丹参麦冬水溶性部位对过氧化氢致血管内皮细胞凋亡的影响

目的研究丹参与麦冬的水溶性部位6部位(MD-6)对过氧化氢H2O2损伤人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC凋亡的保护作用及机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的MD-6作用24 h。用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,Western Blot检测ERK蛋白含量变化。结果H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,Hoechst染色见大量凋亡细胞,流式细胞检测出明显凋亡峰,ERK的表达量有明显的下降,而加药组的ERK表达量一定程度回升与正常组相比P0.01,具有明显的统计学意义。结论丹参与麦冬的乙酸乙酯提取部位MD-6保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

白藜芦醇通过激活PI3K/AKT通路抑制内皮细胞凋亡的研究

目的观察白藜芦醇对脂多糖作用下人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,实验分为5组:空白组给予单纯培养基培养;模型组培养基中加入1000 ng/mL脂多糖孵育24 h;5μmol/L白藜芦醇组和10μmol/L白藜芦醇组培养基中分别先加入5μmol/L、10μmol/L白藜芦醇孵育12 h,再加入1000 ng/mL脂多糖孵育24 h;PI3K抑制剂组培养基中先加入10μmol/L白藜芦醇和10μmol/L PI3K抑制剂LY294002共处理12 h,再加入1000 ng/mL脂多糖孵育24 h。使用CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;DHE荧光探针检测各组细胞中活性氧(ROS)含量;ELISA检测各组细胞培养液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western blot法检测各组AKT的磷酸化情况。结果与空白组相比,模型组细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率和细胞中ROS含量及TNF-α、IL-6水平均明显升高,NO水平及P-AKT/AKT表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与模型组和PI3K抑制剂组相比,10μmol/L白藜芦醇组细胞增殖能力明显升高,细胞凋亡率和细胞中ROS含量及TNF-α、IL-6水平明显下降,NO水平及P-AKT/AKT表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论白藜芦醇能够提升脂多糖作用下人脐静脉血管内皮细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡,减轻细胞的氧化应激和炎性反应,恢复细胞的分泌功能,可能与其激活PI3K/AKT通路而发挥保护作用有关。     

姜黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究姜黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法：以体外培养的HUVECs细胞为研究对象,建立H202损伤模型,观察姜黄素对H2O2诱导HUVECs损伤模型细胞形态以及培养液中LDH活力、NO和MDA含量的影响。结果：经姜黄素预处理的HUVECs能显著改善H2O2对细胞形态学的损伤,姜黄素中、高剂量可明显降低培养液中LDH活力：姜黄素高剂量能显著提高培养液中NO含量,降低MDA含量。结论：姜黄素对H2O2诱导HUVECs损伤具有一定保护作用。     

养心汤含药血清对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响

目的：观察养心汤含药血清对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Smad4 mRNA表达的影响,从分子生物学水平探讨其可能的作用机制。方法：采用H2O2体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的方法,建立人脐静脉内皮细胞损伤模型。实验分为空白组、模型组、养心汤含药血清组,应用Affymetrix人基因组U133＋2.0芯片筛选出Smad4基因,采用实时定量PCR的方法观察养心汤含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响。结果：养心汤的含药血清可以下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA表达。结论：养心汤下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA的表达可能是其保护内皮细胞损伤,防治冠心病不稳定型心绞痛的主机制之一。     

基于TXNIP信号通路调控的艳山姜挥发油对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究艳山姜挥发油（EOAZF）对高浓度葡萄糖（HG）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用,为研究EOAZF改善糖尿病诱导的心血管疾病提供实验依据。方法 该项目研究分为正常组,模型组（25 mmol·L^-1葡萄糖组）,阳性药组（100 mg·L^-1维生素C）,EOAZF低、中、高浓度组（0.25,1,4 μg·L^-1）。通过建立HG诱导HUVECs损伤模型,检测不同给药组内皮细胞中的丙二醛（MDA）,一氧化氮（NO）和内皮素1（ET-1）的分泌量,评价EOAZF对高糖诱导HUVECs损伤的保护作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染实验以及DCFH-DA荧光探针标记,考察EOAZF对HG诱导HUVECs的凋亡水平和活性氧（ROS）产生的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,检测硫氧还原蛋白相互结合蛋白（TXNIP）与硫氧还原蛋白（Trx-1）蛋白表达和转录水平,采用胰岛素二硫键还原法测定细胞内总Trx-1的酶活性。结果 细胞形态学结果显示,与正常组比较,模型组HUVECs增殖速度明显降低,细胞形态受损;与模型组比较,0.25,1,4 μg·L^-1EOAZF对HG诱导损伤的HUVECs具有保护作用,且呈浓度依赖性;与正常组比较,模型组显著上调HUVECs内MDA和ET-1分泌量（P<0.05）,下调NO的分泌（P<0.01）;与模型组比较,不同浓度EOAZF均能改善HG诱导的MDA,ET-1和NO的分泌,其中4 μg·L^-1EOAZF能明显降低HG诱导的HUVECs细胞MDA和ET-1的分泌量（P<0.05）,明显上调HUVECs细胞NO的分泌量（P<0.05）;细胞凋亡和ROS检测结果显示,与正常组比较,模型组细胞凋亡和ROS水平均显著上调（P<0.01）;与模型组比较,4 μg·L^-1EOAZF明显降低HG诱导的HUVECs中ROS水平和细胞凋亡率（P<0.05）;免疫印迹实验结果和Trx-1活性检测结果显示,与正常组比较,造模组细胞中TXNIP的mRNA和蛋白水平显著上调（P<0.01）,Trx-1的活性显著降低（P<0.01）;与模型组比较,4 μg·L^-1EOAZF明显下调HG诱导的TXNIP的mRNA与蛋白的表达上调（P<0.05）,同时增强细胞内总Trx-1的酶活活性（P<0.05）,发挥抗氧化应激的作用。结论 EOAZF能改善HG诱导损伤的HUVECs的内皮功能,降低细胞内ROS水平和凋亡水平,发挥显著的内皮细胞保护作用,其机制可能是通过降低TXNIP的mRNA和蛋白水平以及增强Trx-1的活性而发挥的抗氧化应激作用。     

地骨皮提取液对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨地骨皮醇提液对H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡的影响,探讨地骨皮醇提液对血管内皮的保护作用,为研究糖尿病并发症治疗的新药提供新的理论基础。方法：将HUVEC细胞分为正常对照组、高药物浓度组、H2O2组和药物预处理＋H2O2作用组,作用18-24h后,用显微镜观察细胞形态改变,用流式细胞仪通过Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡百分比,用RT-PCR检测Bcl-2基因的表达变化。结果：地骨皮醇提液有效降低H2O2引起的细胞凋亡率;地骨皮醇提液可以增加凋亡相关基因Bcl-2的表达。结论：地骨皮醇提液对H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡有不同程度的抑制作用,对血管内皮具有保护作用。     

复方薤白胶囊对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的：研究复方薤白胶囊对过氧化氢（H2O2）诱导的凋亡内皮细胞的保护作用,及相关凋亡基因表达的影响,以明确其作用机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的复方薤白胶囊提取液作用24h。以MTT法检测细胞增殖率,Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,Western Blot检测抗凋亡基因Bcl-2含量变化。结果：H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,Hoechst染色见大量凋亡细胞,流式细胞检测出明显凋亡峰,抗凋亡基因Bcl-2含量降低,与正常组相比P〈0.01,具有明显的统计学意义。而各中药组提高了造模后细胞增殖率,降低了凋亡细胞及凋亡峰,提高了Bcl-2含量表达,且与浓度呈正相关,具有明显的统计学意义。结论：复方薤白胶囊能上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对内皮细胞增殖、凋亡的影响研究

目的 研究蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响.方法 实验分为5组,对照组HUVECs正常培养,其余组HUVECs培养后建立H2 O2氧化损伤模型,其中蓬子菜总黄酮低、中、高浓度组分别加入12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的蓬子菜总黄酮培养....     

冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤炎性因子水平的影响

目的：观察冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤过程中TNE-α与IL-1水平的影响。探讨冠心平治疗冠心病的相关机制。方法：体外培养内皮细胞ECV304,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、中、小剂量组,用100μmol／LH2O2,损伤细胞,以血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察细胞生长情况,检测细胞上清中TNF-α与IL-1水平。结果：100μmol／LH2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著降低TNF-α的水平;减少H2O2诱导ECV304IL-1的产生。结论：冠心平可降低H2O2对ECV304的损伤程度,其机理可能与其降低TNF-α和IL-1水平,从而调节血管内皮炎性反应有关。     

地骨皮中不同组分对四氧嘧啶糖尿病小鼠的降血糖作用

目的:考察地骨皮水提物和地骨皮中不同组分对四氧嘧啶糖尿病小鼠的降血糖作用.方法:将地骨皮药材以不同方法提取,经过离子交换树脂得到不同组分,以四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,连续7天以80mg·kg-1(4g·kg-1)、160mg·kg-2(8g·kg-1)两个剂量浓度灌胃,以GOD法测血糖.结果:地骨皮水提物和酸性组分与对照组比较有显著差异(P＜0.05;P＜0.01).结论:地骨皮的酸性组分是降血糖的有效组分.     

中药地骨皮有效部位提取工艺研究

目的:研究地骨皮有效部位的提取工艺。方法:采用正交设计法,选取浸膏得率和香草酸的得率作为评价指标。对溶剂用量、提取时间和提取次数三个因素选用L9(34)正交表进行考察。结果:确定最佳工艺为10倍量溶剂,每次1h,提取3次。结论:为地骨皮生产提供了实验基础。     

地骨皮对四氧嘧啶糖尿病小鼠的降糖作用

目的考察地骨皮水煎剂对实验性糖尿病小鼠血糖的影响.方法以四氧嘧啶糖尿病小鼠为模型,连续2周,以地骨皮水煎剂2.5g/(kg·d)-1,5.0g/(kg·d)-1剂量灌胃,GOD法测定血糖值.结果各组给药前后血糖值比较均呈显著型差异(P＜0.001).结论地骨皮水煎剂具降低实验性小鼠血糖作用.     

Cortex Lycii Radicis extracts improve insulin resistance and lipid metabolism in obese‐diabetic rats

Here we evaluate the effects of ethanol and aqueous extracts from Cortex Lycii Radicis (CLR) on insulin resistance and lipid metabolism in obese‐diabetic rats, which were induced by high fat feeding for 3 weeks after injection with streptozotocin (STZ). Diabetic rats treated with ethanol or aqueous extracts of CLR at 15 and 30 g/kg dosage for 7 weeks, had decreased body weights, concentration of serum glucose, triglyceride (TG), total cholesterol (TC), and low‐density lipoprotein‐cholesterol (LDL‐C), alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), while the insulin‐sensitivity index (ISI) improved significantly compared with the control group. In addition, high contents of tumor necrosis factor‐α (TNF‐α), interleukin‐6 (IL‐6) and low adiponectin level were observed in the control group and levels of TNF‐α and IL‐6 in CLR groups showed obvious differences with the control group. Histopathologic examination also showed degrees of hepatocyte edema although hepatocyte ballooning degeneration was lessened in all CLR groups. Overall, ethanol extract from CLR seemed to be more effective than aqueous extracts in improving insulin resistance, resulted in elevating insulin sensitivity, adjusting glucose and lipid metabolism, correcting cytokines levels and ameliorating liver function, especially protecting the liver against lipoid degeneration. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.     

信号转导与H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡关系的研究进展

目前,心血管疾病仍是严重威胁人类健康的疾病之一。心肌细胞凋亡在心血管疾病发生和发展过程中起着重要作用。近年研究表明：氧化应激是心肌细胞凋亡的首要刺激因素,药物通过不同的信号通道作用于氧化应激损伤引起的细胞凋亡已有研究。本文就膜受体介导的信号通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的作用做一综述。     

基于PERK信号通路介导的细胞凋亡及杯状细胞破坏探讨芍药汤对溃疡性结肠炎大鼠的作用机制

目的:通过检测溃疡性结肠炎(UC)大鼠p-PERK通路蛋白、C/EBP 同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量,探讨芍药汤对UC大鼠的作用机制。方法: 84只SD大鼠中随机抽取14只作为空白组,余下70只大鼠通过三硝基苯磺酸建立UC大鼠模型,除去死亡大鼠,随机分为模型组12只、柳氮磺吡啶组13只、芍药汤低剂量组12只、芍药汤中剂量组13只、芍药汤高剂量组13只。空白组、模型组用等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,柳氮磺吡啶组采用柳氮磺吡啶灌胃,芍药汤高、中、低剂量组按照芍药汤不同剂量灌胃。第14天进行疾病活动指数(DAI)评分。随后将大鼠处死并解剖,进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,并检测大鼠结肠p-PERK通路蛋白、C/EBP 同源蛋白的表达及结肠杯状细胞数量。结果: 与空白组比较,柳氮磺吡啶组及芍药汤不同剂量组大鼠DAI、CMDI评分均增高(P<0.05),与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分均降低(P<0.05),柳氮磺吡啶组与芍药汤高、中、低剂量组DAI、CMDA评分比较无统计学差异(P>0.05); 与空白组比较,模型组、柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均上升(P<0.05); 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05); 与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达均下降(P<0.05); 柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组p-PERK、CHOP蛋白表达无统计学差异(P>0.05); 与空白组比较,其他各组杯状细胞数量均下降(P<0.05); 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中、低剂量组杯状细胞数量均明显增加(P<0.05); 与芍药汤低剂量组比较,柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量均增加(P<0.05); 柳氮磺吡啶组和芍药汤高、中剂量组杯状细胞数量比较无统计学差异(P>0.05)。结论: 芍药汤能抑制内质网应激PERK信号通路被激活,降低CHOP表达活性,减少细胞凋亡,抑制杯状细胞被破坏,保护肠黏膜屏障,改善UC大鼠的症状和体征,这可能是芍药汤治疗UC的作用机制。     

The water extract of Omija protects H9c2 cardiomyoblast cells from hydrogen peroxide through prevention of mitochondrial dysfunction and activation of caspases pathway

The water extract of Omija (Omija) has been used traditionally in the treatment of ischemic damage of the heart and brain tissues. However, little is known about the mechanism by which it rescues myocardial cells from oxidative stress. This study was designed to investigate the protective mechanisms of Omija on H(2)O(2)-induced cytotoxicity in H9c2 cardiomyoblast cells. Treatment with H(2)O(2) resulted in the death of H9c2 cells, characterized by apparent apoptotic features, including fragmentation of the nucleus and an increase in the sub-G(0)/G(1) fraction of the cell cycle. However, Omija markedly suppressed the apoptotic characteristics of H9c2 cells induced by H(2)O(2). In addition, Omija suppressed the features of mitochondrial dysfunction, including changes in the mitochondrial membrane potential and cytosolic release of cytochrome c in H(2)O(2)-treated cells. Treatment with Omija further inhibited the catalytic activation of caspase-9 and caspase-3 and induction of Fas by H(2)O(2). Taken together, these data indicate that the water extract of Omija protects H9c2 cardiomyoblast cells from oxidative stress of H(2)O(2) through inhibition of mitochondrial dysfunction and activation of intrinsic caspase cascades, including caspase-3 and caspase-9.