SLE患者外周血单个核细胞NF-κBp65的表达和活化

目的:确定系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞NF-κBp65的表达量和活化量与免疫学指标的相关性和评价糖皮质激素对NF-κBp65表达和活化的影响。方法:分别从SLE患者和正常人外周血提取单个核细胞,利用免疫细胞化学的方法检测NF-κBp65的表达量及活化量。结果:NF-κBp65在活动期SLE患者外周血单个核细胞浆和细胞核内均有表达,而在非活动期SLE病人和正常人外周血单个核细胞仅胞浆内少量表达,细胞核内不表达。NF-κBp65表达量和活化量与血清补体C3和C4水平呈负相关,与抗dsDNA抗体和抗Sm抗体阳性率及SLE病情分级呈正相关。糖皮质激素治疗敏感组NF-κBp65的表达量和活化量低于糖皮质激素抵抗组(P0.05)。结论:活动期SLE患者外周血单个核细胞NF-κBp65表达量和活化量均与病情分级呈正相关;糖皮质激素可以降低NF-κBp65的表达和活化。     

寻常型银屑病患者外周血单个核细胞TLR4和NF - кBp65的表达

检测寻常型银屑病患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)和核转录因子кBp65(NF -кBp65)的表达.采用直接免疫荧光法定位并分别用流式细胞术及免疫细胞化学法检测22例寻常型银屑病外周血单个核细胞TLR4、NF- кBp65的表达,15名正常人做正常对照.结果:寻常型银屑病外周血单个核细胞TLR4的表达高于正常对照组(P＜0.05),而进行期寻常型银屑病外周血单个核细胞TLR4表达明显高于稳定期寻常型银屑病患者的表达(P＜0.05).寻常型银屑病组和正常对照组,进行期寻常型银屑病组和稳定期寻常型银屑病组活化NF-кBp65的表达,各组之间差异无显著性(p＞0.05).     

SLE患者外周血单个核细胞bcl-2和bax基因的表达

目的通过对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡相关基因bcl-2与bax mRNA的检测,探讨凋亡相关基因在SLE患者中的改变及其在SLE发病机理中的作用。方法应用逆转录-PCR(RT-PCR)法检测41例SLE患者及32例年龄、性别与之相匹配的正常人PBMC中bcl-2mRNA与bax mRNA的表达,并用免疫印迹法检测SLE患者组自身抗体谱。结果SLE活动期患者组bcl-2mRNA表达明显高于稳定期患者和正常对照组,稳定期患者和正常对照组比较也有显著性升高;SLE患者中,两种以上自身抗体阳性组bcl-2 mRNA表达与一种或无自身抗体阳性组相比显著升高;各受试组bax mRNA的表达均无显著性差异。结论SLE患者PBMCbcl-2 mRNA呈过度表达,而baxmR-NA的表达无变化,使得bcl-2/bax的比值升高,这可能是大量自身抗体产生,SLE发生发展的重要因素之一。     

SLE患者外周血单个核细胞中Aiolos mRNA的表达

目的观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子Aiolo smRNA的表达情况。方法采用SYBR Green实时定量PCR法检测20例SLE患者PBMCs中Aiolos mRNA的表达情况,并与20例正常人作比较。结果 SLE患者的PBMCs中Aiolos mRNA的表达明显低于正常对照组;SLE活动期组和稳定期组也均低于正常对照组;而且活动期组低于稳定期组;以上差异均有统计学意义(P均<0.01)。另外,SLE患者PBMCs中Aiolos mRNA的表达与SLEDAI评分呈负相关(P<0.01)。结论 SLE患者Aiolos基因表达降低,且与SLE活动指数呈一定相关性。     

SLE患者外周血单个核细胞IL—13mRNA的表达

探讨IL-13在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及其意义,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PGR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人外周血单个核细胞(PBMC)中IL-13mRNA的表达水平.结果表明,活动期SLE患者IL-13的阳性表达率与正常人对照组相比无明显差异(P＞0.05);活动期SLE患者PBMC中IL-13mRNA的平均表达水平(0.8983±0.1153)明显高于正常人对照组(0.6085±0.0903),差异非常显著(P＜0.001).提示高水平的IL-13表达可能与SLE患者外周血T细胞高度活化、功能异常有关,其通过刺激B细胞活化、分化与增殖或激活B细胞旁路,参与SLE的发病过程.     

银屑病患者皮损Toll样受体4、核因子-κBp65、CC趋化因子配体20的表达

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κBp65、CC趋化因子配体20(CCL20)在银屑病患者皮损区及非皮损区的表达及意义.方法 用免疫组化EnVision法检测40例进行期银屑病患者斑块状皮损及20例进行期银屑病患者非皮损区皮肤、10例正常皮肤石蜡标本中的TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达,对其在皮损中的表达水平进行相关性分析.结果 银屑病皮损区角质形成细胞中TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达(A值分别为0.3006±0.1200、0.4551±0.1572和0.3862±0.1304)较正常人皮肤TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达(A值分别为0.1379±0.0663、0.1970±0.0679和0.1262±0.0612)及银屑病非皮损区组(A值分别为0.1930±0.0687、0.2626±0.0606和0.2387±0.0467)明显上调(t值分别为4.113、5.044、6.106、3.711、5.265和4.889,均P＜0.05).与正常人皮肤相比,银屑病非皮损区TLR4、NF-κBp65、CCL20表达明显上调(t值分别为2.118、2.685和5.608,均P＜0.05).银屑病患者TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达水平间均呈正相关(r值分别为0.766、0.851和0.885,均P＜0.05).结论 TLR4、NF-κBp65、CCL20的高表达可能与银屑病发病有关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞NF-κB信号通路活化检测

目的检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单一核细胞 (PBMC) NF－κ B信号通路活化情况 ,并探讨其临床意义。方法 NF－κ B活性检测采用电泳迁移率改变试验 , Iκ Bα蛋白及其磷酸化产物采用蛋白印迹 ,抗 dsDNA抗体、 IgG、 IgM测定采用 ELISA方法。结果 SLE患者 PBMC NF－κ B活性显著高于正常对照组 (P< 0.05),活动期明显高于缓解期 (P< 0.05), SLE组 Iκ Bα蛋白表达显著低于正常对照组（ P< 0.05） ,活动期患者低于缓解期 (P< 0.05)。 SLE组 Iκ Bα磷酸化产物显著高于正常对照组（ P< 0.05） ,活动期患者高于缓解期 (P< 0.05)。 NF－κ B活性和 Iκ Bα磷酸化产物均与抗 dsDNA抗体、 IgG和 SLE疾病活动指数呈正相关 ,而与 IgM无相关关系。结论 SLE患者 PBMC存在 NF－κ B信号通路异常活化 ,且与抗 dsDNA抗体、 IgG分泌密切相关。检测 SLE PBMC内 NF－κ B信号通路蛋白表达可能有助于 SLE疾病活动的判断。     

银屑病患者皮损Toll样受体4、核因子-κBp65、CC趋化因子配体20的表达北大核心CSCD

目的探讨Toll样受体4（TLR4）、核因子（NF）-κBp65、CC趋化因子配体20（CCL20）在银屑病患者皮损区及非皮损区的表达及意义。方法用免疫组化EnVision法检测40例进行期银屑病患者斑块状皮损及20例进行期银屑病患者非皮损区皮肤、10例正常皮肤石蜡标本中的TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达,对其在皮损中的表达水平进行相关性分析。结果银屑病皮损区角质形成细胞中TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达（A值分别为0．3006±0．1200、0．4551±0．1572和0．3862±0．1304）较正常人皮肤TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达（A值分别为0．1379±0．0663、0．1970±0．0679和0．1262±0．0612）及银屑病非皮损区组（A值分别为0．1930±0．0687、0．2626±0．0606和0．2387±0．0467）明显上调（t值分别为4．113、5．044、6．106、3．711、5．265和4．889,均P〈0．05）。与正常人皮肤相比,银屑病非皮损区TLR4、NF-κBp65、CCL20表达明显上调（t值分别为2．118、2．685和5．608,均P〈0．05）。银屑病患者TLR4、NF-κBp65、CCL20的表达水平问均呈正相关（r值分别为0．766、0．851和0．885,均P〈0．05）。结论TLR4、NF-κBp65、CCL20的高表达可能与银屑病发病有关。     

SLE患者外周血单个核细胞ER和HSP90基因的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中雌激素受体(ER)和热休克蛋白90(HSP90)基因的表达情况。方法分离58例SLE患者和28例正常人新鲜外周血单个核细胞,提取总RNA,利用半定量RT-PCR方法逆转录并扩增ER和HSP90,通过凝胶图像扫描系统对PCR产物的电泳条带进行扫描分析。结果 SLE患者组PBMC中ER和HSP90mRNA表达明显高于正常对照组(P均<0.05),且活动期患者的表达高于稳定期患者(P均<0.05)。结论 SLE患者中存在ER和HSP90基因的过度表达,并与疾病活动性有关。     

狼疮肾炎患者外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受体mRNA的表达

目的：检测狼疮肾炎患者单个核细胞核因子-κB（NF一κB）与糖皮质激素受体mRNA（GR-mRNA）的表达水平。方法：免疫组织化学方法及逆转录酶链反应检测狼疮肾炎患者和正常对照组外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受体mRNA的表达。结果：与对照组相比,狼疮肾炎患者外周血单个核细胞GRmRNA表达水平降低,NF-κB表达水平升高（P〈0．01）;激素治疗前,激素敏感组、激素依赖组及激素抵抗组GRmRNA表达水平均降低（P〈0．01）,NF—κB表达水平升高（P〈0．01）。激素敏感组与激素抵抗组GRmRNA表达水平有统计学差异（P〈0．01）。结论：NF—κB与GRmRNA的异常表达可能与狼疮。肾炎病情及糖皮质激素疗效不同有关。     

SLE患者外周血单个核细胞中IL-6 IL-10表达研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者中Ｔｈ２型细胞因子ｍＲＮＡ的表达。方法 用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测了１０例正常人和１５例活动期ＳＬＥ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中白介素６（ＩＬ－６）和白介素１０（ＩＬ－１０）ｍＲＮＡ表达的水平。结果 与正常相比,活动期ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ中ＩＬ－６和ＩＬ－１０ｍＲＮＡ的表达水平均增高（均Ｐ〈０．０１）。结论 ＳＬＥ患者中Ｔｈ２型细胞因子Ｉ     

SLE患者外周血单个核细胞一氧化氮合酶mRNA的表达

探讨原生型一氧化氮合酶(cNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其意义,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人PBMC中cNOS和iNOSmRNA的表达水平。结果表明,活动期SLE患者iNOS和cNOS的阳性表达率与正常人对照组相比均无明显差异(P>0.05);活动期SLE患者PBMC中iNOSmRNA的平均表达水平(0.7710±0.1050)明显高于正常人对照组(0.5249±0.0770),差异非常显著(P<0.01);活动期SLE组cNOS的平均表达水平与正常人对照组处于同一表达水平,差异无统计学意义(P>0.05)。提示活动期SLE患者外周血单个核细胞中iNOSmRNA的表达增加,可能通过诱导一氧化氮(NO)及其代谢产物的产生参与SLE的发病过程。特异性iNOS抑制剂的开发与研制可能是治疗SLE新药发展的一个方向。     

SLE患者外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子αmRNA的表达

为探讨系统性红斑狼疮患者中肿瘤坏死因子α表达情况,用逆转录－多聚酶链反应法检测了１５例活动期ＳＬＥ患者和１０例正常人外周血单个核细胞中ＴＮＦαｍＲＮＡ表达的水平。结果与正常人相比,活动ＳＬＥ患者ＰＢＭＣαＭｒｎａＧＥ ＤＰ ＩＩＧＵＦＵ ＹＭ 。ＧＥ α的表达上调。     

寻常型银屑病患者外周血单个核细胞TLR4和NF—kBp65的表达

检测寻常型银屑病患者外周血单个核细胞T0Ⅱ样受体4（TLR4）和核转录因子xrap65（NF—xBp65）的表达。采用直接免疫荧光法定位并分别用流式细胞术及免疫细胞化学法检测22例寻常型银屑病外周血单个核细胞TLR4、NF—kBp65的表达,15名正常人做正常对照。结果：寻常型银屑病外周血单个核细胞TLR4的表达高于正常对照组（P〈0．05）,而进行期寻常型银屑病外周血单个核细胞TLR4表达明显高于稳定期寻常型银屑病患者的表达（P〈0．05）。寻常型银屑病组和正常对照组,进行期寻常型银屑病组和稳定期寻常型银屑病组活化NF-kBp65的表达,各组之间差异无显著性（P〉0．05）。     

原位杂交组化技术对SLE患者外周血单个核细胞C—myc基因表达的研究

C－myc原癌基因是一种能编码关键性调控蛋白，对细胞生长、分化和增殖起重要作用的基因［1］。近年来，国外已有学者用Northern印迹法和斑点杂交法发现SLE患者外周血单个核细胞（PBMC）C－mycmRNA表达明显增高，推测该基因与SLE发生、发展密切相关[2，3]。但上述方法只能了解细胞C－myC表达的总体水平，而不能结合细胞形态学对单个细胞中的基因表达进行比较。我们运用原位细胞杂交组化技术，在保持细胞形态完整的基础上对SLE患者PBMCC－myc表达情况进行了研究，从而弥补了以往方法的不足，为更深入了解SLE与C－myc基因关系提供…     

TLR7及TLR9在SLE患者外周血单个核细胞内的表达

目的:检测Toll样受体7(TLR7)mRNA及TLR9 mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞内的表达.方法:运用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量方法检测40例SLE患者(活动期25例,稳定期15例)和30名健康对照者外周血单个核细胞TLR7和TLR9 mRNA表达水平.结果:活动期SLE患者外周血单个核细胞TLR7 mRNA表达显著高于稳定期患者和正常人(Ps<0.01);活动期TLR9 mRNA表达与稳定期无统计学差异(P>0.05),但高于正常人(P<0.01).两者表达量与SLEDAI积分均呈正相关.结论:TLR7及TLR9在SLE的发病中可能起一定作用.     

Th17在SLE的组织定位和外周血单一核细胞中的比例

目的 探讨产生IL-17的CD4+T细胞(Th17)在SLE患者组织中的定位,以及与狼疮活动的关系.方法 共聚焦显微镜、免疫荧光双标技术、免疫组化和HE染色,分析Th17细胞业群在4例活动期SLE患者和2例正常人外周血单一核细胞中、皮损组织和肺组织中的定位.流式细胞仪检测50例SLE患者和15例正常人对照外周血Th17的比例,RT-PCR检测相关细胞因子基因表达,用ELISA检测血清中IL-17的分泌水平.结果 在活动期狼疮患者外周血单一核细胞中可见有Th17细胞,其IL-17的荧光强度为(127.6±20.5),明显高于正常人IL-17荧光强度,其值为(40.6±11.1),P＜0.001.在活动期SLE患者受损的皮肤组织和肺组织中可见有Th17细胞的浸润,而正常人皮肤未见有Th17细胞的浸润.活动期SLE患者外周血中Th17比例明显增加,且与SLE活动指数(SLEDAI)呈正相关.相关细胞因子IL-17A和IL-17F mRNA表达明显增加,血清中的不IL-17水平分泌增加,活动期SLE患者中Th17增加与血管炎的发病呈正相关,经过治疗后Th17随病情缓减而减少.结论 Th17细胞亚群在活动期SLE患者体内扩增,其扩增与SLE活动密切相关,可能参与SLE 血管炎的发生.     

SLE患者外周血单个核细胞产生IL-1及lL-2的检测

本文对31例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)产生 IL-1及 IL-2进行了检测。结果显示,与正常人对照组比较,SLE 患者 PBMC 产生 IL-2显著减少(P<0.01),IL-1的产生有降低趋势,但无统计学意义(P>0.05)。提示 SLE 患者存在淋巴细胞功能明显异常,IL-2产生缺陷在其发病机制起中重要作用。     

IκK-α/β、IκB-αm RNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中核因子(NF)-κB信号通路中IκB激酶(IκK)-α、IκKβ、IκB-α mRNA的定量表达水平,及与SLE病情活动程度的相关性。方法:采集110例SLE患者和50名正常人外周血,抽提总RNA并反转录成cDNA,运用实时定量PCR法在基因测序仪上检测IκK-α、IκK-β、IκB-α mRNA的表达水平。结果:①SLE患者组的IκK-α、IκK-β mRNA定量表达水平显著高于正常对照组(P0.01);未使用糖皮质激素的初发SLE患者IκK-α、IκK-β mRNA定量表达水平显著高于已使用糖皮质激素的SLE患者(P0.05);②SLE患者组的IκB-α mRNA定量表达水平显著低于正常对照组(P0.01);未使用糖皮质激素的初发SLE患者IκB-αmRNA定量表达水平显著低于已使用糖皮质激素的SLE患者(P0.01);③IκB-α mRNA的表达与IκK-α、IκK-β mRNA表达水平呈负相关(P=0.000);④IκB-α mRNA的表达与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分呈负相关(P0.01)。结论:SLE患者体内NF-κB信号通路处于高活性状态,且与疾病活动程度相关,阻抑NF-κB过度活化可能有利于SLE的治疗。     

SLE患者外周血单一核细胞淋巴细胞功能相关抗原1表达的检测

目的 研究SLE患者外周血单一核细胞（PBMC）淋巴细胞功能相关抗原1（LFA-1）的表达,探讨LFA-1与SLE的发病及病情变化的关系及其临床意义。方法 提取30例SLE患者（SLE组）和24例正常人（对照组）的PBMC,用抗人CD3-FITC和抗人CD11a-PE对其进行标记后,采用流式细胞术检测其CD11a的表达率。结果 PBMC CD11a的表达率对照组为68.21% ± 4.58%,SLE组为73.74% ± 7.89%,活动期组为77.11% ± 7.46%,稳定期组为69.33% ± 6.27%,SLE组PBMC CD11a的表达率显著高于对照组（P ＜ 0.05）,且活动期组亦显著高于对照组（P ＜ 0.05）,而稳定期组与对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。活动期组与稳定期组比较,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。相关性分析显示,SLE患者CD11a的表达率与其采血时的SLEDAI呈正相关（r = 0.64,P ＜ 0.01）。结论 LFA-1的过表达参与SLE的发病,并与疾病活动相关。