PCR检测疟疾混合感染的现场应用研究

目的　评价PCR检测技术在间日疟与恶性疟混合感染区诊断疟疾的现场应用价值。　方法　采集海南省疟疾混合感染流行区 3 0 4份滤纸干血滴样本 ,根据红内期疟原虫SSUrRNA基因序列 ,设计合成 3条引物 ,采用PCR技术在同一反应体系中扩增出间日疟原虫和恶性疟原虫不同的DNA片段 ,检测现场所采样本中的间日疟原虫或恶性疟原虫DNA ;同时与镜检法进行比较。　结果　在 3 0 4份样本中 ,PCR法阳性 15份 ,其中间日疟 7份 ,恶性疟 8份 ;镜检法阳性11份 ,其中间日疟 6份 ,恶性疟 5份。镜检阳性的样本PCR均为阳性 ;镜检阴性而PCR阳性的 4份样本 ,其扩增产物经限制性酶切鉴定 ,证实为间日疟原虫或恶性疟原虫DNA。　结论　此PCR检测体系灵敏、特异 ,对诊断或鉴别诊断间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有实用价值。     

PCR检测疟疾混合感染的现场应用研究

目的 评价PCR检测技术在间日疟与恶性疟混合感染区诊断疟疾的现场应用价值。方法 采集海南省疟疾混合感染流行区304份滤纸干血滴样本，根据红内期疟原虫SSUrRNA基因序列，设计合成3条引物．采用PCR技术在同一反应体系中扩增出间日疟原虫和恶性疟原虫不同的DNA片段，检测现场所采样本中的间日疟原虫或恶性疟原虫DNA；同时与镜检法进行比较。结果 在304份样本中，PCR法阳性15份，其中间日疟7份．恶性疟8份；镜检法阳性11份，其中间日疟6份，恶性疟5份。镜检阳性的样本PCR均为阳性；镜检阴性而PCR阳性的4份样本，其扩增产物经限制性酶切鉴定，证实为间日疟原虫或恶性疟原虫DNA。结论 此PCR检测体系灵敏、特异．对诊断或鉴别诊断间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有实用价值。     

复式PCR检测间日疟原虫和恶性疟原虫的现场应用

目的探讨复式PCR方法在疟疾诊断中的现场应用价值。方法根据疟原虫18 S rRNA基因序列,合成疟原虫属特异性上游引物和间日疟原虫、恶性疟原虫种特异性下游引物,优化PCR反应体系,建立在同一PCR反应体系中同时检测间日疟原虫、恶性疟原虫基因组特异性DNA片段的疟疾诊断方法,并评价其现场应用价值。结果间日疟原虫和恶性疟原虫基因组DNA经过复式PCR后,分别扩增出1 451 bp和833 bp的特异性条带,而伯氏疟原虫、食蟹猴疟原虫及健康人血样均无扩增带出现,用该反应体系可检出原虫血症为1.1×10-6和5.6×10-7的间日疟原虫和恶性疟原虫感染。与镜检法相比,复式PCR检测119份现场样本,112份与镜检结果相同,阳性率为54%,漏诊率为0.8%,误诊率为0,而镜检法依次分别为53%、1.7%和3.4%。结论复式PCR方法检测疟原虫具有简便、快速、特异、敏感等优点,在疑似病例的鉴别诊断和分子流行病学调查中具有良好的应用价值。     

驻索马里美军的间日疟原虫感染:使用伯氨喹抗复发失败

伯氨喹是唯一抗疟疾复发的药物,不同株的间日疟原虫对伯氨喹的敏感性不同。本文根据驻索马里美军感染间日疟原虫的病例资料及使用伯氨喹进行化学预防和治疗的一些问题分析了伯氨喹抗疟疾复发的效果。 作者从索马里返美的士兵中选择75例经病原诊断(血片镜检和PCR诊断)确诊的间日疟患者作为观察对象。患者的平均年龄     

套式/多重PCR方法应用于疟疾诊断与监测的初步评价

目的 与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR（UT-PCR）在疟疾监测中的应用价值。 方法 在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较镜检法与UT-PCR的初检结果,对结果不一致的血片再次镜检复查,同时对其滤纸血样重复PCR 2～3次;评估UT-PCR与镜检法的敏感性和特异性。 结果 400例发热患者血样中,镜检法初检检出疟原虫阳性234例,其中恶性疟125例,间日疟109例;UT-PCR检出疟原虫阳性235例,其中恶性疟124例,间日疟109例;恶性疟和间日疟混合感染2例。两法初检结果一致的血样占92.5%（370/400）,其中阴性154例,阳性216例（间日疟117例,恶性疟99例）。复查25份初检结果不一致的血样,包括镜检阴性PCR阳性11例,镜检阳性PCR阴性10例,镜检为恶性疟PCR为间日疟3例,镜检为间日疟而PCR为混合感染1例,其中15份与UT-PCR的初检结果一致,7份“假阳性”原因不明,仅3份为PCR的假阴性。根据复查结果评估PCR的敏感性为99.6%,特异性为98.8%。 结论 采用更敏感的UT?鄄PCR疟疾诊断方法有助于解决疟疾诊断与鉴别诊断中的疑难问题,提高疟疾监测的质量和效率。     

2014—2020年四川省疟疾诊断参比实验室 病例复核结果分析

目的　对2014—2020年四川省疟疾报告病例检测结果进行复核,评价四川省疟疾诊断参比实验室疟疾诊断能力。方法　对2014—2020年四川省疟疾诊断参比实验室收集的疟疾报告病例血液和血涂片样本采用镜检和巢式PCR法进行复核,对复核结果进行比较分析。结果　2014—2020年四川省疟疾诊断参比实验室累计复核1 710例疟疾报告病例样本,其中阳性样本复核1 634例,阳性符合率为95.56%（1 634/1 710）;疟原虫虫种完全一致1 508例,虫种一致率为92.29%（1 508/1 634）;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫检测符合率分别为99.48%（961/966）、97.07%（430/443）、83.05%（98/118）和67.86%（19/28）;镜检法与巢式PCR检测方法一致率为91.81%（1 513/1 648）。结论　四川省基层医疗机构镜检人员的疟原虫镜检能力仍有不足;今后应继续加强镜检人员培训工作,以提高消除后疟疾再传播监测工作能力。     

移动平均数法在疟原虫镜检管理工作中的应用

移动平均数法在疟原虫镜检管理工作中的应用江苏六合县血防站六合２１１５００游本荣在疟疾流行季节，对原因不明、感冒、疑似疟疾的“三热病人”采血镜检疟原虫，是发现疟疾传染源的重要手段。通激４“三热病人”数的预测，可以提高疟防工作的社会效益和经济效益。现根据...     

2012-2014年云南省疟疾实验室诊断质量分析

目的分析云南省的省、县两级实验室疟疾镜检诊断质量及影响因素。方法 2012年8月-2014年10月,云南省各疫情报送单位采集镜检确诊为疟疾的患者血样,制作血涂片和滤纸血送至省级疟疾参比实验室进行镜检和基因检测,并统计分析省、县两级实验室疟疾诊断的符合性。结果 2012年8月-2014年10月云南省的72个县镜检确诊疟疾病例1 400例,其中恶性疟、间日疟和未分型疟疾分别占18.4%(252/1 400)、79.3%(1 105/1 400)和3.1%(43/1 400),未分型疟疾比例最高为2012年的3.5%(9/257)。2012年云南各县与省级疟疾参比实验室疟原虫镜检结果的虫种符合率为70.1%(845/1 216),为2012-2014年期间的最低水平,血片疟原虫阳性符合率为77.6%(943/1 216)。各县的疟原虫镜检结果与省级实验室基因检测的虫种符合率、阳性符合率也是2012年最低,分别为81.3%(150/185)和85.0%(157/185)。省级实验室镜检与基因检测结果的不符合率为8.7%(97/1 120),不符合类型中以镜检阴性而基因检测为恶性疟原虫、间日疟原虫或恶性疟/间日疟原虫混合感染为主,占57.7%(56/97)。各县采集疟疾病例血样的覆盖率最低为2012月11月的46.9%(82/175)。2012-2014年全省血涂片制作质量得分分别为69.8、70.4和78.8(P0.05)。结论 2013年后除个别县外,云南省的县级疟疾实验室诊断各环节的工作质量均显著提高。     

贵州省县级和省级疟疾诊断实验室检测结果比较分析

贵州省省级疟疾诊断实验室通过PCR法和镜检法对各县级疟疾诊断实验室上报的疟疾网报病例进行复核,以PCR和镜检一致的结果作为判定依据,对县级疟疾诊断实验室镜检结果进行评价。共对89份血样进行复核,PCR检出24份阳性,15份为恶性疟原虫,7份为间日疟原虫,2份为卵形疟原虫,均为输入性病例;省级镜检和PCR结果一致的有21份。县级与省级检测结果的总符合率为79.8%(67/84),县级漏检率为9.5%(2/21),误检率为23.8%(15/63),两级实验室检测的Kappa值为0.6,属于中、高度一致。     

一个红细胞内同时寄生不同期间日疟原虫输入性病例1例

2012年对云南省腾冲市1例间日疟患者血样采用Care Start~(TM)疟疾快速诊断试剂盒、吉氏染色镜检和巢式PCR方法进行鉴定。Care Start~(TM)疟疾快速诊断试剂盒检测结果判定为除恶性疟原虫以外的间日疟原虫、三日疟原虫或卵形疟原虫感染。镜检结果显示,患者血样厚、薄血片中可见间日疟原虫环状体多核、多重感染现象,1个环状体有2个及以上核的占14.68%(188/1 280);同时寄生2个及以上环状体的红细胞占22.50%(288/1 280);1个红细胞内同时寄生环状体和滋养体、环状体和配子体。巢式PCR结果显示,患者血样为间日疟原虫特异性DNA片段阳性。结合检测结果、流行病学资料和临床表现,确诊该患者为输入性间日疟原虫感染病例,且一个红细胞内同时寄生不同期间日疟原虫。     

江苏省如皋市本地居民与流动人口疟疾镜检结果比较

为了解我市近几年本地区居民的疟疾流行情况,以及流动人口的病原特点,于1989-1993年对全市53个乡镇卫生院门诊在5—10月查治的“三热”病人,采血镜检疟原虫。进行了流行病学调查。结果本地居民与流动人口疟疾阳性率情况见表1。全部疟原虫阳性者,均为间日疟。原虫密度为1—5个/视野。由表1可见疟疾阳性率呈逐年下降的趋势。经χ2检验,各年疟疾阳性率间差别具有极显著意义(χ2=154.20,P<0.01)。表明本市的疟疾防治工作是扎实的。经χ2检验,本地居民与流动人口疟疾阳性率间差别具有显著意义(χ2=25.09,P<0.05)。流动人口的阳性率高可能与来往…     

2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果分析

目的 分析2017年江苏省疟疾诊断参比实验室样本检测结果,为巩固江苏省疟疾诊断水平提供科学依据。方法 由江苏省疟疾诊断参比实验室收集2017年疟疾网报病例诊断结果和样本;对每份病例样本分别采用镜检、核酸检测复核和疟疾快速诊断试纸条（RDT）检测;比较分析不同地区和不同疟原虫虫种样本检测结果符合情况。结果 2017年江苏省共有疟疾网报病例242例,经复核确定疟疾病例共239例,其中恶性疟163例、间日疟21例、三日疟11例、卵形疟43例、恶性疟和卵形疟原虫混合感染1例。13个设区市疟疾网报病例的诊断符合率均＞80%,总符合率为88.8%;恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫检测符合率分别为98.8%、57.1%、63.6%、81.4%,RDT对4种疟原虫感染检出率分别为95.7%、85.0%、63.6%、79.1%。结论 2017年江苏省疟疾网报病例诊断质量总体较高,对非恶性疟人体疟原虫的虫种鉴别能力有待提高,RDT对非恶性疟人体疟原虫感染检测效果不理想。在当前消除疟疾阶段,应加强和保持各部门的疟疾诊断能力。     

PCR鉴别诊断间日疟及恶性疟的研究

目的 :在同一反应体系中建立能鉴别诊断间日疟与恶性疟的 PCR检测方法。方法 :根据红内期疟原虫 SSUr RNA编码基因序列 ,设计合成 3个引物 ,采用聚合酶链反应技术 ,在同一反应体系中 ,间日疟原虫和恶性疟原虫分别预期被扩增出 34 1bp和 4 31bp的 DNA条带。结果 :间日疟原虫和恶性疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小的 DNA片段 ,并经限制性酶切证实 ;杜氏利什曼原虫、弓形虫、健康人血及空白对照均无特异性扩增条带 ;以该检测体系至少可检出原虫血症为 2 .56× 10 ^-7间日疟原虫感染和 1.0 8× 10 ^-5恶性疟原虫感染 ;69份镜检阳性的间日疟和 2份恶性疟患者血样 PCR检测均为阳性 ,1例发热待查患者PCR诊断为间日疟 ,与镜检复查结果一致 ,所有疟疾阳性标本中未检出混合感染 ,2 0份健康人血 PCR均为阴性。结论 :该检测体系灵敏、特异 ,对于诊断间日疟和恶性疟以及鉴别间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有一定的应用价值。     

多重PCR种特异性检测恶性疟原虫和间日疟原虫方法的建立

目的建立恶性疟原虫和间日疟原虫种特异性检测的多蕈PCR方法,用于疟疾的检测和诊断.方法根据疟原虫18S核糖体小亚基ssRNA的基因序列设计合成8对11条引物,通过对恶性疟、间日疟患者及健康对照者血样的DNA进行扩增,选择出敏感性和特异性最佳的引物用于建立多重PCR方法,并用梯度变化的方法分别对引物浓度、复性温度、延伸温度和循环次数等反应参数进行比较分析,优化PCR反应条件.利用优化后的多重PCR埘采自云南和上海的139份疟疾患者血样和32份非疟疾患者血样进行检测,以镜检方法为金标准,分析多重PCR方法检测患者血样的敏感性和特异性.结果从8对11条引物中优选出2对共3条引物用于建立多重PCR.利用这3条引物进行多重PCR,一次反应即可完成对恶性疟原虫和间日疟原虫的种特异性鉴定.对疟疾和非疟疾患者血样检测结果显示,该方法检测患者血样的敏感性为97.8%,特异性为100%.结论多重PCR方法敏感、特异、可进行批量检测,适用于对人群的疟疾监测和疑似疟疾病例的诊断,并能鉴定恶性疟原虫和间日疟原虫虫种.     

2012年河南省疟疾标本的实验室检测分析

目的比较疟疾实验室检测方法,分析疟疾标本的检测结果。方法分别用吉氏染色镜检、巢氏PCR和序列分析方法对2012年河南省收集的165份疟疾标本进行检测,并对检测方法及结果进行分析比较。结果综合分析镜检、巢氏PCR和序列分析等3种方法的检测结果,165份疟疾标本的阳性率为93.94%,其中镜检和巢氏PCR阳性率分别为87.88%和90.30%;两种方法对疟原虫虫种的误判率为10.32%,其中对间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的误判率分别为42.86%、40.00%和28.57%,而对恶性疟原虫的误判率为0.85%。结论姬氏染色镜检和巢氏PCR两种方法在疟疾检测中各有优缺点,建议2种方法结合使用以提高疟疾诊断的准确率。     

《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》1988年第6卷文题索引

疟疾流行病学深圳地区疟疾基发流行主要传播媒介的调查豫南地区雷氏按蚊嘴人亚种地理分布与恶性疟 流行关系的调查福建省疟疾基发点的调查海南省不同流行程度疟区的血清流行病学调查一九八七年全国疟疾情况病原人红细胞膜血型搪蛋白A在恶性疟原虫入侵中的 受体作用人红细胞膜血型搪蛋白B对恶性疟原虫入侵 红细胞的影响该南和湘西北间日疟原虫的实脸感染比较广西间日疟原虫潜伏期和复发规律的实脸观察间日疟原虫寿命的观察间日疟原虫子抱子在大劣按蚊体内的寿命及活力约氏疟原虫红内期裂体增殖与配子体生成中的 某些形态特征媒介中华按蚊唾…     

套式PCR扩增特定SSUrDNA基因片段检测四川疟原虫感染的研究

目的：用套式PCR系统诊断、鉴别人体疟原虫感染。方法：以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸（SSUrDNA）基因为靶基因,选用1对疟原属特异性引物,建立套式PCR扩增系统并用于四川省疟疾病人血样的检测。结果：从间日疟原虫、恶性疟原虫和三日疟原虫感染血样中分别扩增出104bp,102bp和115bp预测大小的特定扩增带。61份血样检测结果与镜检的间日疟阳性符合率为100％,并查出镜检漏诊的2例P.v.和P.m.的混合感染及1例P.v.、P.F.和P.m.的混合感染病例,结论本系统特异、灵敏,稳定、简便,可在诊断疟疾的同时判定混合感染,故对疟疾的诊断,大规模流行病学研究及疫情监控有实际应用价值。     

套式PCR扩增特定SSU rRNA基因片段检测四川疟原虫感染的研究

目的用套式PCR系统诊断、鉴别人体疟原虫感染。方法以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸（SSUrRNA）基因为靶基因,选用1对疟原虫属特异性引物和4对种特异性引物,建立套式PCR扩增系统并用于四川省疟疾病人血样的检测。结果从间日疟原虫、恶性疟原虫和三日疟原虫感染血样中分别扩增出104bp、102bp和115bp预期大小的特定扩增带。61份血样检测结果与镜检的间日疟阳性符合率为100％。并查出镜检漏诊的2例P.v.和P.m.的混合感染及1例P.v.、P.f.和P.m.的混合感染病例。结论本系统特异、灵敏、稳定、简便,可在诊断疟疾的同时判定混合感染,故对疟疾的诊断、大规模流行病学研究及疫情监控有实际应用价值。     

逆转录聚合酶链反应检测和鉴定疟原虫的研究

在同一反应体系中建立能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟及混合感染的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并用于现场采集血样检测。先以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计1对针对恶性疟原虫的特异性引物,建立RT-PCR检测恶性疟原虫方法,在此基础上,增加1条针对间日疟原虫的种特异性引物,使在同一反应体系中,能够同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段。恶性疟原虫和间日疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小为359bp和449bp特定扩增带,健康人血样和空白对照均未见扩增带。用建立的RT-PCR检测方法对现场采集128份血样进行检测,与镜检的阳性符合率为9609%,14份镜检为阴性的发热病人全血标本中2份RT-PCR检测为间日疟阳性。RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。     

"新吉尔"疟原虫快速检测试剂盒检测效果评价

目的采用疟疾厚薄血片镜检法(金标准)和"新吉尔"疟原虫抗原检测试剂盒(胶体金法)进行平行检测,评价该疟疾快速检测试剂盒的检测效果。方法收集948份血样,采用镜检作为金标准与新吉尔快速诊断试剂盒进行盲法平行检测,计算试剂盒检测结果的灵敏度、特异性和诊断准确性,分析两种检测方法检测结果的一致性。结果共检测948份血样,其中镜检疟原虫阳性416份。以镜检法结果为标准,"新吉尔"疟原虫检测试剂盒检测灵敏度为96.88%,特异性为100%,诊断准确性为98.63%,一致性系数kappa为0.9721。其中检测间日疟的灵敏度为94.76%,特异度为100%,诊断准确性为98.62%,一致性系数kappa为0.9638;检测恶性疟灵敏度达98.41%,特异度为100%,诊断准确性为99.58%,一致性系数kappa达0.9892。间日疟原虫的检出下限介于105.19-157.94个/?l之间,恶性疟原虫的检测下限介于77.76-103.68个/?l之间。结论与镜检法相比,新吉尔疟原虫检测试剂盒具有较高的灵敏度、特异度和一致性,其中对恶性疟检测的灵敏度和一致性略高于间日疟,但是在原虫密度较低情况下漏检较多。该试剂盒可用于不具备开展镜检的基层医疗机构进行疟疾的快速检测和初筛,但不建议用于健康人群或无症状人群的筛查和检测。