血清抗结核分支杆菌抗体对结核病的诊断价值

目的研究血清抗结核分支杆菌抗体在活动性结核病诊断和病情变化的意义。方法观察血清抗结核分支杆菌抗体在各类结核患者中的敏感性和特异性，与痰涂片及ＰＰＤ皮试的一致性，以及与疾病转归的关系。结果血清抗结核分支杆菌抗体诊断结核病的敏感性为７１．９％，特异性为９１．９％，与痰涂片阳性和ＰＰＤ皮肤试验阳性的一致率分别为８０．２％和６１．６％。抗结核分支杆菌抗体水平与病情变化有一定的相关性。结论血清抗结核分支杆菌抗体可用来诊断活动性结核病及评估结核病的转归。     

结核分支杆菌抗原85复合物的研究及应用前景

当前全球结核病的疫情依然十分严峻。全世界已有近1／3的人口受到结核分支杆菌的感染，每年新发病例数800～1000万，死亡人数约300万。近年来，由于结核分支杆菌多重耐药菌株及人体免疫缺陷病毒(HIV)双重感染的出现，结核病的发病率和死亡率呈上升趋势。结核病的卷土重来使得世界各国的医学工作不得不再次重视这一严重     

结核分支杆菌H37Rv株菌体抗原单克隆抗体制备,特性？…

目的 利用单克隆抗体技术分析分支杆菌多肽抗原的共性和个性,建立纯化单克隆抗体的最佳方法。方法 按常规方法制备单克隆抗体。分泌单克隆抗体阳性杂交细胞株的筛选采用ＥＬＩＳＡ法,确认采用免疫印迹法。２４种分支杆菌菌株均生长于改良罗氏培养基上,Ｈ３７Ｒｖ株分别生长于改良罗氏培养基和苏通液体培养基上。单克隆抗体的纯化采用硫酸铵沉淀法、辛酸沉淀法和离子交换法。结果 经筛选获得１４株单克隆抗体杂交细胞瘤。其中,     

非结核分支杆菌病诊断与处理指南

一、绪论分支杆菌属内除结核分支杆菌复合群 (包括结核分支杆菌、牛分支杆菌、非洲分支杆菌、田鼠分支杆菌 )和麻风分支杆菌外统称为非结核分支杆菌 (ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ,ＮＴＭ) ,其中部分是致病菌或条件致病菌。非结核分支杆菌病多继发于慢性肺病如支气管扩张、矽肺和肺结核 ,是人类免疫缺陷病毒 (ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ ,ＨＩＶ)感染或获得性免疫缺陷综合征 (ａｃｑｕｉｒｅｄｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｓｙｎｄｒｏｍｅ ,ＡＩＤＳ)的常见并发症 ,也可以是因消…     

临床标本结核分支杆菌检测

迄今为止,对结核病的病原体快速诊断的方法仍很有限,涂片镜检结核分支杆菌的方法虽简便快速,但阳性率低。细菌培养结果右面靠,但需时3～8周。因此多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法^[1,2]。我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCR、PCR反向探针膜杂交法检测临床标本中的结构分支杆菌,并作比较分析报告如下。     

结核分支杆菌与非结核分支杆菌快速鉴别的实验研究

目的 探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法 应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β-珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多重PCR扩增，其扩增产物分别为439bp、268bp及123bp，并对439bp进行BstE Ⅱ和Hae Ⅲ两种限制性内切酶消化，同时，将135例临床标本进行培养、涂片，和多重PCR联合限制性片段长度多态性分析(mPCR-RFLP)检测。结果 mPCR-RFLP方法可将12种受试的标准菌种分别区分到种及亚种水平。本方法在临床实验中亦体现出较高的灵敏性及特异性。结论 mPCR-RFLP分析是对结核分支杆菌与非结核分支杆菌进行菌种分类鉴定的一种快速有效的方法。     

几种结核分支杆菌重组蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

目的：了解结核分支杆菌重组抗原ESAT6（E）、MPT64（M）、Ag85A(A)及两两混合物诱发豚鼠产生迟发型超敏（DTH）反应的能力。方法：常规皮肤实验法：灭活H37Rv全菌体致敏豚鼠，皮肤试验以生理盐水为阴性对照，5U PPD标准品为阳性对照，0．8μgE、0.8μgM、0.8μgA、0.4μgA 0.4μgM、0.4μgA 0.4μgE、0.4μgE 0.4μgM分别于背部皮内注射，注射后24、48、72h分别测量硬结反应横、纵直径（mm），取二者的平均值。皮肤试验轮圈法：生理盐水、5U PPD及0．8μgE、0.8μgM、0.8μgA、0.4μgA 0.4μgM、0.4μgA 0.4μgE、0.4μgE 0.4μgM，以轮圈法注射于同一只豚鼠背部两侧，每批6只，共3批。注射后24、48、72h分别测量硬结反应横、纵直径（mm），取二者的平均值。结果：常规皮肤试验0．8μgM、A、M＋E及E＋A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比无显著性差异（P＞0．05），而0．8μgE抗原及M＋A诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比有显著性差异（P＜0．05）。时间效应：重组抗原及其混合物诱发豚鼠DTH的平均直径24h平均直径显著高于48h平均直径（P＜0．05），24h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后，结果与常规皮肤试验结果一致。结论：从试验结果看，重组ESAT6抗原及MTP64与Ag85A混合物诱发豚鼠DTH反应强于PPD。     

不同方法收集胃液进行结核分支杆菌培养对儿童肺结核的诊断价值

目的探讨胃液的结核分支杆菌培养对儿童肺结核的诊断价值。方法对４６例儿童肺结核患者选取痰、胃腔内直接吸取液、清晨呕吐液及其他时段呕吐液４种标本进行结核分支杆菌培养，并对其培养阳性率进行比较。结果上述４种标本的结核分支杆菌培养阳性率分别为９％、３３％、２６％和４％。结论酌情选用不同方法收集胃液进行培养，是诊断儿童肺结核的特异性方法之一     

TB-SA抗体检测对结核病临床诊断价值的研究

目的　对TB-SA(Tuberculosis-Specific Antigen)抗体检测用于结核病诊断的价值进行评估。方法 2004年5—11月在山东省胸科医院住院的活动性结核病患者230例(菌阳肺结核60例,菌阴肺结核131例,肺外结核39例),非结核呼吸系统疾患者96例,无结核疾患的在校大学生健康志愿者41人,入选病例留取的痰、胸腔积液、腹腔积液、脑脊液标本同时进行抗酸杆菌浓缩集菌,结核杆菌培养,血清样本进行TB-SA抗体检测。结果 活动性结核病人血清学检测TB-SA抗体总的敏感性为67.8%。活动性肺结核敏感性为67.6%,肺外结核敏感性为59.0%(P>0.05);诊断结核病总的特异性为76.6%,在非结核呼吸系统疾患中为72.9%,在健康人群中为85.4%。结论 TB-SA抗体检测是一种快速、简单、有较好敏感性和特异性的结核病辅助诊断手段,对菌阴肺结核及不易取得细菌学检查标本的肺外结核病、儿童结核病有较高的参考价值。     

分枝杆菌双相罗氏培养基在结核病诊断中的应用研究

目的 评价分枝杆菌双相罗氏培养基在结核病诊断中的价值,探讨其在我国基层实验室应用的可行性。方法采取多中心试验方法,在我国3个省的3个地市级结核病诊疗机构连续纳入2014年10月至2015年10月期间的初诊肺结核可疑症状者2320例,其中15例因分枝杆菌改良罗氏培养基(简称“罗氏培养基”)和分枝杆菌双相罗氏培养基(简称“双相培养基”)中的1种或2种培养污染或结果缺失,对两种培养基培养结果进行比较时不计入分析。每例患者留取3份痰标本(即时痰、夜间痰、晨痰)进行萋-尼染色法涂片镜检(简称“涂片”),并选取2份性状好的痰标本同时进行罗氏培养基培养、双相培养基培养。使用SPSS 24.0软件,采用配对χ²检验比较两种培养基的阳性检出率,以P<0.05为差异有统计学意义;分别以罗氏培养基培养结果、临床诊断为标准对双相培养基的检测效能进行评价;采用Wilcoxon秩和检验对罗氏培养基与双相培养基检出时间的差异进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果罗氏培养基和双相培养基两种培养方法阳性检出率分别为19.65%(453/2305)和22.00%(507/2305),差异有统计学意义(χ²=22.091,P=0.000);以罗氏培养基培养结果为标准,双相培养基的敏感度为91.39%(414/453),特异度为94.98%(1759/1852),一致率为94.27%(2173/2305);以临床诊断为标准,罗氏培养基和双相培养基的ROC曲线下面积分别为0.694(95%CI:0.672~0.715)、 0.707(95%CI:0.685~0.728);罗氏培养基报阳时间中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]为28(21,34)d,双相培养基报阳时间M(Q₁,Q₃)为18(14,24)d,差异有统计学意义(Z=15.114,P=0.000)。结论双相培养基较罗氏培养基具有更高的阳性检出率,诊断价值较高,报阳时间明显缩短,是一种可以作为结核病临床诊断的参考方法,在我国基层实验室有一定推广应用价值。     

结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用

目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素(Heparin-binding haemagglutinin adhesin,HBHA)在结核病免疫诊断方面的应用价值.方法 将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株(BCG)菌体超声裂解,离心后取上清并通过CL-6B层析柱,利用含0～500 mmol/L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行梯度洗脱后获得天然HBHA.以BCG基因组为模板PCR扩增结核分枝杆菌hbha基因片段,质粒pET-32a为载体,大肠杆菌作为宿主菌制备原核表达的HBHA重组蛋白.以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原,分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组各47例血清通过ELISA方法检测抗HBHA的抗体水平.应用SPSS 11.5统计软件对各研究组数据进行方差齐性检验,然后进行t检验,并计算各研究组的敏感度和特异度.结果 含有375 mmol/L氯化钠的PBS洗脱液可以洗脱获得较纯的天然HBHA蛋白.利用重组HBHA所带的组氨酸标签进行特异分离、纯化.ELISA检测结果表明天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间血清抗体水平差异不明显.肺结核组与肺外结核组的血清抗体ELISA检测的吸光度值在散点图中分布有明显差异,肺结核组吸光度值集中分布在0.30～0.40之间,肺外结核组吸光度值分布在0.35～0.45之间,经统计学检验结果差异具有统计学意义(t=12.224,P＜0.05).结核组(肺结核和肺外结核)与对照组(PPD阴性,PPD阳性)吸光度值分布具有显著不同,对照组全部小于0.30,结核组吸光度值则集中分布于0.30～0.45之间.经统计学检验(t=25.909,P＜0.05)血清抗体水平具有显著性差异.结论 结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断的应用中具有较好的特异度和敏感度,有望用于结核病、尤其是肺外结核病的实验室辅助诊断.     

结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究

目的 提取结核分枝杆菌（MTB）脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值.方法 将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase 酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1, LPS-1在去污剂Triton-X114作用后,分成含有阿拉伯甘露糖（AM）的水相即LPS-2和含有脂阿拉伯甘露糖（LAM）和脂甘露糖（LM）的有机相即LPS-3,以三种多糖作为抗原,通过ELISA方法检测结核阳性和阴性血清参考品.结果 LPS-1对结核血清参考品检测的敏感性为71.7%,特异性为96%,LPS-3的敏感性为43.9%（18/41）,而特异性达到100%.结论 脂多糖抗原检测血清结核抗体显示出较强的特异性,可望成为结核病血清学的诊断组合抗原之一.     

结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究

目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LPS-1在去污剂Triton-X114作用后,分成含有阿拉伯甘露糖(AM)的水相即LPS-2和含有脂阿拉伯甘露糖(LAM)和脂甘露糖(LM)的有机相即LPS-3,以三种多糖作为抗原,通过ELISA方法检测结核阳性和阴性血清参考品。结果LPS-1对结核血清参考品检测的敏感性为71.7%,特异性为96%,LPS-3的敏感性为43.9%(18/41),而特异性达到100%。结论脂多糖抗原检测血清结核抗体显示出较强的特异性,可望成为结核病血清学的诊断组合抗原之一。     

结核分枝杆菌cfDNA在结核病诊断中的发展现状和挑战

为实现“2035终止结核”的目标,开发新的检测方法迫在眉睫。结核分枝杆菌cfDNA(Mycobacterium tuberculosis cfDNA, MTB-cfDNA)可表明病原体的存在,是结核病(tuberculosis,TB)诊断和治疗监测有吸引力的生物标志物。易于获取的尿液和(或)血液中的MTB-cfDNA可实现对任何年龄组的肺结核和肺外结核的检测。在胸腔积液、腹腔积液和脑脊液等体液样本中检测MTB-cfDNA对TB的诊断性能高于GeneXpert MTB/RIF等基因组DNA检测。但cfDNA作为TB生物标志物的研究仍处于起步阶段,未来需要更大型、纳入患者类型更全面的临床研究来评估其在TB诊断中的效用。随着检测方法的进一步优化,cfDNA检测有可能改善TB诊断并成为“游戏规则的改变者”。     

Humoral immune response against 38‐ and 16‐kDa mycobacterial antigens in childhood tuberculosis

Several enzyme‐linked immunosorbent assays (ELISAs) based on mycobacterial antigens have been tried for the rapid diagnosis of tuberculosis (TB). In this study, the value of the 16 and 38‐kDa mycobacterial antigens in the diagnosis of TB was investigated in pediatric patients in Izmir, Turkey in whom they were found using clinical and/or bacteriological methods. A commercial ELISA kit was used for measuring IgG against 38 and 16‐kDa recombinant antigens. The humoral immune response was analyzed in a group of 32 TB patients (24 pulmonary, 3 lymphadenitis and 2 pleuritis, 2 meningitis and a disseminated TB) and in control groups consisting of 20 healthy children and 20 pulmonary diseases other than TB cases. The sensitivity, specificity, positive predictive value, and the negative predictive value of the test were found to be 25%, 90%, 66.7%, and 60%, respectively, in the TB cases. The ELISA test shows very good specificity, but low level of sensitivity and negative predict value. It was thought that it might be used in combination with other methods to increase diagnostic accuracy, especially for culture‐negative TB pediatric cases, which are difficult to diagnose. Pediatr Pulmonol. 2009; 44:839–844. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

脂阿拉伯甘露聚糖的结构功能及其在结核病诊断中的应用

结核病是由结核分枝杆菌复合群引发的人畜共患病,甘露糖帽修饰的脂阿拉伯甘露聚糖(mannose-capped-lipoarabinomannan,ManLAM)是结核分枝杆菌细胞壁上重要的成分,具有免疫调节作用,能够被固有细胞和适应性细胞所识别。作为结核病诊断的生物标记物,存在于体液的ManLAM具有较好的特异性,有区分...     

山东省局部地区结核分枝杆菌散在分布重复单位基因分型技术的应用

目的对结核分枝杆菌散在分布重复单位（mycobacterial interspersed repetitive units，MIRU）基因分型技术在山东省局部地区的应用进行评价。方法2004年2月至2006年6月，对山东省12个县级结核病防治所实验室分离培养的826株结核分枝杆菌，应用MIRU基因分型技术进行分型。结果826株结核分枝杆菌分为201种基因型，123个独特型，78个簇，最大簇基因型为223325173533。成簇的菌株中相对应的患者有流行病学接触史者18例。MIRU基因分型法分辨率为0．90，位点26显示相对较高多态性。该基因分型法的重复性为100％。完成1株菌株基因分型需要成本人民币约50元。结论MIRU基因分型技术的重复性好，快速、简单、经济，不需要昂贵的设备。不足之处是223325173533基因型菌株在山东是社会传播的优势菌群，占分离结核分枝杆菌的30．89％，需要通过二线分型方法IS6110限制性片段长度多态性基因分型技术或增加新的多态性较高的可变数目串联重复序列位点进一步提高分辨率。