人表皮细胞的体外培养

目的：对表皮细胞在不同的培养方法、不同的培养液及不同底物中的生长情况进行３方面的探讨，以便选出较好的一种组合进行表皮细胞培养，为改善烧伤皮源不足的问题打下基础。方法：①采用人包皮或体皮制成皮块、皮粒、表皮细胞悬液进行液体培养，比较３种方法中表皮细胞生长情况；②应用纯表皮细胞悬液进行空气液体界面培养，平铺平皿培养及培养瓶液体培养，比较表皮细胞贴壁、生长情况；③另将表皮细胞悬液接种于３种不同的培养液，即ＲＰＭＩ１６４０，ＲＰＭＩ１６４０＋ＭＥＭ及ＭＥＭ比较细胞生长差异。结果：①在适当的条件下，离体的皮肤皮块、皮粒及表皮细胞悬液经培养皆能生长和分化，而表皮细胞悬液生长速度较快，纤维母细胞污染机会最少；②以Ｂｉｏｆｉｌ为底物的空气液体界面法，细胞生长速度最快，培养出的单层表皮细胞膜片易取出，不收缩；③表皮细胞在ＭＥＭ，ＲＰＭＩ１６４０及ＲＰＭＩ１６４０＋ＭＥＭ３种培养基中的生长情况基本一致。结论：以Ｂｉｏｆｉｌ为底物的空气液体界面培养法应得到推广应用，它不仅加快了表皮细胞的生长速度，减少了纤维母细胞的污染，易于移植，同时解决了以往各种人工敷料仅针对Ⅱ度烧伤创面的治疗及暂时覆盖Ⅲ度创面的局限     

用漏出液代替标准培养基培养人体外周血淋巴细胞

用漏出液代替标准培养基培养人体外周血淋巴细胞生物学教研室肖桂芝，刘朝晖，冯立新关键词培养基，淋巴细胞，有丝分裂指数培养人体外周血淋巴细胞一般是用Ｍ１９９、ＲＰＭＩ１６４０、ＨａｍＦ１０等标准培养基，但标准培养基均由国外购进，价格比较昂贵，不利于基层及...     

胆固醇脂质体对培养兔胆道口括约肌细胞的增殖作用及其意义

通过胆固醇脂质体对培养兔胆道口括约肌细胞作用的研究，以探讨高胆固醇血症ＳＯ功能形态改变间的关系，影响因素及高胆固醇血症诱发胆固醇结石形成的可能机理。方法；分离幼兔胆道口括约肌行原代培养，经免疫组化及电镜诱发，给予人工ＣＬ，分别采用ＤＭＥＭ和ＲＰＭＩ－１６４０培养基，行细胞增殖四唑盐比色实验及流式细胞仪ＦＣＭ分析。     

白细胞介素—6对急性白血病原代细胞的影响及意义

用ＲＰＭＩ１６４０培养基，在不同浓度的白细胞介素－６条件下对原代白血病细胞进行 外培养，用ＭＴＴ法测细胞增殖提数，     

大鼠肺动脉内皮细胞的简易培养鉴定

目的：探索一种简单的方法培养大鼠肺动脉内皮细胞（ＲＰＡＥＣｓ）方法：分离大鼠肺动脉，将共切成步块，使其内皮面贴于培养瓶，用含有２０％新生牛血清，肝索９０μｇ／ｍｌ，Ｌ－谷氨酰胺４ｍｍｏｌ／Ｌ，青霉素１００ｕ／ｍｌ和链霉素１００ｕｇ／ｍｌ的ＲＰＭＩ－１６４０培养基培养，结果：培养２４ｈ后ＲＰＡＥＣｓ从动脉块游出，７２ｈ后将动脉块移去，ＲＰＡＥＣｓ于６～１０ｄ融合成单层细胞，这些细胞具有规律的鹅卵石样     

叶酸缺乏对人乳腺细胞株生长影响的实验研究

将人乳腺细胞株ＨＢＬ 10 0和人乳腺癌细胞株ＭＣＦ 7置于叶酸缺乏的培养基中培养 ,利用细胞计数和流式细胞仪 (ＦＣＭ )判断叶酸缺乏情况下 ,乳腺癌的发生及生长 ,探讨叶酸缺乏与乳腺癌发生之间的关系。材料和方法一、细胞培养(一 )细胞株　人乳腺癌细胞株ＭＣＦ 7、人乳腺细胞株ＨＢＬ 10 0均购于中国科学院细胞库。(二 )培养基　以不含叶酸的ＲＰＭＩ 16 4 0培养液 (ＧＩＢ ＣＯ公司 )为基础 ,补充一定量的叶酸 ,配置成浓度为正常叶酸浓度 1/ 10的ＲＰＭＩ 16 4 0培养液作为实验组 ;含正常浓度叶酸的ＲＰＭＩ 16 4 0培养液为对照组。(三 …     

培养的肺动脉内皮细胞生长及生化特性的初步观察

采用胰蛋白酶消化法和刮取法培养了肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）。通过原代培养、传代和冻存复苏等步骤，观察了ＰＡＥＣ的形态及生化特点，如Ⅷ因子相关抗原、细胞内钙、环磷酸腺苷等。结果表明：原代及传代培养的ＰＡＥＣ可很快贴壁生长，经２￣５ｄ可汇合成单层，细胞呈铺路石状排列，Ⅷ因子相关抗原阳性，并能分泌血管紧张素转移酶；在含２０％小牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养基内，ＰＡＥＣ可传３０代以上；传代后的细胞生长速     

核黄素等抗甲基苄基亚硝胺的致细胞突变作用

采用ＣＨＯ细胞ＨＧＰＲＴ位点突变测定系统观察了核黄素、尼克酰胺和锌等微量营养素对甲基苄基亚硝胺（ＭＢＮＡ）致细胞突变作用的影响。结果表明，在ＲＰＭＩ１６４０培养基中添加核黄素（２．６～１３．０μｍｏｌ／Ｌ）或尼克酰胺（４０～１２０μｍｏｌ／Ｌ）可显著抑制ＭＢＮＡ的致细胞突变作用。联合应用核黄素、尼克酰胺和锌效果更佳。提示：核黄素等微量营养素可能具有阻止细胞癌变的作用，为应用微量营养素干预治疗癌变过程提供了一定的理论依据。     

不同压力对兔动脉平滑肌细胞增殖的调控作用研究

目的：探讨不同压力状态对动脉平滑肌增殖的调控作用,由此判断冠脉再狭窄过程中压力因素所起的作用。方法：用含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液体外培养新西兰白兔的主动脉平滑肌细胞至３－７代,将含５％小牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液与动脉平滑肌细胞的混悬液１００μｌ加入９６孔培养板中培养。２４ｈ后按照实验分组分别在６．６５ｋＰａ,１３．３ｋＰａ,１９．９５ｋＰａ,２６．６ｋＰａ压力状态下持续培养     

人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离培养与活性测定

目的 分离、培养人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞并对其进行活性测定，探讨临床应用肿瘤浸润淋巴细胞的理论根据。方法 采用机械分离、酶解聚和不连续密度梯度离心方法从１０例脑胶质瘤制备肿瘤浸润淋巴细胞单细胞悬液，体外培养扩增；采用ＮＡＧ酶荧光比色法测定肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性。结果 肿瘤浸润淋巴细胞得率达到７２．５±３．２１；在ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中生长旺盛，第３、４周能够达到１０＾９数量级，此时杀伤活     

神经细胞体外分离培养的比较研究

目的：对神经元分离、培养的不同实验方法进行比较研究。方法：取成年小鼠和新生小鼠的脑皮质或全脑组织，经胰蛋白酶消化分离后，分别在普通RPMI-1640培养基、含阿糖胞苷的培养基、含Neurol Medium和B27的培养基3种不同条件下进行培养，观察神经元的生长情况。结果：采用普通RPMI-1640培养基培养的神经元被胶质细胞掩盖，形态不典型，神经元比例小；用含阿糖胞苷的培养基培养的神经元所含比例较高，但形态不太典型；用含Neurol Medium和M27的培养基培养的神经元形态典型，生长良好。结论：采用含Neurol Medium和M27的培养基可以从的乳鼠的全脑组织中培养出形态典型，生长良好，较为纯净的神经元，方法简便，得率高，这为进一步深入探讨其功能奠定了良好基础。     

两种不同培养基体外培养阴道毛滴虫的增殖效果比较

目的 筛选阴道毛滴虫体外生长的适宜培养基.方法 分别配制RPMI-1640和半胱氨酸-肝-胨-麦芽糖(肝浸汤)培养基培养基,并接种阴道毛滴虫,接种密度为12.5×104个/mL,pH值为5.8,置37 ℃恒温箱培养.血球计数板计数阴道毛滴虫增殖密度并计算增殖倍数,光镜观察虫体形态.结果 阴道毛滴虫在pH 5.8的环境中...     

地塞米松和辛伐他汀对成骨细胞增殖分化的影响

目的:研究地塞米松和辛伐他汀对成骨细胞增殖分化的影响.方法:从新生SD大鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,随机分为3组培养,A组加入1×10-7 mol/L的地塞米松、1×10-7 mol/L的辛伐他汀和二甲基亚砜(DMSO,终浓度为1 g/L);B组加入1×10-7 mol/L的地塞米松和与A组等量的DMSO;C组只加入与A组等量的DMSO作为对照.96 h后,以RT-PCR一步法分析成骨细胞骨钙素mRNA的表达;采用MTT法测定成骨细胞增殖率.结果:A、C组成骨细胞骨钙素mRNA表达量及细胞增殖率均高于B组(P＜0.01),A与C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:辛伐他汀可对抗地塞米松对成骨细胞增殖和分化的抑制作用.     

原代人胚肺、肾细胞成功培养方法的改进

目的：培养出广泛适合于基础与临床研究的原代人胚肺、人胚肾细胞。方法：分别用不同的培养基及不同浓度的血清,以改进的方法对原代人胚肺、肾细胞进行培养。结果：经水囊引产的３月大小的胚胎肺及肾,用ＭＥＭ及１６４０加上２０％的牛血清,对细胞的贴附及增殖十分有利,细胞生长状态良好。结论：经改进后的对人胚肺细胞和人胚肾细胞的原代培养,用含２０％的小牛血清的ＭＥＭ和１６４０的培养液对细胞的生长极为有利。     

葡萄糖和胰岛素对SW480肿瘤细胞分泌IGF-1的影响

目的本实验模拟2型糖尿病病程中葡萄糖、胰岛素的浓度改变,研究不同浓度的葡萄糖、胰岛素对SW480肿瘤细胞分泌IGF-1的影响。方法体外培养SW480肿瘤细胞。依据培养液中加入葡萄糖、胰岛素浓度的不同,将实验细胞分为六组：0组（对照组）：RPMI1640细胞培养液;第1组：RPMI1640细胞培养液＋5mmol／L葡萄糖和5uIU／ml胰岛素;第2组：RPMI1640细胞培养液＋5mmol／L葡萄糖和125gIU／ml胰岛素;第3组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和125uIU／ml胰岛素;第4组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和5uIU／ml胰岛素;第5组：RPMI1640细胞培养液＋25mmol／L葡萄糖和1．25uIU／ml胰岛素。每个组设3个复孔,于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中培养48h,培养结束后,收集细胞培养上清,用ELISA方法检测IGF-1的浓度。结果在高浓度的胰岛素组（第2组、第3组,培养液中均含有125uIU／ml的胰岛素）IGF-1的浓度[（286．85±23．51）ug／L、（293．43±30．57）ug／L]高于对照组0组[（197．99±22．50）ug／L],差异有统计学意义（F=9．726,P〈0．01）;而第1、4、5组（培养液中分别含有5uIU／ml、5uIU／ml、1．25uIU／ml的胰岛素）IGF-1的浓度[（203．22±28．89）ug／L、（209．47±25．77）ug/L、（195．33±20．88ug/L）]与对照组0组相比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高浓度的胰岛素能够上调SW480肿瘤细胞IGF-1的表达。     

针对CTGF的siRNA对高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin减少的影响

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin表达减少中的作用,及针对CTGF基因的siRNA对其影响.方法 将体外培养的小鼠足细胞分为6组:(1)正常对照组,1640培养基含D-葡萄糖1 g/L;(2)等渗对照组,1640培养基合D-葡萄糖lg/L,甘露醇3.5 g,L;(3)高糖组,1640培养基含D.葡萄糖4.5 g,L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于舍D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于含D-葡萄糖4.5g/L中的1640培养基中培养.应用Reahime PCR检测nephrin、podocin、CTGFmRNA水平,Western blot检测CTGF,nephrin、podocin蛋白表达水平.结果 高糖可诱导CTGF mRNA及蛋白表达增加,下调足细胞的nephrin、podocin mRNA及蛋白水平,而通过特异性siRNA抑制CTGFmRNA表达后,CTGF表达减少,同时伴有细胞nephrin、podocin表达升高.结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,高糖可通过CTGF诱导nephrin,podocin表达减少.针对CTGF的siRNA能明显改善这种损伤,为DN发病机制的研究提供新的实验依据.     

益生注射液对人内皮细胞缺氧再给氧损伤的拮抗机理研究

目的 探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理。方法 用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株ECV304缺氧1.5小时，然后以含糖培养基，在5%CO2和37℃条件下给氧培养5小时，建立内皮细胞缺氧再给氧模型，以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤，并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程，荧光染色显示胞内钙离子与线粒体，细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶（SDH）和乳酸脱氢酶（LDH）活性，并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）浓度。结果 缺氧再给氧使ECV304细胞变圆，收缩、脱落，细胞内钙离子含量增高，线粒体膜电位减弱，SDH活性下降，LDH活性增高，培养液中SOD与NO含量减少，而MDA浓度增高；用益生注射液干预后，ECV304细胞形态基本恢复正常，上述多项检测指标的改变得以逆转。结论 缺氧再给氧导致ECV304细胞发生脂质过氧化，胞内钙离子超载，SOD活性及NO水平降低，线粒体功能受损，益生注射液可使上述变化得意以逆转，从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤。     

纳米SiO2粒子特性及其在无细胞体系中氧化能力的检测及意义

目的：检测纳米SiO₂粒子的特性及其在无细胞体系中的氧化能力,为医用纳米SiO₂粒子体内外毒性的预测提供依据。方法：用透射电镜观测2种纳米SiO₂粒子粒径、分散性、形状;用Zeta电位粒度分析仪检测纳米粒子在不同介质（纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液、含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液,超声30 s）溶液及不同时间（0、24、48和72 h）的粒径分布及团聚状态;用ＤDCFH-DA法Ｆ检测粒子在无细胞体系中自发产生自由基的能力。结果：电镜结果显示,2种纳米SiO₂粒子均呈球形,大小一致,分布均匀、分散性好,粒子平均粒径分别为（43.0±4.2）和（68.0±5.7）nm;在纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液及含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中,Si-43 nm及Si-68 nm 粒子粒径变化很大,其中在生理盐水中的粒径最接近电镜结果,为74.0和96.7 nm。超声30 s后0、24、48和72 h时,Si-43 nm及Si-68 nm粒子粒径在生理盐水中不发生团聚;在含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中发生团聚,形成相似大小的团聚体;在30~100 μg的质量范围内,2种粒子自发产生自由基的能力相似但很弱,相当于2.5 μmol•L^-1左右H₂O₂当量。结论：一定粒径的纳米SiO₂在细胞培养液中形成大粒径团聚体,粒子自身只有较弱的自发产生自由基的能力。     

旋毛虫体外培养研究

目的 :研究旋毛虫囊蚴在宿主体外培养的情况。方法 :加 2 0 %小牛血清的 RPMI- 16 4 0作为培养基 ,在 37℃、 5 % CO2 的二氧化碳培养箱中培养。结果 :旋毛虫脱囊蚴能在体外合适培养基中存活较长时间。但虫体无明显增大。结论 :旋毛虫脱囊蚴能在体外生存 ,生长和发育还需要其它刺激因子     

益生注射液对人内皮细胞缺氧再给氧损伤的拮抗机理研究

目的　探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理。方法　用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4缺氧 1.5小时 ,然后以含糖培养基 ,在 5 % CO2 和 37℃条件下给氧培养 5小时 ,建立内皮细胞缺氧再给氧模型 ,以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤 ,并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程 ,荧光染色显示胞内钙离子与线粒体 ,细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (L DH)活性 ,并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)和一氧化氮 (NO)浓度。结果　缺氧再给氧使 ECV30 4细胞变圆、收缩、脱落 ,细胞内钙离子含量增高 ,线粒体膜电位减弱 ,SDH活性下降 ,L DH活性增高 ,培养液中 SOD与 NO含量减少 ,而 MDA浓度增高 ;用益生注射液干预后 ,ECV30 4细胞形态基本恢复正常 ,上述多项检测指标的改变得以逆转。结论　缺氧再给氧导致 ECV30 4细胞发生脂质过氧化 ,胞内钙离子超载、SOD活性及 NO水平降低、线粒体功能受损 ,益生注射液可使上述变化得以逆转 ,从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤