定痫方对戊四氮致痫大鼠模型海马神经元凋亡的影响

目的:观察戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马神经元凋亡以及定痫方(AAP)的脑保护作用。方法:144只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组(CK组)、模型组(PTZ组)、定痫方大剂量组(AAPl组)、定痫方中剂量组(AAPm组)、定痫方小剂量组(AAPs组)和丙戊酸钠组(VPA组);每组24只。CK组和PTZ组分别给予生理盐水(4 ml/kg体质量.d)灌胃;定痛方各组分别给予定痫方大、中、小剂量(10.26 g/kg体质量、5.13 g/kg体质量、2.56 g/kg体质量)灌胃,VPA组给予丙戊酸钠(20 mg/kg.d)灌胃,每日1次;连续7 d。造模第1天,除CK组外,其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(PTZ)75 mg/kg体质量,观察记录大鼠行为学变化;于致痫后12 h、2 d、5 d、7 d相应时间点取材,制备脑标本,TUNEL检测海马神经元凋亡。结果:致痫后,除CK组外,其余各组海马区凋亡细胞增加;7 d,与PTZ组相比,AAPl组凋亡神经元阳性表达减少(P<0.05)。结论:凋亡参与致痫大鼠海马神经元死亡过程;定痫方能减少神经元凋亡,有神经保护作用。     

中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织海马凋亡相关因子C-fos蛋白表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马组织中C-fos蛋白表达水平的影响,探讨中药复方抗痫灵治疗癫痫的可能作用机制。方法:将90只Wistar大鼠随机分成空白对照组(10只),戊四氮(PTZ)腹腔注射(ip)法造模组(80只)。将戊四氮所诱导成功的癫痫大鼠随机分成5组,分别为癫痫模型组,丙戊酸钠治疗组,抗痫灵低剂量治疗组,抗痫灵中剂量治疗组,抗痫灵高剂量治疗组。观察大鼠痫性发作时,空白组、模型组及治疗各组大鼠行为,并采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马C-fos蛋白表达,采用实时荧光定量(Real time PCR)方法检测大鼠海马组织中C-fos mRNA的相对表达。结果:各治疗组大鼠C-fos蛋白阳性目标面密度值较模型组均显著降低,差异具有统计学意义(P0.01),但均未达到空白组水平(P0.01);西药组和中药中剂量组的阳性目标面密度值与其他各组相比差异具有统计学意义(P0.05);各治疗组之间相比差异无统计学意义(P0.05),模型组大鼠海马中C-fos mRNA表达较模型组均显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),但均未达到空白组水平(P0.01)。结论:中药复方抗痫灵对癫痫病的抗痫作用可能是通过降低癫痫大鼠大脑内C-fos的水平从而抑制神经元细胞的凋亡而达到抗癫痫作用的。     

中药抗痫复方对PTZ致痫大鼠海马c-jun基因及其蛋白表达的影响

目的:观察中药抗痫复方对PTZ致痫大鼠海马c-jun基因及其蛋白表达的影响。方法:观察大鼠痫性发作的行为;采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马c-jun基因及其蛋白的表达;采用Realtime PCR(实时荧光定量)方法检测大鼠海马组织c-junmRNA的相对表达。结果:经观察发现经中药抗痫复方治疗6周后,大鼠痫性发作行为明显减少。并可降低癫痫大鼠大脑内c-jun水平和海马中c-junmRNA表达。结论:中药抗痫复方能够减少大鼠癫痫发作的次数,降低海马区基因c-junmRNA及其蛋白表。     

石菖蒲挥发油抗惊厥作用及对癫痫大鼠海马PKC表达的影响

目的:研究石菖蒲挥发油的抗惊厥作用及其机制。方法:采用四种动物惊厥模型,测定石菖蒲挥发油抗惊厥效应并分析时效、量效关系及作用机制。结果:石菖蒲挥发油200、300、400 mg/kg灌胃,能显著提高电刺激大鼠皮层惊厥阈值,其中400mg/kg组药后1h、2h、4h惊厥阈值576.8μA、615.9μA、622.0μA明显高于石菖蒲其它剂量组惊厥阈值536.3μA、561.7μA、562.9μA和549.8μA、586.3μA、584.9μA;而丙戊酸镁90 mg/kg灌胃作用虽强,但其维持时间短;石菖蒲挥发油各剂量组对最大电休克惊厥实验(MES)、戊四唑惊厥实验(MET)抗惊厥效应明显优于生理盐水对照组,且均具有剂量依赖性对抗作用;海人酸模型对照组大鼠PKC阳性细胞数明显高于假手术对照组,石菖蒲挥发油300、400 mg/kg灌胃组PKC表达68.3、45.0明显低于模型对照组90.4,且呈剂量相关性。结论:石菖蒲挥发油对大、小鼠多种惊厥模型有效,是一种作用持续时间较长,抗痫谱广的抗癫痫药物,调控PKC表达,进而减少神经细胞凋亡可能是其抗癫痫作用机制之一。     

抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马区脑组织c-jun蛋白表达的影响

1实验材料1.1药物中药抗痫灵:由穿山甲、龙骨、乳香、没药、珍珠、胆南星、石菖蒲等组成,各药混合为末,药材购于黑龙江中医药大学专家门诊;丙戊酸钠缓释片:江苏恒瑞医药股份有限公司生产,批号:081017;致痫药物戊四氮:购自美国Sigma公司。1.2动物健康雄性Wistar大鼠90只,体重180～220g(SPF级),由黑龙江中医药大学实验动物中心繁育提供。     

针刺对戊四氮致痫大鼠抗癫痫机制的研究

目的:探讨针刺对戊四氮(PTZ)致痫大鼠抗癫痫的作用机制.方法:将实验大鼠分为NS组、PTZ组和针刺组,造模后观察各组大鼠癫痫发作的行为学表现,采用免疫组化法检测大脑皮质及海马caspase-3在36 h和72 h时间点免疫反应性,采用半定量RT-PCR法检测海马bcl-2、bax蛋白表达.结果:针刺组大鼠癫痫发作较P...     

石甘散对戊四氮致痫大鼠 GABA 含量的影响

目的：通过检测石甘散对戊四氮致痫模型大鼠血清 GABA 的含量,从而探讨石甘散治疗癫痫的相关机制。方法：从60只 Wistar 大鼠中,随机选取10只作为空白组。其余50只大鼠给予戊四氮35mg/kg 腹腔注射诱导点燃癫痫模型。其中模型组10只,将余下40只大鼠随机分为4组：石甘散组、石菖蒲组、甘松组、西药对照组,每组各10只。治疗30天后比较各组大鼠血清中 GABA 含量的变化。结果：与空白组相比,石菖蒲组、甘松组有统计学意义;与模型组相比,西药对照组、石甘散组、石菖蒲组、甘松组均有统计学意义;与西药对照组相比,石菖蒲组、甘松组、石甘散组有统计学意义。结论：石甘散能调整 PTZ 致痫大鼠血清中 GABA 含量使其平衡,从而抑制癫痫发作。     

天麻素对戊四氮致痫大鼠海马氨基酸递质的影响

[目的]探讨天麻索抗癫痫的机制.[方法]应用SP法研究戊四氮致癫痫大鼠和天麻素抗癫痫大鼠海马谷氨酸(Glu)和r-氨基丁酸(GABA)的变化.[结果]海马Glu的表达在戊四氮致癫痫组明显高于正常对照组(P<0.01),天麻素抗癫痫组明显低于戊四氮致癫痫组(p<0.01),天麻素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(P>0.05):海马GABA的表达在戊四氮致癫痫组明显低于正常对照组(P<0.01),天麻索抗癫痫组明显高于戊四氮致癫痫组(P<0.01),天麻素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(P>0.05).[结论]天麻素可能通过抑制海马兴奋性氨基酸神经递质受体Glu和激活海马抑制性神经递质受体GABA的活性与表达,降低大脑皮质的兴奋性,抑制癫痫的形成及发展来发挥抗癫痫作用.     

木犀草素对戊四氮致痫大鼠海马组织 CaM-CaMPK信号通路的影响

目的：观察木犀草素对戊四氮致痫大鼠认知功能的影响,探讨其作用机制。方法按随机数字表法将50只SD雄性大鼠分为正常对照组8只、模型组12只、木犀草素低剂量组11只、木犀草素中剂量组11只和木犀草素高剂量组8只。木犀草素低、中、高剂量组分别灌胃木犀草素混悬液25、50、100 mg/kg;正常对照组与模型组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠混悬液,1次/d,连续给药36 d。除正常对照组外,其余各组大鼠于每日给药后30 min腹腔注射戊四氮(40 mg/kg)制备癫痫动物模型。采用Morris 水迷宫和新物体识别实验观察大鼠的学习记忆能力,ELISA 法测定大鼠海马组织中钙调蛋白(calmodulin, CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶(calmodulin-dependent protein kinase,CaMPK)水平,Western blot法检测大鼠海马组织Ras蛋白的表达。结果与模型组比较,木犀草素低、中、高剂量组大鼠逃避潜伏期[(28.51±3.84)s、(19.77±5.41)s、(14.86±2.76)s比(37.08±5.18)s]明显缩短(P＜0.05或P＜0.01),分辨指数[(18.77±2.02)%、(25.06±4.32)%、(31.92±2.65)%比(13.87±2.14)%]明显增加(P＜0.05或P＜0.01);海马组织中 CaM 水平[(140.33±13.52)ng/L、(124.26±9.97)ng/L、(113.52±11.57)ng/L 比(158.36±10.68)ng/L]、CaMPK 水平[(8.25±1.37)ng/ml、(7.69±0.84)ng/ml、(6.74±0.93)ng/ml 比(9.87±1.02)ng/ml]、Ras 蛋白[(0.99±0.08)、(0.76±0.07)、(0.52±0.07)比(1.58±0.12)]表达降低(P＜0.05或 P＜0.01)。结论木犀草素可有效改善癫痫大鼠的认知功能,其作用机制可能与下调癫痫大鼠海马组织中CaM-CaMPK信号通路相关蛋白的表达有关。     

抗痫方对癫痫模型大鼠海马神经元γ-氨基丁酸A受体α1表达的影响

目的:观察抗痫方对戊四氮致痫大鼠海马神经元γ-氨基丁酸A受体α1(GABAARα1)表达的影响。方法:120只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、抗痫方大剂量组、小剂量组和丙戊酸钠组,每组24只。对照组和模型组分别给予生理盐水每日4 ml/kg灌胃;抗痫方各组分别给予大、小剂量(10.26 g/kg、5.13 g/kg)灌胃,西药组给予丙戊酸钠每日20 mg/kg灌胃,每日1次,连续7 d。造模第1天,除对照组外,其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(PTZ)75 mg/kg,复制急性癫痫模型;于致痫后12 h、2 d、5 d、7 d相应时间点取材,制备脑标本,免疫组化检测大鼠海马GABAARα1表达。结果:与对照组比较,模型组GABAARα1免疫反应阳性表达减少(P<0.05);与模型组比较,抗痫方大、小剂量组GABAARα1阳性表达增加(P<0.05)。结论:抗痫方可提高GABAARα1表达,降低神经元兴奋性,有脑保护作用。     

天麻素对戊四氮致痫大鼠的脑保护作用

目的：探讨天麻素对戊四氮致痫大鼠的神经元、星形胶质细胞和血管内皮的保护作用。方法：Wistar大鼠,随机分成5组,对照组,戊四氮（PTZ）致痫组,丙戊酸钠（VPA）干预组,小剂量天麻素（Gs）干预组和大剂量天麻素（Gb）干预组。每组分4个时间点：12小时、48小时、5天和7天。HE染色观察海马区组织学改变,免疫组化检测海马区的GFAP和CD34变化。结果：除对照组无痫样发作外,其余各组全部出现Racine分级Ⅳ-Ⅴ级痫样的发作。HE染色示PTZ组海马区神经元及血管内皮细胞变性、坏死显著;VIA组和天麻素组损害较轻。免疫组化结果显示PTZ纽GFAP染色在海马区和血管有高表达,5天达高峰;CD34表达水平在48小时以内较低,5天达高峰;与VPA组、Gs组和Gb组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：天麻素能减轻戊四氮致痫大鼠海马区神经元、星形胶质细胞和血管内皮细胞的损伤,从多个层面保护脑组织,减轻由癫痫导致的损伤。     

穴位埋线对青霉素致痫大鼠海马氨基酸类神经递质的影响

目的：探讨穴位埋线对癫痫大鼠海马氨基酸类神经递质含量的影响.方法：50只大鼠随机分为空白组、模型组、埋线组、西药组、针刺组,经预处理后用青霉素钠腹腔注射造模（空白组除外）,于造模后90min时处死大鼠,迅速取一侧大脑海马,以高效液相色谱仪测定海马中γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）、天门冬氨酸（ASP）、丙氨酸（Ala）、甘氨酸（Gly）、牛磺酸（Tau）的含量,计算GABA/Glu值.结果：①造模后海马内兴奋性氨基酸Glu、ASP的含量均有增加,穴位埋线、西药、针刺均可明显降低痫性大鼠海马内Glu、ASP的含量,但穴位埋线降低Glu的作用优于西药、针刺.②造模后海马内抑制性氨基酸GABA、Ala、Gly、Tau均显著升高,穴位埋线可进一步升高痫性大鼠海马内GABA、Ala、Gly的含量,其作用优于西药、针刺,并可降低Tau的含量并使之恢复正常.③模型组海马内GABA/Glu值高于空白组（P＜0.01）,穴位埋线可进一步提高痫性大鼠海马内GABA/Glu值,其作用优于西药、针刺.结论：穴位埋线可通过升高海马内抑制性氨基酸的含量、降低兴奋性氨基酸的含量、调节兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸的水平而发挥抗痫作用.     

复方石菖蒲颗粒对戊四唑致痫小鼠行为学及海马结构的影响

目的：观察复方石菖蒲颗粒（CSCP）对戊四唑（PTZ）致痫小鼠行为及海马结构的影响。方法：昆明种小鼠60 只,雌雄各半随机分为6 组：空白组,模型组,苯妥英钠组,CSCP 高（4 000 mg·kg-1）、中（2 000 mg·kg-1）、低（1 000 mg·kg-1）剂量组,空白组和模型组给予等体积生理盐水除外,其他组别给予对应药物,连续灌胃7 天,末次给药1 h 后,按80 mg·kg-1 剂量腹腔注射PTZ（空白组除外）,造成急性癫痫模型,观察CSCP 对PTZ 致痫小鼠的发作潜伏期、行为分级、发作次数等的影响;采用脑组织切片HE 染色观察海马结构的改变。结果：CSCP 可以改善癫痫小鼠的发作程度,延长轻度发作潜伏期,减少郁、吁级癫痫发作次数;观察HE 染色切片可见PTZ 致痫小鼠海马结构发生改变,细胞数量减少,苯妥英钠和CSCP 可有效保护小鼠海马神经元。结论：CSCP 对PTZ 致痫小鼠有一定抑制作用及减少海马神经元细胞的损伤,其抗癫痫机制有待进一步探讨。     

补肾与健脾方对骨质疏松症大鼠干预作用及下丘脑PKC蛋白表达的影响

目的:探索骨质疏松症的病理机制,比较补肾与健脾中药干预骨质疏松症的作用。方法:摘除大鼠卵巢建立骨质疏松症模型,给予补肾、健脾中药灌胃3个月,Western blotting法检测指标。结果:与正常组比较,骨质疏松症模型空白组骨密度明显下降(P0.01),下丘脑中PKCα与PKCβ2蛋白表达显著增加(P0.01)。与模型空白组比较,补肾中药高剂量组骨密度显著增加(P0.01);补肾、健脾中药均可下调模型大鼠下丘脑中PKCα与PKCβ2蛋白表达(P0.01)。结论:补肾中药防治骨质疏松症的作用优于健脾中药;骨质疏松的发生可能与脑PKC的变化有关,补肾中药对其有调节作用优于健脾中药。     

桂枝对致痫大鼠海马CA1区诱发场电位的影响

目的 探讨桂枝对癫痫模型海马脑片诱发场电位的影响。方法 以毛果芸碱致痫大鼠为实验对象,用细胞外玻璃微电极记录方法,观察桂枝对癫痫模型离体海马脑片CA1区锥体细胞诱发群峰电位（population spike,PS）的影响。结果 桂枝提取液使致痫大鼠海马脑片PS幅度平均降低28.73%,平均16.8min恢复。结论 桂枝能降低致痫大鼠海马脑片CA1区顺向诱发PS幅度,提示桂枝对中枢神经系统的突触传递过程有明显的抑制效应。     

抗痫煎剂对戊四氮致痫大鼠Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨抗痫煎剂对戊四氮致痫大鼠行为的影响及其对海马神经元的保护作用。方法观察模型组、抗痫煎剂低剂量组、抗痫煎剂高剂量组、丙戊酸钠组的大鼠痫性发作,采用免疫组化染色法观察Bcl-2蛋白的表达。结果抗痫煎剂高剂量组、丙戊酸钠组与模型组相比,癫痫发作潜伏期差异有统计学意义。抗痫煎剂低、高剂量组、丙戊酸钠组较模型组Bcl-2细胞增多。结论抗痫煎剂对戊四氮致痫大鼠模型海马神经元有一定的保护作用。     

中药复方对癫痫小鼠海马c-fos蛋白表达的影响

目的　探讨中药复方对戊四唑 (PTZ)致痫小鼠海马不同亚区c -fos蛋白表达的影响。方法　将 5 0只昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型组、中药复方Ⅰ组、中药复方Ⅱ组及西药组。中药复方Ⅰ组和Ⅱ组灌服不同浓度的中药复方浓缩剂 ;空白对照组、模型组灌服蒸馏水 ;西药组灌服苯妥英钠。除空白对照组外 ,其余各组于第 6天给药 30min后腹腔注射PTZ( 5 5mL/kg)致痫 ,5 5min后处死动物。采用免疫组化法观察中药复方对癫痫小鼠海马不同亚区c-fos蛋白的影响。结果　PTZ致痫后c -fos表达增强 ,分布密集 ,染色加深 ;而中西药组表现为c -fos表达减少 ,分布稀疏 ,染色变浅。结论　中药复方能有效对抗PTZ所致的惊厥发作 ,可能与其能调节海马回内的c-fos蛋白的过度表达有关。     

中药补脑止痫散对癫痫大鼠海马c-fos和PKCa表达的影响

目的 利用戊四氮点燃大鼠模型研究中药补脑止痫散对癫痫大鼠海马神经元c-fos和PKCa表达的影响,探讨补脑止痫散抗痫机制.方法 将80只大鼠随机分为8组,分别为空白组、模型组、补脑止痫散低、中、高剂量10天组和低、中、高剂量21天组,在戊四氮点燃大鼠模型后,分别用补脑止痫散低、中、高剂量对相应的组别进行灌胃,在预定时间点处死大鼠并取材,用免疫组化法检测海马神经元c-fos和PKCa的表达情况.结果 与模型组相比,补脑止痫散中、高剂量组海马神经元c-fos和PKCa的表达量均明显减少,差异极显著(P＜0.01);c-fos表达:高剂量组低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组,21天组低于10天组,均差异显著(P＜0.05);PKCa表达:高剂量组和中剂量组均显著低于低剂量组(P＜0.05),中剂量和高剂量组之间比较无显著差异,10天组和21天组比较无显著差异(P＞0.05).结论 补脑止痫散能明显抑制癫痫大鼠海马神经元c-fos和PKCa的表达,中、高剂量组作用强于低剂量组;抑制c-fos和PKCa表达是补脑止痫散的抗痫机制之一.     

痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马Glu,GABA含量的影响

目的:观察痫愈痊颗粒对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸(Glu),γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨痫愈痊颗粒治疗癫痫的机制。方法:将70只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丙戊酸钠组(200 mg·kg-1)、痫愈痊颗粒低、高剂量组(586,1 172 mg·kg-1),采用亚惊厥剂量戊四氮(PTZ)ip建立癫痫大鼠模型,在造模同时即开始给药,共28 d。行为学观察后取海马组织,采用高效液相色谱-四级杆离子阱串联质谱仪检测海马中Glu,GABA的含量。结果:59只大鼠进入结果分析,与模型组比较,痫愈痊颗粒与丙戊酸钠干预后发作潜伏期延长、惊厥持续时间缩短(P0.01);惊厥持续时间高剂量组优于低剂量组(P0.05)。模型组与正常组相比,海马Glu含量明显上升,GABA含量明显下降(P0.01);与模型组比较,痫愈痊颗粒高、低剂量组和丙戊酸钠组可明显降低海马Glu含量,升高GABA含量(P0.05,P0.01)。结论:采用亚惊厥剂量PTZ能够建立癫痫大鼠模型;痫愈痊颗粒抗癫痫机制可能与其降低海马Glu含量,增加GABA含量有关。     

愈痫灵对戊四氮点燃癫痫大鼠钙离子的干预作用

据流行病学调查资料显示:全世界有超过5‰的人口患有癫痫(epilepsy)[1],给家庭、社会带来沉重的心理压力和巨大的经济负担.愈痫灵颗粒是以活血化瘀药物为主所组成的方剂,临床疗效满意[2],并已证实对致痫大鼠颞叶及海马病理学损害有预保护作用[3],为了进一步说明其临床疗效,本实验通过观察该方对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫大鼠海马突触体[Ca2 ]i、脑脊液和血清[Ca2 ]i的影响,探讨其抗癫痫的作用机制.