，它能保护机体或细胞不受或少受伤害，这一反应过程称为热休克反应。目前已发现的HSP主要可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60和小HSP等五个家族，其中HSP70在正常状态水平较低，而在应激状态下可显著升高，其生物学功能的研究也最为透彻。本实验拟探讨四种不同的镇痛方法对子宫切除患者血清中HSP70水平的影响，旨在进一步研究HSP70在不同应激状态下的变化规律。     

5-氟尿嘧啶对口腔鳞癌细胞株热休克蛋白27／70表达的影响

目的：为探讨热休克蛋白27和热休克蛋白70在口腔鳞状细胞癌化疗中的意义。本实验选用口腔鳞状细胞癌细胞株OSC-4作为研究对象t随机分组。实验组加100μg／mL 5-氟尿嘧啶。方法：用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检洲HSP27和HSP70的表达。结果：OSC-4细胞经5-Fu处理后,MTT和流式细胞仪显示5-Fu抑制OSC-4细胞的存活率（P〈0．05）．并存在时间和剂量依赖。Western Blot结果显示HSP27和HSP70在OSC-4中均有表达,在OSC-4细胞中5-Fu能诱导HSP27和HSP70的表达（P〈0．05）。HSP27和HSP70在不同口腔鳞状细胞癌细胞株中均有表达,表达有差异（P〈0．05）。结论：5-Fu能诱导OSC-4细胞的凋亡,并呈现时间与剂量依赖;5-Fu能上调HSP27和HSP70的表达。     

热休克蛋白90与不良妊娠结局的相关性研究

近年来，不良妊娠的发生率越来越高，对于不良妊娠的影响因素众说纷纭，包括妊娠期高血压、肥胖、过度紧张、年龄较高等，而对于其发生机制尚无定论。热休克蛋白（heat shockprotein，HSP）是所有生物细胞在应激原刺激后，发生热休克反应时产生的一类细胞伴侣蛋白的总称。研究证实，HSP对于肿瘤细胞的分化及凋亡的调控有重要作用。本课题以不良妊娠患者为研究对象，     

热休克蛋白70及其疫苗与胃癌的相关性研究

热休克蛋白(heat shock protein,HSPs)又称应激蛋白(stress protein,SP),广泛存在于细胞核、细胞质、内质网、线粒体和叶绿体细胞中,是一类高度保守的蛋白质。当细胞在受到一些应激原如高热、感染、缺血、缺氧及化学物质等刺激时,会激活HSP基因,高效合成热休克蛋白,发挥细胞保护功能。应激时HSPs在细胞内的出现标志着细胞自身保护机理的启动。近年来     

HSP70单克隆抗体诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的:体外培养宫颈癌细胞株,免疫化学方法检测阻断HSP70前后的表达;方法:TUNEL技术观察不同浓度热休克蛋白70单抗对细胞生长的影响.探讨热休克蛋白70(HSP70)单抗对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用;结果:经不同浓度热休克蛋白70单抗后,免疫化学方法检测HSP70的表达显著受到抑制.TUNEL技术检测出细胞凋亡;结论:表明热休克蛋白70单克隆抗体明显诱导宫颈癌细胞调亡.     

大鼠心肌缺血后心、肝组织应激改变的研究

目的本研究旨在探讨短暂和持续心肌缺血应激后大鼠心、肝组织病理改变及热休克蛋白（HSP70）的表达规律。方法复制大鼠短暂心肌缺血（BMI）5min后再灌20h及持续心肌缺血（MI）20h模型,取心、肝组织,用Western blotting法、免疫组化及HE染色,观察大鼠心、肝组织的病理变化和HSP70的表达规律。结果短暂和持续心肌缺血后心、肝组织病理形态均有改变,HSP70表达均显著增加,心、肝组织中HSP70表达在短暂心肌缺血再灌组增加显著且组织病变较轻,持续心肌缺血组HSP70表达较少且组织损伤较大。结论不同程度心肌缺血对心、肝组织病理改变和HSP70表达影响不同,短暂心肌缺血再灌比持续心肌缺血对心脏及肝脏组织损伤较小而刺激组织HSP70增加较多。     

热应激对鲤鱼血清组织HSP70诱导的影响

为了探讨热应激过程中热应激蛋白（heat stress proteins，HSPs）的诱导合成与机制，建立了鲤鱼血清组织HSP70的双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法（ELISA）。以国际通用的鱼类温度指标测定程序，依据鲤鱼的起始致死温度（即50％个体无限期存活的温度上限Upper incipient lethal temperature，TL50），以及鲤鱼的选择一回避温度、选择最适温度（Preferred optimum temperature），在热冲击室内模拟环境下，进行了不同驯化温度、不同增温条件下的鲤鱼血清组织HSP70的诱导合成测定。     

HSP70在大鼠磨牙机械性损伤后的免疫组化表达

热休克蛋白又称应激蛋白,是在热休克状态下启动的一系列特殊基因编码合成的蛋白质,广泛存在于真核细胞内,能够在应激状态下保护细胞组织免受伤害,并对受损组织有修复作用。因其在体内与多种多肽和蛋白质形成复合体,生理状态下在蛋白质的折叠与伸展,多肽的组装过程中起调节作用,但又不改变靶蛋白的结构,故热休克蛋白又被称作分子伴侣。基于其分子量的大小有学者建议将其分为四类,HSP90家族,HSPT0家族,HSP60家族及小分子量sHSP家族。     

热休克蛋白70及其抑制剂的研究进展

热休克蛋白70（heat shock protein 70,Hsp70）是一种在应激条件下诱导表达的伴侣蛋白,能帮助细胞内新生蛋白折叠,蛋白细胞内运输、蛋白装配和降解,并能在应激状态下维持蛋白质构象。研究表明,Hsp70与许多疾病有关,如癌症、神经退行性疾病、异源移植的排斥、感染等,有望成为新的药物作用靶点。本文综述了Hsp70的结构、家族成员、协同伴侣（co-chaperones）成员及其功能研究进展,并介绍Hsp70抑制剂的研究现况。     

肿瘤细胞HSP-70多肽诱导CTL及其抗瘤作用机制的研究

目的：探讨鼠S180细胞HSP－70多肽诱导杀伤性T淋巴细胞（CTL）及其特异性抗瘤作用机制。方法：从43℃9h热休克诱导HSP高表达与S180细胞提纯80μg/mlHSP-70多肽，体外刺激小鼠脾淋巴细胞扩增，活化，然后用MTT法测定其杀瘤活性，并用电镜观察其培养上清诱导S180细胞的形态学变化。结果：S180细胞HSP－70多肽体外免疫扩增的小鼠脾淋巴细胞对S180和H22细胞的杀瘤率分别为83．61％和9．98％，其培养上清能培养S180的细胞出现程序化死亡的形态学变化。结论：S180细胞HSP－70多肽能刺激小鼠脾淋巴细胞产生特异性杀伤S180细胞的免疫活性细胞，该细胞还能发泌免疫活性物质诱导肿瘤细胞凋亡。     

高温氧化条件下人晶状体上皮细胞内HSP70mRNA的表达

目的:通过研究高温氧化作用对人晶体上皮细胞内热休克蛋白质(HSP)的效应来探讨白内障的发病机制。方法:细胞分别在高温(45℃)、氧化(50mmol/LH2O2)条件下,培养30min后恢复至正常条件下,在生物介质中恢复于不同时间段(0h,2h,4h,6h,16h,24h),采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70的水平。结果:生理状态下和应激状态下均有热休克蛋白质的表达。热应激和氧化应激后2h导致HSPmRNA的水平增加。但是每组HSP70的表达到达峰值的时间间隔2~6h。以后逐渐降低,但是他们在16h仍维持较高水平。结论:HSPs在晶状体上皮细胞里存在,并且在应激之后可被诱导产生。数据表明它可能在应激状态下对晶状体上皮细胞起重要保护作用。     

热休克蛋白70与创伤愈合关系的研究进展

热休克蛋白70(HSP70)是一类与细胞损伤耐受性有关的细胞应激蛋白，具有细胞保护作用，其主要机制是通过保持细胞内蛋白质的稳定来维持细胞的正常结构。一些研究发现HSP70与细胞增殖及创伤愈合有关，本文综述了HSP70与创伤愈合关系的研究进展。     

丹参酮II A影响大鼠急性脊髓损伤HSP70神经元的表达

目的：通过对Wistar大鼠给予尾静脉注射丹参酮ⅡA,影响大鼠急性脊髓损伤热休克蛋白质70（HSP70）神经元水平的表达。方法采用Allen’s打击法建立急性脊髓损伤（ASCI模型）,观察丹参酮ⅡA组（STS组）、甲基强的松龙组（MP组）、安慰剂对照组（NS组）、不给药对照组（NO组）,观察在伤后1、2、4、8 h时间点HSP70阳性表达。结果四组HSP70在ASCI后组织中显著存在,且各组HSP70表达趋势随着各个时段上升呈上升趋势。①急性脊髓损伤大鼠不做任何处理或给予生理盐水的情况下, HSP70表达差异无统计学意义（P〉0.05）。②当注射丹参酮ⅡA或甲基强的松龙时,脊髓组织中HSP70表达差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。组间比采取t检验,其结果显示：①给脊髓损伤模型注射生理盐水和不给药时,对脊髓组织中HSP70表达是一致的（P〉0.05）。②给强的松龙治疗脊髓损伤作用优于丹参酮ⅡA注射液（P〈0.05）。结论①急性脊髓损伤过程中神经元受到损伤致使HSP70表达增高是产生应激性保护的一种标志,该标志在HSP 70表达中对受损神经元起到保护作用,也使得HSP70在ASCI后表达增强。②脊髓损伤后各组的HSP70表达均呈增加趋势。STS组和MP组HSP70随时段上升阳性神经元细胞表达上升,亦呈连续性, STS组数值虽低于MP组数值,但具有可比性。所以二者在急性脊髓损伤后HSP70阳性神经元表达层面上具有相同作用。     

热休克蛋白70肿瘤疫苗的研究进展

热休克蛋白(HSP)与免疫治疗的关系是近年来的研究热点之一。许多研究结果证实，从肿瘤组织提取HSP后免疫动物，可以诱导特异的抗肿瘤细胞CTL(cyto-toxicityT lymphocyte)反应，产生强大的杀瘤效应。HSP广泛存在于各种原核和真核细胞中。在正常生长条件下，各种细胞中HSP占细胞总蛋白含量的5％～10％，当细胞处于高温和应激情况时，HSP表达明显增高。