定痫方对戊四氮致痫大鼠模型海马神经元凋亡的影响

目的:观察戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马神经元凋亡以及定痫方(AAP)的脑保护作用。方法:144只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组(CK组)、模型组(PTZ组)、定痫方大剂量组(AAPl组)、定痫方中剂量组(AAPm组)、定痫方小剂量组(AAPs组)和丙戊酸钠组(VPA组);每组24只。CK组和PTZ组分别给予生理盐水(4 ml/kg体质量.d)灌胃;定痛方各组分别给予定痫方大、中、小剂量(10.26 g/kg体质量、5.13 g/kg体质量、2.56 g/kg体质量)灌胃,VPA组给予丙戊酸钠(20 mg/kg.d)灌胃,每日1次;连续7 d。造模第1天,除CK组外,其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(PTZ)75 mg/kg体质量,观察记录大鼠行为学变化;于致痫后12 h、2 d、5 d、7 d相应时间点取材,制备脑标本,TUNEL检测海马神经元凋亡。结果:致痫后,除CK组外,其余各组海马区凋亡细胞增加;7 d,与PTZ组相比,AAPl组凋亡神经元阳性表达减少(P<0.05)。结论:凋亡参与致痫大鼠海马神经元死亡过程;定痫方能减少神经元凋亡,有神经保护作用。     

天麻素对戊四氮致痫大鼠的脑保护作用

目的：探讨天麻素对戊四氮致痫大鼠的神经元、星形胶质细胞和血管内皮的保护作用。方法：Wistar大鼠,随机分成5组,对照组,戊四氮（PTZ）致痫组,丙戊酸钠（VPA）干预组,小剂量天麻素（Gs）干预组和大剂量天麻素（Gb）干预组。每组分4个时间点：12小时、48小时、5天和7天。HE染色观察海马区组织学改变,免疫组化检测海马区的GFAP和CD34变化。结果：除对照组无痫样发作外,其余各组全部出现Racine分级Ⅳ-Ⅴ级痫样的发作。HE染色示PTZ组海马区神经元及血管内皮细胞变性、坏死显著;VIA组和天麻素组损害较轻。免疫组化结果显示PTZ纽GFAP染色在海马区和血管有高表达,5天达高峰;CD34表达水平在48小时以内较低,5天达高峰;与VPA组、Gs组和Gb组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：天麻素能减轻戊四氮致痫大鼠海马区神经元、星形胶质细胞和血管内皮细胞的损伤,从多个层面保护脑组织,减轻由癫痫导致的损伤。     

银杏叶提取物对戊四氮诱导大鼠癫痫发作和Cav3．2表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（GBE）对戊四氮（PTZ）慢性致痫大鼠模型癫痫发作的影响及脑保护作用。方法健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组：PTZ致痫组、PTZ＋丙戊酸（VPA）组、PTZ＋VPA＋GBE组、生理盐水（NS）对照组,每组10只,观察各组大鼠的行为学、脑电图（EEG）、电迷宫正确率和颞叶海马T型ca2＋通道Car3．2表达变化。结果PTZ＋VPA组、PTZ＋VPA＋GBE组和NS组发作级别为0-Ⅱ级,EEG正常或少量棘慢波,EEG总功率差值及颞叶海马Cav3．2水平较PIE组显著降低,差别有统计学意义（P〈0．05）;相比于PTZ＋VPA组,PTZ＋VPA＋GBE组颞叶海马Cav3．2表达明显减少,差别有统计学意义（P〈0．05）。结论GBE能降低Car3．2水平,显著降低癫痫大鼠发作级别、减少脑部异常放电和改善认知功能,有辅助抗癫痫和脑保护作用。     

针刺结合抗痫灵对癫痫大鼠海马GABA_AR的影响

目的：通过针刺结合抗痫灵对戊四氮诱导的大鼠癫痫模型的实验研究,探讨针刺结合抗痫灵的抗癫痫作用及其机制。方法：采用戊四氮（PTZ）诱导癫痫大鼠模型,实验动物分为模型组和针刺结合抗痫灵处理组、抗痫灵处理组、丙戊酸钠（VPA）处理组、实验空白对照组。于癫痫发作24 h后断头取脑,用免疫印迹（Western blot）法检测GABAAR在大鼠海马变化。结果：抗痫灵处理组、针刺结合抗痫灵组和VPA处理组癫痫发作程度及海马区GABAAR蛋白阳性目标面密度值均显高于模型组（P〈0.05）,低于空白组（P〈0.01）。结论：针刺结合抗痫灵处理较抗痫灵处理能有效地减少癫痫发作,可使GABAAR蛋白增加从而抑制癫痫发作。     

石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对癫痫幼鼠脑海马神经元凋亡的影响

目的探讨石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对戊四氮(PTZ)诱发的幼鼠癫痫发作所激发的海马区神经元凋亡的影响。方法利用光电镜技术观察癫痫幼鼠海马神经元的病理改变,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bax和Bcl-2的表达情况。结果致痫对照组癫痫幼鼠海马CA1和CA3区大量神经元凋亡;药物治疗后凋亡细胞数明显减少(P<0.01);PTZ致痫各组幼鼠海马CA1和CA3区Bcl-2和Bax阳性细胞数量较正常对照组均有明显增加(P<0.01)。其中,苯巴比妥钠组、石菖蒲组、α-细辛醚组Bcl-2阳性细胞数量增加较致痫对照组显著(P<0.01);Bax阳性细胞数量各致痫组之间无显著性差异。正常对照组Bcl-2/Bax的值约为6.0;致痫对照组约为0.7;其余3组均约为1.0。结论石菖蒲和α-细辛醚可能通过增强Bcl-2表达,抑制幼鼠癫痫发作激发的海马神经元凋亡。     

抗痫方对癫痫模型大鼠海马神经元γ-氨基丁酸A受体α1表达的影响

目的:观察抗痫方对戊四氮致痫大鼠海马神经元γ-氨基丁酸A受体α1(GABAARα1)表达的影响。方法:120只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、抗痫方大剂量组、小剂量组和丙戊酸钠组,每组24只。对照组和模型组分别给予生理盐水每日4 ml/kg灌胃;抗痫方各组分别给予大、小剂量(10.26 g/kg、5.13 g/kg)灌胃,西药组给予丙戊酸钠每日20 mg/kg灌胃,每日1次,连续7 d。造模第1天,除对照组外,其余各组大鼠均腹腔注射戊四氮(PTZ)75 mg/kg,复制急性癫痫模型;于致痫后12 h、2 d、5 d、7 d相应时间点取材,制备脑标本,免疫组化检测大鼠海马GABAARα1表达。结果:与对照组比较,模型组GABAARα1免疫反应阳性表达减少(P<0.05);与模型组比较,抗痫方大、小剂量组GABAARα1阳性表达增加(P<0.05)。结论:抗痫方可提高GABAARα1表达,降低神经元兴奋性,有脑保护作用。     

电针“太阳”透“百会”对PTZ致痫大鼠海马pCREB及NSE的影响

摘要：目的：观察电针透刺“太阳”透“百会”对戊四氮( PTZ) 致痫大鼠行为学、海马内pCREB及NSE表达情况,探讨其抗痫的机制。方法：采用随机分组将32只大鼠动物分成空白组、模型组、西药组及电针透穴组,每组各8只。除空白组外,采用戊四氮（PTZ）腹腔注射将其余24只大鼠制备为癫痫模型。记录各组大鼠一般状态、行为学改变等情况,免疫组化法及Western-blot检测海马组织pCREB及NSE表达变化情况。结果：模型组、西药组及电针透穴组与空白组比较,体质量明显降低;模型组大鼠海马组织的pCREB及NSE阳性细胞数及细胞核蛋白浓度明显升高,具有显著性差异(P＜0.05);与模型组比较,西药组、电针透穴组大鼠的体质量均明显增加、痫性发作潜伏期延长、高等级痫性发作减少,差异具有显著性差异(P＜0.05);与模型组比较,电针透穴组pCREB及NSE阳性细胞数及细胞核蛋白浓度明显降低,具有显著性差异(P＜0.05)。结论：头部电针透穴可改善PTZ致痫大鼠一般状态,减轻痫性发作,延长发作潜伏期,可降低海马组织pCREB及NSE表达,其抗痫机制可能通过减轻神经元损伤实现。     

川芎嗪对癫痫的作用及其与神经递质关系的研究

目的研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对癫痫的作用及其与神经递质谷氨酸(glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric,GABA)的关系。方法采用腹腔注射戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)诱发大鼠癫痫模型。将SD大鼠随机分为3组,即:生理盐水对照组;戊四氮致痫组;川芎嗪 戊四氮致痫组。采用免疫组织化学方法检测各组大鼠大脑皮层、海马谷氨酸、γ-氨基丁酸阳性神经元的表达变化。结果戊四氮致痫组与对照组比,大脑皮层、海马Glu阳性神经元明显增多,大脑皮层、海马GABA阳性神经元明显减少,差异均有显著性意义(P<0.05)。川芎嗪干预后,大脑皮层、海马Glu阳性神经元明显减少,大脑皮层、海马GABA阳性神经元明显增多,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论川芎嗪能上调GABA阳性神经元数目,下调Glu阳性神经元数目。川芎嗪可能通过抑制脑内Glu的产生,促进脑内GABA的产生,从而使神经元的兴奋性降低,抑制了癫痫的发生。     

柴胡总皂甙对戊四氮致痫大鼠海马神经细胞凋亡和P53蛋白表达影响的实验研究

目的：观察柴胡总皂甙对实验性痫性发作大鼠海马神经细胞凋亡和P^53蛋白表达的影响。方法：采用戊四氮（PTZ）致痫大鼠模型。将40只SD大鼠，随机分为6组，其中A组（8只）为PTZ模型组，B、C、D组（各8只）分别为柴胡总皂甙低、中、高剂量组，E组（4只）为正常对照组，F组（4只）为安定给药组。以原位末端标记（TUNEL）法检测凋亡细胞，免疫组化法检测P^53蛋白，观察大鼠痫性发作后48小时其海马齿状回（DG）区神经细胞凋亡和P^53蛋白表达情况。结果：各组大鼠海马DG区均可观察到不同程度的阳性细胞，其中A组阳性细胞数最多，其余各组阳性细胞数明显减少，各组与A组比较，C、D、E、F组与B组比较，差异均有显著性意义（P〈0．05）。各组大鼠海马DG区均有不同程度的P^53蛋白表达，其中A组免疫表达阳性细胞数最多，其余各组阳性细胞数明显减少，各组与A组比较，差异均有显著性意义（P〈0.05）。结论：柴胡总皂甙对PTZ致痫大鼠所致的海马神经细胞凋亡和P^53蛋白表达有明显抑制作用，可能对痫性发作引起的神经细胞凋亡有一定的保护作用。     

康痫丸对致痫大鼠氨基酸递质的影响

目的 从脑内氨基酸类递质角度探讨康痫丸治疗原发性癫痫的作用机制.方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组、癫痫模型组、丙戊酸钠组、康痈丸组,每组10只.用戊四氮(PTZ)亚惊厥剂量造模.通过免疫组化观察药物处理后致痫大鼠海马CA1、CA3、齿状回和顶叶大脑皮层的γ-氨基丁酸((GABA)、谷氨酸(Glu)表达强度.结果 PTZ致痫后,大鼠海马及皮层GABA阳性细胞数及光密度减少,而Glu阳性细胞数及光密度增加,提示PTZ同时影响脑内GABA和Glu的代谢,证实了GABA及Glu与癫痫的相互关系.采用康痫丸抗癫痫,动物海马、皮层GABA阳性细胞数及光密度增加.而Glu阳性细胞数及光密度减少.结论 康痫丸降低脑内Glu,升高GABA水平可能是其发挥抗癫痫作用的机制之一.     

槐定碱对大鼠海马组织CA1区ERK信号转导通路的影响

目的：观察槐定碱（sophoridine,SRI）对大鼠海马组织CA1区ERK信号转导通路的影响。方法：成年雄性SD大鼠72只随机分为生理盐水对照组（n=8）,槐定碱组（n=32）,PD98059＋槐定碱组（n=32）。腹腔注射大剂量槐定碱（47.83mg/kg）建立癫痫模型,应用免疫组化法和Western blot法检测各组大鼠致痫后0.5h、1.5h、5.0h、8.0h海马组织CA1区ERK1、ERK2和p-ERK1/2的免疫阳性神经元数量的变化。结果：免疫组化结果显示生理盐水对照组大鼠海马CA1区有少量的ERK1和ERK2表达,p-ERK1/2仅在胞浆内表达弱阳性,槐定碱致痫0.5h后P-ERK1/2表达迅速增强,在神经元的胞核胞浆内都有表达;同时ERK1和ERK2阳性神经元数量明显多于生理盐水对照组（P〈0.05）,尤以致痫1.5h后该三种蛋白阳性细胞数量达到最高,5.0h时阳性神经元数量回降,8.0h继续回降,但仍高于生理盐水对照组。经PD98059干预后,槐定碱致痫大鼠海马ERK1、ERK2和P-ERK1,2阳性神经元数量明显低于槐定碱组（P〈0.05）。Western blot检测显示痫性发作各时间点大鼠海马组织内ERK1、ERK2和p-ERK1/2蛋白表达较生理盐水对照组显著增多（P〈0.05）,其中1.5h点组的蛋白表达水平高于其他各时间点组。PD98059＋槐定碱组与槐定碱组比较三种蛋白含量明显降低（P〈0.05）。结论：槐定碱通过ERK信号通路对大鼠海马组织造成痫性损害。     

金思维对脑缺血模型大鼠海马CRF,PKC蛋白表达的影响

目的：观察中药金思维对脑缺血模型大鼠海马神经细胞促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）,蛋白激酶C（PKC）蛋白表达的影响。方法：采用线栓法制备脑缺血模型,大鼠随机分为假手术组,脑缺血模型组,金思维组（6.1 g·kg^-1·d^-1）和都可喜组(7.39 mg·kg^-1·d^-1)。利用免疫组化技术,分析各组大鼠海马区CRF,PKC蛋白表达量。结果：CRF：假手术组海马区可见少量阳性细胞；模型组见大量阳性细胞,着色深,随时间延长增多。金思维组和都可喜组阳性表达较少,着色较浅。模型组蛋白阳性表达面积均显著高于假手术组、金思维组和都可喜组,P<0.01。PKC：假手术组海马区阳性表达颗粒少,模型组见大量阳性表达颗粒,金思维组和都可喜组阳性表达颗粒稀疏。模型组CRF蛋白阳性表达面积均显著高于假手术组、金思维组和都可喜组,P<0.01。同时发现金思维组和都可喜组2组大鼠海马CRF,PKC蛋白阳性表达面积比较无明显差异。结论：脑缺血诱导CRF,PKC蛋白高表达是导致海马神经细胞迟发性死亡的一个重要因素;金思维可下调脑缺血后CRF,PKC蛋白表达,这可能是金思维保护缺血后神经损伤的作用机制之一。     

补脑止痫散对戊四氮慢性点燃癫痫大鼠模型GABA及其受体GABAα表达的影响

目的:揭示补脑止痫散对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫痫大鼠模型γ-氨基丁酸(GABA)及其受体亚单位α(GABAα)表达的影响。方法:1选取60只健康SD大鼠,分成6组(空白对照组、癫痫模型组、丙戊酸钠组、补脑止痫散小剂量组、补脑止痫散中剂量组、补脑止痫散高剂量组)。2采用连续小剂量腹腔注射戊四氮(PTZ)的方法,建立癫痫大鼠模型(慢性点燃)。凡是获得III级以上发作后,均停止给药。后采用免疫组织化学法,检测各组大鼠海马区GABA及其GABAα的表达。结果:除空白对照组无癫痫样发作外,其余各组都出现Racine分级中的III-IV痫样发作表现。通过免疫组织化学法,检测各组大鼠海马区GABA及其GABAα的表达。丙戊酸钠组、补脑止痫散高剂量组GABA及GABAα表达明显上调,与模型组比较,差异显著,具有统计学意义(P0.05)。结论:补脑止痫散对戊四氮慢性点燃癫痫大鼠模型海马区内抑制性递质及受体有明显的上调作用,从而起到保护脑组织、缓解癫痫症状,进而减轻由癫痫导致的脑损伤的作用。     

中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织海马凋亡相关因子C-fos蛋白表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马组织中C-fos蛋白表达水平的影响,探讨中药复方抗痫灵治疗癫痫的可能作用机制。方法:将90只Wistar大鼠随机分成空白对照组(10只),戊四氮(PTZ)腹腔注射(ip)法造模组(80只)。将戊四氮所诱导成功的癫痫大鼠随机分成5组,分别为癫痫模型组,丙戊酸钠治疗组,抗痫灵低剂量治疗组,抗痫灵中剂量治疗组,抗痫灵高剂量治疗组。观察大鼠痫性发作时,空白组、模型组及治疗各组大鼠行为,并采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马C-fos蛋白表达,采用实时荧光定量(Real time PCR)方法检测大鼠海马组织中C-fos mRNA的相对表达。结果:各治疗组大鼠C-fos蛋白阳性目标面密度值较模型组均显著降低,差异具有统计学意义(P0.01),但均未达到空白组水平(P0.01);西药组和中药中剂量组的阳性目标面密度值与其他各组相比差异具有统计学意义(P0.05);各治疗组之间相比差异无统计学意义(P0.05),模型组大鼠海马中C-fos mRNA表达较模型组均显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),但均未达到空白组水平(P0.01)。结论:中药复方抗痫灵对癫痫病的抗痫作用可能是通过降低癫痫大鼠大脑内C-fos的水平从而抑制神经元细胞的凋亡而达到抗癫痫作用的。     

抗痫灵对癫痫大鼠脑内nNOS活性影响的实验研究

目的:观察中药抗痫灵对戊四氮点燃癫痫大鼠模型的影响,进一步探讨从调节一氧化氮合酶(nNOS)的nNOS(神经元型)亚型代谢的角度探讨抗痫灵的抗癫痫作用机制。方法:动物模型采用戊四氮点燃大鼠模型。免疫印迹(Western blot)方法观察实验各组大鼠大脑海马nNOS的活性变化。结果:抗痫灵组、丙戊酸钠组、模型组阳性细胞表达与正常对照组相比,有显著性差异(P0.05),模型组较正常对照组大鼠脑nNOS内活性显著升高(P0.01),中药组显著低于模型组(P0.01)。结论:抗痫灵对戊四氮点燃大鼠癫痫发作有显著对抗作用,其作用机制可能与其降低模型大鼠脑内nNOS活性有关。     

抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑电图及脑组织病理形态学的影响

目的:通过观察中药复方抗痫灵对戊四氮(PTZ)致痫大鼠脑电图及脑组织病理形态学的影响,探讨其抗痫的作用机制。方法:采用光镜及尼氏体染色的方法观察大鼠脑组织的病理形态学变化。结果:经中药复方抗痫灵治疗6周后,戊四氮致痫大鼠海马区神经元的变性、坏死均不同程度的减轻。结论:中药复方抗痫灵能够不同程度减缓癫痫发病过程中海马区神经元的变性、坏死,从而减少癫痫的发作次数及发作症状。     

抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织海马区p53表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织细胞凋亡因子p53表达的影响,从分子生物学水平探讨癫痫的发病机制.方法:采用免疫组化方法和实时荧光定量PCR(Real time PCR)方法,检测大鼠脑组织海马区p53表达的影响.结果:经中药复方抗痫灵治疗6周后,致痫大鼠脑组织海马区p53蛋白阳性表达明显减少.结论:中药复方抗痫灵能够通过降低致痫大鼠脑组织海马区p53蛋白的阳性表达,对癫痫有明显的抑痫作用.     

抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织中海马区c-fos蛋白表达的影响

目的:研究中药复方抗痫灵抑制癫痫的发病机制。方法:采用免疫组化方法和实时荧光定量PCR(Real timePCR)方法检测大鼠脑组织中海马c-fos蛋白表达的影响。结果:经中药复方抗痫灵治疗6周后,致痫大鼠脑组织海马区c-fos蛋白阳性表达显著降低。结论:中药复方抗痫灵可能通过减少戊四氮致痫大鼠脑组织海马区c-fos蛋白的阳性表达,对癫痫有明显的抑痫作用。     

复方石菖蒲颗粒对戊四唑致痫小鼠行为学及海马结构的影响

目的：观察复方石菖蒲颗粒（CSCP）对戊四唑（PTZ）致痫小鼠行为及海马结构的影响。方法：昆明种小鼠60 只,雌雄各半随机分为6 组：空白组,模型组,苯妥英钠组,CSCP 高（4 000 mg·kg-1）、中（2 000 mg·kg-1）、低（1 000 mg·kg-1）剂量组,空白组和模型组给予等体积生理盐水除外,其他组别给予对应药物,连续灌胃7 天,末次给药1 h 后,按80 mg·kg-1 剂量腹腔注射PTZ（空白组除外）,造成急性癫痫模型,观察CSCP 对PTZ 致痫小鼠的发作潜伏期、行为分级、发作次数等的影响;采用脑组织切片HE 染色观察海马结构的改变。结果：CSCP 可以改善癫痫小鼠的发作程度,延长轻度发作潜伏期,减少郁、吁级癫痫发作次数;观察HE 染色切片可见PTZ 致痫小鼠海马结构发生改变,细胞数量减少,苯妥英钠和CSCP 可有效保护小鼠海马神经元。结论：CSCP 对PTZ 致痫小鼠有一定抑制作用及减少海马神经元细胞的损伤,其抗癫痫机制有待进一步探讨。     

中药补脑止痫散对癫痫大鼠海马神经元凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响

目的 通过观察中药补脑止痫散对戊四氮化学点燃癫痫模型大鼠海马神经元凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响,探讨补脑止痫散治疗癫痫的相关机制.方法 从78只正常Wistar大鼠中随机选取10只列为正常组,剩余68只大鼠腹腔注射戊四氮制作癫痫点燃模型,再随机选取50只造模成功大鼠随机分为5组:模型组、丙戊酸钠组、补脑止痫散高剂量组、补脑止痫散中剂量组和补脑止痫散低剂量组,每组10只.用免疫组化法检测药物治疗各组大鼠与正常组和模型组比较海马中神经元凋亡基因Bax和Bcl-2蛋白表达的变化.结果 各治疗组大鼠海马Bax和Bcl-2蛋白阳性目标面密度值与模型组相比分别出现明显降低和升高(P<0.05),而补脑止痫散低剂量组大鼠海马Bax和Bcl-2蛋白阳性目标面密度值改变不明显(P>0.05),并且补脑止痫散高剂量组和中剂量组比较,以及此二组与丙戊酸钠组相比大鼠海马Bax和Bcl-2蛋白阳性目标面密度值改变均无明显差异(P>0.05).结论 中药补脑止痫散高、中剂量能调整癫痫患者海马神经元凋亡基因Bax和Bcl-2蛋白的表达,从而抑制癫痫发作.