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反义寡脱氧核苷酸在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒复制与 … 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究反义核酸的抗病毒作用。方法 设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)前S(PreS)基因区第951-968位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN),以20μg/g体重/日剂量对3只腹腔感染DHBV5.2毒株后,血清DHBsAg及DHBV DNA阳性鸭连续静脉注射10天,同时以等体积生理盐水注射另3只感染鸭作为对照。结果 对照鸭注射生理盐水后,血清DHBsAg及DHBV DNA阳性未 相似文献
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目的探讨IgA肾病HBV感染与肾小管间质病变的关系。方法利用原位分子杂交(HBVDNA)、免疫组化(HBAg、CD3、CD8)以及HBVDNAHBAg和HBAgCD43双标记技术,对91例IgA肾病肾穿刺标本进行研究。结果肾组织内HBAg阳性率为69.2%。HBVDNA原位杂交阳性率为429%。HBVDNA阳性的病例,双重标记染色发现HBVDNA阳性的肾小管上皮细胞可表达HBcAg或/和HBsAg。HBV感染标记(HBVDNA、HBcAg、HBsAg)阳性组CD3阳性细胞和CD8阳性细胞数明显高于阴性组(P<001),并可见数量不等的T淋巴细胞入侵HBcAg及HBsAg阳性肾小管管壁或围绕其周围。结论感染HBV的肾组织细胞能够表达HBAg,并诱导CD3阳性细胞和CD8阳性细胞浸润,从而加重肾小管、间质损害。HBV感染对IgA肾病的发生发展可能起着重要作用 相似文献
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磷甲酸钠在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒的抑制作用 总被引:5,自引:0,他引:5
以鸭乙型肝炎病毒(DHBV)静脉感染雏鸭为模型,分组腹腔注射磷甲酸钠(PFA)250mg、125mg、62.5mg/kg及生理盐水,观察治疗后鸭血清中DHBVDNA及DHBsAg的动态变化,并检测肝、肾、脾及胰中DHBVDNA的分布;提取肝脏中超螺旋DNA(SCDNA),检测PFA对DHBVDNA复制的影响。结果表明:PFA治疗第7天到第21天,125mg和250mg/kg剂量组对DHBsAg有显著的抑制作用;125mg和250mg/kg剂量组治疗第14、21天对血清中DHBVDNA有显著的抑制作用;125mg和250mg/kg剂量组治疗第21天肝及肾中DHBVDNA明显下降;250mg/kg剂量组治疗21天对DHBV感染鸭肝细胞内DHBVRCDNA、LDNA及SCDNA的合成有明显抑制作用。可见,最大剂量250mg/kgPFA每天2次,治疗21天,对DHBV感染鸭血清中DHBsAg、血清及肝、肾中DHBVDNA都有抑制作用,对脾、胰中DHBVDNA抑制不明显。提示该药能抑制DHBV感染,但未能清除病毒,故停药后可出现反跳现象。 相似文献
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鸭乙型肝炎病毒DNA体内转染的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用两种鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA双体质粒及环化的DHBVDNA体内转染2d龄鸭及4~20d龄鸭,大多数鸭产生了短暂病毒血症,少数鸭产持续病毒血症,转染鸭血清中检测得DHBs/preSAg,DHBVDNA及DHBV病毒颗粒,转染鸭血清腹腔注射1d龄鸭可感染成功,转染鸭肝组织检测到复制型DHBVDNA,提示转染后既有抗原有的表达,又有病毒的复制。另外,用两种DHBVDNA单体质粒体内转染2dx 相似文献
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目的筛选高效特异的抗HBV反义核酸药物。方法针对HBV包装信号ε起始区设计并合成硫代反义寡聚核苷酸(s-asODN)片段,通过ELISA检测法、MTT法、电子显微镜等观察,研究此s-asODN对HBsAg、HBeAg和HBcAg表达,以及对细胞毒性,细胞形态的影响。结果针对ε起始区的s-asODN显著抑制HBsAg、HBeAg和HBcAg的表达,其中,对HBeAg和HBcAg的抑制率分别为38.1%和58.7%高于S基因起始区(32.1%和37.2%,P<0.01),对HBsAg抑制率为82%,低于S基因起始区(93.41%),在实验浓度下s-asODN对细胞无毒性,对细胞形态无影响。结论HBV包装信号区是反义核酸抗HBV复制研究的重要的靶序列选择区域。 相似文献
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核酶对鸭乙型肝炎病毒感染体内抗病毒作用效果的观察 总被引:2,自引:0,他引:2
目的观察核酶在体内抗病毒作用效果。方法选择鸭乙型肝炎(DHBVLJ-76)及其鸭动物模型作为检测系统,将针对DHBVPre-S736位点的核酶(RzDS)插入pJ120质粒构建成pJ-RzDS。与痘苗病毒天坛761株(VV)同源重组后获得含RzDS的重组痘苗病毒(V-RzDS)。用DHBV感染1日龄北京鸭,分别在感染的同时、感染后24小时和72小时注射V-RzDS和VV,10天后检测血清中DHBVDNA和DHBsAg的含量。结果北京鸭在感染DHBV的同时注射V-RzDS,其DHBVDNA和DHBsAg的含量均低于VV对照组,两组之间有显著性差异。结论提示RzDS对DHBV基因组复制和表达均有抑制作用,其抑制率分别为45%和63%。 相似文献
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肝细胞刺激物质对感染鸭乙型肝炎病毒的雏鸭体内抗病毒作用的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的北京雏鸭为体内实验动物模型,观察了肝细胞刺激物质(HSS)对鸭乙型肝炎病毒的抗病毒作用。1日龄北京鸭实验感染DHBV,7天后血清DHBVDNA阳性,给予药物治疗10天,用斑点杂交方法检测用药前后血清DHBVDNA,分析药物对血清DHBVDNA是否有抑制作用,结果显示:HSS大、小两个剂量组(分别为50mg/kg/d和200mg/kg/d)均对DHBVDNA有抑制作用,大剂量组出现DHBVDNA抑制作用时间早于小剂量组,用药5天、10天及停药3天血清DHBVDNA中位抑制率显著高于生理盐水对照组(P<0.05);两个剂量组均无停药反跳;生理盐水组用药前后DHBVDNA的A值比较差异无显著性意义(P>0.05)。停药后3天肝组织病理光镜及电镜均显示HSS组病变较生理盐水组轻。结论:肝细胞刺激物质有一定的保肝和抑制DHBVDNA复制的作用 相似文献
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肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义 总被引:1,自引:1,他引:1
取225例人肝硬变活检组织石蜡切片,检测了HBVDNA及其5种抗原。分别用免疫组化ABC法检测HBxAg、pre-S_1和pre-S_2抗原;用PAP法检测HBsAg和HBcAg;用原位杂交方法检测HBVDNA;用免疫组化、原位杂交双标记方法检测HBVDNA和HBsAg、HBxAg或HBcAg。结果显示,阳性检出率HBsAg为70.0%(128/183例),pre-S_1抗原为64.4%(85/132例)、pre-S_2抗原为61.4%(81/132例),HBxAg为75.3%(113/150例),HBcAg为22.4%(39/174例),HBVDNA为62.4%(58/93例)。双标阳性检出率HBVDNA和HBsAg为37.3%(19/51例),HBVDNA和HBx-Ag为86.3%(44/51例),HBVDNA和HBcAg为39.2%(20/51例)。HBVDNA和HBV5种抗原阳性病例中80%以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明,在我国肝硬变的发生发展与HBV慢性感染有密切的关系。 相似文献
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肝细胞刺激物质对感染鸭乙型肝炎病毒的争论鸭体… 总被引:5,自引:0,他引:5
以感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的北京雏鸭为体内实验动物模型,观察了肝细胞刺激物质(HSS)对鸭乙型肝炎病毒的抗病毒作用,1日龄北京鸭实验感染DHBV,7天后血清DHBVDNA阳性,给予药物治疗10天,用斑点杂交方法检测用药前后血清DHBVDNA,分析药物对血清DHBVDNA有抑制作用,大剂量量组出现DHBVDNA抑制作用时间早小剂量组,用药5天,10天及停药3天血清DHBVDNA中位抑制率显著高 相似文献
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抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选 总被引:15,自引:1,他引:14
目的 寻找抗HBV最佳反义寡核苷酸区段。方法 合成4种互补于HBV不同区段的反义硫代寡核酸(asON),加入HBV基因转染的肝癌细胞模型HepG22.2.15,以ELSA法测定HBsAg、HBeAg含量。结果 互补于pre-S2翻译起始区的asON(序列Ⅰ)抗HBV基因表达作用最强(P〈0.02),对HBsAg、HBeAg的最高表达抑制率分别为66%和91%,针对增强Ⅱ(ENⅡ)的序列Ⅲ也有较强的 相似文献
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目的:探讨Gq蛋白介导血管活性多肽对vSMCDNA合成及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响。方法:用硫代修饰的Gαq/11亚基反义寡聚脱氧核苷酸(Gαq/11AS-ODNs),以6μmol/L的浓度加入含10-7mol·L-1ET-1刺激无血清DMEM培养基中体外培养vSMC。用3H-TdR掺入法测定vSMCDNA合成、免疫细胞化学技术检测vSMCPCNA蛋白表达。结果:Gαq/11AS-ODNs可明显抑制vSMCDNA的合成,在12h,24h时抑制率分别为842%和853%;Gαq/11AS-ODNs亦明显降低vSMCPCNA蛋白的表达。而相同浓度的正义Gαq/11ODNs只呈现少量抑制作用。结论:本实验提示Gαq/11AS-ODNs有可能进一步应用于由血管活性多肽刺激引起的vSMC增生性疾病如经皮冠脉腔内血管成形术(PTCA)后再狭窄的防治的研究 相似文献
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经缺口平移法以a-32P-dCTP标记1.0kb的丁型肝炎病毒(HDV)cDNA片段为探针,采用蛋白酶K直接从血清中提取HDVRNA,建立了检测血清中HDVRNA的打点杂交法,其灵敏性可达1pg水平,与乙型肝炎病毒(HBV)DNA无交叉杂交反应;并应用于检测我国5949份HBsAg阳性血清中的HDVRNA,共检出176份HDVRNA阳性,检出率为2.95%。 相似文献
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表达HBsAg和HBeAg小鼠成纤维胞膜型的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立表达乙型肝炎病毒(HBV)主要基因产物的细胞克隆,为研究HBV的生物学性状及其致病机制提供细胞模型;方法:应用磷酸钙沉淀技术将环化的3.2kb HBVDAN和携带新霉素抗药基因的真核细胞表达载体pCNCX,导入体外培养的小鼠成纤维NIH3T3细胞;结果:成功地获得表达HBsAg和HBeAg的小鼠成纤维NIH3T3细胞克隆;结论:将HBV基因组DNA导入体外培养的非肝细胞,HBV病毒的HB 相似文献
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庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒NS3 抗原。方法 从重组质粒Iwq2利用PCR 反应扩增出GBVC/HGV NS3 基因片段,克隆至表达载体pPROEX HTa 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经IPTG 诱导重组工程菌,用SDSPAGE 和Western blot 对重组蛋白进行鉴定。结果 酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌pHTNS3/ DH5α且克隆的基因片段为GBVC/HGV NS3 基因片段。SDSPAGE 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约43 810处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的17 .7 % 。用NiNTA 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Western blot 鉴定发现重组蛋白可与GBVC/HGV RNA 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论 获得了具备免疫反应原性的GBVC/HGV NS3 抗原,该重组蛋白可用于GBVC/HGV 感染的检测。 相似文献
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修饰的反义寡脱氧核苷酸对胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用 总被引:4,自引:0,他引:4
目的观察修饰过的反义寡脱氧核苷酸(ASOND)对人胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用。方法用人工合成与c-myc和Ki-ras帽区互补的修饰的反义寡脱氧核苷酸,即反义硫代正磷酸寡脱氧核苷酸(antisensephosophorothioateoligodeoxynucleotide,ASPODN)处理人胰腺癌细胞系PC-2和PC-3。多次小剂量(10μg)或一次性剂量(15μg)ASPODN处理细胞后计数细胞生长率和3H掺入率,并用逆转录聚合酶链反应检测靶基因表达。结果多次小剂量ASPODN处理后,细胞生长、3H掺入和靶基因表达的抑制可长达2周以上,到第14天时实验组的细胞生长率仅为对照组的38%~43%,3H掺入率为对照组的18%~33%;靶基因表达明显受抑或下调,经一次性15μgASPODN处理后,细胞生长、3H掺入和靶基因表达的抑制可达4天。结论与以往的研究比较,表明ASPODN较ASODN有更强的抑制细胞生长、3H掺入、靶基因表达的作用。 相似文献
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应用果蝇(DS2)表达系统,构建了含有乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、摄金蛋白启动子(MTn-promoter)的共表达质粒pAM-HBsAg,转染细胞,经克隆,存活细胞株的培养上清液经硫酸铵沉淀、氯化铯(CSCl)密度梯度离心沉淀,获得的抗原用酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫分析(RIA)法检测抗体,免疫吸印法(Westernblot)和电泳凝胶银染显色证实分子量为23000和27000,免疫电镜观察显示表达产物为22um球型颗粒,通过重金属离子(CuSO4、ZnSO4)的诱导可增加抗原的表达量。用共表达质粒pAM-HBsAg的DNA,注射Balb/C小鼠的股四头肌。经ELISA、RIA检测抗体产生情况,结果免疫后的小鼠经硫酸锌喂养抗体高于普通喂养的小鼠。Southern杂交证实鼠肌肉细胞存在HBsAg基因。小鼠免疫接种实验表明,DS2细胞表达的抗原与直接用DNA含有HBsAg的重组质粒)免疫小鼠均获抗HBsAg的抗体。 相似文献
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分别将含免疫刺激DNA序列(ISS)的质粒pUC19、pcDNA3及编码IL 2的真核表达质粒pcDNA3 IL 2,与乙肝病毒DNA疫苗共同注射于小鼠胫前肌内。定量检测免疫小鼠体内HBsAg的表达及血清中抗HBs的水平。结果显示:pUC19、pcDNA3及pcDNA3 IL 2对乙肝病毒DNA疫苗在肌肉内表达HBsAg无影响或有抑制,但它们均能显著促进疫苗诱导抗体的产生(P<001),抗体水平的增加与ISS的数量呈剂量反应关系。 相似文献
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根据乙型肝炎病毒(HBV)的S区序列设计了3条引物:HBS1、HBS2和HBS3,与HBS1和HBS2配对,经2次聚合酶链反应(PCR)扩增。即可在检测有无HBV-DNA存在的同时对其基因型分类,可检出10ag的HBV-DNA,比免疫学方法更灵敏和特异。25份不同亚型的标准血清中的绝大多数用S-PCR和AGID/RPHA的分型结果一致,S-PCR的另一突出优越性的于能够对HBsAg低滴度和阴性标本 相似文献
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HBV-SAg特异性靶细胞系的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 研究特异性细胞免疫反应在病毒性肝炎发生发展中的作用及观察药物等对细胞免疫反应的影响。方法 用DNA 重组技术构建逆转录病毒重组质粒PLXSNS,以电穿孔方法转入PA317 细胞,筛选高表达克隆,收集其假病毒颗粒感染EL4 细胞,经有限稀释选择高表达克隆。结果 重组质粒转染PA317 细胞后,53 个克隆形成(1∶10 传代),在24 孔板中扩增后有7 个克隆细胞上清HBsAg 阳性。用HBsAg A值(曾称OD值) 最高克隆的假病毒感染EL4 细胞,再经有限稀释得到稳定、高效表达HBsAg 的靶细胞系(EL4S),在体外传100 代以上,HBsAg 仍能高效表达(48 小时上清中HBsAg 的A值达0-85)。经检测PLXSNS及重组腺病毒rAdB72S免疫后小鼠对HBsAg 特异的细胞免疫反应,得到较为满意的结果。结论 我们成功构建了稳定表达HBsAg 的靶细胞,对研究HBsAg 细胞免疫反应及乙肝免疫发病机理等方面有重要意义 相似文献