姜黄素对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β受体的影响

目的探讨姜黄素对经转化生长因子β(TGF-β)诱导后人胚肺成纤维细胞TGF-βⅠ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、RⅡ)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响,及其与特发性肺纤维化的关系。方法细胞分为正常组、姜黄素组、模型组、治疗组,采用RT-PCR、Western blotting法检测TGF-βRⅠ、RⅡ在人胚肺成纤维细胞的变化。结果模型组TGF-βRⅠ与RⅡ表达增强,治疗组与正常组、模型组相比,TGF-βRⅠ与RⅡ表达明显减弱。结论姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起一定作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-βRⅠ与RⅡ的表达而实现的。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA基因表达的影响

目的采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响.方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA基因表达,并进行比较.结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P＜0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P＜0.01).结论腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR-NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强（P <0．01）,含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达（P<0．01）。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察化纤煎冻干粉溶液对人胚肺成纤维细胞增殖、活化、分泌细胞外基质的影响,并观察其对TNF-α细胞因子和NF-κB信号通路的调控,探讨化纤煎治疗特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:采用TGF-β_1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、活化,化纤煎冻干粉溶液进行干预,CCK8法检测化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响。qRT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,观察成纤维细胞向肌成纤维细胞转化、分泌细胞外基质情况。qRT-PCR法检测TNF-αmRNA、NF-κB p65 mRNA、IκBαmRNA、IKKβmRNA,Western Blot检测NF-κB p65蛋白,观察化纤煎对炎症反应因子TNF-α与炎症信号通路NF-κB的作用。结果:与空白对照组比较,模型对照组的细胞增殖水平显著增加(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎中、高剂量组MRC-5细胞增殖水平均明显下降(P0.01)。模型对照组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达水平显著高于空白对照组(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平显著低于空白对照组(P0.01)。与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平均上升(P0.05或P0.01)。模型对照组NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:化纤煎冻干粉溶液可能通过抑制炎症因子TNF-α分泌和NF-κB炎症信号通路活化,从而发挥抗纤维化作用。     

龙血竭对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子β_1 mRNA及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察龙血竭对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA和I型胶原蛋白表达的影响,探讨其防治肺纤维化的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为模型组、治疗组和正常组各10只。模型组和治疗组大鼠气管内注入博来霉素(5mg/kg)诱导肺纤维化;正常组经气管内注入等容积0.9%氯化钠注射液。从第2d起,治疗组大鼠给予龙血竭180mg/kg灌胃;模型组和正常组以等容积0.9%氯化钠注射液灌胃。所有大鼠于第29d处死。苏木素-伊红(HE)及胶原纤维(VG)染色观察肺组织病理改变和胶原沉积情况;免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连结(SP)法检测I型胶原蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-CR)检测肺组织TGF-β1mRNA的表达。结果正常组I型胶原蛋白在气管周围弱表达,模型组Ⅰ型胶原蛋白分布于支气管上皮下组织、肺间质及血管周围,且表达较对照组增加(P0.01);治疗组较模型组Ⅰ型胶原蛋白表达减弱(P0.01)。模型组TGF-β1mRNA的表达较正常组明显增高(P0.01),治疗组TGF-β1mRNA的表达较模型组明显降低(P0.01),而与正常组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论龙血竭可能通过抑制大鼠肺组织TGF-β1mRNA的表达,阻止I型胶原蛋白过度沉积,从而有效地减轻肺纤维化大鼠肺组织的纤维化程度。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的观察清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF—β1）、血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）mRNA基因表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测TGF—β1、PDGF—BB mRNA基因的表达,进行各组间比较。结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均明显升高（P〈0．01）,含药血清组对3I、7b型攻击后的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均有显著降低作用（P〈0．01）。结论清肺口服液可下调TGF—β1、PDGF—BB mRNA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

姜黄素对肺纤维化大鼠肺组织胶原沉积及转化生长因子β1表达的影响

目的观察姜黄素对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠胶原沉积、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法SD雄性大鼠144只,分为假手术组、模型组、醋酸泼尼松组、姜黄素高剂量组、姜黄素中剂量组、姜黄素低剂量组,每组24只.除假手术组外其余各组大鼠气管内1次性滴注盐酸博莱霉素,假手术组大鼠气管内1次性滴注等体积的生理盐水.造模后第1天开始给药,持续到处死动物的前1天.姜黄素高、中、低剂量组分别为200、100、50 mg·kg-1,醋酸泼尼松组每天为0.56 mg·kg-1,假手术组,模型组分别灌服等体积的生理盐水.各组动物于7、14、28天随机处死8只,取肺组织进行HE和Mallory染色,同时进行免疫组化显色,结合图像分析来检测各组肺组织中转化生长因子的表达水平.结果模型组支气管黏膜下、血管壁及周围、肺泡壁、肺间质均有胶原大量沉积;姜黄素治疗组胶原沉积明显轻于模型组;假手术组最轻,胶原沉积不明显.免疫组化发现模型组TGF-β1表达最强,姜黄素治疗组较弱,假手术组微弱表达.结论姜黄素可抑制肺纤维化大鼠肺组织的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起重要作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的表达来实现.     

藏药红景天对大鼠肺纤维化保护作用及机制探讨

目的观察红景天对肺纤维化大鼠肺组织I型胶原、转化生长因子β1(TGF-β1)及其信号通路分子Smad4表达的影响,探讨红景天对大鼠肺纤维化的防治作用与机制。方法健康SD大鼠40只随机分为4组:模型组(A组),正常对照组(B组),红景天14d治疗组(C组),红景天28d治疗组(D组)各10只。博莱霉素(BLM)气管内滴入建立大鼠肺纤维化模型,正常对照组气管内滴入生理盐水。在造模的第2日治疗组予红景天0.21g/kg灌胃干预,于第14,28日取肺组织,运用组织芯片结合图象分析技术,通过苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变,用免疫组化检测I型胶原蛋白和TGF-β1的表达,实时荧光定量RT-PCR检测I型胶原和TGF-β1的mRNA表达,原位杂交技术对Smad4 mRNA进行定位定量分析。结果红景天在两时相皆抑制I型胶原,TGF-β1的表达。C组I型胶原蛋白的IOD值为(0.362±0.241),D组I型胶原蛋白IOD值为(0.334±0.122),与A组(0.513±0.384)相比有统计学意义(P均<0.05)。C组TGF-β1蛋白的IOD值为(0.062±0.013),D组TGF-β1蛋白IOD值为(0.058±0.011),与A组(0.100±0.005)相比有统计学意义(P均<0.05)。C组I型胶原mRNA相对表达量为(0.041±0.017),D组I型胶原mRNA相对表达量为0.040±0.021,与A组0.071±0.054相比有统计学意义(P均<0.05)。C组TGF-β1 mRNA相对表达量为(0.0025±0.0013),D组TGF-β1 mRNA相对表达量为(0.0030±0.0005),与A组(0.0170±0.0157)相比有统计学意义(P均<0.05)。肺组织Smad4 mRNA表达呈局灶性,在炎症和胶原沉积部位表达较明显,而治疗组和模型组比较无统计学意义(P均>0.05);治疗组Smad4 mRNA表达量与正常对照组(0.165±0.099)比较亦无统计学意义(P>0.05)。结论红景天对大鼠肺纤维化具有一定治疗作用,其机制可能是通过抑制I型胶原及TGF-β1表达,从而干扰TGF-β-Smads信号通路对基因表达、蛋白合成的调节而实现的。     

化瘀濡肺汤对肺纤维化大鼠肺组织中转化生长因子β_1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨化瘀濡肺汤对博来霉素A5所致大鼠肺纤维化的干预作用及其机理.方法:雄性Wistar大鼠60只,随机均分为正常对照组、模型组、中药高剂量治疗组、中药低剂量治疗组.大鼠气管内一次性注入博来霉素A5制成肺纤维化模型.模型制备后第 2天开始,分别给予相应处理,4组动物分别于第7、14、28天各处死5只,提取肺组织,应用免疫组化法检测肺组织内转化生长因子β1(TGF-β1)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达.结果:与模型组比较,中药低剂量、高剂量治疗组肺泡炎、肺纤维化的程度明显降低(P ＜0.01),肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的表达也明显减少(P<0.01).结论:化瘀濡肺汤可有效减轻大鼠肺纤维化,抑制转化生长因子β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原在肺组织中的表达是其可能的作用机制之一.     

肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5的影响及机制研究

目的基于Smad通路研究肺痹汤含药血清对白细胞介素17(IL-17)诱导的人胚肺成纤维细胞二倍体(MRC-5)的影响,探讨肺痹汤防治肺间质纤维化的机制。方法建立IL-17诱导的MRC-5模型,通过CCK-8法检测细胞增殖水平,ELISA法检测TGF-β1、Smad 3、Smad 7表达水平,q PCR法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白RNA表达水平,研究肺痹汤含药血清对MRC-5模型是否具有干预效果。结果以IL-17诱导MRC-5细胞能够成功建立肺纤维化模型,肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5细胞中Smad 3、Smad 7、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白RNA、Ⅲ型胶原蛋RNA表达水平有明显下调作用。结论肺痹汤含药血清可抑制成纤维细胞的增殖,减少TGF-β1的分泌,阻断TGF-β1/Smad信号通路,从而减少胶原的合成与分泌,减轻纤维组织增生,从而改善肺间质纤维化。     

糖脂安对糖尿病大鼠心肌TGF-β_1mRNA的影响

目的观察心肌细胞间质纤维化、转化生长因子β1（TGF-β1）基因在糖尿病大鼠心肌组织的表达及糖脂安的干预作用。方法尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）并高糖高脂饲料喂养诱导2型糖尿病大鼠模型;大鼠分为中药组（糖脂安组）、模型组、正常对照组。治疗8周后,行Masson染色观察心肌胶原分布并测定心肌胶原含量,行逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）,检测心肌组织中TGF-β1mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组心肌胶原蛋白含量和TGF-β1mRNA的表达均明显升高（P〈0.01）;中药组上述指标均显著低于模型组。结论 TGF-β1表达增高导致细胞间质降解减少并生成增多,是心肌间质纤维化原因,而糖脂安可以干预TGF-β1mRNA表达,预防心肌组织的纤维化。     

解毒复肾逐瘀方对肾纤维化大鼠CTGF及TGFβ_1表达的影响

目的：研究解毒复肾逐瘀方对肾纤维化的干预作用机制。方法：建立大鼠单侧输尿管结扎术（UUO）肾间质纤维化动物模型,观察给予解毒复肾逐瘀方治疗后肾间质病理变化及肾组织转化生长因子（TGFβ1）及结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。结果：解毒复肾逐瘀方能明显减少大鼠胶原沉积的面积含量。药物治疗组能抑制大鼠的TGFβ1及CTGF蛋白的表达。结论：解毒复肾逐瘀方能减轻肾间质纤维化的损伤,可能与抑制大鼠的TGFβ1及CTGF蛋白表达有关。     

姜黄素对糖尿病心肌病大鼠心肌NF-κB的影响和机制研究

目的:探讨姜黄素对糖尿病心肌病大鼠心肌NF-κB的影响和机制。方法:采用SD大鼠尾静脉注射45 mg/kg链脲佐菌素建立实验性糖尿病模型,30只成模大鼠随机分为糖尿病心肌病组(DCM组)、姜黄素治疗组[Curcumin-L组,15 mg/kg·d;Curcumin-H组,30 mg(kg·d)],正常对照组(NC组)10只。用药处理8周后检测各组大鼠体质量、血糖、心脏重量指数,masson染色观察各组心肌组织变化并计算心肌胶原容积分数(CVF),Real-time PCR测定miRNA-146a水平,Western-blot测定NF-κB。结果:与DCM组比较,姜黄素治疗组大鼠血糖水平无明显变化,但心脏重量指数明显降低。Masson染色DCM组心肌细胞排列紊乱,肌纤维间纤维组织增生明显,姜黄素治疗组心肌细胞排列较DCM组规则,纤维组织增生明显减少。与DCM组比较,姜黄素组CVF水平明显降低(P<0.05),miRNA-146a表达上调(P<0.05),NF-κB表达下调(P<0.05)。结论:姜黄素通过抑制糖尿病大鼠心肌NF-κB的表达而对糖尿病大鼠心肌有保护作用,其机制与miRNA-146a有关。     

红花黄色素对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的：探讨红花黄色素对大鼠肾间质纤维化的影响。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为假手术（SO）组、单侧输尿管梗阻（UUO） 组、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦组（IRB组） 和红花黄色素组（SY组） 。大鼠肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,计算肾间质纤维化的相对面积。免疫组化技术检测I型胶原（Col I）和纤维连接蛋白（FN）在肾组织中的表达。结果：SY治疗组和IRB治疗组能有效改善UUO大鼠的肾脏间质纤维化,SY组和IRB组中各时间点Col I和FN蛋白的表达均低于UUO组（P0.05）。结论：红花黄色素可减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度,延缓肾脏间质纤维化。     

丹酚酸B对转化生长因子β1诱导的人胚肺成纤维细胞生物学行为的影响

目的 观察丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)对人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖及分泌 Ⅰ 型前胶原、内源性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的影响。     

丹参酮对肺纤维化大鼠的干预作用及其机制研究

目的:观察丹参酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为5组:空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、丹参酮组、丹参酮加地塞米松组。大鼠气管内注射博莱霉素复制肺纤维化模型后,各给药组腹腔注射相应药物,给药1次/d。28 d后处死动物,取固定部位肺组织分别行HE、Masson染色及电镜进行病理组织学检查;RT-PCR法检测丹参酮对大鼠肺组织中u PA、PAI-1 mRNA表达的影响。结果:与模型组相比,丹参酮组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻(P0.05,0.01);u PA显著升高而PAI-1表达明显降低(P0.05,0.01);在与地塞米松联合时以上作用更加明显。结论:丹参酮对博莱霉素所致大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用且与地塞米松有协同作用,其机制可能与抑制炎性反应细胞的浸润活化、细胞外基质沉积及调控UPA及PAI-1之间平衡有关。     

姜黄素抗C_(57BL/6)小鼠肺纤维化与CathepsinK相关性研究

目的:探讨姜黄素抗C57BL/6小鼠肺纤维化分子机制。方法:博来霉素气管注射造小鼠肺纤维化模型,随机分组:对照组(气管内注入0.1mL生理盐水),模型组(气管内注入0.025U博来霉素),姜黄素组(气管内注入0.025U博来霉素);造模第2天,对照组和模型组给予生理盐水灌胃,姜黄素组给予200mg/kg/d姜黄素灌胃,分别于造模后第7、14、28天取材。采用Mallory染色观察肺组织胶原表达变化;应用免疫组化检测Cathepsin K蛋白的表达,经图像分析各组之间的差异;在免疫组化的基础上,Re-al Time RT-PCR,Western-blot进一步验证Cathepsin K mRNA及蛋白在各组之间表达的差异。结果:Mallory染色结果显示姜黄素组、模型组与对照组比较胶原表达都比对照组高,姜黄素组与模型组比较胶原表达减少;姜黄素组、模型组与对照组比较,Cathepsin K表达都有不同程度增加;但姜黄素组与模型组比较Cathepsin K蛋白表达显著增加,其中第14天(P=0.006);第7天(P=0.015);28天(P=0.027);Real Time RT-PCR分析CathepsinK mRNA表达,姜黄素组与模型组进行比较发现,姜黄素组比模型组明显增加,第7天(P=0.047),第14天(P=0.001),第28天增加不明显(P=0.053)。结论:姜黄素通过增加Cathepsin K的表达从而降解胶原而实现抗纤维化作用。     

中药强心饮含药血清对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:研究强心饮对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardi-ac fibroblasts CFs)增殖和胶原合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用机制。方法:采用胰酶消化法分离培养乳鼠CFs,建立TNF-α诱导新生大鼠CFs纤维化病理模型,分别采用四氮唑蓝(MTT)比色法、羟脯氨酸法检测不同浓度强心饮含药血清对CFs增殖和胶原含量影响。结果:TNF-α能够刺激CFs增殖和胶原合成,与空白组相比差异显著(P<0.05);强心饮抑制TNF-α诱导CFs增殖和胶原合成(P均<0.05)。结论:强心饮通过抑制TNF-α诱导的CFs增殖和胶原合成,发挥有效的抗心肌纤维化作用。