首乌延寿丹抗血管内皮细胞老化的实验研究

目的：探讨首乌延寿丹对动脉粥样硬化中血管内皮细胞（EC）损伤的抑制作用，方法：以高脂血清作用于培养的人脐带静脉内皮细胞，诱发内皮细胞脂质过氧化损伤，同时加入中药首乌延寿丹提取液作为保护剂，应用脂质过氧化物含量及酶活性测定以及放射免疫分析等方法，观察中药对脂质过氧化损伤的内皮细胞结构和功能的保护作用。结果：首乌延寿丹能有效增加机体抗氧化能力，抑制脂质过氧化反应，减少细胞内脂质过氧化物（LPO）的蓄积，提高谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX）活性，抑制前列环素（PGI2）合成减少，保护内皮细胞，减轻细胞及细胞膜的结构的损伤程度，从而达到抗动脉粥样硬化（AS），抗衰老的功效。     

首乌延寿丹抗血管内皮细胞老化的实验研究

目的 :探讨首乌延寿丹对动脉粥样硬化中血管内皮细胞 (EC)损伤的抑制作用。方法 :以高脂血清作用于培养的人脐带静脉内皮细胞 ,诱发内皮细胞脂质过氧化损伤 ,同时加入中药首乌延寿丹提取液作为保护剂 ,应用脂质过氧化物含量及酶活性测定以及放射免疫分析等方法 ,观察中药对脂质过氧化损伤的内皮细胞结构和功能的保护作用。结果 :首乌延寿丹能有效增加机体抗氧化能力 ,抑制脂质过氧化反应 ,减少细胞内脂质过氧化物 (LPO)的蓄积 ,提高谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -PX)活性 ,抑制前列环素 (PGI2 )合成减少 ,保护内皮细胞 ,减轻细胞及细胞膜的结构的损伤程度 ,从而达到抗动脉粥样硬化 (AS)、抗衰老的功效。     

正交试验法优选颐正活脉丸提取工艺研究

目的：优选颐正活脉丸的最佳提取工艺。方法：采用正交实验设计，以高效液相色谱法测定提取液中熊果酸和齐墩果酸总量，及浸膏得率为指标，优选颐正活脉丸的提取工艺。结果：最佳提取工艺为A1B2C3D2,即10倍量的90%乙醇加热回流2次，每次1.5 h。结论：该提取工艺稳定，安全，简便易行。     

血管内皮细胞体外损伤模型的研究

目的：研究高脂血清对血管内皮细胞（VEC）的损伤，探讨体外VEC损伤模型的方法，为进一步开展防治动脉粥样硬化（AS）的研究奠定基础。方法：复制高脂血症大鼠并获取高脂血清，以此高脂血清培养VEC，酶联免疫法（ELISA）检测培养上清液的vWF、TXB2、PGI2含量，观察普通光镜、透射电镜下血管内皮细胞形态。结果：高脂血清致VEC培养上清液vWF、TXB2含量增加，PGI2含量减少，VEC形态及结构损伤。结论：高脂血清可导致血管内皮细胞形态、结构及功能损伤。     

正交试验法优选颐正活脉丸提取工艺

目的:优选颐正活脉丸的最佳提取工艺。方法:采用正交实验设计,以高效液相色谱法测定提取液中熊果酸、齐墩果酸总量及浸膏得率为指标,优选颐正活脉丸的提取工艺。结果:最佳提取工艺为A1B2C3D2,即10倍量的90%乙醇加热回流2次,每次1.5 h。结论:该提取工艺稳定,安全,简便易行。     

搜风祛痰法中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）核转录因子（NF-κB）mRNA及内皮素-1（ET-1）mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA,随机分为5组：正常对照组,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组,低浓度中药血清＋AngⅡ组,中浓度中药血清＋AngⅡ组,高浓度中药血清＋AngⅡ组。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少NF-κB mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

心脑通保护血管内皮细胞损伤的实验研究

目的：研究心脑通对血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），缺氧造成内皮细胞损伤，通过放免法和比色法测定培养上清液中ET、NO水平。结果：HUVEC缺氧48h后，NO含量明显下降，而ET含量增加，不同浓度心脑通（0.25-2.0g/L)与HUVEC预孵48h后，对缺氧造成的上述变化具有显影响，用药后NO含量增加，ET含量下降，结论：心脑通对血管内皮细胞具有明显的保护作用。     

加味青麟丸改善衰老症状的临床观察

目的：加味青麟丸用于改善衰老症状的临床观察。方法：选择基本健康的老年前期和老年期115例,服用加味青麟丸者85例,设服用维生素E作为对照组30例,并按照衰老积分观察加味青麟丸的临床疗效。结果：加味青麟丸组改善衰老症状总有效率84．7％,治疗前后衰老症状积分值变化明显（P〈0．01）,均优于抗衰老药维生素E。两组均有降低TC、TG、LDL的作用,加味青麟丸组降低TC、LDL优于维生素E组。加味青麟丸升高ANAE优于维生素E（P〈0．01）。两组均有降低LPO的作用,与治疗前比（P〈0．05）,两组间比（P〉0．05）,无明显差异。加味青麟丸组有升高SOD的作用,与用药前比（P〈0．01）,维生素E组升高不明显,两组间比（P〈0．05）。结论：加味于麟丸改善衰老优于维生素E。     

蒲黄提取物抗人脐静脉内皮细胞氧化损伤的研究

目的：研究蒲黄提取物对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）脂质过氧化的影向。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法测定不同浓度蒲黄提取物对内皮细胞有无毒性。根据MTT法的结果,采用蒲黄提取物（10mg/L,50mg/L,100mg/L）预处理细胞24h,再加入100mg/L Ox-LDL造成细胞损伤,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性、丙二醛（MDA）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果：Ox-LDL损伤组LDH的活性、MDA的含量显著升高,SOD的活力显著降低,与正常对照组比较有显著差异（P〈0.05）;10、50、100mg/L蒲黄提取物可显著降低LDH的活性、MDA的含量,提高SOD的活力。结论：蒲黄提取物可通过抗脂质过氧化,清除自由基起到保护血管内皮细胞的作用。     

麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培养的血管内皮细胞的促血管生成作用

目的：探讨麝香保心丸在鸡胚绒毛尿囊膜模型及培养的微血管内皮细胞系统中的促血管生成作用。方法：分别以重组碱性成纤维细胞生长因子（bFGF,贝复济）和生理盐水为阳性和阴性对照,作用于绒毛尿囊膜（chrioallantoic membrane,CAM),通过一级、二级血管计数,初步评价麝香保心丸的促血管生成活性;并通过观察它对培养的牛肾上腺微血管内皮细胞增殖及管腔结构形成的影响,验证其促血管生成效应;同时检测麝香保心丸作用于培养的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)的mRNA表达及其上清液中VEGF、bFGF含量,初步探索其作用机理。结果：麝香保心丸组CAM上血管数比生理盐水组明显增加;麝香保心丸组内皮细胞及管腔数目均较生理盐水组明显增多,前者细胞表达VEGF和bFGF mRNA明显增高,上清液中VEGF和bFGF含量明显增多。结论：麝香保心丸能促进CAM及培养的微血管内皮细胞的血管生成。     

灯盏乙素对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的作用及其机制研究

目的：探讨灯盏乙素对过氧化氢（H2O2）损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养血管内皮细胞,将细胞分为6组,即正常对照组（control）,氧化损伤组（H2O2组）,氧化损伤加入维生素E对照组（VitE＋H2O2）,氧化损伤加入灯盏乙素组（scutellarin1＋H2O2,scutellarin2＋H2O2,scutellarin3＋H2O2）。用VitE及不同浓度灯盏乙素预先培养血管内皮细胞24 h,然后加入1 mmol.L-1 H2O2继续培养24 h,MTT法检测细胞存活率;检测SOD,GSH-PX,CAT活力。结果：不同浓度灯盏乙素呈能够降低H2O2对抗氧化酶SOD,GSH-PX,CAT活力的影响,各指标差异有显著性（P〈0.01）。结论：灯盏乙素可保护过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、增强抗氧化酶SOD、GSH-PX、CAT的活力有关。     

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞LOX-1mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白1（LOX－1）mRNA及内皮素－1 ET－1）mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤舍药血清。采用酶消化法培养HUVECs2～3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞LOX－1 mRNA及ET－1 mRNA。随机分为正常对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组、低浓度中药血清＋AngⅡ组、中浓度中药血清＋AngⅡ组、高浓度中药血清＋AngⅡCR。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少LOX—1 mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

牡荆素鼠李糖苷对血管内皮细胞血管活性物质的影响

目的：观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧再给氧损伤内皮细胞产生血管活性物质的影响。方法：采用脐静脉内皮细胞培养的方法，以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤，分别以放射免疫、Grlesa法测定细胞培养上清中6．酮-前列腺素F1a（6-Keto-PGF1a）、血栓素B2（TXB2）、内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）含量。结果：不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可使血管舒张因子NO、6-Keto-PGF1a产量明显增加；缩血管因子ET-1、TXB2明显减少。结论：牡荆素鼠李糖甙对缺氧再给氧损伤血管内皮细胞产生的血管活性物质具有一定的调节作用。     

二至丸对D-半乳糖诱导衰老模型大鼠血清POD活性、LPO含量影响的实验研究

目的：研究二至丸对D-半乳糖诱导衰老模型大鼠血清过氧化物酶（POD）活性及脂质过氧化物（LPO）含量的影响，探讨二至丸抗氧化及抗衰老的机制。方法：D-半乳糖诱导衰老大鼠模型．测定大鼠血清POD酶活性及LPO含量。结果：二至丸各治疗组较模型对照组POD活性显著提高（P〈0．01），LPO含量明显降低（P〈0．01）。结论：二至丸能够提高机体的抗氧化能力，从而延缓机体的衰老进程。     

六味地黄方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：观察六味地黄方大鼠含药血清对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的保护作用。方法：以MTT法观察人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的活力和流式细胞仪测定内皮细胞凋亡率,并通过测定胞内丙二醛（MDA）含量及细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活力,探讨六味地黄方对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。结果：六味地黄方含药血清能促进ox LDL损伤的血管内皮细胞增殖、抑制ox LDL造成的内皮细胞凋亡、降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论：六味地黄方对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。     

脉复康对高脂血症家兔血管内皮功能的影响

目的：研究活血化瘀中药脉复康对高脂家兔血管内皮功能的改善作用。方法：实验分为6组：喂正常饲料；喂高脂饲料（9周）；喂高脂饲料（5周）并加喂脉复康I号或Ⅱ号、Ⅲ号及绞股蓝总甙（GPS、阳性中药）（4周）。检查血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白（LDL-c）、高密度脂蛋白（HDL－c）、过氧化脂质（LPO）、前列环素（PGI2）、血栓素A2（TXA2）的水平，以及用原位杂交法检查主动脉内膜内皮素基因（ET－mRNA）的表达。结果：脉复康I、Ⅱ、Ⅲ组与GPS组TC、TG、LDL－c、TC／HDL－c、LPO、TXA2、TXA2／PGI2水平比高脂组明显降低。HDL－c和PGI2明显升高。ET－mRNA过表达减弱。结论：脉复康I、Ⅱ、Ⅲ与GPS均具有改善血管内皮功能的作用，其中水蛭（脉复康Ⅲ）的作用优于GPS。脉复康改善内皮功能以及逆转ET－mRNA过表达，可能是活血化瘀的细胞与分子水平的机制。     

麦冬酒制前后对内皮细胞缺氧保护作用的比较研究

目的研究中药麦冬及其酒制炮制品对人脐静脉内皮细胞（EAHY926）缺氧损伤的保护作用。方法体外培养EAHY926,采用通入缺氧气体建立缺氧损伤模型。用麦冬提取液干预后,采用MTT比色法测定细胞活力、黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶活性、硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛含量、硝酸还原酶法测定一氧化氮含量。结果组间比较采用单因素方差分析,两两之间用SNK检验。与模型组相比,川麦冬生品提取液组、酒制川麦冬提取液组、杭麦冬生品提取液组、酒制杭麦冬提取液组均能显著提高细胞活力（P〈0.05）,并且均显著提高缺氧后细胞超氧化物歧化酶活性（P〈0.05）及降低丙二醛、一氧化氮的含量（P〈0.05）;酒制川麦冬提取液组和酒制杭麦冬提取液组效果最佳,与空白对照组比有非常显著性差异（P〈0.01）。结论麦冬酒制后更能显著拮抗缺氧对EAHY926的损伤。     

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞iNOS mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）iNOS及ET-1 mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞iNOSmRNA及ET-1 mRNA。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少iNOSmRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

高糖培养ECV304内ROS含量变化及丹瓜方影响的研究

目的：探讨高糖培养人脐静脉内皮细胞（ECV304）内ROS含量的变化及丹瓜方的影响。方法以标准的M199培养基（A组,含糖5．55mmol／L）、高糖培养基（B组,含糖16．67mmol／L）、不同浓度的丹瓜方培养基（在B组基础上：C组含1／150丹瓜方,D组含1／300,E组含1／600）、及1／300丹瓜方培养基（F组,在A组含1／300丹瓜方）,培养ECV30472小时,以流式细胞仪（flow eytometry,FCM）测定培养细胞内活性氧簇（ROS）含量。结果B组细胞内ROS含量较A组升高（319．87vs41．78）具有显著统计学意义（P〈0．001）,D组及E组细胞内ROS含量均较B组降低（197．13or189．70vs319．87）,统计学意义也显著（P〈0．001）;F组细胞内ROS含量较A组降低（36．26vs41．78）,但尚未达到统计学意义。C组细胞内ROS较B升得更高（581．82vs319．87）,统计学意义显著（P〈0．001）。结论：血管内皮细胞经高糖培养可显著升高其胞内ROS含量;适当浓度丹瓜方对高糖培养血管内皮细胞内ROS含量具有显著降低作用。     

常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的：探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法：常规制备无污染、无溶血正常家兔血清，通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）及血管紧张素转换酶（ACE）等指标，观察5％、10％、20％、40％、60％和80％家兔血清对人脐静脉内皮细胞（VEC）－304的影响。结果：5％和10％两浓度组各指标均无变化，对VEC－304没有损伤作用。40％、60％和80％3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤，而且随着浓度的增加，呈现出损伤加重的趋势，而20％的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用，只有LDH含量差异有显著性（P＜0．01）。结论：常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下，其对细胞的作用浓度是有一定限制的，当达到40％或更高浓度时有较为明显的损伤。所以，在中药血清药理学研究中，应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验，以尽量减少血清本身带给实验的影响。