鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖的影响。[方法]将实验大鼠随机分为四组,生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。无菌条件下从大鼠后腔静脉采血,分离血清。将同组大鼠血清混匀,冷藏备用。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。对标本进行0D值测定,计算细胞增殖抑制率。[结果]鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组血清作用人肝癌HEPG2细胞48H后与灌服生理盐水组相比较细胞增殖抑制率有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组细胞增殖抑制率三者无明显差异(P>0.05)。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖有抑制作用。     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响。[方法]将实验大鼠随机分为4组:生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。利用原位杂交染色法对标本进行含药血清作用后显微镜图像分析。[结果]光镜下,鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组端粒酶数量减少、密度降低,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组无明显差异(P>0.05)。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响有减弱作用。     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞Mg2+-ATP酶、G-6-P酶活性影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响.[方法]将实验大鼠随机分为4组:生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组.待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本.利用原位杂交染色法对标本进行含药血清作用后显微镜图像分析.[结果]光镜下,鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组端粒酶数量减少、密度降低,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P＜0.05).鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组无明显差异(P＞0.05).[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响有减弱作用.     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞Mgn-ATP酶、G-6-P酶活性影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞Mg2＋-M田酶、G-6-P酶活性的影响。[方法]将实验大鼠随机分为4组：空白对照组、鳖甲煎丸煎剂组、顺铂组、鳖甲煎丸联合顺铂用药组。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。利用Mg^2＋-ATP酶、G-6-P酶细胞化学染色方法对标本进行染色。运用光镜观察酶反应。[结果]光镜下,鳖甲煎丸煎剂组、顺铂组、鳖甲煎丸联合顺铂用药组Mg2＋-ATP酶、G-6-P酶活性减弱,与空白对照组相比较有明显差异,差别有统计学意义（P〈0．05）。[结论]鳖甲煎丸合药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞Mg2＋-ATP酶、G-6-P酶活性的影响有减弱作用。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

姜黄煎对大鼠血管损伤后Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义

目的:探讨姜黄煎对大鼠血管损伤后血清中Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义。方法:模拟PCI术,采用ELISA法检测144只大鼠血清中Bcl-2与Bax和p53含量。其中姜黄煎干预组36只,生理盐水干预组36只,并与36只假手术组和36只正常组作为对照。结果:姜黄煎组,生理盐水组,假手术组,血清Bcl-2与Bax和p53含量与正常对照组比较差异明显(P0.05);假手术组血清Bcl-2水平含量接近于正常对照组,差异不明显(P0.05);姜黄煎组血清Bcl-2与Bax含量和p53含量与生理盐水干预组,假手术组比较有明显差异(P0.05);与正常对照组比较差异不明显(P0.05)。结论:姜黄煎可上调大鼠Bcl-2蛋白表达,使Bax的蛋白表达明显下降,说明Bc1-2过量表达,Bax/Bc1-2的比值增大,能抑制内皮细胞过度凋亡。二者的比例是决定细胞是否发生凋亡的重要调控因素。同时姜黄煎能够阻滞细胞周期降低P53蛋白的表达,迅速恢复内皮功能,保持完整血管内皮结构。因此,Bcl-2与Bax和p53参与了再狭窄的病理生理变化。检测患者血清Bcl-2与Bax和p53含量的异常变化,可能有助于评估血管损伤后凋亡因子对血管内皮功能和结构的影响。     

回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白表达的影响

目的探讨回药爱康方(AKR)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白表达的影响。方法将80只大鼠分为8组,每组10只:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKRL、AKRM、AKRH)组,环磷酰胺(CTX)组,回药爱康方低、中、高剂量联合环磷酰胺(AKRL/AKRM/AKRH+CTX)组。制备含药血清。MTT法检测各组含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖的影响,免疫细胞化学法检测细胞Bcl-2以及p53蛋白的表达。结果和NS组比较,回药爱康方对SK-MES-1细胞生长增殖有抑制作用(P0.05)。回药爱康方高剂量联合CTX组的抑制率最高(P0.05)。免疫细胞化学法检测结果显示,在不同浓度的含药血清作用下,和NS组相比,各实验组细胞的IOD值逐渐减小,差异有统计学意义(P0.05);20%浓度的含药血清各实验组IOD值低于5%、10%浓度的含药血清组(P0.05)。分别干预细胞24h、48h、72h后,与NS组比较,各实验组细胞的IOD值逐渐减小(P0.05);20%浓度含药血清干预细胞72h,各实验组的阳性表达逐渐减弱,IOD值较低(P0.05),AKRH+CTX组细胞的抑制率最高,故阳性表达最弱,IOD值最低。结论回药爱康方可以降低人肺鳞癌SK-MES-1细胞Bcl-2和p53蛋白的表达,抑制SK-MES-1细胞增殖。     

鳖甲煎丸大黄虫丸联合华蟾素预防实验性肝癌的研究

目的观察鳖甲煎丸、大黄虫丸及华蟾素对肝癌形成的抑制作用。方法将大鼠随机分为正常组、病理组和治疗组,除正常组常规喂养外,余2组均以0.05%2-乙酰氨基芴饲料喂服诱发肝癌,同期治疗组予鳖甲煎丸和大黄虫丸口服及华蟾素腹腔注射,实验35 d后观察大鼠生存及肝功能、肝组织病理学和PCNA阳性表达等指标变化。结果病理组和治疗组ALT、AST、ALP水平均升高,A/G值降低,肝组织学检查可见癌结节形成,PCNA指数明显增高。治疗组肝功能损害程度和肝癌结节形成数目、PCNA指数、大鼠死亡数均明显低于病理组。结论鳖甲煎丸、大黄虫丸及华蟾素联合应用可抑制2-乙酰氨基芴诱发大鼠肝癌的发生,减轻肝功能的损害,其作用可能与抑制癌前变细胞DNA复制及细胞增殖有关。     

滋阴明目丸对视网膜光损伤大鼠模型Bcl-2及p53表达的影响

目的:通过观察滋阴明目丸对视网膜光损伤大鼠模型Bcl-2、p53表达的影响,探讨滋阴明目丸对视网膜光损伤大鼠模型的保护作用及治疗机制。方法:将60只Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、滋阴明目丸低剂量组、滋阴明目丸中剂量组、滋阴明目丸高剂量组6组,每组10只。空白对照组不予处理,其余均建立视网膜光损伤大鼠模型,造模后第3天予以灌胃,连续15 d,其中滋阴明目丸低、中、高剂量组予以不同剂量滋阴明目丸灌胃,阳性对照组予以杞菊地黄丸灌胃。取大鼠眼球做免疫组化检测Bcl-2及p53的表达。结果:Bcl-2免疫组化结果:与空白对照组比较,模型对照组有统计学差异(P=0.0250.05);与模型对照组比较,阳性对照组(P=0.0030.01)、中剂量组(P=0.0040.01)及高剂量组(P=0.0010.01)均有显著统计学差异,低剂量组无明显差异(P0.05)。p53免疫组化结果:与空白对照组比较,模型对照组有显著统计学意义(P=0.0000.01);与模型对照组比较,低剂量组无明显差异(P0.05);阳性对照组(P=0.012)、中剂量组(P=0.002)及高剂量组(P=0.002)均有统计学差异(P0.05)。结论:视网膜光损伤模型可使大鼠视网膜组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白p53表达增高,滋阴明目丸能有效增强Bcl-2的表达,降低p53的表达,从而对细胞凋亡起到双向调节作用,对视网膜光损伤模型具有一定的治疗作用。     

鳖甲煎丸对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的通过研究鳖甲煎丸药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用及诱导其凋亡的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的可能作用机制。方法 Wistar大鼠40只,系统随机抽样(抓阄法)分为阴性对照组(NC组)、阳性药对照组(P组)、鳖甲煎丸高(H)、中(M)、低(L)剂量组,每组8只。L、M、H剂量组分别按21.87、43.75、87.50mg/mL灌服鳖甲煎丸混悬液。P组灌胃0.01mg/mL秋水仙碱溶液,NC组灌予等量的生理盐水。每只大鼠每次灌胃2mL,每日2次。每次灌胃间隔12h,连续灌胃7次,制备药物血清。将HSC-T6分为药物血清组(H/M/L/NC组)、秋水仙碱对照组(P组)及空白对照组(BC组),H、M、L、NC及P组给予对应药物血清进行培养,BC组为不含药物血清的培养基。采用CCK8法检测HSC-T6细胞24、48、72h时增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blot法检测凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果与NC组比较,M、H、P组24h细胞增殖抑制率明显增高(P0.05);48、72h时与NC组比较,L、M、H、P组细胞增殖抑制率明显增高(P0.05)。但24、48、72h各时间点之间L、M、H、P组细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P0.05)。与NC组、BC组比较,M、H、P组的HSC-T6早期凋亡与晚期凋亡率明显升高(P0.05),M、H、P组G0/G1期细胞数明显增多(P0.05),L、M、H、P组S期与G2/M期细胞数明显减少(P0.05)。各组间Bcl-2蛋白表达比较,差异无统计学意义(P0.05)。与NC组比较,P、H、M、L组的Bax蛋白表达明显升高(P0.01)。结论鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制可能与其抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡有关。     

鳖甲煎丸对动脉粥样硬化大鼠血脂及ICAM-1表达的影响

目的 观察鳖甲煎丸对动脉粥样硬化大鼠(atherosclerosis,AS)血脂及主动脉壁细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达水平的影响.方法 将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(血脂康组、鳖甲煎丸高剂量组、鳖甲煎丸低剂量组),对照组给予正常饮食,模型组给予高脂饮食,治疗组在高脂饮食的基础上分别给予血脂康、鳖甲煎丸高剂量、鳖甲煎丸低剂量,12周后测定血脂及免疫组化法观察主动脉壁ICAM-1的表达水平.结果 与模型组相比,血脂康组、鳖甲煎丸高、低剂量组均能降低血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c),升高高密度脂蛋白(HDL-c)(P＜0.05);免疫组化结果显示,模型组大鼠主动脉内皮细胞ICAM-1表达强阳性,血脂康组、高、低鳖甲煎丸剂量组与模型组相比ICAM-1的表达均显著降低.结论 鳖甲煎丸能有效调节AS大鼠血脂的异常,降低ICAM-1表达,减轻血管内皮病变程度,这可能是其抗AS的分子机制之一.     

鳖甲煎丸对肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1表达的影响

目的:观察鳖甲煎丸抗博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化的作用机制.方法:SD大鼠60只,随机分为生理盐水对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、中药中剂量组、中药高剂量组.采用博莱霉素气管内注入法,制备肺纤维化模型,于实验第28天留取标本,用免疫组化技术检测TGF-β1在肺组织中的表达.结果:鳖甲煎丸中、高剂量组大鼠TGF-β1表...     

鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌癌前病变的影响

目的:通过观察鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌癌前病变组织及血清cyclin D1(细胞周期蛋白1)、CDK4(细胞周期蛋白依赖性激酶)、白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)、自然杀伤细胞(NKC)数值改变,探讨鳖甲煎丸对大鼠细胞因子水平及肿瘤抑制的作用机理及抑制肝癌细胞增殖的机制。方法:选用136只SD大鼠,随机分为3组,正常对照组、模型组、鳖甲煎丸干预组,建立二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝癌癌前病变组织短期动物模型,在制模过程中给予鳖甲煎丸制剂进行干预,通过观察大鼠动脉血清中TNF-β、IL-2、NKC、ALT、AST、AFP、TBIL的变化,免疫组化学染色观察各组大鼠肝组织内Cyclin D1、CDK4、TNF-β、IL-2的表达水平。结果:干预组组织学中Cyclin D1、CDK4、TNF-β、IL-2的表达水平显著低于模型组、对照组(P0.01),血清中TNF-β、IL-2、NKC、ALT、AST、AFP、TBIL也明显低于模型组及对照组。结论:鳖甲煎丸有预防或延缓DEN诱发大鼠肝癌的发生、发展作用,其机制可能通过抑制Cyclin D1、CDK4蛋白的表达,通过阻滞细胞周期,抑制肝癌细胞过度增殖,调整由TNF-β、IL-2和NKC介导的细胞炎症反应,改善肝癌细胞微环境,抑制肿瘤病理进程。鳖甲煎丸对肝癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用。     

鳖甲煎丸化裁对肝癌22荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的：研究鳖甲煎丸化裁对肝癌22荷瘤小鼠动物模型肿瘤抑瘤率、T淋巴细胞亚群的影响。方法：建立肝癌22荷瘤小鼠动物模型，随机分为5组，鳖甲煎丸化裁高剂量组、鳖甲煎丸化裁中剂量组、鳖甲煎丸化裁低剂量组、生理盐水组、正常组。通过测定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率观察鳖甲煎丸化裁对肿瘤生长的影响；通过对荷瘤小鼠血液中T淋巴细胞亚群的变化来观察鳖甲煎丸化裁对其机体的免疫调节效应；通过对本实验各种指标的观察和研究来讨论鳖甲煎丸化裁高、中、低3个剂量在治疗肝癌22荷瘤小鼠动物模型肿瘤作用中的差异及优劣程度。结果：鳖甲煎丸化裁能使肝癌22荷瘤小鼠的瘤重减小，抑制肿瘤的生长，高、中、低组的平均抑瘤率分别为56．66％、48．11％、40．88％；鳖甲煎丸化裁高、中、低剂量组荷瘤小鼠血液内的CD4百分率、CD4／CD8比值均高于生理盐水组（P〈0．05），尤其中剂量组效果尤为突出；另外，鳖甲煎丸化裁中剂量组对荷瘤小鼠肿瘤包膜完整性控制最好。鳖甲煎丸化裁中剂量是对肝癌抑制及治疗作用的具体、有效、安全的优先剂量。结论：鳖甲煎丸化裁能明显抑制肝癌22荷瘤小鼠肿瘤的生长，其作用机制可能是增强荷瘤小鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能。     

鳖甲煎丸对大鼠四氯化碳肝损伤治疗作用的实验研究

采用ｃｃｌ４制成大鼠肝硬变模型，以体重，肝指数，脾指数，ＧＰＴ值，肝内组织纤维化程度为指标，观察鳖甲煎丸治疗作用，结果表明鳖甲煎丸有改善肝内血液循环，减少肝纤维化程度的功效。     

鳖甲煎丸对肺纤维化模型大鼠外周血CTGF表达的影响

目的：探讨鳖甲煎丸对肺纤维化模型大鼠外周血结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法：SD大鼠50只随机分为生理盐水对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、鳖甲煎丸中剂量组、鳖甲煎丸高剂量组,采用博莱霉素气管内注入制备肺纤维化模型,造模后各组分别用生理盐水、西药、中药灌胃,第3、14、28天乙醚麻醉后毛细玻管眼眶静脉丛采血,ELISA法检测CTGF表达明显减少,与模型对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。结果：模型对照组外周血中CTGF表达明显增加,第14天鳖甲煎丸中、高剂量组外周血CTGF的表达。结论：鳖甲煎丸可抑制肺纤维化模型大鼠外周血CTGF的表达,可能是抗肺纤维化作用的机制之一。     

鳖甲煎丸影响免疫性肝纤维化大鼠TNF-α表达的研究

目的:观察复方中药鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化模型大鼠肝组织TNF-α表达的影响,分析鳖甲煎丸抗肝纤维化的治疗作用并探讨其作用机制;并通过与抗肝纤维化药物秋水仙碱对照,为临床防治肝纤维化用药提供科学依据。方法:雄性Wistar大鼠90只,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组,选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型。各组于10周后取8只大鼠断头处死,取肝组织,免疫组化染色,用图像分析法检测TNF-α。结果:鳖甲煎丸能够从多个环节抑制肝脏纤维化病理改变,明显抑制TNF-α的表达,其作用接近或优于秋水仙碱。结论:鳖甲煎丸具有明显的抗肝纤维化作用。     

鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠细胞免疫功能的干预作用

目的:观察鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫功能的影响。方法:将50只小鼠分成实验组和正常组,对实验组小鼠进行肝癌荷瘤小鼠造模后,分为模型组和鳖甲煎丸高、中、低剂量组,连续灌胃给药15d。流式细胞仪对荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和CD4+T/CD8+T进行测定;采用ELISA法检测荷瘤小鼠外周血中白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果:鳖甲煎丸可使荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞显著增加(P0.01),CD8+T淋巴细胞亚群的比例显著下降(P0.01),CD4+T/CD8+T升高显著(P0.01);同时,鳖甲煎丸还可以提高肝癌荷瘤小鼠血清IFN-γ水平(P0.01)和血清IL-2水平(P0.01)。结论:鳖甲煎丸抑制肝癌生长的作用可能是通过提高肝癌荷瘤小鼠外周血中CD4+T细胞亚群的比例和降低CD8+T细胞亚群的比例,来纠正CD4+T/CD8+T的失衡,改变Th1/Th2漂移现象,维持Th1功能亚群的优势来实现的。