掌叶半夏化学成分的研究（V）

从天南星科植物掌叶半夏Ｐｉｎｅｌｌｉａ ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ块茎的生物碱部分，分离鉴定了７个化合物：Ｌ－脯氨酰－Ｌ－丙氨酸酐（Ｌ－ｐｒｏｌｙｌ－Ｌ－ａｌａｎｉｎｅ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ，ＸＸＶ），３－乙酰胺基－２－哌啶酮（３－ａｃｅｔａｍｉｎｏ－２－ｐｉｐｅｒｉｄｏｎｅ，ＸＸⅥ），腺苷，Ｌ－苯丙氨酰－Ｌ－丝氨酸酐，Ｌ－酪氨酰－Ｌ－丙氨酸酐，掌叶半夏碱丁，掌叶半厦碱戊，均为首次从该植物中分得，其中掌     

掌叶半夏化学成分的研究(Ⅴ)

从天南星科植物掌叶半夏PinelliaPedatisecta块茎的生物碱部分，分离鉴定了7个化合物：L-脯氨酰－L-丙氨酸酐（L-prolyl－L-alanineanhydride,ⅩⅩⅤ），3－乙酰胺基－2－哌淀酮（3－acetamino－2－piperidone，ⅩⅩⅥ），腺苷（adenosine，ⅩⅩⅦ），L－苯丙氨酰－L－丝氨酸酐（L－phenylalanyl－L－serylanhydride，ⅩⅩⅧ），L－酪氨酰－L－丙氨酸酐（L－tyrosyl－L－alanineanhydride，ⅩⅩⅨ），掌叶半夏碱丁（pedatisectineD，ⅩⅩⅩ），掌叶半夏碱戊（pedatisectineE，ⅩⅩⅩⅠ），均为首次从该植物中分得，其中掌叶半夏碱丁、戊为2个吡嗪类新化合物。     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药堂叶半夏（Ｐｔｎｅｌｌｉａ ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ Ｓｅｈｏｔｔ）中通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝生的凝信要素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ｐｉｎｅｌｌｉａ ｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａ ｌｅｃｔｉｎ Ａ，ＰＰＬ－Ａ）ｄ ＰＡＧＥ＇ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定     

掌叶半夏总蛋白的提取、化学分析和对小鼠S-180瘤株的抑制作用

从中草药掌叶半夏(Pinellia pedatisecta Schott)中提取分离出的总蛋白成分,经化学分析证实,总蛋白中不含磷,不含脂蛋白,含有糖成分;经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析,总蛋白中含有十余种蛋白质,蛋白质含量96.1％。动物实验显示,掌叶半夏总蛋白1％生理盐水液每天给每只小鼠腹腔注射0.1ml,对小鼠S-180瘤株的抑制率为50.1％～67.0％,平均为58.3％。经病理切片观察,实验组和对照组S-180瘤块细胞在细胞坏死数、核分裂数和细胞变性数三个指标上均有显著性差别。结果表明,掌叶半夏总蛋白对小鼠S-180癌细胞生长具有明显抑制作用。     

β-谷甾醇对子宫颈癌细胞微管系统的影响

目的 探讨β-谷甾醇对子宫颈癌细胞SiHa的生长抑制作用及对细胞内微管系统的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定β-谷甾醇对SiHa细胞的增殖抑制作用,并用流式细胞技术分析β-谷甾醇作用前后细胞周期的变化,应用激光共聚焦显微技术观察β-谷甾醇处理的SiHa细胞内微管和微管相关蛋白2的表达、分布,采用蛋白免疫印迹法检测微管蛋白、微管相关蛋白2的表达,及聚合和未聚合微管蛋白含量的变化。结果 20μmol／L的β-谷甾醇能明显抑制SiHa细胞的增殖,并显著促进S期细胞的集聚。激光共聚焦分析表明,β-谷甾醇作用5d的SiHa细胞微管网络异常,微管相关蛋白2表达显著下调,蛋白免疫印迹结果进一步证实β-谷甾醇能抑制微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达,同时β-谷甾醇能抑制SiHa细胞内微管蛋白的聚合,并随着作用时间的延长而逐渐增强。结论 β-谷甾醇能降低SiHa细胞微管蛋白α和微管相关蛋白2的表达,并抑制SiHa细胞内微管的聚合,提示β-谷甾醇具有一定的抗微管作用,这一作用可能是造成SiHa细胞生长抑制的重要原因。     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药掌叶半夏（ＰｔｎｅｌｌｉａｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａＳｃｈｏｔｔ）中通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝活性的凝集素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ＰｉｎｅｌｌｉａｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａｌｅｃｔｉｎＡ，ＰＰＬ－Ａ）。在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其Ｍｒ为１６．３×１０３，用等电聚焦电泳测得其等电点为５．８，经ＤＮＳ－Ｃｌ分析法分析其氨基末端为丙氨酸。对所含的１８种氨基酸作了定量分析。通过Ｓｃｈｉｆｆ试剂电泳染色法鉴定ＰＰＬ－Ａ为糖蛋白，用酶标凝集素结合法分析了糖链的结构，糖链部分含有甘露糖，岩藻糖和乙酰氨基葡萄糖。     

掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用

 目的  观察掌叶半夏提取物(Pinellia extracts,PE)对HPV+TC-1荷瘤小鼠T细胞免疫应答的作用。方法  宫颈癌荷瘤小鼠建模后随分成4组:机对照组(生理盐水,0.2 mL/d,灌胃)、PE低剂量组(10 mg/kg, 0.2 mL/d,灌胃)、PE高剂量组(20 mg/kg,0.2 mL/d,灌胃)、CDDP组(4 mg/kg,0.2 mL/3 d,腹腔注射)。给药期间测瘤、描绘肿瘤生长曲线,21天后处死小鼠并计算抑瘤率,流式细胞术检测脾脏CD4+和CD8+T细细胞以及Th1、Th2、Treg和Th17亚群的比例。结果  抑瘤率:CDDP组(29.82%)>PE高剂量组(21.73％)>PE低剂量组(8.23%);PE高剂量组和CDDP组CD4+和CD8+T细胞比例较阴性对照组均显著增多(P<0.01);PE两组Th1比例显著升高、Th2和Th17比例显著下降(呈现剂量依赖性),Treg亚群分泌TGF减少,而FOXP3水平增高。结论  PE能通过诱导CD4+T细胞向Th1型分化,抑制Th1/Th2漂移,改善Treg和Th17的比例,发挥抗肿瘤免疫作用。     

柞蚕杀菌肽D对宫颈癌细胞株生长的抑制作用

用大肠杆菌（Ｋｌ２Ｄ３ｌ）诱导柞蚕，取其血淋巴，分离纯化出杀菌肽Ｄ。研究了不同浓度、不同作用时间的杀菌肽Ｄ对３Ｈ－ＴｄＲ参入ＳｉＨａ细胞的影响。结果显示：在２４ｈ内具有促进作用，４８ｈ后参入受抑制。由此可见杀菌肽Ｄ对肿瘤细胞ＤＮＡ合成具有一种调控抑制作用，而非一般抗肿瘤药物的单纯抑制作用。     

甲氨蝶呤的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响

目的研究甲氨蝶呤(MTX)的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响,以探索更好的给药方法。方法培养Hela细胞,设生理盐水对照组、常规化疗组(MTX 12 mg/mL,72 h)和节律化疗组(MTX2 mg/mL,12 h/次,72 h给药6次),分别用MTT法检测各组的细胞增殖改变,Hoechst 33342/PI双染色检测细胞凋亡和死亡情况,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达。结果与生理盐水对照组比较,两个MTX化疗组Hela细胞均有不同程度的增殖抑制和凋亡(P<0.01);与常规化疗组比较,节律化疗组Hela细胞的增殖抑制率和凋亡率更高(P<0.05),Hela细胞的死亡率更低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,两个MTX化疗组Hela细胞中Caspase-3的表达高于生理盐水对照组;而节律化疗组Hela细胞Caspase-3的表达显著高于常规化疗组。结论甲氨蝶呤节律化疗比常规化疗对宫颈癌Hela细胞的抑制作用更强、毒性更小。     

结核菌素对肝癌和肺癌肿瘤细胞生长和凋亡的调控作用

目的探讨结核菌素对肝癌和肺癌肿瘤细胞生长和凋亡的调控作用。方法制备不同浓度的结核菌上清液(TB-SN),分别与肿瘤细胞株HePG2(肝癌)和A549(肺癌)进行反应。应用特异性荧光探针LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity试剂盒检测肿瘤细胞的生长情况,应用Vybrant凋亡试剂盒检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果与5%TB-SN反应5 d后,HePG2和A549细胞凋亡显著增加;与TB-SN反应后,HePG2和A549细胞生长受到抑制。结论结核菌素可以介导肝癌和肺癌肿瘤细胞的凋亡,并抑制肿瘤细胞的生长。     

金黄色葡萄球菌L型对宫颈癌细胞生长的影响

目的:研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)L型对体外培养的单层人宫颈癌细胞(HeLa)生长的影响作用.方法:用常规方法诱导金葡菌为L型后感染HeLa细胞,采用光学显微镜、透射电子显微镜检测金葡菌L型黏附及侵入细胞情况,并采用改良的MTT比色法检测细胞增殖能力.结果:光镜、电镜检查显示金葡菌L型能够黏附并且进入HeLa细胞;改良的MTT法检测表明金葡菌L型能够促进HeLa细胞增殖(P<0.01).结论:金葡菌L型能够感染并促进HeLa细胞增殖生长,揭示金葡菌L型可能与宫颈癌的发生有关.     

溶血磷脂酸对宫颈癌细胞形态学影响的体外研究

目的观察溶血磷脂酸对宫颈癌细胞株Siha生长及细胞形态的影响。方法①体外培养人宫颈癌细胞株Siha,以终浓度为1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L的溶血磷脂酸和终浓度为5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的多西环素分别干预,并设不加任何药物作为空白对照组。各组均干预72h后进行过碘酸雪夫反应(PAS)染色,用倒置显微镜观察各组宫颈癌细胞的生长及形态变化。②体外培养Siha细胞,用终浓度为10μmol/L的溶血磷脂酸和终浓度为40mg/L的多西环素干预,72h后固定过夜,电镜扫描。结果①溶血磷脂酸组Siha细胞随着溶血磷脂酸浓度升高,癌细胞数量明显增多,细胞异形性及可塑性增加;多西环素处理组随着多西环素浓度增加,细胞数量明显减少,细胞核固缩、碎裂,细胞破坏。②电镜下可见经溶血磷脂酸干预后Siha细胞表面出现大量分泌颗粒,细胞变形伸出细长突起相互连接。多西环素组干预者则细胞数量减少,形态轮廓不清晰,细胞皱缩变形,核碎裂,细胞溶解。结论溶血磷脂酸促进宫颈癌细胞株Siha生长增殖并改变Siha细胞形态,而多西环素则具有相反的抑制作用。     

泰索帝对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制效应研究

目的研究泰索帝对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制效应。方法应用流式细胞仪和免疫荧光法观察MCF-7细胞经不同剂量泰索帝作用(24 h、48 h)后,细胞凋亡率、细胞周期、微管结构的变化。结果免疫荧光染色显示0.1、1.0μg/ml泰索帝作用48 h细胞凋亡最为明显(凋亡率为37.5%,37%),5.0μg/ml作用凋亡率较以上低浓度组有所下降(22%)。流式细胞仪测定表明,泰索帝作用使大量MCF-7细胞阻滞于G2/M期,48 h后阻滞作用有所减弱。微管蛋白抗体荧光示泰索帝促进细胞内微管聚合成束,随着泰索帝剂量的增加、时间的延长,微管的聚集越明显。结论本实验结果显示泰索帝对MCF-7人乳腺癌细胞增殖有抑制作用、促进肿瘤细胞凋亡,随着剂量的增加,作用时间的延长,坏死可能成为肿瘤的主要死亡形式。     

胡桃醌对宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 探讨胡桃醌对人宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响,阐明胡桃醌在宫颈癌治疗中的作用。方法: 选取处于对数生长期的SiHa细胞,随机分为对照组和10、20、40、60、80和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组。倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和细胞生长抑制率,流式细胞术检测SiHa细胞的细胞周期。结果: 与对照组比较,胡桃醌处理组SiHa细胞体积缩小,连接消失,与周围细胞脱离。与对照组比较,胡桃醌处理组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞生长抑制率升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)为20.7 μmol·L^-1;流式细胞术检测,与对照组比较,10和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组SiHa细胞的亚二倍体峰(SubG₁)比率增加,G₀/G₁和S期细胞比率降低,G₂/M期细胞比率先升高后降低。结论: 胡桃醌对SiHa细胞增殖具有抑制作用,并可使细胞周期SubG₁比率增加。     

宫颈鳞癌组织中血管内皮生长因子表达的临床意义

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达的临床意义。方法对1994年1月-1998年7月就诊、放疗、手术根治并能建立随访关系的官颈癌患者103例,采取免疫组化S-P法检测官颈鳞状细胞癌组织中VEGF的表达水平,分析官颈鳞癌患者复发、转移、生存期以及癌的分化程度、生长方式的关系。结果官颈癌组织中VEGF表达的阳性率为55．3％（75／103）,在高分化鳞状细胞癌中VEGF阳性表达率为31．5％（10／32）．低分化鳞状细胞癌阳性表达率为60．4％（26／43）,未分化鳞状细胞癌阳性表达率为75％（21／28）,分化程度越低,阳性率越高（P〈0．01）。生长方式中外生浸润型阳性表达率为45．1％（35／51）,内生浸润型阳性表达率为65．4％（34／52）,VEGF阳性随生长方式不同而有显著性差异（P〈0．05）。手术根治患者中有淋巴结转移的VEGF阳性表达率为76．2％（16／21）,无淋巴结转移VEGF阳性表达率为33．3％（3／9）（P〈0．05）。VEGF阳性表达者5年内复发率为61．4％（35／57）,VEGF阴性表达者5年内复发率为34．8％（16／46）（P〈0．05）。VEGF阳性患者5年生存率为43．8％（25／57）。VEGF阴性患者5年内生存率为69．7％（32／46）,两者有显著性差异（P〈0．05）。结论官颈鳞状组织中VEGF表达与分化程度、生长方式、复发、淋巴结转移及生存期密切相关,VEGF阳性表达者预后较差。检测官颈癌组织中VEGF表达水平是判断官颈癌预后的重要指标。     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响。建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性。结果MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关(P<0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P<0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%。结论ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关。     

miRNA221对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移行为的影响

目的:探讨干扰miRNA221对宫颈癌细胞侵袭转移行为的影响.方法:实验分为Siha,Siha-模拟物即(siha-mimic),阴性对照Siha-nc(mimic),Siha-抑制剂即(Siha-inhibitor),阴性对照Siha-nc(inhibitor)五组.采用qPCR、Western blotting、划痕实验和Transwell小室实验对miRNA221在宫颈癌siha细胞株侵袭转移中的作用.结果:在siha-mimic组,miRNA221表达明显高于Siha组和Siha-nc(mimic)组,E-钙粘素(E-cadherin,E-cad)表达水平明显降低,N-钙粘素(N-cadherin,N-cad)及波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平明显上调;在Siha-inhibitor组,miRNA221表达明显低于Siha组和Siha-nv(inhibitor)组,E-cad蛋白表达水平明显升高,N-cad和Vimentin表达水平显著下调.结论:干扰miRNA221抑制宫颈癌细胞侵袭转移.